CN106906131A - 一种菌落总数快速检测卡片及使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及食品卫生安全领域，具体涉及一种菌落总数快速检测卡片及使用方法。包括自下而上依次设置的第一透明树脂层、第一透明双面胶层、第一凝胶层、通气层结合为下层，第二凝胶层、第二透明双面胶层、第二透明树脂层结合为上层，上下层活页连接。所述通气层上还设有通孔，用于放置样品溶液，所述第一凝胶层中均匀混合有培养基干粉。镂空吹塑纸作为通风层，于35‑37℃的培养箱中培养24‑48h，对菌落进行计数，经换算得到样品中菌落总数。本发明提供的菌落数量检测卡的结构及使用方法的优点在于透明双面胶粘附干粉均匀，通风层材料环保且便于制作通孔，透明树脂层均印刷有方格便于计数。采用本发明检测食品中菌落总数操作便捷、灵敏度高、计数准确、成本低。
Description
技术领域
本发明涉及技术领域为食品卫生安全，具体涉及一种菌落总数快速检测卡片及使用方法。
背景技术
食品是人类赖以生存和发展的物质基础，而食品安全关系到人们的健康和国计民生，已经越来越受重视，其中菌落总数是食品卫生检验中最基本、最常见的微生物指标检测项目。
国际微生物规格委员会将菌落总数定义为在被检样品的单位重量(g)、容积(mL)或表面积(cm2)内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的菌落的总数。菌落总数是判定食品被细菌污染程度的重要标志，能反映食品加工及储藏过程是否符合食品卫生要求。
目前，食品菌落总数的检测一般是按照GB/T4789.2-20l0《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》标准进行规定的倾注平板计数法进行，其准确性、灵敏性均较高，但涉及的实验较多、操作繁琐、耗时长、准备和收尾工作繁重，而且要有大量人员参与。因此，检测食品中菌落总数操作便捷、灵敏度高、计数准确的方法具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种菌落总数快速检测卡片及使用方法，补充技术效果。
本本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种菌落总数快速检测卡片，包含自下而上依次设置的第一透明树脂层、第一透明双面胶层、第一凝胶层、通气层、第二凝胶层、第二透明双面胶层、第二透明树脂层，所述通气层上还设有通孔，用于放置样品溶液，所述第一凝胶层中均匀混合有培养基。所述第一透明树脂层、第一透明双面胶层、第一凝胶层、通气层结合为下层，第二凝胶层、第二透明双面胶层、第二透明树脂层结合为上层。上下层活页连接。
进一步地，所述第一透明树脂层、第二透明树脂层分别为PET透明塑料片。
进一步地，所述通气层为吹塑纸通气层。
进一步地，所述第二凝胶层为冷水可溶性凝胶干粉层。
进一步地，所述第一凝胶层为冷水可溶性凝胶及培养基干粉层，包含有糖类、蛋白质、显色剂、钠盐、钾盐、磷酸盐、酵母提取物、粘胶质、增稠剂的质量比例为125：150：75：4：16：20：60：50，第二凝胶层为冷水可溶性凝胶层，包含有粘胶质、增稠剂的质量比例为6：5。
进一步地，所述通气层的厚度为0.4-0.6mm。
一种菌落总数快速检测卡片的使用方法，包括以下步骤：
1)检测卡制备：冷水可溶性凝胶及培养基干粉层、冷水可溶性凝胶干粉层在粘附镂空区域约0.10～0.15g，灭菌；
2)样品制备：将样品加入无菌容器，加入无菌稀释液，混合均匀，如样液的pH非中性，则需调节样液pH至6.6～7.2；
3)接种与培养：将800μL样液垂直滴加在测试片下层的通孔中，盖上上层，至少静置1min，在培养温度为35-37℃下培养24-48h；
4)判读计数：对检测卡片上的红色菌落进行计数判读。
进一步地，所述菌落计数的面积20cm2，计数所有红色菌落，若菌落数大于300个时，可计数1-5个具有代表性的方格(方格)，换算为单个方格菌落数，经换算得到样品中菌落总数。
进一步地，所述调节样液pH使用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸调节。
本发明中菌落总数快速检测卡片的使用方法通过如下步骤实现菌落数量检测：通过溶性黏胶及培养基干粉层提供营养成分、水分、粘胶剂以及显色剂，镂空吹塑纸的通孔中放置样品，在35-37℃的培养箱中，培养24-48h，计数所有红色菌落(目视，或用标准菌落计数器、放大镜)，倍数换算得到菌落总数；当红色菌落数大于300个时，可计数1-5个具有代表性的方格9内的红色菌落数，换算成单个方格内的菌落数，再乘以20即为测试片上估算的细菌数。
检测卡制备：将冷水可溶性凝胶及培养基干粉层(其配方组成为每10g含有：乳糖2.50g、酵母提取物3.00g、蛋白胨粉1.50g、四氮红唑(TTC)0.08g、氯化钠0.32g、磷酸二氢钾0.40g、卡拉胶1.20g、羧甲基纤维素(CMC)1.00g)、冷水可溶性凝胶干粉层(其配方组成为每2.2g含有：卡拉胶1.20g、羧甲基纤维素(CMC)1.00g)粉碎过筛(100目)，在通孔8区域粘附约0.10～0.15g混合均匀的干粉，灭菌，无菌包装保存。
样品制备：将样品加入无菌容器，加入无菌稀释液，混合均匀，调节样液pH至6.6～7.2。
接种与培养：将800μL样液垂直滴加在测试片下层的通孔中，盖上上层，至少静置1min，堆叠片数低于20片，培养温度35-37℃，培养时间24-48h。
本发明的有益效果是：透明双面胶粘附干粉均匀，通风层材料环保且便于制作通孔，透明树脂外层均印刷有方格便于计数。检测食品中菌落总数操作便捷、灵敏度高、成本低、计数准确。
附图说明
图1为菌落总数快速检测卡片的剖视图；
图2为菌落总数快速检测卡片的俯视图；
图中，1-第一透明树脂层，2-第一透明双面胶层，3-第一凝胶层，4-通气层，5-第二凝胶层，6-第二透明双面胶层，7-第二透明树脂层，8-通孔，9-方格，10-检测卡片。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。
实施例1
如图1和图2所示，一种菌落总数快速检测卡片，包含自下而上依次设置的第一透明树脂层1、第一透明双面胶层2、第一凝胶层3、通气层4、第二凝胶层5、第二透明双面胶层6、第二透明树脂层7，所述通气层4上还设有通孔8，用于放置样品溶液，所述第一凝胶层3中均匀混合有培养基。
具体地，所述第一透明树脂层1、第二透明树脂层分别为PET透明塑料片。
具体地，所述通气层为吹塑纸通气层。
具体地，所述第二凝胶层为冷水可溶性凝胶干粉层。
具体地，所述第一溶性黏胶层为冷水可溶性凝胶及培养基干粉层，包含有糖类、蛋白质、显色剂、钠盐、钾盐、磷酸盐、酵母提取物、粘胶质、增稠剂的质量比例为125：150：75：4：16：20：60：50，第二溶性黏胶层为冷水可溶性凝胶层，包含有粘胶质、增稠剂的质量比例为6：5。
具体地，所述通气层的厚度为0.4-0.6mm。
上述检测卡片的使用方法：
