CN109439788A

CN109439788A - 与小麦株高主效基因位点紧密连锁的kasp分子标记及其应用

Info

Publication number: CN109439788A
Application number: CN201811383843.9A
Authority: CN
Inventors: 安调过; 麻菲菲; 许云峰; 童依平; 刘冬成; 张爱民
Original assignee: Center for Agricultural Resources Research of Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Current assignee: Center for Agricultural Resources Research of Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Priority date: 2018-11-20
Filing date: 2018-11-20
Publication date: 2019-03-08
Anticipated expiration: 2038-11-20
Also published as: CN109439788B

Abstract

本发明公开了一种与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP标记及其应用，所述小麦株高主效基因位点位于小麦2DS染色体臂上，命名为QPh‑2DS，与其紧密连锁的KASP分子标记为AX‑111021196和AX‑111561744，所述QPh‑2DS定位在KASP分子标记AX‑111021196和AX‑111561744之间的0.917 Mb区间内；利用本发明提供的两个KASP标记AX‑111021196和AX‑111561744对4个环境条件下179个小麦品种或品系的株高进行了验证，其结果完全符合预期。本发明提供的KASP标记具有快速、简便、特异性高和准确性好等特点，可在较短时间内完成大批量材料中该株高主效基因位点的筛选和表型预测工作。

Description

与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术和分子育种领域，具体地说是一种与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记及其应用。

背景技术

小麦是世界上最主要的粮食作物之一，也是我国第二大粮食作物，其高产、稳产直接影响到我国人们生活水平和国家粮食安全。而小麦株高不仅影响产量潜力，而且与抗倒伏性密切相关，调控株高以提高抗倒伏性一直是小麦重要的育种目标。

分子标记辅助选择育种技术，是利用控制目标性状位点/基因连锁的分子标记，通过分子生物学检测基因分型，达到对目标性状选择的目的；其优点是简单快速，不受环境及环境互作的影响，能够快速且高效的选育出目标资源材料。

单核苷酸的多态性（SNP，Single Nucleotide Polymorphisms），是指在基因组上单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，包括转换（transition）、颠换（transversion）、缺失（deletion）和插入（insertion）。SNP标记主要有以下特点：1、数量多，分布广泛；2、适于快速、规模化筛查；3、等位基因频率的容易估计；4、易于基因分型。

KASP（竞争性等位基因特异性PCR，即Kompetitive Allele-Specific PCR）技术是目前国内外主流的基因分型方法之一。该技术是基于引物末端碱基的特异匹配来对SNP位点进行精准的双等位基因判定。该项技术优点是：其一，只要合成两个通用荧光探针，两个通用淬灭探针，再加合成多个针对具体位点的SNP-PCR引物，就可以检测许多位点；其二，因为荧光探针和淬灭探针都很贵，KASP方法相比于原来的Taqman方法，可以通过通用荧光探针来代替针对位点的荧光探针，无需昂贵的双色标记探针，大大节约了成本。KASP技术可以在短时间内准确判断分子标记类型，且平均基因分析的误差较低，具有极高的分析稳定性和准确度，还可以显著降低反应成本，增加灵活性和缩短分析时间，尤其在大规模标记检测工作中具有明显优势，可实现高通量育种平台检测。因此，研究调控株高的基因，获得与株高基因紧密连锁的KASP分子标记，对小麦株高主效基因位点进行定位和检测，有效调控小麦的株高类型，选育预期株高类型的小麦新品种，对提高小麦产量具有极其重大的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记及其应用，以利用该分子标记对小麦株高主效基因位点QPh-2DS进行定位和检测，在小麦选育中对其亲本进行有目的地选择，为选育目标株高类型的小麦新品种提供了指导依据。

本发明是通过以下方法实现的：与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记，所述小麦株高主效基因位点位于小麦2DS染色体臂上，命名为QPh-2DS，与其紧密连锁的KASP分子标记为AX-111021196和AX-111561744，所述QPh-2DS定位在KASP分子标记AX-111021196和AX-111561744之间的0.917 Mb区间内；

