CN106967809A - 一种快速鉴定小麦背景中簇毛麦染色体的方法 - Google Patents

一种快速鉴定小麦背景中簇毛麦染色体的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种快速鉴定小麦背景中簇毛麦染色体的方法。本发明首先提供2条寡核苷酸探针，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑2所示，将2条探针混合，结合ND‑FISH技术，可用于鉴定小麦与簇毛麦杂交后代中的簇毛麦染色体，能清楚地区分小麦染色体和簇毛麦染色体的同时，准确识别7条簇毛麦染色体，并且能鉴定小麦‑簇毛麦易位染色体。本发明方法能克服GISH和现有ND‑FISH技术的缺点，又能达到GISH和现有ND‑FISH技术的效果，方便鉴定小麦‑簇毛麦易位染色体，在小麦育种领域具有良好的应用前景。

Description

一种快速鉴定小麦背景中簇毛麦染色体的方法
技术领域
本发明涉及分子细胞遗传学领域，特别是涉及利用寡核苷酸探针采用ND-FISH方法检测小麦背景中簇毛麦染色体以及小麦-簇毛麦易位染色体的方法。
背景技术
高等生物染色体序列复杂多样，在不同区间存在大量的重复序列，这为标记与鉴定染色体提供了新的思路与方法。在分子细胞遗传学领域，可通过构建重复序列探针对染色体进行标记，分析染色体上探针信号的分布状态，从而区分基因组与染色体组。此外，通过比较染色体上探针信号的变化亦是分析染色体行为的普遍做法。
簇毛麦是小麦的的近缘种属，蕴含着丰富的优良基因，可用于小麦品种改良。创制小麦-簇毛麦易位染色体是利用簇毛麦优良基因改良小麦品种的重要环节，比如小麦-簇毛麦6AL/6VS易位染色体被成功用于小麦抗白粉病育种。在利用簇毛麦优良基因改良小麦品种的过程中，准确快速鉴定小麦背景中的簇毛麦染色体是必须的，尤其是鉴定小麦-簇毛麦易位染色体，显得尤为重要。目前用于鉴定小麦背景中簇毛麦染色体的方法主要包括分子标记和细胞学方法。但目前的分子标记和细胞学方法都存在缺点，还缺乏一种快速准确的，从小麦背景中鉴定小麦-簇毛麦易位染色体的方法。
用基于PCR的分子标记进行鉴定。根据特定的DNA序列，开发出了基于PCR的、簇毛麦特异的分子标记(特异引物)。这些分子标记(引物)可以检测小麦背景中是否有簇毛麦染色体存在。尽管基于PCR的标记可以检测小麦背景中是否存在簇毛麦染色体，但该技术仅能证明小麦背景中簇毛麦染色体的存在，不能确定小麦和簇毛麦的染色体是否发生了易位。
GISH(Genome in situ hybridization,基因组原位杂交)：用经标记的动植物总基因组DNA作探针，与动植物染色体进行杂交，探明外源染色体的存在及存在方式。以簇毛麦基因组DNA为探针，利用基因组原位杂交(GISH)技术鉴定小麦背景中是否存在簇毛麦染色体。该技术可以确定小麦和簇毛麦的染色体是否发生了易位，也可以确定易位的片段有多大。但GISH技术需要从簇毛麦中提取基因组DNA，然后对基因组DNA进行标记。探针标记好后，在进行原位杂交过程中，要对探针和染色体进行变性，然后杂交过夜。该过程十分繁琐，费时费力，而且探针标记的成本也高。另外，GISH技术因为以整个簇毛麦基因DNA为探针，探针在每条簇毛麦染色体上产生的杂交信号模式是相同的，因此不能区分具体是那一条簇毛麦染色体。
C-带技术(C-banding):植物染色体经一定条件处理后，用Giemsa染料进行染色，在不同染色体上显示出染色深浅不一的带纹，不同染色体显示出的带纹模式不同，达到识别染色体的目的。C-带技术也可以用来鉴定小麦背景中的簇毛麦染色体。通过C-带技术，可以显示出簇毛麦与小麦不同的带型，从而将簇毛麦染色体和小麦染色体区分开。但该技术存在以下不足：(1)C-带技术流程长，过程繁杂。(2)在使用C-带技术过程中，小麦染色体也有较丰富的带纹，使得小麦背景中识别簇毛麦染色体存在一定困难，达不到一目了然的效果。
