CN106855508B - 一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法 - Google Patents
一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106855508B CN106855508B CN201710011208.7A CN201710011208A CN106855508B CN 106855508 B CN106855508 B CN 106855508B CN 201710011208 A CN201710011208 A CN 201710011208A CN 106855508 B CN106855508 B CN 106855508B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fish
- hypoxanthine
- detecting
- content
- detection
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 title claims abstract description 77
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 59
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 108010093894 Xanthine oxidase Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102100033220 Xanthine oxidase Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 7
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 3
- 239000005457 ice water Substances 0.000 claims description 3
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 28
- 238000013461 design Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 8
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 235000013332 fish product Nutrition 0.000 description 2
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017166 Bambusa arundinacea Nutrition 0.000 description 1
- 235000017491 Bambusa tulda Nutrition 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000082204 Phyllostachys viridis Species 0.000 description 1
- 235000015334 Phyllostachys viridis Nutrition 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011425 bamboo Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005485 electric heating Methods 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000012009 microbiological test Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N para-benzoquinone Natural products O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- -1 quinone compound Chemical class 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N21/33—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry using ultraviolet light
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/34—Purifying; Cleaning
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法，涉及一种次黄嘌呤的检测方法。本发明的方法简单，完成速度快，设计合理，准确度高，数据参考性强，操作容易，无须特制实验仪器，即使用现有检测仪器就能达到检测目的，有利于大面积推广和使用。本发明方法是取鱼肉制样品液，用辣根过氧化物酶和黄嘌呤氧化酶偶联催化样品液后用紫外分光光度计进行检测获取次黄嘌呤的含量。本发明用于判断鱼的新鲜度。
Description
技术领域
本发明涉及肉类新鲜度检测领域，具体为一种次黄嘌呤的检测方法。
背景技术
鱼肉中含有容易被人体所消化吸收的蛋白质，并且这些蛋白质的含量有很多。蛋白质不仅含量多，其中还含有人体所需的不同种类氨基酸，亮氨酸和赖氨酸是人体需求最多鱼中含有量也丰富的两大氨基酸。鱼肉是所有肉类中最容易消化的，消化继而被人体吸收的转化率能够达到90％。鱼肉中的脂肪含量相对较低，与畜肉相比，含量只在1％-10％。鱼肉中的脂肪也是很容易被人们消化吸收的，它呈中性，人们的消化率能够接近百分之百。无机盐也是鱼肉中含量非常丰富的，不仅在于它的含量比畜肉多十到五十倍之间，种类也高达十种以上。更为重要的是人体必不可少的微量元素也储存在鱼肉当中。鱼肝是鱼中的脂肪，这类脂肪中维生素A和维生素D的含量很多，与畜肉的含量相比，更胜的不只一筹。
鱼类新鲜度的检测关系到鱼制品的安全卫生和营养程度各个方面，在鱼制品的加工制作买卖过程中有至高无上的作用。
鱼类早期从新鲜到次新鲜再到腐败这一系列的变化过程中，次黄嘌呤的含量是不断上升的，鱼类在腐败以前都可以用次黄嘌呤的含量检测鱼的新鲜度。
如今，用来检测水产品新鲜程度的方式，大部分为传统检测。其中有人们容易从外观着手的感官评价，也有需要相关仪器药品，由专业检测人员验证的微生物检测和化学指标测定。如果将这三种方法同时用到水产品新鲜度的检测中，结果理论来说会准确。可是，如此将会花费大量的人力物力和时间。跟传统的检测方法相比，诸如生物传感器、新鲜度指示卡、电子舌、电子鼻这些能够快速方便的方式的研究也如雨后春笋一般，但在实地应用层面却并不多见。水产品新鲜度的检测方法大致可以分为：人体感官层次上的测试、物理方面的测试、化学方面的测试等。其中物理检测有激光检测、僵硬指数测试，化学检测有很多，比如pH值检测、k值测定、挥发性盐基氮的测定和丙二醛的测定等。
过去人们用于检测鱼类新鲜度的一些方法的实验仪器设备昂贵，操作方法需要专业人员进行专业作业，时间及人员的付出上不可估量，推行的难度较大。
发明内容
本发明目的是提供一种易操作、完成速度快、易广泛推广的检测鱼中次黄嘌呤含量的方法。
为达到上述目的，本发明的一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法是按下述步骤进行的：
步骤一、取鱼肉研磨至泥状，离心取上清液，用过滤膜过滤后去除沉淀蛋白；
步骤二、然后离心取上清液，用辣根过氧化物酶和黄嘌呤氧化酶偶联催化，再用紫外分光光度计进行检测获取次黄嘌呤的含量。
进一步限定：步骤一中取5g鱼肉研磨。
步骤一中所述去除沉淀蛋白是按下述步骤制备的：向用过滤膜过滤的滤液中加入0.1mL10％(质量)三氯醋酸，搅拌混匀。
步骤二中偶联催化是：向上清液中依次加入3mL的苯酚、3mL4-氨基安替比林、3mLTris-HCL缓冲液(pH8.0)、3mL叠氮钠和3mL辣根过氧化物酶，加100μL黄嘌呤氧化酶和10mL样品液，置于37℃的恒温水浴锅内保温8min，然后煮沸2min后加入1mL 浓度为71.389mg/mL的Na2CO3溶液，放入冰水中冷却，用紫外分光光度计测量。
步骤二中紫外分光光度计测量波长为508nm。
本发明中酶测定法原理：
次黄嘌呤在进行一系列化学反应的过程中，是在黄嘌呤氧化酶的作用下，伴着1mol分子氧和1mol水的情况下，生成了1mol尿酸和1mol过氧化氢。过氧化氢在辣根过氧化物酶的作用下，分解的产物，能够让4-氨基安替比林与苯酚反应，生成一种化合物，这种化合物是亚醌类化合物，能显出红色。在整个反应中，黄嘌呤氧化酶和辣根过氧化物酶充足的前提下，由红色化合物测定出的吸光度值大小(可见光范围内)，就可以推测出样品中次黄嘌呤的含量。
本发明的方法简单，完成速度快，设计合理，准确度高，数据参考性强，操作容易，无须特制实验仪器，即使用现有检测仪器就能达到检测目的，有利于大面积推广和使用。
本发明用于判断鱼的新鲜度。本发明通过检测鲫鱼中次黄嘌呤的含量来判断鱼肉的新鲜度，实现了对鱼肉新鲜度的准确判定。本发明对鲫鱼早期品质新鲜度变化的检测，有助于鲫鱼新鲜度变化的及时发现。
具体实施方式
实施例1：本实施例中检测鱼中次黄嘌呤含量的方法是按下述步骤进行的：
步骤一、固体放入小号离心管，加蒸馏水，放入圆槽中，在其对称位置放入同样型号的鱼类处理：把鱼洗干净，剪去鱼鳃鱼尾，剪成小块，取5g鱼肉，用研钵充分研磨至泥状后，将离心管，并添加一样多的蒸馏水，保证对称位置重量平衡的前提下，打开低速离心机开关，设置成5000r/min，10min离心，之后用塑料吸管提取上清液到注射器中，盖上过滤膜挤压过滤10mL至烧杯，按压过程中若发现出液体速率下降，及时更换新的过滤膜。在过滤好的液体中，用塑料滴管加入10％三氯醋酸0.1mL，拿玻璃棒搅拌，混匀沉淀蛋白。
