CN103766218A - 一种蝴蝶兰诱导培养基及蝴蝶兰无性繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种蝴蝶兰诱导培养基及蝴蝶兰无性繁殖方法，其中，所述蝴蝶兰诱导培养基是以标准N6培养基为基础母液，加入6-卞氨基腺嘌呤BA、赤霉素GA3和有机添加物混合制成。所述蝴蝶兰诱导培养基可用于诱导蝴蝶兰花梗节间部分快速繁殖蝴蝶兰，具有成本低，类原球茎诱导率高，诱导时间短，生长速度快等优点。本发明所提供的蝴蝶兰无性繁殖方法以幼嫩的花梗节间为外植体并采用所述蝴蝶兰诱导培养基为培养基，采用此方法不仅能充分利用花梗材料，变废为宝，节约成本，而且不损伤母本，处于花梗较低部位的花仍可用于杂交。

Description

一种蝴蝶兰诱导培养基及蝴蝶兰无性繁殖方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养领域，尤其涉及一种蝴蝶兰诱导培养基及蝴蝶兰无性繁殖方法。
背景技术
蝴蝶兰(Phalaenopsis B1.spp.)属热带气生兰，其花大，花期长，花色艳丽，色泽丰富，花形美丽别致，如蝴蝶翩翩起舞，因而得名。在热带兰中有“兰花皇后”之美称，是近年来最受欢迎的洋兰之一。蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧芽，且种子极难萌发，对其进行常规性的繁殖，增殖速度很慢，故多采用组织培养的方法对其进行快速繁殖。目前蝴蝶兰组培工厂化生产大多使用花梗腋芽诱导不定芽，废弃花梗节间部分，这样不仅损伤母本，还浪费花梗节间部分。
因此，现有技术还有待发展。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种蝴蝶兰诱导培养基及蝴蝶兰无性繁殖方法，所述蝴蝶兰诱导培养基可用于诱导蝴蝶兰花梗节间部分快速繁殖蝴蝶兰，旨在提供一种新的蝴蝶兰无性繁殖方法。
本发明的技术方案如下：
一种蝴蝶兰诱导培养基，其中，所述蝴蝶兰诱导培养基是以标准N6培养基为基础母液，加入6-卞氨基腺嘌呤BA、赤霉素GA3和有机添加物混合制成；6-卞氨基腺嘌呤BA的浓度为0～10g/L，赤霉素GA3的浓度为0～1.5mg/L，有机添加物的浓度为0～300g/L；且6-卞氨基腺嘌呤BA和赤霉素GA3的含量非零。
所述的蝴蝶兰诱导培养基，其中，6-卞氨基腺嘌呤BA的浓度为3～5mg/L，赤霉素GA3的浓度为1～1.2mg/L，有机添加物的浓度为150～180g/L。
所述的蝴蝶兰诱导培养基，其中，6-卞氨基腺嘌呤BA的浓度为5mg/L，赤霉素GA3的浓度为1.2mg/L，有机添加物的浓度为150g/L。
所述的蝴蝶兰诱导培养基，其中，所述蝴蝶兰诱导培养基中添加有琼脂、碳源和活性炭；其中，琼脂的浓度为7～9g/L，碳源的浓度是20～30g/L，活性炭的浓度为1～3g/L。
所述的蝴蝶兰诱导培养基，其中，所述有机添加物为椰子汁或番茄汁。
所述的蝴蝶兰诱导培养基，其中，所述有机添加物为番茄汁。
所述的蝴蝶兰诱导培养基，其中，所述碳源为白砂糖或蔗糖。
所述的蝴蝶兰诱导培养基，其中，所述碳源为白砂糖。
一种蝴蝶兰无性繁殖方法，其中，所述蝴蝶兰无性繁殖方法是以花梗节间为外植体，采用如上任一所述的蝴蝶兰诱导培养基作为诱导培养基。
所述的蝴蝶兰无性繁殖方法，其中，所述蝴蝶兰无性繁殖方法包括以下步骤：
取蝴蝶兰两花梗节之间的幼嫩部分，切成2～3mm的切段，接种于盛装有所述蝴蝶兰诱导培养基的培养瓶中，封口；将培养瓶置于培养室中，在温度25±1℃、光照强度1500～1800lx、光暗交替12h/12h条件下，培养42～50天。
有益效果：本发明所提供一种蝴蝶兰诱导培养基及蝴蝶兰无性繁殖方法，所述蝴蝶兰诱导培养基可用于诱导蝴蝶兰花梗节间部分快速繁殖蝴蝶兰，具有成本低，类原球茎诱导率高，诱导时间短，生长速度快等优点。本发明所提供的蝴蝶兰无性繁殖方法，是以幼嫩的花梗节间为外植体并采用所述蝴蝶兰诱导培养基快速繁殖蝴蝶兰。花梗节间是传统组培生产中的废料，采用此方法不仅能充分利用花梗材料，变废为宝，节约成本，而且不损伤母本，处于花梗较低部位的花仍可用于杂交。
具体实施方式
本发明提供一种蝴蝶兰诱导培养基及蝴蝶兰无性繁殖方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明提供一种蝴蝶兰诱导培养基，用于诱导蝴蝶兰花梗节间部分快速繁殖蝴蝶兰。所述蝴蝶兰诱导培养基，是以标准N6培养基为基础母液，加入植物生长调节剂和有机添加物优化制得的。
其中，所述植物生长调节剂为6-卞氨基腺嘌呤BA和赤霉素GA3。在所述蝴蝶兰诱导培养基中添加6-卞氨基腺嘌呤BA，在一定范围（0～5mg/L，且含量非零）内对类原球茎的诱导及增殖有显著的促进作用，是使花梗节间诱导成类原球茎的主导因子，可提高诱导率和后期的增殖系数。赤霉素GA3是一种植物激素，主要用于促进植物茎叶生长，打破休眠，促进抽穗，增加瓜类的雄花数，诱导单性结实，少见用于花梗诱导中。在所述蝴蝶兰诱导培养基中创造性地加入了赤霉素GA3，能明显地缩短诱导时间，比不添加处理提前10～15天诱导出类原球茎。
所述有机添加物可以为番茄汁或椰子汁，在本发明方案中优选为番茄汁。在所述蝴蝶兰诱导培养基中添加番茄汁，能有效地提高蝴蝶兰类原球茎的健壮度，减少后期增殖时的褐化和枯死。番茄汁是一种天然的有机添加剂，能避免高浓度生长调节物质的使用导致类原球茎在增殖中发生变异。同时相较于起相似作用的椰子汁，番茄一年四季均有大量供应，随处可见，且价格便宜，降低了组培成本。
综上，所述蝴蝶兰诱导培养基，是以标准N6培养基为基础母液，加入6-卞氨基腺嘌呤BA、赤霉素GA3和有机添加物混合制成；其中，6-卞氨基腺嘌呤BA的浓度为0～10g/L，赤霉素GA3的浓度为0～1.5mg/L，有机添加物的浓度为0～300g/L；且6-卞氨基腺嘌呤BA和赤霉素GA3的含量非零。
优选地，所述蝴蝶兰诱导培养基中，6-卞氨基腺嘌呤BA的浓度为3～5mg/L，赤霉素GA3的浓度为1～1.2mg/L，番茄汁的浓度为150～180g/L。采用此组成范围内的蝴蝶兰诱导培养基，其诱导率较高，诱导时间较短，类原球茎的生长发育较为良好。
最为优选地，所述蝴蝶兰诱导培养基中，6-卞氨基腺嘌呤BA的浓度为5mg/L，赤霉素GA3的浓度为1.2mg/L，番茄汁的浓度为150g/L。采用此组成范围内的蝴蝶兰诱导培养基，其诱导率最高，诱导时间最短，且类原球茎的生长发育状况最好。
进一步地，所述蝴蝶兰诱导培养基中，还可以添加有琼脂、碳源和活性炭；其中，琼脂的浓度为7～9g/L，碳源的浓度是20～30g/L，活性炭的浓度为1～3g/L。
其中，在所述蝴蝶兰诱导培养基中添加0.2%左右的活性炭，可以抑制褐化现象，提高类原球茎的成活率。所述碳源可以为白砂糖或蔗糖，在本发明方案中，优选为白砂糖作为碳源，因为在所述蝴蝶兰诱导培养基中采用白砂糖作为碳源，在对诱导率及诱导时间不受影响的前提下降低了成本。而琼脂能够为植株提供养分、水分，并能起到透气的效用，用琼脂代替传统培养基中的卡拉胶，在类原球茎诱导率以及诱导时间不受影响的前提下降低了培养基的制备成本。
本发明所提供的蝴蝶兰诱导培养基，除各种营养元素母液采用蒸馏水配制以外，其余均可采用自来水代替蒸馏水，从而间接简化了组培程序及成本。
本发明中还提供一种蝴蝶兰无性繁殖方法，包括以下步骤：
取蝴蝶兰两花梗节之间的幼嫩部分，切成2～3mm的切段，迅速接种于盛装有上述蝴蝶兰诱导培养基的培养瓶中，用瓶塞封口；接种后，将培养瓶置于培养室中，在温度25±1℃、光照强度1500～1800lx、光暗交替12h/12h条件下，培养42～50天。
本发明所提供的蝴蝶兰无性繁殖方法，以幼嫩的花梗节间为外植体，不仅充分利用了花梗材料，而且不损伤母本，处于花梗较低部位的花还可用于杂交；另外，采用上述蝴蝶兰诱导培养基作为诱导培养基，具有成本低，类原球茎诱导率高，诱导时间短，生长速度快等优点。
下面通过实施例对本发明作进一步说明，但本发明不限于以下实施例的举例。
实施例1：配制诱导培养基
（1）根据标准N6培养基的成分和浓度配制所述蝴蝶兰诱导培养基的基础母液，并分装于9个三角瓶中，并分别标号。1号～8号三角瓶为本发明添加有植物生长调节剂和有机添加物的蝴蝶兰诱导培养基实验组，9号瓶为仅添加琼脂、白砂糖和活性炭的培养基对照组。
（2）根据表1，将6-卞氨基腺嘌呤BA母液、番茄汁和活性炭加入各三角瓶中与N6基础母液混合至所需浓度。