FISH(fluorescence in situ hybridization,荧光原位杂交)：用经标记的DNA序列作探针，与动植物染色体进行杂交，明确探针序列在染色体上的分布，建立染色体特定界标，从而达到识别染色体、了解染色体的结构功能和基因组进化的目的。利用常规FISH技术鉴定小背景中的簇毛麦染色体。克隆簇毛麦特异的重复序列，以这样的重复序列为探针，用常规FISH技术鉴定小麦背景中的簇毛麦染色体。这种方法也能很好地从小麦背景中将簇毛麦染色体识别出来，其效果类似GISH技术。但常规FISH技术所需探针的制备过程也非常繁琐。首先需要获得大量的特异重复序列，这涉及克隆、转化感受态大肠杆菌、质粒提取等繁杂过程。另外，与GISH技术一样，获得的重复序列还需要标记，要购买标记试剂盒，成本高。探针与染色体杂交之前，探针和染色体也都需要变性。因此常规FISH技术过程复杂，成本高。
ND-FISH(non-denaturing fluorescence in situ hybridization,非变性荧光原位杂交)：通常以合成的单链寡核苷酸为探针，与非变性的染色体进行原位杂交，能够低成本、快速、方便地明确探针序列在染色体上的分布，建立染色体特定界标，从而达到识别染色体、了解染色体的结构功能和基因组进化的目的。利用ND-FISH技术鉴定簇毛麦染色体。合成簇毛麦染色体特异的寡核苷酸探针，采用ND-FISH技术鉴定小麦背景中的簇毛麦染色体。该方法与常规FISH技术相比，减少了探针制备的繁琐过程，且寡核苷酸探针的合成成本较低。杂交过程中探针和染色体不需要变性。
现有的鉴定簇毛麦染色体的ND-FISH技术中，所使用的寡核苷酸探针还不完善。目前所使用的寡核苷酸探针，其信号不能完全覆盖整条簇毛麦染色体，因而只有在簇毛麦染色体保持完整的状态下才能清楚地识别，如果与小麦染色体发生易位，而且参与易位的区段很有可能不带有寡核苷酸探针信号(因为目前所使用的寡核苷酸探针信号不能全覆盖簇毛麦染色体)，这样就不能将簇毛麦染色体识别出来。
用寡核苷酸探针和ND-FISH技术代替基因组GISH技术鉴定小麦背景中的外源染色体。利用寡核苷酸探针Oligo-1162、Oligo-pSc200和Oligo-pSc250以及ND-FISH技术，可以代替以黑麦基因组DNA为探针的GISH技术鉴定小麦背景中的黑麦染色体。目前利用寡核苷酸探针Oligo-1162、Oligo-pSc200和Oligo-pSc250以及ND-FISH技术鉴定小麦背景中的黑麦染色体，只能起到GISH技术的效果，即只能将小麦背景中的黑麦染色体与小麦染色体区分开，但不能识别具体是那一条黑麦染色体。
发明内容
为克服现有技术的上述不足，本发明提供一种能区分小麦与簇毛麦杂交后代中的簇毛麦染色体、能识别单个簇毛麦染色体、并能鉴定小麦-簇毛麦易位染色体的方法。
本发明依据转座类重复序列在植物基因组中呈散步方式分布的特点，从分析转座类重复序列入手，寻找寡核苷酸探针。基于从簇毛麦基因组中分离克隆的转座类重复序列相对较少的情况，依据麦类作物各物种之间具有一定亲缘关系的原理，考虑采用物种间序列转移方法，开发合适的寡核苷酸探针。具体方法如下：
(1)收集所有已报道的从黑麦基因组中分离克隆的转座类重复序列和已报道的黑麦特异寡核苷酸探针序列。
(2)利用perl语言编程对收集的所有序列进行比对，分析序列特点，找到保守性强、但与已报道的黑麦特异寡核苷酸探针相似度低于60％的区段，设计新寡核苷酸探针。
(3)采用物种间序列转移方法，以小麦-簇毛麦杂交后代植株为材料，用ND-FISH方法验证开发的寡核苷酸探针是否能鉴定小麦背景中的簇毛麦染色体。
分析已报到的少数簇毛麦特异的重复序列碱基的特点，以及微卫星序列在植物染色体上的分布特点，以二核苷酸GT为重复单位，设计不同重复次数的寡核苷酸探针。具体设计方法是，以7为最小重复单位，按7的2倍、3倍和4倍重复次数设计不同长度的GT寡核苷酸探针，最长不超过60个碱基。设计的探针为(GT)7、(GT)14、(GT)21、(GT)28。然后用ND-FISH方法进行验证，找出只与簇毛麦染色体杂交而不与小麦染色体杂交的探针。获得了能起作用的寡核苷酸序列。