制冷水可溶性凝胶及培养基干粉层，其配方组成为每10g含有：乳糖2.50g、酵母提取物3.00g、蛋白胨粉1.50g、四氮红唑(TTC)0.08g、NaCl 0.32g、K2HPO4 0.40g、卡拉胶1.20g、羧甲基纤维素(CMC)1.00g。配制冷水可溶性凝胶干粉层，其配方组成为每2.2g含有：卡拉胶1.20g、羧甲基纤维素(CMC)1.00g；将上述配方配制后，进一步研磨粉碎，过100目过筛；在直径50mm的圆形区域内粘附约0.10～0.15g混合均匀的干粉；结合图1制备检测卡，经高计量辐照灭菌后，无菌包装保存。称取或吸取食物样品，置于适宜的无菌容器内，加入适量的无菌稀释液，制备一定稀释倍数的样品稀释液，搅拌或均质样品；如果样品稀释液的pH值非中性，则需调节样品稀释液的pH在6.6～7.2之间，酸性样用1mol/L NaOH调节，碱性样用1mol/L HCl调节。将测试片置于平坦表面处，揭开上层；使用移液器精确吸取800μL样液垂直滴加在测试片下层的圆形中央；将上层盖下，将上层PET透明塑料片轻轻地压平，使样液均匀覆盖于圆形的培养面上，切勿扭转检测卡，静置至少1min使培养基凝固；将测试片的正面朝上置于培养箱内，堆叠片数不超过20片；培养温度36℃，培养时间24-48h。培养结束后，选择所有红色菌落计数(目视，或用标准菌落计数器、放大镜)，经稀释倍数换算得到样品中菌落总数；当红色菌落数大于300个时，可计数1-5个具有代表性的方格9内的红色菌落数，换算成单个方格内的菌落数，再乘以20即为测试片上估算的细菌数。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。
Claims (9)
1.一种菌落总数快速检测卡片，其特征在于，包含自下而上依次设置的第一透明树脂层、第一透明双面胶层、第一凝胶层、通气层、第二凝胶层、第二透明双面胶层、第二透明树脂层，所述通气层上还设有通孔，用于放置样品溶液，所述第一凝胶层中均匀混合有培养基，所述第一透明树脂层、第一透明双面胶层、第一凝胶层、通气层结合为下层，第二凝胶层、第二透明双面胶层、第二透明树脂层结合为上层，上下层活页连接。
2.根据权利要求1所述的一种菌落总数快速检测卡片，其特征在于，所述第一透明树脂层、第二透明树脂层分别为PET透明塑料片。
3.根据权利要求1所述的一种菌落总数快速检测卡片，其特征在于，所述通气层为吹塑纸通气层。
4.根据权利要求1所述的一种菌落总数快速检测卡片，其特征在于，所述第一凝胶层为冷水可溶性凝胶及培养基干粉层、第二凝胶层为冷水可溶性凝胶干粉层。
5.根据权利要求1所述的一种菌落总数快速检测卡片，其特征在于，所述第一凝胶层为冷水可溶性凝胶及培养基层干粉，包含有糖类、蛋白质、显色剂、钠盐、钾盐、磷酸盐、酵母提取物、粘胶质、增稠剂，其质量比例为125：150：75：4：16：20：60：50；第二凝胶层为冷水可溶性凝胶层，包含有粘胶质、增稠剂，其质量比例为6：5。
6.根据权利要求1所述的一种菌落总数快速检测卡片，其特征在于，所述通气层的厚度为0.4-0.6mm。
7.根据权利要求1所述的一种菌落总数快速检测卡片，其特征在于，所述一种菌落总数快速检测卡片的使用方法通过如下步骤实现菌落数量检测：
1)检测卡制备：冷水可溶性凝胶及培养基干粉层、冷水可溶性凝胶干粉层在粘附镂空区域约0.10-0.15g，灭菌；
2)样品制备：将样品加入无菌容器，加入无菌稀释液，混合均匀，如样液的pH非中性，则需调节样液pH至6.6-7.2；
3)接种与培养：将800μL样液垂直滴加在测试片下层的通孔中，盖上上层，至少静置1min，在培养温度为35-37℃下培养24-48h；
4)判读计数：对检测卡片上的红色菌落进行计数判读。
8.根据权利要求7所述的一种菌落总数快速检测卡片的使用方法，其特征在于，所述菌落计数的面积20cm2，计数所有红色菌落，若菌落数大于300个时，可计数1-5个具有代表性的为1×1cm的方格，换算为单个方格菌落数，经换算得到样品中菌落总数。
9.根据权利要求7所述的一种菌落总数快速检测卡片的使用方法，其特征在于，所述步骤2)中调节样液pH使用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸来进行调节。
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