CN105075859A

CN105075859A - 一种利用海浮石促进铁皮石斛生根的培养基

Info

Publication number: CN105075859A
Application number: CN201510395087.1A
Authority: CN
Inventors: 丁小余; 刘玲; 牛志韬
Original assignee: Nanjing Normal University
Current assignee: Nanjing Normal University
Priority date: 2015-07-07
Filing date: 2015-07-07
Publication date: 2015-11-25
Anticipated expiration: 2035-07-07
Also published as: CN105075859B

Abstract

本发明提供了一种利用海浮石促进铁皮石斛生根的培养基。该培养基以1/2MS培养基为基础培养基，其中还含有如下组分：花宝二号0～5g/L、海浮石0～100g/L、香蕉汁0～100g/L、土豆汁0～100g/L、活性炭1～3g/L、琼脂5～7g/L、白砂糖15～30g/L。本发明向基础生根培养基中添加海浮石，海浮石可以阻碍根系多方向生长，而且可以为组培苗提供一种仿野生生长环境，从而获得根数多、根系发达、根较长且生长健壮的组培苗。该方法具有简单易行，经济实用，可大大提高成苗移栽成活率，便于铁皮石斛产业化生产。

Description

一种利用海浮石促进铁皮石斛生根的培养基

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种铁皮石斛生根培养，可有效提高成苗移栽成活率的方法。

背景技术

铁皮石斛(DendrobiumofficinaleKimuraetMigo)为兰科石斛属多年生附生草本植物，又称黑节草，是我国传统的珍稀名贵中药材，被誉为“救命仙草”。铁皮石斛具有生津养胃、滋阴清热、润肺益肾等功效，常用于治疗热病伤津、胃阴虚、病后虚火等病症。现代医学研究表明，铁皮石斛还具有抗疲劳、抗衰老、辅助抑制肿瘤、增强人体免疫力等作用。但由于铁皮石斛种子极小且不含胚乳，自然繁殖率极低，再加上人们长期掠夺式的采挖导致野生资源紧缺，甚至濒临灭绝，现已成为国家2级保护的贵重濒危药材品种之一。因此，为满足市场需求，大力发展人工栽培铁皮石斛品种显得尤为重要。

目前，铁皮石斛组培苗快繁的组织培养技术已基本成熟，但是影响组织快繁技术实现产业化的瓶颈是组培苗的大田移栽，而铁皮石斛根系的生长状况则是移栽存活的关键因素。因此，培养根数多、根粗壮、根长的组培苗是提高移栽成活率的根本措施。海浮石是火山喷发出的岩浆所形成的石块，一般是由铝、钾、钠的硅酸盐所成，因多采自海水，故含有众多的微量元素。其具有清肺火、化老痰、软坚通淋等功效，多在医学上应用，少见于组织培养上应用。同时，在生根培养基中添加海浮石可以人为建立天然屏障，阻碍根系随意、多方向生长，促进组培苗根部包裹海浮石，增加根系韧性，为铁皮石斛组培苗的生长提供一种组培瓶内仿野生生长环境，使其更易于适应移栽环境，提高移栽成活率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生根培养基，该培养基可作为铁皮石斛生根培养基，解决现有技术中成苗移栽成活率低，生根周期长等问题。本发明具有简单易行，提高成苗移栽成活率，为产业化移栽提供技术支持。

我们选取经过壮苗阶段，株高为2cm左右的，具有2～3片叶片，无根或少量细根的铁皮石斛组培苗为外植体，将其根部切断，保留1～2cm的根部，在无菌条件下将其一根一根接种到生根培养基中进行生根诱导。经过2～3周的生根培养，形成4～6厘米高，生长健壮，根数多且粗壮的成苗即可进行移栽，显著提高移栽成活率，从而实现了本发明的目的。

本发明为达到其目的，采用的技术方案如下：

一种利用海浮石促进铁皮石斛生根培养基，所述生根培养基为向1/2MS培养基中加入花宝二号、海浮石、香蕉汁、土豆汁、活性炭、琼脂、白砂糖配置而成，如下组分在生根培养基中的浓度分别为：花宝二号0～5g/L、海浮石0～100g/L、香蕉汁0～100g/L、土豆汁0～100g/L、活性炭1～3g/L、琼脂5～7g/L、白砂糖15～30g/L。

优选的，如下组分在生根培养基中的浓度分别为：花宝二号1～2g/L、海浮石60～100g/L、香蕉汁40～60g/L、土豆汁60～80g/L，采用该优选培养基对组培苗进行生根培养，成苗根数多且粗壮，生根时间明显缩短。

进一步优选的，如下组分在生根培养基中的浓度分别为：花宝二号2g/L、海浮石80g/L、香蕉汁60g/L、土豆汁80g/L，采用该进一步优选的生根培养基，培养的成苗根数多且粗壮，生根培养效果最佳。

选取进过壮苗阶段，株高为2cm左右的，具有2～3片叶片，无根或少量细根的铁皮石斛组培苗为外植体，将其根部切断，保留1～2cm的根部，在无菌条件下将其一根一根接种到生根培养基中进行生根诱导。

本发明所述的利用海浮石促进铁皮石斛生根培养基，生根培养的条件为：温度22～26℃，光照强度2000～2500lx，光暗交替16h/8h，即光照培养16小时和暗培养8小时交替进行。

本发明具有如下有益效果：

(a)由于铁皮石斛组培苗快繁的培养基配方已基本成熟，但是成苗移栽成活率是制约产业化生产的关键。因此，获得成根数多且根粗壮的成苗显得尤为重要。本发明重在研究一种促进铁皮石斛生根培养基，从而提高移栽成活率。(b)本发明进一步在生根培养基中添加海浮石，在培养过程中，海浮石可人为建立天然屏障，阻碍根系随意、多方向生长，促使组培苗顽强生长，进而根系发达以获得更多营养物质；此外，海浮石可在组培瓶内为组培苗提供一种攀岩基地，从而实现组培苗在组培瓶内仿野生生长，更易于适应移栽环境；而且，海浮石还能提供铝、钾、钠的硅酸盐以及众多生长所需的微量元素，促进生根，提高成苗移栽成活率。(c)在生根培养基中添加花宝二号、香蕉汁、土豆汁和活性炭，能提供一些必要的微量营养成分，生长激素和生理活性物质等，抑制组培苗褐化现象，促进生根，缩短生根时间，提高成苗移栽成活率，便于铁皮石斛产业化生产。

附图说明

图1.生根培养3周后组培苗的整体生长情况(左图：添加海浮石生根培养基，右图：未添加海浮石生根培养基)。

图2.生根培养3周后组培苗的单株生长情况(左图：添加海浮石生根培养基，右图：未添加海浮石生根培养基)。

图3.移栽培养4周后组培苗的生长情况(左图：添加海浮石生根培养基，右图：未添加海浮石生根培养基)。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1～8

(1)配制实施例1～8所用的生根培养基

实施例1～8的生根培养基为向1/2MS培养基中添加琼脂、白砂糖、活性炭、花宝二号、香蕉汁、土豆汁、海浮石配制而成，琼脂、白砂糖、活性炭、花宝二号、香蕉汁、土豆汁、海浮石在实施例1～8的生根培养基中的浓度均参见表1所示。表1中的生根培养基编号1～8号分别依次对应于实施例1～8的生根培养基。配制实施例1～8的生根培养基后，将其分别装于1～8号培养瓶中，经高压灭菌冷却后备用。

表1生根培养基各成分使用浓度

在配制生根培养基时：

(a)配制1/2MS基础母液。

(b)按照表1所述的生根培养基配方，称取适量琼脂、白砂糖和活性炭，将琼脂倒入煮沸自来水中溶解，再倒入白砂糖和活性炭直至溶解后保温备用。

(c)将洗净去皮的香蕉和土豆切成小块，然后放入榨汁机中榨汁，得到的匀浆即为香蕉汁和土豆汁。

(d)将母液、花宝二号、琼脂、白砂糖、活性炭、香蕉汁和土豆汁按一定比例定容后，分装到培养瓶，另外，将一定量的海浮石加入到新培养瓶中，两者分别灭菌后备用。

(e)待d中培养基未完全冷却前，在超净工作台中将海浮石定量加入到培养基中混匀，即生根培养基。

在配制生根培养基时，除各种营养元素母液采用蒸馏水配制外，其他组分均可采用自来水进行配制，可以间接简化程序和降低成本。

(2)组培苗接种及培养

在无菌超净工作台中进行接种，用已消毒的镊子小心将铁皮石斛组培苗从培养瓶中取出，并放置在预先消毒的大培养皿上，然后用已消毒的手术刀切除细小而脆弱的根，保留1～2厘米的根部，再将组培苗一根一根插入到实施例1～8的各种生根培养基中，培养环境条件如下：温度22～26℃，光照强度2000～2500lx，光暗交替16h/8h。

对比例1～8

对比例1～8分别依次与实施例1～8基本相同，不同点在于，对比例1～8的生根培养基中未加入海浮石。

实施例1～8接种于生根培养基中的铁皮石斛组培苗生根培养5天左右，即可发现苗根增多。将实施例1～8和对比例1～8接种于生根培养基中的组培苗生根培养3周后，对各组培瓶中铁皮石斛成苗的根数，根粗及根长进行统计，实验数据见表2，生长情况见图1、图2。

表2生根培养3周后的实验数据

将上述经过生根培养3周后的实施例1～8和对比例1～8的组培苗在同样条件下移栽，移栽4周后的生长情况如图3，成活率见表3。

表3海浮石对移栽成活率的影响

由表2、表3可知，在同样的生根培养条件下，采用本发明在培养基中加入花宝二号、香蕉汁和土豆汁以及海浮石，成苗根直径可达1.8mm，明显增粗，生长健壮；根部可以牢固包裹海浮石，增加根系韧性；同时根长度较适中，在移栽过程中不易折断，易于成活，平均成活率高达68.8％。，特别是2号、4号、5号、6号生根培养基，生根效果最好。在对比例1～8中，因没有添加海浮石，成苗较矮小，根细小且脆弱，在移栽过程中易于折断。可见，添加海浮石的生根培养基，有利于苗根增粗，成苗生长健壮，提高移栽成活率。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，凡未脱离本发明申请专利范围所做的任何简单修改、均等变化与修饰，仍属于本发明的涵盖范围。

Claims

1.一种利用海浮石促进铁皮石斛生根培养基，其特征在于，以1/2MS培养基为基础培养基，其中还含有如下组分：花宝二号0～5g/L、海浮石0～100g/L、香蕉汁0～100g/L、土豆汁0～100g/L、活性炭1～3g/L、琼脂5～7g/L、白砂糖15～30g/L。

2.根据权利要求1所述的一种利用海浮石促进铁皮石斛生根培养基，其特征在于，如下组分在生根培养基中的浓度分别为：花宝二号1～2g/L、海浮石60～100g/L、香蕉汁40～60g/L、土豆汁60～80g/L。

3.根据权利要求2所述的一种利用海浮石促进铁皮石斛生根培养基，其特征在于，如下组分在生根培养基中的浓度分别为：花宝二号2g/L、海浮石80g/L、香蕉汁60g/L、土豆汁80g/L。

4.根据权利要求1～3所述的一种利用海浮石促进铁皮石斛生根培养基，其特征在于，海浮石按照如下方法添加到培养基：将未添加海浮石的培养基和海浮石分别灭菌，待培养基未完全冷却前，在超净工作台中向培养基中加入海浮石混匀即为生根培养基。

5.根据权利要求4所述的一种利用海浮石促进铁皮石斛生根培养基，其特征在于，海浮石质量分别为40、60、80、100g/L。

6.根据权利要求1～3所述的一种利用海浮石促进铁皮石斛生根培养基，其特征在于，香蕉汁和土豆汁是按照如下方法得到的：将洗净去皮的香蕉和土豆切成小块，然后放入榨汁机中榨汁，得到的匀浆即为香蕉汁和土豆汁。

7.一种铁皮石斛生根诱导的方法，其特征在于，选取经过壮苗阶段，株高为2cm左右的，具有2～3片叶片，无根或少量细根的铁皮石斛组培苗为外植体，将其根部切断，保留1～2cm的根部，在无菌条件下将其一根一根接种到权利要求1所述生根培养基中进行生根诱导。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，进行生根培养的条件为：温度22～26℃，光照强度2000～2500lx，光暗交替16h/8h。