Oligo-Ku:
GATCGAGACTTCTAGCAATAGGCAAAAATAGTAATGGTATCCGGGTTCG(SEQ ID NO.1)
(GT)7:GTGTGTGTGTGTGT(SEQ ID NO.2)
将两种探针混合，用ND-FISH的方法鉴定小麦背景中的簇毛麦染色体。
本发明提供了用于区分小麦-簇毛麦远缘杂交后代中的小麦染色体和簇毛麦染色体的寡核苷酸探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
寡核苷酸探针Oligo-Ku能用于ND-FISH，分析小麦-簇毛麦远缘杂交后代植株染色体，只在簇毛麦染色体上全覆盖式产生杂交信号，不在小麦染色体上产生杂交信号，能代替以簇毛麦基因组为探针的GISH技术，明确地区分小麦-簇毛麦远缘杂交后代植株中的小麦染色体和簇毛麦染色体。
本发明提供了用于鉴别簇毛麦各染色体的寡核苷酸探针，其核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。
寡核苷酸探针(GT)7也只在簇毛麦染色体上产生杂交信号，而不在小麦染色体上产生杂交信号。(GT)7的信号模式与Oligo-Ku的不同，Oligo-Ku的信号是簇毛麦染色体全覆盖式的，(GT)7在簇毛麦各染色体特定位置产生杂交信号，能将簇毛麦各条染色体区分开。
本发明提供了一种寡核苷酸探针组合，含有2条寡核苷酸探针，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-2所示。
本发明提供了上述寡核苷酸探针组合在鉴定小麦背景中是否存在簇毛麦染色体的应用。
本发明提供了上述寡核苷酸探针组合在检测小麦和簇毛麦易位染色体中的应用。
本发明提供了上述寡核苷酸探针或权利要求3所述的寡核苷酸探针组合在区分簇毛麦各条染色体中的应用。
本发明提供了上述寡核苷酸探针在小麦种质资源改良或育种中的应用。
本发明提供一种检测小麦背景中簇毛麦染色体的方法，利用本发明的寡核苷酸探针组合(含有核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-2所示的寡核苷酸探针)对待测小麦材料进行ND-FISH方法检测。
本发明提供一种检测小麦和簇毛麦易位染色体的方法，利用本发明的寡核苷酸探针组合(含有核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-2所示的寡核苷酸探针)对待测小麦材料进行ND-FISH方法检测。
含有SEQ ID NO.1或2所示寡核苷酸探针的检测试剂盒属于本发明的保护范围。
含有SEQ ID NO.1-2所示的寡核苷酸探针组合的检测试剂盒属于本发明的保护范围。
本发明基于ND-FISH的原理，开发新型寡核苷酸探针。其目的是寻找到合适的寡核苷酸探针，结合ND-FISH技术，鉴定小麦-簇毛麦杂交后代中的簇毛麦染色体，能清楚地区分小麦染色体和簇毛麦染色体的同时，准确识别7条簇毛麦染色体，从而建立一种新快速准确鉴定小麦背景中的簇毛麦染色体的方法。
本发明方法具有以下特点：
(1)Oligo-Ku和(GT)7相结合，能够检测小麦和簇毛麦的易位染色体，克服分子标记不能确定小麦和簇毛麦的染色体是否发生了易位的缺点。现有技术一根据已知序列设计引物，然后用PCR和凝胶电泳的方法进行检测。这一方法只能证明小麦背景中有簇毛麦DNA存在，但不清楚具体存在的方式。而本发明能明确检测簇毛麦染色体在小麦背景中的存在方式，即，是否发生易位。
(2)成本低，操作简便，能够识别7条簇毛麦染色体，克服GISH技术过程繁琐、成本高和不能识别具体簇毛麦染色体的缺点；
GISH技术需要先提取簇毛麦基因DNA，然后进行标记，再让探针和染色体变性，最后杂交。而本发明不需要这些过程，只需合成短的探针序列，杂交时染色体和探针都不需要变性。
本发明方法克服C-带技术流程长、过程繁杂、不能一目了然的缺点；C-带技术在对染色体进行染色之前，需要染色体前处理，过程繁杂，而且不能做到一目了然地区分小麦染色体和簇毛麦染色体。而本发明不需要复杂的染色体前处理，能够一目了然地区分小麦染色体和簇毛麦染色体。