所述AX-111021196的KASP分子标记引物分别是核苷酸序列如SEQ ID NO :1所示的上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO :2所示的上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO :3所示的下游引物；

所述AX-111561744的KASP分子标记引物分别是核苷酸序列如SEQ ID NO :4所示的上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO : 5所示的上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO : 6所示的下游引物。

所述的与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记在小麦株高QPh-2DS基因定位和检测中的应用。

所述的与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记在选育小麦不同株高相关资源和在创制小麦不同株高相关材料中的应用。

所述的与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记在小麦株高性状选择育种中的应用。

本发明还保护一种筛选具有株高主效基因位点QPh-2DS小麦材料的方法，包括以下步骤：

（1）提取待测小麦样品的DNA；

（2）取浓度为50-100ng/μL的模板DNA 1.00 μL，引物混合液0.14 μL，2 × KASPMaster Mix 5.00μl，ddH₂O 3.86 μl，进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；所述引物混合液为权利要求2或权利要求3所述的两条上游引物和一条下游引物，其两条上游引物的终浓度均为12 μM；下游引物的终浓度均为30 μM；

（3）采用荧光检测仪和生物学软件对PCR扩增产物进行分型分析，确定等位位点AX-111021196-T为对株高有负向效应的优异等位类型，等位位点AX-111561744-T为对株高有负向效应的优异等位类型。

所述方法的步骤（2）中PCR扩增的反应条件为：95℃预变性15分钟；95℃变性20秒，61℃梯度退火并延伸60秒，10个循环，每个循环退火及延伸的温度降低0.6℃；94℃变性20秒，55℃退火并延伸60秒，30个循环；37℃条件下测量荧光信号。

本发明还保护一种小麦株高分型检测试剂盒，包括如上所述的小麦株高主效基因位点QPh-2DS的KASP分子标记。

所述的小麦株高分型检测试剂盒在小麦株高性状选择育种中的应用。

本发明以小麦品种小偃54为母本、京411为父本的F₇代重组近交系（RecombinantInbred Lines，RIL）群体为材料，对株高性状进行6个环境条件下的表型鉴定，并结合660KSNP芯片构建的高密度连锁图谱，首次将控制株高性状的主效基因位点QPh-2DS定位于2DS染色体臂上AX-111021196和AX-111561744分子标记0.917 Mb区间内，并获得了所述分子标记相对应的引物序列。利用本发明开发的两个KASP标记对179个小麦品种（系）在多个环境条件下进行了验证，其实验结果与预期一致。本发明的创新点在于：

1. 本发明将株高性状的主效基因位点QPh-2DS定位于2DS染色体臂上AX-111021196和AX-111561744分子标记0.917 Mb区间内，并首次开发了与小麦株高性状的主效基因位点QPh-2DS紧密连锁的两个KASP分子标记。通过实验证明，控制株高性状的主效基因位点QPh- 2DS为在6个环境条件下均能稳定表达的主效位点；

2. 本发明中开发的KASP标记基于660K高密度SNP芯片，与传统分子标记相比，具有快速、简便、特异性高和准确性好等特点，可在较短时间内完成大批量材料的筛选和表型预测工作；

3. 本发明中开发的基于主效基因位点QPh-2DS的KASP标记，在上世纪50年代以来在我国小麦育种工作中发挥重要作用的小麦骨干亲本、不同时期不同生态区的主栽品种及小麦微核心种质材料里同样适用，确实具有对株高进行辅助选择的作用，可应用于分子标记辅助选择育种，大大加快小麦品种的选育进程。

本发明将提供的与小麦株高主效基因位点QPh-2DS的KASP分子标记应用于小麦育种中，不仅筛选快速精准，不受环境影响，选择目标明确，而且节约了成本，大大提高了高产小麦品种或品系的选择效率和选择质量。

附图说明

图1为AX-111021196分子标记对179份品种/品系的小麦自然群体的基因分型结果图。

图2为AX-111561744分子标记对179份品种/品系的小麦自然群体的基因分型结果图。

图3为AX-111021196分子标记分型结果的株高统计分析图。

图4为AX-111561744分子标记分型结果的株高统计分析图。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。实施例中所用的试验材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