（3）取一定量自来水（代替蒸馏水）煮沸，根据表1中的浓度，用电子天平秤取琼脂及白砂糖，将琼脂倒入沸水中煮化，接着倒入白砂糖，溶化后，将琼脂液分别分装在1号～9号三角瓶中，定容至1L，加盖灭菌。
（4）将赤霉素GA3小瓶封口用75%的酒精消毒后，用一次性医用注射器注入乙醇配成1mg/L的赤霉素GA3母液，用过滤灭菌器进行过滤灭菌，待用。
（5）待灭菌后培养基的温度冷却至40～50℃时，在无菌的超净工作台上根据表1在1号～8号瓶中加入不同浓度的赤霉素GA3，混匀，分装到培养瓶中，得类原球茎诱导培养基，即本发明所述蝴蝶兰诱导培养基。
实施例2：花梗节间的接种及培养
在无菌超净工作台中进行接种，用已消毒的手术刀切除花梗两端与消毒剂接触的切口，取两花梗节之间的幼嫩部分，分切成2～3mm的切段，迅速接种至实施例1中制备得到的各诱导培养基中，接种后用已消毒的瓶塞封口。
接种后，将培养瓶置于人工培养室中，培养瓶所处环境参数如下：
培养条件：温度25±1℃、光照强度1500～1800lx、光暗交替12h/12h。
培养50天后，对各培养瓶中类原球茎的诱导率、诱导时间及生长情况进行记录（实验数据见表1）。
表1诱导培养基各成分使用浓度及实验结果数据
Figure BDA0000448140590000061
由表1可以看出，在同样的诱导培养条件下，采用本发明诱导培养基的诱导率效果和生长状况都比较好，特别是在添加一定量（3～5mg/L）的6-卞氨基腺嘌呤BA（1号、2号、5号、7号、8号诱导培养基）时，诱导率不仅没有降低，反而还有所提高；对照组中没有添加6-卞氨基腺嘌呤BA，所有花梗节间均不萌动，没有诱导出类原球茎，证明添加6-卞氨基腺嘌呤BA能有效地提高类原球茎的诱导率，是花梗节间是否能诱导成功的关键。添加番茄汁，对类原球茎的生长发育有一定的促进作用，但对诱导率的影响不明显。赤霉素GA3的添加，在不影响诱导率的情况下，能明显地缩短诱导时间，比不添加项提前10～15天。
应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (10)

1.一种蝴蝶兰诱导培养基，其特征在于，所述蝴蝶兰诱导培养基是以标准N6培养基为基础母液，加入6-卞氨基腺嘌呤BA、赤霉素GA3和有机添加物混合制成；6-卞氨基腺嘌呤BA的浓度为0～10g/L，赤霉素GA3的浓度为0～1.5mg/L，有机添加物的浓度为0～300g/L；其中，6-卞氨基腺嘌呤BA含量和赤霉素GA3的非零。
2.根据权利要求1所述的蝴蝶兰诱导培养基，其特征在于，6-卞氨基腺嘌呤BA的浓度为3～5mg/L，赤霉素GA3的浓度为1～1.2mg/L，有机添加物的浓度为150～180g/L。
3.根据权利要求1所述的蝴蝶兰诱导培养基，其特征在于，6-卞氨基腺嘌呤BA的浓度为5mg/L，赤霉素GA3的浓度为1.2mg/L，有机添加物的浓度为150g/L。
4.根据权利要求1～3任一所述的蝴蝶兰诱导培养基，其特征在于，所述蝴蝶兰诱导培养基中添加有琼脂、碳源和活性炭；其中，琼脂的浓度为7～9g/L，碳源的浓度是20～30g/L，活性炭的浓度为1～3g/L。
5.根据权利要求4所述的蝴蝶兰诱导培养基，其特征在于，所述有机添加物为椰子汁或番茄汁。
6.根据权利要求4所述的蝴蝶兰诱导培养基，其特征在于，所述有机添加物为番茄汁。
7.根据权利要求4所述的蝴蝶兰诱导培养基，其特征在于，所述碳源为白砂糖或蔗糖。
8.根据权利要求4所述的蝴蝶兰诱导培养基，其特征在于，所述碳源为白砂糖。
9.一种蝴蝶兰无性繁殖方法，其特征在于，所述蝴蝶兰无性繁殖方法是以花梗节间为外植体，采用如权利要求1～8任一所述的蝴蝶兰诱导培养基作为诱导培养基。
10.根据权利要求9所述的蝴蝶兰无性繁殖方法，其特征在于，所蝴蝶兰无性繁殖方法包括以下步骤：
取蝴蝶兰两花梗节之间的幼嫩部分，切成2～3mm的切段，接种于盛装有所述蝴蝶兰诱导培养基的培养瓶中，封口；将培养瓶置于培养室中，在温度25±1℃、光照强度1500～1800lx、光暗交替12h/12h条件下，培养42～50天。
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