常规FISH技术需要获得大量的用于探针标记的序列，得到大量序列后再进行探针标记，杂交之前也需要对探针和染色体进行变性。本发明不需要这些过程，只需合成短的探针序列，杂交时染色体和探针都不需要变性。克服常规FISH技术探针制备繁琐、成本高的缺点；
(3)本发明所用方法不仅能全覆盖式在簇毛麦染色体上产生信号，还能同时区分各条簇毛麦染色体。克服现有ND-FISH技术中，寡核苷酸探针信号不能完全覆盖整条簇毛麦染色体的缺点；GISH技术虽然能全覆盖式在簇毛麦染色体上产生杂交信号，但体现不出各条簇毛麦染色体的特点，不能区分各条簇毛麦染色体。
(4)能清楚地区分小麦染色体和簇毛麦染色体的同时，准确识别7条簇毛麦染色体，克服现有的技术中利用寡核苷酸探针和ND-FISH技术代替基因组GISH技术鉴定小麦背景中的外源染色体的方法中，不能同时区分各条外源染色体的缺点。
附图说明
图1为用ND-FISH方法分析小麦-簇毛麦双二倍体的根尖染色体的效果图，以寡合苷酸序列探针Oligo-Ku(红色)和(GT)7(绿色)为探针，Oligo-Ku(红色)和(GT)7(绿色)能将簇毛麦染色体与小麦染色体分辨出来，同时也将各条簇毛麦染色体识别出来。
图2为以Oligo-Ku(红色)和(GT)7(绿色)为探针，用ND-FISH方法分析小麦-簇毛麦6VS.6AL易位系小麦品种绵麦37的根尖染色体，Oligo-Ku(红色)和(GT)7能将簇毛麦6VS染色体臂与小麦染色体分辨出来。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。本发明所使用的验证探针的小麦材料包括小麦-簇毛麦双二倍体和小麦-簇毛麦6VS.6AL易位系小麦品种绵麦37。小麦-簇毛麦双二倍体由电子科技大学生命科学与技术学院的杨足君教授提供，该材料已经通过论文报道(Li et al.2016)。小麦品种绵麦37是四川省绵阳农科院培育的优良品种，已经通过四川省审定，已是公众可以获得的材料。本发明所使用生化试剂均为市售。
实施例1小麦-簇毛麦重复序列分析及寡核苷酸探针序列的确定
依据转座类重复序列在植物基因组中呈散步方式分布的特点，从分析转座类重复序列入手，寻找寡核苷酸探针。基于从簇毛麦基因组中分离克隆的转座类重复序列相对较少的情况，依据麦类作物各物种之间具有一定亲缘关系的原理，考虑采用物种间序列转移方法，开发合适的寡核苷酸探针。
1、寡核苷酸探针核苷酸序列的确定与探针设计
(1)收集所有已报道的从黑麦基因组中分离克隆的转座类重复序列和已报道的黑麦特异寡核苷酸探针序列。
从NCBI数据库中，下载所有已公布的、从黑麦基因组中分离的转座类重复序列，这些序列的GenBank号为:AB304276.1、AB124640.1、AB646252.1、AB124641.1、AB124639.1、AB124642.1、AB124643.1、GU226015–GU226029、GU318156–GU318170、GU318066–GU318080、GU317976–GU317990、GU226000–GU226014、GU318141–GU318155等。另外还包括申请人已经报道的寡核苷酸探针Oligo-1162、Oligo-pSc200和Oligo-pSc250序列(Fu et al.2015)。
(2)利用perl语言编程对收集的所有序列进行比对，分析序列特点，找到保守性强、但与已报道的黑麦特异寡核苷酸探针相似度低于60％的区段，设计新寡核苷酸探针。
通过编程，对获得的序列进行比对，发现以GU编号的序列在600-683bp处具有较高保守性。因此，从中选取序列GU318080.1，以此序列设计探针。设计探针前，将其与Oligo-1162、Oligo-pSc200和Oligo-pSc250序列进行比对，确认这3条寡核苷酸序列与GU318080.1的600-683bp处的相似度低于60％。再截取GU318080.1的600-683bp区段的序列，与编号为AB的序列进行比对，发现GU318080.1的633-681bp区段与这些序列达95％以上相似。因此，以GU318080.1的633-681bp区段设计出探针Oligo-Ku。