实施例1 小麦株高候选位点及其分子标记的获得

（1）以小麦品种小偃54为母本、京411为父本进行杂交得到杂种F₁，F1自交产生F₂，采用单粒传法获得含有182个株系的F₇代重组近交系RIL群体。

（2）RIL群体株高性状多年环境下的鉴定

于2006-2007和2007-2008两个年度种植于中国科学院栾城农业生态系统试验站（37°53'15″N，114°40'47″E，海拔50 m，位于太行山山前平原）。试验设正常施肥（CK）、低氮胁迫（LN）和低磷胁迫（LP）3个处理，采用裂区设计，两次重复，每个小区4行，行长1.5 m，行距0.25 m，每行30粒种子。常规田间管理，生长期间没有发生严重病虫害和倒伏。小麦成熟后，每个小区随机抽取10株调查株高，从茎基部到小麦穗部顶端的距离（不包括芒长），取10株平均值。

（3）基因型扫描与QTL定位

a）基因组DNA提取：采用SDS法提取RIL群体的182份植株DNA，检测其浓度，并稀释至50-100 ng/μL。

b）Wheat 660K SNP扫描

① 所有材料送至Affymetrix平台，并进行Genomic DNA质量检测，用Wheat 660K SNParray进行全基因组扫描；

② 将基因型缺失10%以上的SNP标记及某个基因型在群体中出现频率少于30%的标记去除，剩余6,987个SNP标记；

③ 利用基于完备区间作图的ICIMapping 4.1的BIN功能将标记聚类，相同分离方式的标记聚于同一个BIN中，在每个BIN中选取缺失数据最少的一个标记来代表此BIN的基因型分离方式；

④ 利用ICIMapping 4.1的MAP功能，将这些代表性标记分成不同的连锁群，标准设置为LOD值3.5，重组率0.3，计算采用Kosambi作图函数；

⑤ 利用JoinMap v4.0，将不同的遗传连锁群排序组成一条连续的染色体，LOD值≥3，短臂在上，长臂在下；

⑥ 株高性状的连锁分析：利用上述高密度图谱和基于ICIMapping 4.1的BIP功能，以P≤ 0.001为标准对每个SNP标记的群体基因型资料与对应每个株系6个环境条件下的株高进行连锁分析并作图；

⑦由QTL分析可得：在染色体2D上发现6个环境条件下重复出现株高QTL标记区间为AX-111021196—AX-111561744；分子标记AX-111021196位于中国春参考基因组序列（IWGSCV1.0）22.499 Mb物理位置；分子标记AX-111561744位于中国春参考基因组序列（IWGSCV1.0）23.416 Mb物理位置；这两个分子标记的SNP两侧序如下所示：

分子标记AX-111021196的SNP两侧序列为：

AAGAGGGCTTTTCAAGTTCTTCAGCTTGAGCTCAA[C/T]TTCCTTGAAAACTACTACCAAGCAGTCGTCCCTGT；

分子标记AX-111561744的SNP两侧序列为：

CCTGAGCAACCTAATTCAATAGCCAACCAAGTCAG[G/T]GGACTGGACTGCCTCAAAGATTCCATCACGATTCT。

（4）KASP标记的开发

为了方便对小麦株高候选材料进行两个SNP标记AX-111021196和AX-111561744的鉴定和辅助选择，同时为了降低育种成本和工作量，增强育种工作中的可操作性，需要将与目标分子标记探针序列开发为基于常规分子生物学手段可用于鉴定和筛选的KASP标记。我们分别下载或延长每个SNP标记前后至少50 bp碱基序列，针对两个目标分子标记分别设计了两条上游引物（AL1、AL2）和一条共用下游引物C；

AX-111021196的上游引物AL1的核苷酸序列：

5’–3’ GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTTCTTCAGCTTGAGCTCAAc，如SEQ ID NO:1所示；

AX-111021196的上游引物AL2的核苷酸序列：

5’–3’ GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTTCTTCAGCTTGAGCTCAAt，如SEQ ID NO:2所示；

