CN103229721B - 白凤菜组织培养繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种白凤菜组织培养繁殖方法，以白凤菜茎段为外植体，经灭菌、接种诱导形成愈伤组织后，再经愈伤组织增殖、芽诱导和根诱导，形成完整植株小苗，将完整小苗移栽到育苗基质中，长成正常白凤菜植株，所用基本培养基均为以MS培养基为基础，辅以L-脯氨酸、6-苄基腺嘌呤、2，4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸、蔗糖和活性炭等成分；本发明应用组织培养克服白凤菜育苗周期长、繁殖系数低的问题，可进行工厂化快速育苗，以适应市场对白凤菜的需求。
Description
技术领域
本发明涉及生物的培养和繁殖，特别是一种白凤菜组织培养繁殖方法。
背景技术
白凤菜（Gynura formosana Kitam.）是菊科（Compositae）多年生药食两用植物，特产台湾。"白凤菜"别名白担当，俗名肝炎草。白凤菜白凤菜营养丰富，每100公克含有蛋白质2公克、维生素A 573.3RE、维生素C 24.5毫克，以及丰富微量元素，钾380毫克、钙82毫克、磷42毫克、锌0.4毫克。因其含锌量高，又有“聪明菜”之称，是新兴的蔬菜品种，嫩茎叶为食用部位，为保健药膳珍稀蔬菜，有“最佳保健药膳蔬菜”之称。近年来，成为中国各大城市蔬菜、保健、医疗市场上的新秀，受到消费者欢迎。白凤菜全草或茎叶可入药，清热排毒舒筋。主入肝、肺、肾、大小肠诸经，有消炎、解热、解毒、利尿、降血压等功效，主治肝炎、肝硬化、肺炎、肺癌、高血压、感冒、发烧、肾脏炎、水肿、便秘、肠炎、儿童日本脑炎，外敷刀伤、创伤、跌打损伤、毒虫咬伤和无名肿毒。许多城市，相继引入试种，栽培面积逐渐扩大。近年来随着国内外对白凤菜需求量的增加，供需矛盾日益突出，白凤菜苗木及新品种培育势在必行。
植物组织培养技术是根据植物细胞具有全能性的理论（个体的某个器官或组织已经分化的细胞再生成完整个体的遗传潜力），取植物个体上的器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工配制的培养基上，进行培养以获得成千上万个的完整植株。利用组培进行离体快繁具有重要意义：（1）占用空间小，不受地区、季节、气候限制，一年四季均可繁殖；（2）偏于保持优良种性、培养脱毒种苗；（3）在保存和繁育优良突变体或优良杂种一代方面具有非常重要的意义；（4）解决有些植物产种子少或无的难题。一株具有明显优势的白凤菜突变体或一个具有明显优势的后代经组织培养后可大面积推广。
目前白凤菜以扦插繁殖为主，组织培养尚未见报道。由于白凤菜含有的化学物质较多，对外植体的选择和灭菌方法都非常关键。本发明首次采用组织培养方法，开展白凤菜种质离体繁殖工作，这为缓解白凤菜苗木供应紧张，开展白凤菜遗传改良、促进白凤菜工厂化育苗提供了一条新途径。
发明内容
本发明的目的是提供一种通过组织培养进行白凤菜种质保存和快速繁苗的方法。
本发明的技术方案是：
一种白凤菜组织培养繁殖方法，其特征在于：以白凤菜的茎段为外植体，经灭菌处理、接种诱导形成丛生芽，再经生根培养，长成完整的植株小苗，将完整的小苗移栽到育苗基质中，长成正常的白凤菜植株。
所述的白凤菜组织培养繁殖方法，包括下列步骤：
A、外植体的选择和灭菌处理：以白凤菜的茎段为外植体，以洗洁精浸泡，摇床100-150转摇15-20分钟，再用清水冲洗15-30分钟，再将冲洗后的外植体置于浓度为0.1%的升汞中，浸泡灭菌9-14分钟，无菌去离子水冲洗6-8次，备用；
B、外植体接种：将经过步骤A中准备的外植体切去两端，切成0.5-0.8厘米长的小块，接种在愈伤组织诱导培养基上，培养时间为28-35天，在茎切口处膨大形成愈伤组织；
C、愈伤组织增殖：将步骤B中得到的愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基上，愈伤组织增殖25-30天，长出黄色、致密的愈伤组织；