(3)采用物种间序列转移方法，以小麦-簇毛麦杂交后代植株为材料，用ND-FISH方法验证开发的寡核苷酸探针是否能鉴定小麦背景中的簇毛麦染色体。该步骤在于将黑麦来源的序列应用于簇毛麦。
分析已报到的少数簇毛麦特异的重复序列碱基的特点，以及微卫星序列在植物染色体上的分布特点，以二核苷酸GT为重复单位，设计不同重复次数的寡核苷酸探针。具体设计方法是，以7为最小重复单位，按7的2倍、3倍和4倍重复次数设计不同长度的GT寡核苷酸探针，最长不超过60个碱基。设计的探针为(GT)7、(GT)14、(GT)21、(GT)28，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2-5所示。然后用ND-FISH方法进行验证，找出只与簇毛麦染色体杂交而不与小麦染色体杂交的探针。获得了能起作用的寡核苷酸序列。
Oligo-Ku:
GATCGAGACTTCTAGCAATAGGCAAAAATAGTAATGGTATCCGGGTTCG(SEQ ID NO.1)
(GT)7:GTGTGTGTGTGTGT(SEQ ID NO.2)
实施例2小麦背景中簇毛麦染色体鉴定方法的建立
将实施例1确定的两种寡核苷酸探针(Oligo-Ku和(GT)7)混合，用ND-FISH的方法鉴定小麦背景中的簇毛麦染色体。小麦-簇毛麦双二倍体和小麦品种绵麦37的根尖中期染色体制备参照(Han et al.2006)所描述的方法，ND-FISH分析过程参照(Fu et al.2015)描述的方法。具体如下：
(1)根尖中期染色体制备
将根尖用笑气处理2小时，用95％醋酸固定10分钟，然后用双蒸水洗掉醋酸，切下根尖分生组织区，置于2％纤维素酶和1％果胶酶混合液中，37℃水浴处理50分钟，用70％酒精将酶清洗干净，在70％酒精中捣碎根尖，离心去掉酒精，加醋酸制成根尖细胞悬液，取悬液滴在干净的载玻片上(每张载玻片8-10ul悬液)，待醋酸挥发完后镜检片子，选分裂相好的片子进行ND-FISH实验。
(2)ND-FISH实验
将合成的寡核苷酸探针Oligo-Ku、(GT)7、(GT)14、(GT)21和(GT)28用pH7.0的1×TE稀释到工作夜浓度，Oligo-Ku的工作液浓度为26.4ng/ul，(GT)7、(GT)14、(GT)21和(GT)28的工作液浓度为29.1ng/ul，然后从(GT)7、(GT)14、(GT)21和(GT)28的工作液中各取0.4ul，分别与0.4ul的Oligo-Ku工作液混合到10ul杂交缓冲液中(杂交缓冲液由1mM/L Tris-HCl,0.1mM/L EDTA,17.5g/LNaCl,8.8g/L柠檬酸三钠组成)，配置成杂交液。配制好的杂交液和中期细胞染色体都不经任何变性处理，在室温25-28℃条件下，直接取9ul配制好的杂交液，滴到有中期细胞染色体的载玻片上，盖上盖玻片，放置于湿润的普通饭盒中，于42℃放置1个小时，用42℃预热的2×SSC缓冲液进行洗脱，并使用洗耳球将片子吹干，每张片子加含DAPI的抗褪色剂10ul，盖上盖玻片，2分钟后在OLYMPUS BX51荧光显微镜下进行观察照相，检测探针的杂交效果，结果表明Oligo-Ku和(GT)7只与簇毛麦染色体杂交，不与小麦染色体杂交。而(GT)14、(GT)21和(GT)28不具簇毛麦特异性。
从图1中可以看出，簇毛麦的14条染色体带有明显的探针Oligo-Ku的红色信号，而且Oligo-Ku的红色信号是簇毛麦染色体全覆盖式的，具有以簇毛麦基因组DNA为探针的GISH的效果，能清楚地将簇毛麦染色体与小麦染色体分开。(GT)7的绿色信号也只在簇毛麦染色体上体现，与Oligo-Ku的红色信号不同的是，(GT)7的绿色信号在簇毛麦染色体的特定区域分布，这就形成了簇毛麦各染色体特有的(GT)7的信号模式，从而将各条簇毛麦染色体区分开。亦即：短小的1V染色体的一条臂的端部带有较强的信号，另一条臂端部带较弱但明显的信号；2V染色体只有着丝粒区域有一弱信号；3V染色体的两条臂的端部都带有极强的信号，着丝粒区域带有较弱但明显的信号；4V染色体的1条臂端部带有极强的信号，着丝粒区域和另一条臂的亚端部带有较强的信号；5V染色体在着丝粒区域和一条臂的亚端部带有较强的信号，在另一条臂的端部带有较弱但明显的信号；6V染色体在一条臂的端部带有极强的信号，在着丝粒区域带有很弱的信号；7V染色体在一条臂的端部带有较强的信号，在着丝粒区域带有弱而明显的信号，在另一条臂上不具信号。
从图2中可以看出，Oligo-Ku和(GT)7能鉴定出小麦品种绵麦37中的簇毛麦-小麦易位染色体6VS.6AL。同样，Oligo-Ku和(GT)7只与簇毛麦染色体杂交，而不与小麦染色体杂交。Oligo-Ku的红色信号覆盖了整个6V染色体臂，而(GT)7也在这条6V染色体臂的端部产生极强的绿色信号。
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虽然，上文已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
SEQUENCE LISTING
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<130> KHP171111839.2
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
gatcgagact tctagcaata ggcaaaaata gtaatggtat ccgggttcg 49
<210> 2
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gtgtgtgtgt gtgt 14
<210> 3
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
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<210> 4
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gt 42
<210> 5
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgt 56

Claims (10)

1.用于鉴别小麦-簇毛麦远缘杂交后代中的小麦染色体和簇毛麦染色体的寡核苷酸探针，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.用于鉴别簇毛麦各染色体的寡核苷酸探针，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。
3.一种寡核苷酸探针组合，其特征在于，含有2条寡核苷酸探针，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-2所示。
4.权利要求3所述的寡核苷酸探针组合在鉴定小麦背景中是否存在簇毛麦染色体的应用。
5.权利要求3所述的寡核苷酸探针组合在检测小麦和簇毛麦易位染色体中的应用。
6.权利要求2所述的寡核苷酸探针或权利要求3所述的寡核苷酸探针组合在区分簇毛麦各条染色体中的应用。
7.权利要求1或2所述的寡核苷酸探针在小麦种质资源改良或育种中的应用。
8.一种检测小麦背景中簇毛麦染色体的方法，其特征在于，利用权利要求3所述的寡核苷酸探针组合对待测小麦材料进行ND-FISH方法检测。
9.一种检测小麦和簇毛麦易位染色体的方法，其特征在于，利用权利要求3所述的寡核苷酸探针组合对待测小麦材料进行ND-FISH方法检测。
10.含有权利要求1和/或2所述寡核苷酸探针的检测试剂盒。
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