AX-111021196的下游引物C的核苷酸序列：

5’–3’ ACAGGGACGACTGCTTGGTA，如SEQ ID NO:3所示。

AX-111561744的上游引物AL1的核苷酸序列：

5’–3’ GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCAATAGCCAACCAAGTCAGg；如SEQ ID NO:4所示；

AX-111561744的上游引物AL2的核苷酸序列：

5’–3’ GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCAATAGCCAACCAAGTCAGT；如SEQ ID NO:5所示；

AX-111561744的下游引物C的核苷酸序列：

5’–3’ TGGAATCTTTGAGGCAGTCC，如SEQ ID NO:6所示。

（5）引物检测

以RIL群体的182份小麦系基因组DNA为模板，利用SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示的引物对模板进行PCR扩增。

PCR扩增体系如下所示:

所述引物混合液中上游引物AL1和上游引物AL2的终浓度均为12μM，下游引物C的终浓度为30 μM。

PCR反应程序如下所示：

PCR产物检测使用BIO-RAD iCycler Thermal Cycler w/iQ5Optical Module for RT-PCR（Bio-Rad iQ5实时荧光定量PCR仪）在37℃进行荧光收集，利用生物信息学软件BioRadCFXManager对PCR产物进行分型，并与已知基因型进行对照。

实施例2 开发的KASP分子标记在鉴定、筛选小麦株高性状中的应用

1）收集上世纪50年代以来在我国小麦育种工作中发挥重要作用的小麦骨干亲本、不同时期不同生态区的主栽品种及小麦微核心种质材料，通过田间统一种植，剔除过早熟、过晚熟及不适合本地种植的材料，筛选生育期相对一致且能正常生长的材料共179份品种/品系组成自然群体，避免了因生育期或者生长状况不同而导致的表型鉴定结果误差。

2）从2012-2013、2013-2014、2014-2015到2015-2016连续4个年度将上述179份材料种植于中国科学院栾城试验站，每份材料种3行，行长1.5 m，均匀播种30粒，行间距25cm。常规田间管理，生长期间没有发生严重病虫害和倒伏。

3）对收获的小麦材料进行KASP标记检测，具体方法为：于三叶期提取叶片基因组总DNA；以179份材料和10份已知基因型主栽品种（对照）的基因组DNA为底物，利用开发的携带不同荧光标记信号的KASP标记引物分别进行PCR扩增，所述引物为：

AX-111021196分子标记的上游引物AL1：

5’–3’ GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTTCTTCAGCTTGAGCTCAAc（SEQ ID NO:1），

AX-111021196分子标记的上游引物AL2：

5’–3’ GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTTCTTCAGCTTGAGCTCAAt（SEQ ID NO:2），

AX-111021196分子标记的下游引物C：

5’–3’ ACAGGGACGACTGCTTGGTA（SEQ ID NO:3）；

AX-111561744分子标记的上游引物AL1：

5’–3’ GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCAATAGCCAACCAAGTCAGg（SEQ ID NO:4），

AX-111561744分子标记的上游引物AL2：

5’–3’ GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCAATAGCCAACCAAGTCAGT（SEQ ID NO: 5），

AX-111561744分子标记的下游引物C：

5’–3’ TGGAATCTTTGAGGCAGTCC （SEQ ID NO:6）。

其PCR扩增体系和PCR反应程序如实施例1所示。

4）PCR产物检测使用BIO-RAD iCycler Thermal Cycler w/iQ5Optical Modulefor RT-PCR（Bio-Rad iQ5实时荧光定量PCR仪）在37℃进行荧光收集，利用生物信息学软件BioRadCFXManager对PCR产物进行分型，并与已知基因型进行对照。