D、愈伤组织的芽的诱导：将步骤C中得到的愈伤组织接种到芽诱导培养基上，培养30-35天，出现白凤菜丛生芽；
E、生根培养：将步骤D中得到的白凤菜丛生芽分株，转入生根培养基中，培养20-25天，小苗基部出现白色短根并长出完整根系；
F、炼苗：将步骤E中的完整小苗打开培养瓶瓶口，人工气候室内炼苗3-5天；
G、植株移栽：移栽前，对含蛭石、泥炭的育苗基质灭菌，将步骤F中得到的经过炼苗的小苗直接移栽到育苗基质，上覆保鲜膜以保持局部空气湿度,长成正常白凤菜植株。
所述的外植体灭菌处理采用0.1-0.2升汞浸泡灭菌9-14分钟方法，无需用75%酒精浸泡。
所述的致密的愈伤组织是指非颗粒状散在的愈伤组织。
所述的白凤菜基源植物为菊科多年生草本植物白凤菜Gynura formosana Kitam。
所述的愈伤组织诱导培养基为MS、L-脯氨酸、2，4-D 5.0-1.0mg/L、NAA 0.2mg/L，其中：MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962，2，4-D为2，4-二氯苯氧乙酸，NAA为萘乙酸。
所述的愈伤组织增殖培养基为：MS、L-脯氨酸0.5~2.5mg/L、2，4-D 0.5~1.0mg/L，其中：MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962， 2，4-D为2，4-二氯苯氧乙酸。
所述的芽诱导培养基为：MS、6-BA1.5~4.5mg/L、NAA0.2~0.5mg/L，其中：MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962，6-BA为6-苄基腺嘌呤，NAA为萘乙酸。
所述的生根培养基为：1/2MS和NAA0.01mg/L，其中：MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962，该常规基本培养基中的大量元素浓度减半得到1/2MS，NAA为萘乙酸。
所述的愈伤组织诱导培养基、愈伤组织增殖培养基和芽诱导培养基均加入占相应培养基总质量0.7~1.0%的琼脂、3%蔗糖和0.1~0.5%活性炭。
所述的育苗基质的理化性质为总孔隙度为75%，有机质含量为20%。
所述的完整小苗是指完成了芽和根的分化，并已长出小叶片，可以独立进行自养生长的幼小植株。
所述的育苗基质的理化性质为总孔隙度为75%，有机质含量为20%。
本发明的有点在于：本发明利用组织培养进行离体快速繁殖在以下四个方面具有重要意义：1）占用空间小，不受地区、季节、气候限制，一年四季均可繁殖；（2）偏于保持优良种性、培养脱毒种苗；（3）在保存和繁育优良突变体或优良杂种一代方面具有非常重要的意义；（4）解决有些植物产种子少或无的难题。一株具有明显优势的白凤菜突变体或一个具有明显优势的后代经组织培养后可大面积推广。
本发明所用培养基诱发时间短、出苗快、繁殖频率高，尤其出苗整齐，易于操作、大规模生产育苗。
本发明首次采用组织培养方法，开展白凤菜种质离体繁殖工作，这为保护白凤菜种质资源，开展白凤菜遗传改良、促进白凤菜的工厂化育苗提供了一条新途径，提供了一种能进行白凤菜人工繁殖、种质资源离体保存、利用及选育药用成分含量高的突变系的组织培养方法。
具体实施方式
下面结合实施例详细说明本发明的技术方案，但保护范围不被此限制。
实施例中各种原料或设备均可从市场购买。
其中，所述的MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962的简称（按常规为：硝酸铵（NH4NO3）1650 mg/L，硝酸钾（KNO3）900 mg/L，硫酸镁（MgSO4·7H2O）370 mg/L，硫酸二氢钾（KH2PO4）170 mg/L, 氯化钙（CaCl2·2H2O ）440 mg/L，硫酸锰（MnSO4·4H2O）22.3 mg/L，硫酸锌（ZnSO4·7H2O）8.6 mg/L，硼酸（H3BO3）6.2 mg/L，碘化钾（KI）0.83 