步骤二、然后倒入新的小号离心管中，添加同样多的蒸馏水，用同样的方法放置对侧的小号离心管，放入低速离心机5000r/min低速离心20min，用塑料吸管取上清液到试管用进行紫外分光光度计法检验；
紫外分光光度计法：在试管中用各自的10mL吸量管和洗耳球依次加入3mL的苯酚、3mL4-氨基安替比林、3mLTris-HCL缓冲液(pH8.0)、3mL叠氮钠、3mL辣根过氧化物酶，用移液枪和无菌枪头加100μL黄嘌呤氧化酶，酶液浓度为0.32U·mL-1，及10mL的上层清液。提前打开恒温水浴锅定在37℃预热，将试管中的液体混匀，待水浴锅达到 37℃后，放置在恒温水浴锅中计时保温8min。同时，将800mL的烧杯中加入足够没过试管中液体水平面的水，打开电热套，加热水至沸腾后把试管放入其中，煮沸2min终止反应，改成用塑料滴管加入Na2CO3溶液1mL即可，之后立即用手套将试管转移放入冰水中冷却。完成上述步骤后，可打开电脑及紫外分光光度计，让其自检合格后，以不加入次黄嘌呤的蒸馏水做参比溶液，把比色皿洗净，用擦镜纸将玻璃面擦拭干净，倒入相应浓度的溶液润洗2-3次。用定波长检测方式，在电脑上将检测波长调至508nm，让其调零自检后，将参比溶液放入紫外分光光度计中，保证镜面可以通过光束照射，盖好样品室盖，按下“Autozero”按钮，仪器自动进行校准(校准工作只需要在第一次测量时进行，只要不改编参比溶液和测量波长范围的情况下，只需校准一次)，在样品池放入样品液，单机“测量”命令按钮，进行测量工作。
表1次黄嘌呤检测梯度的测试
判断依据
新鲜鱼类：次黄嘌呤≤3.6×10-4g/5g；次新鲜鱼类：3.6×10-4g/5g＜次黄嘌呤≤5.9×10-4g/5g；腐败鱼类：黄嘌呤＞5.9×10-4g/5g。
下述实验验证发明效果：
1不同浓度次黄嘌呤溶液吸光度检测
表2.次黄嘌呤浓度为0.02mmol/L情况下吸光度值
| 次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 |
| Abs | 0.0540 | 0.0542 | 0.0541 | 0.0539 | 0.0538 | 0.0540 |
表3.次黄嘌呤浓度为0.04mmol/L情况下吸光度值
| 次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 |
| Abs | 0.0596 | 0.0593 | 0.0595 | 0.0592 | 0.0594 | 0.0594 |
表4.次黄嘌呤浓度为0.06mmol/L情况下吸光度值
| 次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 |
| Abs | 0.0641 | 0.0639 | 0.0639 | 0.0638 | 0.0638 | 0.0639 |
表5.次黄嘌呤浓度为0.08mmol/L情况下吸光度值
| 次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 |
| Abs | 0.1521 | 0.1520 | 0.1519 | 0.1522 | 0.1523 | 0.1521 |
表6.次黄嘌呤浓度为0.1mmol/L情况下吸光度值
| 次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 |
| Abs | 0.1715 | 0.1717 | 0.1719 | 0.1717 | 0.1717 | 0.1717 |
表7.次黄嘌呤浓度为0.12mmol/L情况下吸光度值
| 次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均数 |
| Abs | 0.1942 | 0.1943 | 0.1941 | 0.1941 | 0.1945 | 0.1943 |
2双酶法偶联分光光度计测鱼中次黄嘌呤
表8.鱼肉重量
表9. 30℃时，鱼的新鲜程度。
表10. 15℃时，鱼的新鲜程度。
表11. 4℃时，鱼的新鲜程度
鱼类在不同储存温度下新鲜度的变化是不同的，30℃的鱼腐败的最快，其次是 15℃的鱼，然后是4℃的鱼，最后是-18℃的鱼。
30℃保存条件下，6h内是新鲜的，10h内是次新鲜的，12h以上就腐败了。
15℃保存条件下，9h内是新鲜的，15h内是次新鲜的，18h以上就腐败了。
4℃保存条件下，8h内是新鲜的，16h内是次新鲜的，24h以上就腐败了。
-18℃保存条件下，储存的时间会相对长一些，2个月的鱼肉仍可食用。
为了方便人们即使食用健康的鱼还可以得出以下结论：
30℃实验组：夏天买完鲜活鱼类没有即使食用，室外储存鱼类时，应在10小时之前尽快食用。若超过10小时依旧没有食用此鱼，之后就不要再食用此鱼。