5）基因分型和验证结果

① 用AX-111021196的引物进行扩增时，有81份材料（45.3%）扩增出了等位位点AL1（Allele C），有86份材料（48.0%）扩增出了优异等位位点AL2（Allele T），6份材料杂合，6份材料缺失，如图1所示。图1中靠近X轴呈圆形点的为携带等位位点AL1材料的分型结果，靠近Y轴呈方形点的为携带等位位点AL2材料的分型结果，中间呈三角形点分布为携带杂合位点材料的分型结果。通过方差分析对比发现2013-2014年度下两种等位位点材料的株高在0.01水平上差异显著（P值＝0.0064），优异等位AL2（Allele T）所对应的材料平均植株高为89.1 cm，等位位点AL1（Allele C）所对应的材料平均株高为98.2 cm；2014-2015年度下两种等位位点材料的株高在0.05水平上差异显著（P值＝0.0111），优异等位AL2（Allele T）所对应的材料平均植株高为78.5 cm，等位位点AL1（Allele C）所对应的材料平均株高为85.5cm；2015-2016年度下两种等位位点材料的株高在0.05水平上差异显著（P值＝0.0330），优异等位AL2（Allele T）所对应的材料平均植株高为74.2 cm，等位位点AL1（Allele C）所对应的材料平均株高为80.3 cm，如图3（AX-111021196）所示。图3中X轴坐标为2012-2013、2013-2014、2014-2015和2015-2016四个不同的年度，Y轴坐标为株高性状的表型值，单位为厘米。图3中每个年度左侧深灰色的柱形代表携带等位位点AL1（Allele C）的材料，右侧黑色的柱形代表携带等位位点AL2（Allele T）的材料。从图3中可以看出，在2012-2013年度，携带等位位点AL1的材料比携带等位位点AL2的材料具有更高的株高表型值，但差异不显著；在2013-2014年度，携带等位位点AL1的材料比携带等位位点AL2的材料具有更高的株高表型值，差异极显著；在2014-2015年度，携带等位位点AL1的材料比携带等位位点AL2的材料具有更高的株高表型值，差异显著；在2015-2016年度，携带等位位点AL1的材料比携带等位位点AL2的材料具有更高的株高表型值，差异显著。

② 用AX-111561744引物进行扩增时，有110份材料（61.5%）扩增出了等位位点AL2（Allele T），有61份材料（34.1%）扩增出了优异等位位点AL1（Allele G），8份材料杂合。如图2所示，图2中靠近X轴呈圆形点的为携带等位位点AL1材料的分型结果，靠近Y轴呈方形点的为携带等位位点AL2材料的分型结果，中间呈三角形点分布为携带杂合位点材料的分型结果。通过方差分析对比发现2013-2014年度下两种等位位点材料的株高在0.01水平上差异显著（P值＝0.0064），优异等位AL2（Allele T）所对应的材料平均植株高为89.1 cm，等位位点AL1（Allele C）所对应的材料平均株高为98.2 cm；2014-2015年度下两种等位位点材料的株高在0.05水平上差异显著（P值＝0.0111），优异等位AL2 （Allele T）所对应的材料平均植株高为78.5 cm，等位位点AL1（Allele C）所对应的材料平均株高为85.5 cm；2015-2016年度下两种等位位点材料的株高在0.05水平上差异显著（P值＝0.0330），优异等位AL2（Allele T）所对应的材料平均植株高为74.2 cm，等位位点AL1（Allele C）所对应的材料平均株高为80.3 cm，如图4（AX-111561744）所示。图4中X轴坐标为2012-2013、2013-2014、2014-2015和2015-2016四个不同的年度，Y轴坐标为株高性状的表型值，单位为厘米。图4中每个年度左侧深灰色的柱形代表携带等位位点AL1（Allele G）的材料，右侧黑色的柱形代表携带等位位点AL2（Allele T）的材料。从图4中可以看出，在2012-2013年度，携带等位位点AL1的材料比携带等位位点AL2的材料具有更高的株高表型值，差异极显著；在2013-2014年度，携带等位位点AL1的材料比携带等位位点AL2的材料具有更高的株高表型值，差异极显著；在2014-2015年度，携带等位位点AL1的材料比携带等位位点AL2的材料具有更高的株高表型值，差异极显著；在2015-2016年度，携带等位位点AL1的材料比携带等位位点AL2的材料具有更高的株高表型值，差异极显著。