mg/L，钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）0.25 mg/L，硫酸铜（CuSO4·5H2O ）0.025mg/L，氯化钴（CoCl2·6H2O）0.025 mg/L，硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）27.8 mg/L，Na2-EDTA·2H2O 37.3mg/L， 甘氨酸2 mg/L，盐酸硫胺素(维生素B1) 0.1 mg/L，盐酸吡哆醇(维生素B6) 0.5mg/L，IVB烟酸0.5 mg/L， 肌醇100 mg/L。），2，4-D为2，4-二氯苯氧乙酸，NAA为萘乙酸；实施例中所述的育苗基质的理化性质为总孔隙度为75%，有机质含量为20%。
实施例1
一种白凤菜组织培养繁殖方法,包括下列步骤:
A、取白凤菜Gynura formosana Kitam.的茎段为外植体，用流水冲洗3-5分钟，以洗洁精浸泡，室温下摇床100-150转摇15-20分钟，再用清水冲洗15-30分钟，再将冲洗后的外植体置于浓度为0.1%的升汞中，浸泡灭菌10分钟，无菌去离子水冲洗6-8次，备用；
A、外植体的选择和灭菌处理：以白凤菜的茎段为外植体，以洗洁精浸泡，摇床100-150转摇15-20分钟，再用清水冲洗15-30分钟，再将冲洗后的外植体置于浓度为0.1%的升汞中，浸泡灭菌9-14分钟，无菌去离子水冲洗6-8次，备用；
B、外植体接种：在超净工作台上，将经过步骤A的外植体切成0.5-0.8厘米长的小块，接种在愈伤组织诱导培养基上，该培养基为：MS+L-脯氨酸 2.0 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L +NAA 0.2mg/L，培养基中加入0.8%的琼脂、3%的蔗糖和0.1%的活性炭，培养约35天后，可见在茎切口处膨大形成愈伤组织；
所述的超净工作台，型号为HS-1300，由苏静集团苏州安泰空气技术有限公司生产。
C、愈伤组织增殖：将步骤B中得到的俞伤组织接种到愈伤组织增殖培养基上，该培养基为MS+L-脯氨酸 1.5 mg/L+2,4-D1.0 mg/L，培养基中加入0.8%的琼脂、3%的蔗糖和0.1%的活性炭，增殖培养约30-32天后，长出黄色、致密的愈伤组织；
D、愈伤组织的芽诱导：将步骤C中得到的愈伤组织接种到芽诱导培养基上，该培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.02mg/L, 培养基中加入0.8%的琼脂、3%的蔗糖和0.1%的活性炭，培养约30-35天后，出现丛生白凤菜活苗；
E、生根培养：将步骤D中的白凤菜苗长至2-3厘米时，转入生根培养基中，该培养基为1/2MS++NAA 0.20mg/L，培养基中加入0.8%的琼脂、2%的蔗糖，培养20-25天，小苗基部出现白色短根并长出完整根系；
培养温度及光照条件：温度为21±2℃，关照强度为1600Lux,光照时间为14小时；
F、炼苗：将步骤E中的完整小苗打开培养瓶瓶口，人工气候室内炼苗3-5天；
G、植株移栽：移栽前，对含蛭石、泥炭的育苗基质灭菌，将步骤F中得到的经过炼苗的小苗直接移栽到育苗基质，上覆保鲜膜以保持局部空气湿度,长成正常白凤菜植株，一般成活率在90%以上。
实施例2
一种白凤菜组织培养繁殖方法,包括下列步骤:
A、取白凤菜Gynura formosana Kitam.的茎段为外植体，用流水冲洗3-5分钟，以洗洁精浸泡，室温下摇床100-150转摇10-15分钟，再用清水冲洗20-30分钟，再将冲洗后的外植体置于浓度为0.1%的升汞中，浸泡灭菌11分钟，无菌去离子水冲洗6-8次，最后用无菌滤纸吸干水分备用；
B、外植体接种：在超净工作台上，将经过步骤A的外植体切成0.3-0.5厘米长的小块，接种在愈伤组织诱导培养基上，该培养基为：MS+L-脯氨酸 1.0 mg/L+2,4-D 0.8 mg/L +NAA 0.4mg/L，培养基中加入0.7 %的琼脂、3%的蔗糖和0.5%的活性炭，培养约30-35天后，可见在茎切口处膨大形成愈伤组织；
所述的超净工作台，型号为HS-1300，由苏静集团苏州安泰空气技术有限公司生产。
所述的MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962的简称， 2，4-D为2，4-二氯苯氧乙酸，NAA为萘乙酸；
C、愈伤组织增殖：将步骤B中得到的俞伤组织接种到愈伤组织增殖培养基上，该培养基为MS+L-脯氨酸 1.0 mg/L+2,4-D 0.7 mg/L，培养基中加入0.7%的琼脂、3%的蔗糖和0.5%的活性炭，增殖培养约30-32天后，长出黄色、致密的愈伤组织；
D、愈伤组织的芽诱导：将步骤C中得到的愈伤组织接种到芽诱导培养基上，该培养基为MS+6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L, 培养基中加入0.7%的琼脂、3%的蔗糖和0.5%的活性炭，培养约30-35天后，出现丛生白凤菜活苗；
E、生根培养：将步骤D中的白凤菜苗长至2-3厘米时，转入生根培养基中，该培养基为1/2MS++NAA 0.4mg/L，培养基中加入0.8%的琼脂、2%的蔗糖，培养20-25天，小苗基部出现白色短根并长出完整根系；
培养温度及光照条件：温度为21±2℃，关照强度为1600Lux,光照时间为14小时；
F、炼苗：将步骤E中的完整小苗打开培养瓶瓶口，人工气候室内炼苗3-5天；
G、植株移栽：移栽前，对含蛭石、泥炭的育苗基质灭菌，将步骤F中得到的经过炼苗的小苗直接移栽到育苗基质，上覆保鲜膜以保持局部空气湿度,长成正常白凤菜植株，一般成活率在90%以上。
实施例3
一种白凤菜组织培养繁殖方法,包括下列步骤:
A、取白凤菜Gynura formosana Kitam.的茎段为外植体，用流水冲洗3-5分钟，以洗洁精浸泡，室温下摇床100-150转摇10-15分钟，再用清水冲洗20-30分钟，再将冲洗后的外植体置于浓度为0.15%的升汞中，浸泡灭菌10分钟，无菌去离子水冲洗6-8次，最后用无菌滤纸吸干水分备用；
B、外植体接种：在超净工作台上，将经过步骤A的外植体切成0.3-0.5厘米长的小块，接种在愈伤组织诱导培养基上，该培养基为：MS+L-脯氨酸2.0 mg/L+2,4-D 1.0mg/L +NAA 0.5mg/L，培养基中加入0.8 %的琼脂、3%的蔗糖和0.2%的活性炭，培养约30-35天后，可见在茎切口处膨大形成愈伤组织；
所述的超净工作台，型号为HS-1300，由苏静集团苏州安泰空气技术有限公司生产。
所述的MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962的简称， 2，4-D为2，4-二氯苯氧乙酸，NAA为萘乙酸；
C、愈伤组织增殖：将步骤B中得到的俞伤组织接种到愈伤组织增殖培养基上，该培养基为MS+L-脯氨酸2.0 mg/L+2,4-D1.0mg/L，培养基中加入0.7%的琼脂、3%的蔗糖和0.5%的活性炭，增殖培养约30-32天后，长出黄色、致密的愈伤组织；
D、愈伤组织的芽诱导：将步骤C中得到的愈伤组织接种到芽诱导培养基上，该培养基为MS+6-BA2.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L, 培养基中加入0.8%的琼脂、3%的蔗糖和0.2%的活性炭，培养约30-35天后，出现丛生白凤菜活苗；
E、生根培养：将步骤D中的白凤菜苗长至2-3厘米时，转入生根培养基中，该培养基为1/2MS++NAA 0.6mg/L，培养基中加入0.8%的琼脂、2%的蔗糖，培养20-25天，小苗基部出现白色短根并长出完整根系；
培养温度及光照条件：温度为21±2℃，关照强度为1600Lux,光照时间为14小时；
F、炼苗：将步骤E中的完整小苗打开培养瓶瓶口，人工气候室内炼苗3-5天；
G、植株移栽：移栽前，对含蛭石、泥炭的育苗基质灭菌，将步骤F中得到的经过炼苗的小苗直接移栽到育苗基质，上覆保鲜膜以保持局部空气湿度,长成正常白凤菜植株，一般成活率在90%以上。
实施例4
一种白凤菜组织培养繁殖方法,包括下列步骤:
A、取白凤菜Gynura formosana Kitam.的茎段为外植体，用流水冲洗3-5分钟，以洗洁精浸泡，室温下摇床100-150转摇10-15分钟，再用清水冲洗20-30分钟，再将冲洗后的外植体置于浓度为0.15%的升汞中，浸泡灭菌12分钟，无菌去离子水冲洗6-8次，最后用无菌滤纸吸干水分备用；
B、外植体接种：在超净工作台上，将经过步骤A的外植体切成0.3-0.5厘米长的小块，接种在愈伤组织诱导培养基上，该培养基为：MS+L-脯氨酸1.5 mg/L+2,4-D 1.5mg/L +NAA 0.5mg/L，培养基中加入0.9 %的琼脂、3%的蔗糖和0.3%的活性炭，培养约30-35天后，可见在茎切口处膨大形成愈伤组织；
所述的超净工作台，型号为HS-1300，由苏静集团苏州安泰空气技术有限公司生产。
所述的MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962的简称， 2，4-D为2，4-二氯苯氧乙酸，NAA为萘乙酸；
C、愈伤组织增殖：将步骤B中得到的俞伤组织接种到愈伤组织增殖培养基上，该培养基为MS+L-脯氨酸2.5 mg/L+2,4-D 0.9mg/L，培养基中加入0.9%的琼脂、3%的蔗糖和0.3%的活性炭，增殖培养约25-30天后，长出黄色、致密的愈伤组织；
D、愈伤组织的芽诱导：将步骤C中得到的愈伤组织接种到芽诱导培养基上，该培养基为MS+6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.02mg/L, 培养基中加入0.9%的琼脂、3%的蔗糖和0.3%的活性炭，培养约30-35天后，出现丛生白凤菜活苗；
E、生根培养：将步骤D中的白凤菜苗长至2-3厘米时，转入生根培养基中，该培养基为1/2MS++NAA 1.0 mg/L，培养基中加入0.8%的琼脂、2%的蔗糖，培养20-25天，小苗基部出现白色短根并长出完整根系；
培养温度及光照条件：温度为21±2℃，关照强度为1600Lux,光照时间为14小时；
F、炼苗：将步骤E中的完整小苗打开培养瓶瓶口，人工气候室内炼苗3-5天；
G、植株移栽：移栽前，对含蛭石、泥炭的育苗基质灭菌，将步骤F中得到的经过炼苗的小苗直接移栽到育苗基质，上覆保鲜膜以保持局部空气湿度,长成正常白凤菜植株，一般成活率在90%以上。
所述的育苗基质的理化性质为总孔隙度为75%，有机质含量为20%。
实施例5
一种白凤菜组织培养繁殖方法,包括下列步骤:
A、取白凤菜Gynura formosana Kitam.的茎段为外植体，用流水冲洗3-5分钟，以洗洁精浸泡，室温下摇床100-150转摇10-15分钟，再用清水冲洗20-30分钟，再将冲洗后的外植体置于浓度为0.2%的升汞中，浸泡灭菌10分钟，无菌去离子水冲洗6-8次，最后用无菌滤纸吸干水分备用；
B、外植体接种：在超净工作台上，将经过步骤A的外植体切成0.3-0.5厘米长的小块，接种在愈伤组织诱导培养基上，该培养基为：MS+L-脯氨酸0.5 mg/L+2,4-D 1.0mg/L +NAA 0.5mg/L，培养基中加入0.8 %的琼脂、3%的蔗糖和0.2%的活性炭，培养约30-35天后，可见在茎切口处膨大形成愈伤组织；
所述的超净工作台，型号为HS-1300，由苏静集团苏州安泰空气技术有限公司生产。
所述的MS为常规基本培养基Murashige and Skoog 1962的简称， 2，4-D为2，4-二氯苯氧乙酸，NAA为萘乙酸；
C、愈伤组织增殖：将步骤B中得到的俞伤组织接种到愈伤组织增殖培养基上，该培养基为MS+L-脯氨酸2.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L，培养基中加入0.8%的琼脂、3%的蔗糖和0.2%的活性炭，增殖培养约25-30天后，长出黄色、致密的愈伤组织；
D、愈伤组织的芽诱导：将步骤C中得到的愈伤组织接种到芽诱导培养基上，该培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.1 mg/L, 培养基中加入0.8%的琼脂、3%的蔗糖和0.2%的活性炭，培养约30-35天后，出现丛生白凤菜活苗；
E、生根培养：将步骤D中的白凤菜苗长至2-3厘米时，转入生根培养基中，该培养基为1/2MS++NAA 0.2mg/L，培养基中加入0.8%的琼脂、2%的蔗糖，培养20-25天，小苗基部出现白色短根并长出完整根系；
培养温度及光照条件：温度为21±2℃，关照强度为1600Lux,光照时间为14小时；
F、炼苗：将步骤E中的完整小苗打开培养瓶瓶口，人工气候室内炼苗3-5天；
G、植株移栽：移栽前，对含蛭石、泥炭的育苗基质灭菌，将步骤F中得到的经过炼苗的小苗直接移栽到育苗基质，上覆保鲜膜以保持局部空气湿度，长成正常白凤菜植株，一般成活率在90%以上。
Claims (3)
1.一种白凤菜组织培养繁殖方法，以白凤菜的茎段为外植体，经灭菌处理、接种诱导形成愈伤组织后，再经愈伤组织增殖、诱导芽和生根培养，形成完整的植株小苗，将完整小苗移栽到育苗基质中，长成正常白凤菜植株，其特征在于：包括下列步骤：
A、外植体的选择和灭菌处理：以白凤菜的茎段为外植体，以洗洁精浸泡，摇床100-150转/分钟,摇15-20分钟，再用清水冲洗15-30分钟，再将冲洗后的外植体置于浓度为0.1%的升汞中，浸泡灭菌9-14分钟，无菌去离子水冲洗6-8次，备用；
B、外植体接种：将经过步骤A中准备的外植体切去两端，切成0.5-0.8厘米长的小块，接种在愈伤组织诱导培养基上，培养时间为28-35天，在茎切口处膨大形成愈伤组织，所述的愈伤组织诱导培养基为MS、L-脯氨酸、2，4-D1.0-5.0mg/L、NAA0.2mg/L，其中：MS为常规基本培养基Murashigeand Skoog1962，2，4-D为2，4-二氯苯氧乙酸，NAA为萘乙酸；
C、愈伤组织增殖：将步骤B中得到的愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基上，愈伤组织增殖25-30天，长出黄色、致密的愈伤组织，所述的愈伤组织增殖培养基为：MS、L-脯氨酸0.5～2.5mg/L、2，4-D0.5～1.0mg/L，其中：MS为常规基本培养基Murashigeand Skoog1962，2，4-D为2，4-二氯苯氧乙酸；
D、愈伤组织的芽的诱导：将步骤C中得到的愈伤组织接种到芽诱导培养基上，培养30-35天，出现白凤菜丛生芽，所述的芽诱导培养基为：MS、6-BA1.5～4.5mg/L、NAA0.2～0.5mg/L，其中：MS为常规基本培养基Murashige and Skoog1962，6-BA为6-苄基腺嘌呤，NAA为萘乙酸；
E、生根培养：将步骤D中得到的白凤菜丛生芽分株，转入生根培养基中，培养20-25天，小苗基部出现白色短根并长出完整根系，所述的生根培养基为：1/2MS、NAA0.01mg/L，其中：MS为常规基本培养基Murashige and Skoog1962，该常规基本培养基中的大量元素浓度减半得到1/2MS，NAA为萘乙酸；
F、炼苗：将步骤E中的完整小苗打开培养瓶瓶口，人工气候室内炼苗3-5天；
G、植株移栽：移栽前，对含蛭石、泥炭的育苗基质灭菌，将步骤F中得到的经过炼苗的小苗直接移栽到育苗基质，上覆保鲜膜以保持局部空气湿度，长成正常白凤菜植株；
所述的愈伤组织诱导培养基、愈伤组织增殖培养基和芽诱导培养基均加入
0.7～1.0%的琼脂、3%蔗糖和0.1～0.5%活性炭。
2.根据权利要求1所述的白凤菜组织培养繁殖方法，其特征在于：所述的白凤菜基源植物为菊科多年生草本植物白凤菜Gynura formosana Kitam。
3.根据权利要求1所述的白凤菜组织培养繁殖方法，其特征在于：所述的育苗基质的理化性质为总孔隙度为75%，有机质含量为20%。
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