15℃实验组：春秋天买完鲜活鱼类没有即使食用，室外储存鱼类时，应在15小时之前尽快食用。若超过15小时依旧没有食用此鱼，之后就不要再食用此鱼。
4℃实验组：冬天以及储存在冰箱冷藏室的鲜活鱼类没有即使食用，应在16小时之前尽快食用。若超过16小时依旧没有食用此鱼，之后就不要再食用此鱼。
-18℃实验组：使用冰箱冷冻室保存鲜活鱼类没有即使食用的情况下，2个月之内都可放心食用。
上述实验用准确的数据提示人们在购买完鲜活鱼类的储存中不要超出相应的天数，为人们可以更加健康的食用鱼类具有指导意义。
本发明的检测方式简单，完成速度快，数据参考性强的方向：
检测方式简单是要人们能够更容易的操作，普通人也能把握技术要领，让检测鱼类的行为大众化。完成速度快是说检测的方法时间不要过长，能够让人在短时间内就得出鱼类是何种新鲜程度的结论。数据参考性强是说测出的数据要能准确的反应鱼类的新鲜程度，让检测具有权威性。
本发明不破坏食材的无损化方向：
从前的实验技术都是需要提取相应的鱼肉，对提取下来的鱼肉做进一步的检验。而现在要发展的方向是提取更少的鱼肉，或者说是不用提取鱼肉就能够完成实验的测量，得出可靠的结论。让样品在检测的过程中损失的尽量少。
本发明更商品化、实用化方向：现在很多检测鱼类新鲜程度的实验方法都需要在实验室中，有相应的实验器材才能完成实验测量，实验设备的价格也会相对偏高。而将来的检测不是说让实验仪器消失，而是说实验仪器尽可能的变小变便宜，能够方便人们随时及时的测量。让检测的机器能成为人们手中的商品，让人们为了能提高鱼类食用质量去进行鱼类新鲜度的检测。
Claims (2)
1.一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法，其特征在于该检测方法是按下述步骤进行的：
步骤一、取5g鱼肉研磨至泥状，离心取上清液，用过滤膜过滤后向用过滤膜过滤的滤液中加入0.1mL质量百分比为10％的三氯醋酸，搅拌混匀，去除沉淀蛋白；
步骤二、然后离心取上清液，用辣根过氧化物酶和黄嘌呤氧化酶偶联催化，其特征在于，向上清液中依次加入3mL的苯酚、3mL4-氨基安替比林、3mLTris-HCL缓冲液、3mL叠氮钠和3mL辣根过氧化物酶，加100μL黄嘌呤氧化酶和10mL样品液，置于37℃的恒温水浴锅内保温8min，然后煮沸2min后加入1mL浓度为71.389mg/mL的Na2CO3溶液，放入冰水中冷却，再用紫外分光光度计进行检测获取次黄嘌呤的含量。
2.根据权利要求1所述一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法，其特征在于步骤二中紫外分光光度计测量波长为508nm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710011208.7A CN106855508B (zh) | 2017-01-06 | 2017-01-06 | 一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710011208.7A CN106855508B (zh) | 2017-01-06 | 2017-01-06 | 一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106855508A CN106855508A (zh) | 2017-06-16 |
| CN106855508B true CN106855508B (zh) | 2020-01-14 |
Family
ID=59126101
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710011208.7A Active CN106855508B (zh) | 2017-01-06 | 2017-01-06 | 一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106855508B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109856102A (zh) * | 2019-03-13 | 2019-06-07 | 福州大学 | 一种检测水产品次黄嘌呤的生物传感器 |
| CN110082336A (zh) * | 2019-04-25 | 2019-08-02 | 宁波大学 | 一种基于重氮化反应和sers快速检测水产品中总嘌呤含量的方法 |
| CN114807295A (zh) * | 2021-01-19 | 2022-07-29 | 苏州凯祥生物科技有限公司 | 一种检测嘌呤类物质的试剂盒及其应用 |
| CN113916809A (zh) * | 2021-09-06 | 2022-01-11 | 首都儿科研究所附属儿童医院 | 一种尿液次黄嘌呤含量poct检测方法及应用 |