6）根据5）得到的分型和验证结果，本发明的两个KASP分子标记在179份品种/品系组成的自然群体中同样与株高显著相关。表明从RIL系群体中鉴定到的株高优异等位位点，在上世纪50年代以来在我国小麦育种工作中发挥重要作用的小麦骨干亲本、不同时期不同生态区的主栽品种及小麦微核心种质材料里同样适用，实验结果与预期一致。说明本发明与株高紧密连锁的标记确实具有对株高进行辅助选择的作用。

本发明的两个KASP分子标记，序列、引物明确，染色体位置清晰，高效、准确，经案例实施，可直接用于分子标记辅助选择育种中。

以上所述用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员是易于操作的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国科学院遗传与发育生物学研究所农业资源研究中心

<120> 与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记及其应用

<130>

<160> 6

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 41

<212> DNA

<213> AX-111021196分子标记的上游引物AL1

<400> 1

gaaggtgacc aagttcatgc tttcttcagc ttgagctcaa c 41

<210> 2

<211> 41

<212> DNA

<213> AX-111021196分子标记的上游引物AL2

<400> 2

gaaggtcgga gtcaacggat tttcttcagc ttgagctcaa t 41

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> AX-111021196分子标记的下游引物C

<400> 3

acagggacga ctgcttggta 20

<210> 4

<211> 41

<212> DNA

<213> AX-111561744分子标记的上游引物AL1

<400> 4

gaaggtgacc aagttcatgc tcaatagcca accaagtcag g 41

<210> 5

<211> 41

<212> DNA

<213> AX-111561744分子标记的上游引物AL2

<400> 5

gaaggtcgga gtcaacggat tcaatagcca accaagtcag t 41

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> AX-111561744分子标记的下游引物C

<400> 6

tggaatcttt gaggcagtcc 20

Claims

1.与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记，其特征在于，所述小麦株高主效基因位点位于小麦2DS染色体臂上，命名为QPh-2DS，与其紧密连锁的KASP分子标记为AX-111021196和AX-111561744，所述QPh-2DS定位在KASP分子标记AX-111021196和AX-111561744之间的0.917 Mb区间内；

所述AX-111021196的KASP分子标记引物分别是核苷酸序列如SEQ ID NO :1所示的上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO :2所示的上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO: 3所示的下游引物；

所述AX-111561744的KASP分子标记引物分别是核苷酸序列如SEQ ID NO :4所示的上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO :5所示的上游引物、核苷酸序列如SEQ ID NO :6所示的下游引物。

2.一种权利要求1所述的与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记在小麦株高基因QPh-2DS定位和检测中的应用。

3.一种权利要求1所述的与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记在选育小麦不同株高相关资源和在创制小麦不同株高相关材料中的应用。

4.一种权利要求1所述的与小麦株高主效基因位点紧密连锁的KASP分子标记在小麦株高性状选择育种中的应用。

5.一种筛选具有株高主效基因位点QPh-2DS小麦材料的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取待测小麦样品的DNA；

（2）取浓度为50-100ng/μL的模板DNA 1.00 μL，引物混合液0.14 μL，2 × KASPMaster Mix 5.00μl，H₂O 3.86 μl，进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；所述引物混合液为权利要求2或权利要求3所述的两条上游引物和一条下游引物，其两条上游引物的终浓度均为12μM；下游引物的终浓度均为30 μM；

6.根据权利要求5所述的筛选具有株高主效基因位点QPh-2DS小麦材料的方法，其特征在于，步骤（2）中PCR扩增的反应条件为：95℃预变性15分钟；95℃变性20秒，61℃梯度退火并延伸60秒，10个循环，每个循环退火及延伸的温度降低0.6℃；94℃变性20秒，55℃退火并延伸60秒，30个循环；37℃条件下测量荧光信号。

7.一种小麦株高分型检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的小麦株高主效基因位点QPh-2DS的KASP分子标记。

8.一种如权利要求7所述的小麦株高分型检测试剂盒在小麦株高性状选择育种中的应用。