CN106962165A - 一种可移动的铁皮石斛培养基的制作方法及一体化育苗方法 - Google Patents

一种可移动的铁皮石斛培养基的制作方法及一体化育苗方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种可移动的铁皮石斛培养基的制作方法及一体化育苗方法，属于植物组织培养育苗技术领域。本发明培养基的制作方法及一体化育苗方法改变了培养基不能移动的传统方法，无菌播种或接入试管丛芽苗，经过一段时间培育，铁皮石斛试管苗根系扎入培养基中或附生培养基上，种苗与培养基形成可以移动的整体。经过炼苗、出瓶、驯化、移植树杆或者石壁上，种苗迅速适应外界环境并快速生长。本发明方法的操作工艺简单，成本低，可大大提高铁皮石斛种苗野外移栽的成活率，移栽成活率可达到100％，解决了铁皮石斛仿野生栽培的关键技术，便于铁皮石斛生态种植产业化生产，特别适合铁皮石斛大规模仿野生栽培如树杆栽培、石壁栽培等产业化生产。

Description

一种可移动的铁皮石斛培养基的制作方法及一体化育苗方法
技术领域
本发明属于植物组织培养育苗技术领域，具体的说，涉及一种可移动的铁皮石斛培养基的制作方法及一体化育苗方法。
背景技术
铁皮石斛为兰科石斛属植物，在《道藏》中被列为九大仙草之首。随着健康大产业发展，铁皮石斛组培育苗及人工种植技术基本成熟。从古籍药典到现代技术研究发现，铁皮石斛适宜在凉爽、湿润、空气畅通的环境生长，组培苗培育过程中也表现相似特性。如何生产优质铁皮石斛药材，是目前铁皮石斛产业发展共同努力的方向。因此仿野生的生态树杆栽培、石壁栽培等新型栽培方式不断发展。然而，用于仿野生栽培的种苗一般来源于温室苗床的驯化苗，起苗、绑缚会伤及种苗根系，导致树栽、石栽种苗成活率低或根系恢复期较长，影响了生态种植铁皮石斛产业的发展。如何克服铁皮石斛试管种苗无伤害移植到树杆和石壁上，需要创铁皮石斛组培新育苗模式。
专利申请号为201510874078.0，发明名称为“一种铁皮石斛壮苗生根培养基及制备方法和培养方法”，该发明公开了一种铁皮石斛壮苗生根培养基，通过采用天然添加物代替激素实现全程无激素培养，同时减少工作程序。该发明主要目的是通过生态育苗提高效率，创新点是培养基配方改良。
专利申请号为201410174371.1，发明名称为“一种铁皮石斛水培培养基及其应用”，公开了一种适宜于铁皮石斛无土栽培的水培培养基，所述培养基以1/4MS培养基为基础培养基，添加1～5mg/L的α-萘乙酸，以及适量托玛琳或鹅卵石而成。该发明模拟提供石斛生长所需阴凉湿润环境实现无土栽培，该发明创新点是培养方式的改变。
专利申请号为20151039587.1，发明名称为“一种利用海浮石促进铁皮石斛生根的培养基”的专利申请，公开了一种铁皮石斛组培繁育及仿野生栽培方法。该发明利用海浮石促进铁皮石斛生根培养基，以1/2MS培养基为基础培养基，其中还添加了其他营养成分，利用海浮石的阻碍作用使根系多方向生长，从而获得根系发达的组培苗。这种培养基方法实际上是为了提高组培苗生根质量，未涉及到解决铁皮石斛后续移栽的研究。
虽然对于铁皮石斛组培培养基试验研究较多，但仅限于组织培养育苗、栽培及育苗质量等方面的研究，对于铁皮石斛种苗从培养到定植过程中解决根系无伤害安全移栽，目前的研究还没涉及到。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种可移动的铁皮石斛培养基的制作方法。
本发明的另一目的在于提供通过上述制作方法得到的可移动的铁皮石斛培养基。
本发明的再一目的在于一种铁皮石斛的一体化育苗方法。
通过可移动的铁皮石斛培养基及试管生根种苗，可以进行根无伤害的一体化移栽，适合开展大规模仿野生栽培如树杆栽培和石壁栽培，是铁皮石斛生态种植及产业化生产的关键技术。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种可移动的铁皮石斛培养基的制作方法，包括如下步骤：
(1)配制液体培养基：1/2MS培养基+0.1～0.5mg/L萘乙酸，pH＝5.5～5.7；
(2)制作布袋培养基：将碎蛇木、小号火山石、高吸水性树脂填充至纱布小布袋内，袋内混匀，封口，并在袋中央留一小孔，作为种苗接入时使用；
(3)制作可移动的铁皮石斛培养基：将步骤(2)得到的布袋培养基放在步骤(1)得到的液体培养基中吸足，取出，放入广口培养瓶内高温高压灭菌，得到无菌的可移动的铁皮石斛培养基。
步骤(1)中所述的1/2MS培养基是指MS培养基中大量元素减半，微量元素不变。
步骤(2)中所述的碎蛇木的长为0.3～0.5cm；优选为0.4cm；
步骤(2)中所述的小号火山石的直径为0.1～0.2cm；优选为0.1cm；
步骤(2)中所述的碎蛇木与小号火山石的重量比为1～1.5：1～1.5；优选为1：1；
步骤(2)中所述的高吸水性树脂为碎蛇木和小号火山石总重量的1％～1.65％；
步骤(2)中所述的纱布小布袋为5～7*5～7cm纱布小布袋；优选为5*5cm纱布小布袋；
步骤(3)中所述的吸足的时间为30～120min；优选为50min；
步骤(3)中所述的高温高压灭菌的条件为湿热121℃灭菌15～30分钟；优选为湿热121℃灭菌20分钟。
作为一种优选，用纱布作为外包装的培养基，可以将培养基与附着生长在其表面的铁皮石斛试管苗一起移动，改变了传统上只能移动(转接)试管苗而不能移动培养基的方法。
作为一种优选，纱布作为培养基的外层包装，表面有明显的网格和附着力，营养液渗透自如。使用纱布制作而成的小布袋，既可固定培养基形状，避免培养基在移栽过程中出现松散，又方便在培养过程中后补营养液的不足。
作为一种优选，高吸水性树脂能够吸收相当自身重量的300倍水分或者营养水溶液，吸水后膨胀为水凝胶，然后缓慢释放养分、水分供铁皮石斛试管种苗生长。
作为一种优选，碎的蛇木具有架空透气的作用，利于铁皮石斛根深入培养基中，于培养基连为一体，方便铁皮石斛试管苗与培养基一起移动，便于整体移栽至树杆和石壁上。蛇木是桫椤树的根，纤维化程度高，不易腐烂，碎的蛇木纵横交错，透气性好，满足了铁皮石斛根系气生性的特点。
作为一种优选，火山石具有吸附/释放营养的双重功效，含有多种微量元素，有利于铁皮石斛试管苗的生长，利于铁皮石斛根系发育。
一种可移动的铁皮石斛培养基，通过上述制作方法得到。
一种铁皮石斛的一体化育苗方法，包括如下步骤：
(Ⅰ)种苗接种：将铁皮石斛无菌种胚或者试管分化苗接入到上述可移动的铁皮石斛培养基的接种孔处，置入试管苗培养室内培养生根成苗，得到铁皮石斛试管生根种苗；
(Ⅱ)一体化移植：将铁皮石斛试管生根种苗瓶置入温室炼苗10～20天后，将布袋与种苗一体取出，清水洗净营养液；
(Ⅲ)炼苗过渡：将一体化种苗移栽到穴盘内，在温室内生长3～6个月，常规管理，根系生长布满培养基质表面或者内部；
(Ⅳ)仿野生移植：将炼苗后获得优质苗一体移植到树杆或者石壁上进行仿野生栽培，成活率达到100％，且快速进入生长阶段。
步骤(Ⅰ)中所述的试管分化苗是事先已经培养好的铁皮石斛试管丛芽苗，按照2～3芽接入上述可移动的铁皮石斛培养基的种苗接入点；
步骤(Ⅱ)中所述的一体化移植的试管苗标准是试管种苗生长到5cm以上高度且具有4～6条根系，根系附生布袋表面或者扎入培养基中；
步骤(Ⅳ)中所述的仿野生移植是将培养基质用细钉或者细绳固定在树杆或者石壁上。
将铁皮石斛试管种苗接种到可移动的铁皮石斛培养基上，小苗不断长大，并不断发生根系，这种可移动的铁皮石斛培养基与常规培养基具有功能等同培育铁皮石斛试管苗的作用。
当铁皮石斛试管苗在可移动的铁皮石斛培养基上生长60天后，根系与培养基连接形成一体，可将培养基与小苗一同从培养瓶中取出，经过流水洗净，在温室中培育并驯化6个月后，直接移植到野外树杆、石壁上，自试管苗接种到布袋上，试管苗与培养基质均一同移动。移植不伤及根系，因此可以保障移栽成活率达100％。
本发明相对于现有技术，具有如下的优点及效果：
可移动的铁皮石斛培养基的制作方法及一体化育苗方法改变了培养基不能移动的传统方法，无菌播种或接入试管丛芽苗，经过一段时间培育，铁皮石斛试管苗根系扎入培养基中或附生培养基上，种苗与培养基形成可以移动的整体。经过炼苗、出瓶、驯化、移植树杆或者石壁上，种苗迅速适应外界环境并快速生长。制作可移动的铁皮石斛培养基方法及一体化育苗方法的操作工艺简单，成本低，可大大提高铁皮石斛种苗野外移栽的成活率，移栽成活率可达到100％，解决了铁皮石斛仿野生栽培的关键技术，便于铁皮石斛生态种植产业化生产，特别适合铁皮石斛大规模仿野生栽培如树杆栽培、石壁栽培等产业化生产。
附图说明
图1是纱布小布袋示意图。
图2是纱布小布袋材料分布横切面示意图。
其中，A为纱布小布袋；B为火山石；C为蛇木；D为高吸水性树脂；E为高吸水性树脂吸取营养液后水凝状物。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
(1)铁皮石斛培养液配制：配制1L 1/2MS培养液，含加0.1～0.5mg/L萘乙酸，调pH5.5，充分混匀后备用；
(2)纱布小布袋制作：裁剪10*5cm规格的纱布，对折成5*5cm的纱布袋，使用针线缝合两边，留一边做开口，备用；
(3)培养基载体的制作：向5*5cm的纱布小布袋里，均匀添加适量的碎蛇木(长0.4厘米)、小粒火山石(直径0.1厘米)(重量比1：1)，再向纱布小布袋里加入1％～1.65％(重量比)的高吸水性树脂，使用针线缝合布袋开口，混匀袋内材质，中央剪小口作为接苗部位，并将布袋平摊在培养瓶里；
(4)向沙布袋的培养瓶里添加100mL步骤(1)得到的铁皮石斛培养液，待布袋内材质吸收50min后，倒出多余液体，盖上培养瓶盖；
(5)将制作好的布袋培养基进行高压灭菌，121℃，20分钟；
(6)培养基冷却至常温后，进行铁皮石斛试管苗接种工作，把铁皮石斛试管苗接入袋中央开口处；
(7)培养3个月后，根系基本扎根在布袋里面或者附在布袋表面，试管苗6cm，达到出瓶标准；3个月后，若种苗高度不够，可以添加灭菌后的步骤(1)得到的铁皮石斛培养液20mL继续培养，至试管苗达到标准；
(8)将达到标准的试管苗培养瓶置于温室内进行炼苗，适应自然光和温度，15天打开瓶盖，连同布袋取出铁皮石斛苗，清水洗净；
(9)将苗连同布袋摆放在育苗穴盘内，一苗一穴，温室内驯化培养6个月，常规管理，防止新生根系在穴间交叉缠绕；
(10)温室驯化6个月后，将苗连同布袋一起移植野外，用细钉将布袋固定在树上或石壁上，铁皮石斛试管苗在野外环境内继续生长，成活率达到100％，且快速进入生长阶段。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种可移动的铁皮石斛培养基的制作方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)配制液体培养基：1/2MS培养基+0.1～0.5mg/L萘乙酸，pH＝5.5～5.7；
(2)制作布袋培养基：将碎蛇木、小号火山石、高吸水性树脂填充至纱布小布袋内，袋内混匀，封口，并在袋中央留一小孔，作为种苗接入时使用；
(3)制作可移动的铁皮石斛培养基：将步骤(2)得到的布袋培养基放在步骤(1)得到的液体培养基中吸足，取出，放入广口培养瓶内高温高压灭菌，得到无菌的可移动的铁皮石斛培养基。
2.根据权利要求1所述的可移动的铁皮石斛培养基的制作方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的碎蛇木的长为0.3～0.5cm；
步骤(2)中所述的小号火山石的直径为0.1～0.2cm。
3.根据权利要求1所述的可移动的铁皮石斛培养基的制作方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的碎蛇木与小号火山石的重量比为1～1.5：1～1.5。
4.根据权利要求1所述的可移动的铁皮石斛培养基的制作方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的高吸水性树脂为碎蛇木和小号火山石总重量的1％～1.65％。
5.根据权利要求1所述的可移动的铁皮石斛培养基的制作方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的纱布小布袋为5～7*5～7cm纱布小布袋。
6.根据权利要求1所述的可移动的铁皮石斛培养基的制作方法，其特征在于：步骤(3)中所述的吸足的时间为30～120min；
步骤(3)中所述的高温高压灭菌的条件为湿热121℃灭菌15～30分钟。
7.一种可移动的铁皮石斛培养基，其特征在于通过权利要求1～6任一项所述的制作方法得到。
8.一种铁皮石斛的一体化育苗方法，其特征在于包括如下步骤：
(Ⅰ)种苗接种：将铁皮石斛无菌种胚或者试管分化苗接入到权利要求7所述的可移动的铁皮石斛培养基的接种孔处，置入试管苗培养室内培养生根成苗，得到铁皮石斛试管生根种苗；
(Ⅱ)一体化移植：将铁皮石斛试管生根种苗瓶置入温室炼苗10～20天后，将布袋与种苗一体取出，清水洗净营养液；
(Ⅲ)炼苗过渡：将一体化种苗移栽到穴盘内，在温室内生长3～6个月，常规管理，根系生长布满培养基质表面或者内部；
(Ⅳ)仿野生移植：将炼苗后获得优质苗一体移植到树杆或者石壁上进行仿野生栽培，且快速进入生长阶段。
9.根据权利要求8所述的铁皮石斛的一体化育苗方法，其特征在于：
步骤(Ⅰ)中所述的试管分化苗是事先已经培养好的铁皮石斛试管丛芽苗，按照2～3芽接入权利要求7所述的可移动的铁皮石斛培养基的种苗接入点；
步骤(Ⅱ)中所述的一体化移植的试管苗标准是试管种苗生长到5cm以上高度且具有4～6条根系，根系附生布袋表面或者扎入培养基中。
10.根据权利要求8所述的铁皮石斛的一体化育苗方法，其特征在于：
步骤(Ⅳ)中所述的仿野生移植是将培养基质用细钉或者细绳固定在树杆或者石壁上。
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