| CN114113506B (zh) * | 2021-12-20 | 2023-06-20 | 合肥工业大学 | 一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法 |
-
2017
- 2017-01-06 CN CN201710011208.7A patent/CN106855508B/zh active Active
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 双酶偶联催化分光光度法测定血清次黄嘌呤;李忠琴等;《光谱学与光谱分析》;20080930;第28卷(第9期);1.1-1.2节,2.3节 * |
| 辣根过氧化物酶分光光度法测定黄嘌呤氧化酶的活性;李忠琴等;《分析化学》;20060630;第34卷;3.2.4节 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106855508A (zh) | 2017-06-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106855508B (zh) | 一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法 | |
| Liang et al. | Nutritional compositions of Indian Moringa oleifera seed and antioxidant activity of its polypeptides | |
| Rausch | The estimation of micro-algal protein content and its meaning to the evaluation of algal biomass I. Comparison of methods for extracting protein | |
| CN104630208B (zh) | 提取基因组dna的试剂盒和提取方法 | |
| CN102507550A (zh) | 一种基于天然色素的食品气味可视化传感器的制作方法 | |
| CN110632262A (zh) | 一种芹菜品质综合评价的方法 | |
| Hughes et al. | After‐cooking blackening in potatoes. I.—Introduction and analytical methods | |
| CN106680352A (zh) | 一种仿刺参性别鉴定方法 | |
| Kodicek | Estimation of nicotinic acid in animal tissues, blood and certain foodstuffs: Applications1 | |
| CN106370649A (zh) | 一种加工肉制品中亚硝酸盐含量是否超标的快速检测方法 | |
| CN113476494A (zh) | 一种多级分段式提取法制备高活性蔓越莓萃取物的方法 | |
| CN103399012B (zh) | 一种比色传感贴膜及其制备方法 | |
| Sharma | Experiments and techniques in biochemistry | |
| CN111257254A (zh) | 一种测定牡蛎组织中糖原含量的方法 | |
| CN108060208B (zh) | 一种蛇胆汁的鉴别方法 | |
| CN105890945A (zh) | 超声离心渗液进样快速测定土壤中速效钾的方法 | |
| Barbagli et al. | Influence of freezing and thawing on the release of cytochrome oxidase from chicken's liver and from beef and trout muscle | |
| CN113884455A (zh) | 一种快速检测脯氨酸含量的试剂盒及其检测方法 | |
| CN111337443B (zh) | 一套测定微藻生物质组成的方法 | |
| CN113899709B (zh) | 一种定量检测鱼类肠系膜脂肪沉积量的方法以及应用 | |
| CN101825565A (zh) | 一种蛋黄粉中锌元素的检测方法 | |
| CN102565048B (zh) | 一种真假蜂胶的鉴别方法 | |
| TWI664998B (zh) | Method for removing inorganic arsenic from Sargassum | |
| CN105734157A (zh) | 一种快速鉴别骆驼源性成分的荧光定量pcr引物、探针组合物、试剂盒及检测方法 | |
| Lee et al. | Water soluble vitamins in normal human skin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |