CN114113506B - 一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法 - Google Patents
一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114113506B CN114113506B CN202111557932.2A CN202111557932A CN114113506B CN 114113506 B CN114113506 B CN 114113506B CN 202111557932 A CN202111557932 A CN 202111557932A CN 114113506 B CN114113506 B CN 114113506B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- concentration
- solution
- hypoxanthine
- meat
- freshness
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 145
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 70
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 73
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims abstract description 55
- 108010093894 Xanthine oxidase Proteins 0.000 claims abstract description 40
- 102100033220 Xanthine oxidase Human genes 0.000 claims abstract description 39
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 32
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 27
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 25
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 16
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 25
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 20
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 claims description 18
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 11
- 229960001149 dopamine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 9
- CTENFNNZBMHDDG-UHFFFAOYSA-N Dopamine hydrochloride Chemical compound Cl.NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 CTENFNNZBMHDDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 8
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 4
- -1 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims description 4
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 18
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 7
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 5
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 229920001690 polydopamine Polymers 0.000 description 4
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 4
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 4
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 4
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 238000001027 hydrothermal synthesis Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 2
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 229910020820 NaAc-HAc Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150110933 PHY gene Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N adenosine monophosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(OP(O)(O)=O)C1O LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000011325 biochemical measurement Methods 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002352 surface water Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000002105 tongue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/02—Food
- G01N33/12—Meat; Fish
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，包括：步骤1：将洗净后的待测肉类样品切成颗粒，然后与三氯乙酸溶液混合，均质后得到混合物，然后对均质后的混合物进行离心，过滤取上清液，得到样品溶液；步骤2：向样品溶液中加入黄嘌呤氧化酶，反应后得到反应产物；然后向反应产物中加入由3，3’，5，5’‑四甲基联苯胺溶液和醋酸‑醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，再加入Fe‑PDA，然后用醋酸‑醋酸钠缓冲液将体积定容至200μL，振荡均匀后离心取上清液，测量上清液在653nm处的吸光度；步骤3：将步骤2得到的吸光度值代入回归方程。本发明设计的检测体系简单快速，选择性好，线性范围为5.13‑200μmol/L，检出限为1.54μmol/L，稳定性好且检测成本低。
Description
技术领域
本发明属于肉类检测技术领域，涉及一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法。
背景技术
肉类富含大量的蛋白质和脂肪，是人们餐桌上的常客。在肉类的运输和销售过程中，容易发生一系列生化反应导致腐败变质，最终影响产品的风味口感，降低了营养价值，甚至会产生有毒有害物质引发食品安全问题。因此，研究如何快速获得准确的肉类新鲜度，对于保障肉类食用安全、提高肉类食用品质具有重要意义。新鲜度是肉制品质量的重要的指标之一。动物在死亡后发生了一系列生化反应，包括糖原的酵解和三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate，ATP)的分解等反应。一般来说，动物在死亡后嘌呤分解代谢如下：三磷酸腺苷→二磷酸腺苷→单磷酸腺苷→肌苷单磷酸→肌苷→次黄嘌呤(Hx)→黄嘌呤(X)→尿酸(UA)。在这个循环中，黄嘌呤(X)、次黄嘌呤(Hx)和尿酸(UA)是分解代谢的最终产物。而且次黄嘌呤(Hx)作为肉类在变质过程中ATP经过一系列反应分解后的产物，在肉类变质的过程中逐渐积累。因此，通过测量次黄嘌呤(Hx)的浓度就可获知肉制品的新鲜度变化情况。次黄嘌呤(Hx)含量的积累也会影响肉制品的味道，降低其鲜度，是肉制品变质过程中的苦味来源。因此，肉制品中次黄嘌呤(Hx)含量的快速准确测定对于检测肉类新鲜度、提升肉制品食用品质具有重要意义。
传统上，有两种评估肉类新鲜度的方法：一个是在专家的帮助下控制感官特征的感官测试，另一个是目标生物指标浓度的化学或生化测定。虽然前一种方法已被证明是快速的，但是很昂贵并且有时不太可靠，因为这种方法很难在降解的初始阶段之前评估肉类新鲜度的细微差异。目前，被广泛应用于检测次黄嘌呤(Hx)浓度的方法主要有高效液相色谱法、毛细管电泳法等。这些方法需要相对昂贵的设备、熟练的技术人员、繁琐的实验室操作、复杂的合成方案等，不利于广泛应用。与这些方法相比，一些简单、快速的方法，如生物传感器、电子舌、比色卡等引起了研究人员的注意。
授权公告号为CN106855508B的发明专利公开了一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法，其特征在于该检测方法是按下述步骤进行的：步骤一、取5g鱼肉研磨至泥状，离心取上清液，用过滤膜过滤后向用过滤膜过滤的滤液中加入0.1mL质量百分比为10％的三氯醋酸，搅拌混匀，去除沉淀蛋白；骤二、然后离心取上清液，用辣根过氧化物酶和黄嘌呤氧化酶偶联催化，向上清液中依次加入3mL的苯酚、3mL4-氨基安替比林、3mLTris-HCL缓冲液、3mL叠氮钠和3mL辣根过氧化物酶，加100μL黄嘌呤氧化酶和10mL样品液，置于37℃的恒温水浴锅内保温8min，然后煮沸2min后加入1mL浓度为71.389mg/mL的Na2CO3溶液，放入冰水中冷却，再用紫外分光光度计进行检测获取次黄嘌呤的含量。
公开号为CN109856102A的发明专利申请公开了一种检测水产品次黄嘌呤的生物传感器的制备方法，所述生物传感器为PtNPs，其是以柠檬酸作为稳定剂，通过硼氢化钠还原氯铂酸制备所得；具体步骤为：将1mL浓度为16mM的氯铂酸水溶液和1mL浓度为40mM的柠檬酸三钠溶液加入到38mL水中并在室温下搅拌30min；然后，向混合物中加入200μL浓度为50mM的硼氢化钠溶液；静置1h后，得到PtNPs的棕色悬浮液，使用前将其保持在4℃，制备得到PtNPs。
发明内容
本发明的目的在于提供一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，包括下列步骤：
步骤1：将洗净后的待测肉类样品切成颗粒，然后与三氯乙酸溶液混合，均质后得到混合物，然后对均质后的混合物进行离心，过滤取上清液，得到样品溶液；
步骤2：向样品溶液中加入黄嘌呤氧化酶，反应后得到反应产物；然后向反应产物中加入由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，再加入Fe-PDA，然后用醋酸-醋酸钠缓冲液将体积定容至200μL，振荡均匀后离心取上清液，测量上清液在653nm处的吸光度；
步骤3：将步骤2得到的吸光度值代入回归方程：
y＝0.00364x+0.20824
式中，x为次黄嘌呤的浓度，y为吸光度值；
当判别鱼肉新鲜度时，
新鲜鱼类：次黄嘌呤的浓度≤3.7×10-3g/5g；
腐败鱼类：次黄嘌呤的浓度＞3.7×10-3g/5g；
当判别猪肉新鲜度时，
新鲜猪肉：次黄嘌呤的浓度≤4.75×10-3g/5g；
不新鲜猪肉：次黄嘌呤的浓度＞4.75×10-3g/5g；
当判别鱼肉新鲜度时，
新鲜鸡肉：次黄嘌呤的浓度≤7.2×10-3g/5g；
不新鲜鸡肉：次黄嘌呤的浓度＞7.2×10-3g/5g。
优选的技术方案为：所述Fe-PDA的制备方法包括：将盐酸多巴胺分散于去离子水中，然后加入FeCl3，当溶液的颜色从无色变为绿色时，将混合物转移到衬有聚四氟乙烯的高压釜中，密闭后在150-170℃条件下反应2.5-3.5h；高压釜自然冷却至室温后对得到的反应物料进行离心，弃上清后，用去离子水多次清洗沉淀并再次离心，收集沉淀物即为Fe-PDA。
优选的技术方案为：步骤1中，颗粒的粒径为1.5-2.5mm，三氯乙酸溶液的质量分数为8-12％，均质使用超声波均质机，离心速度为3500-4500r/m。
优选的技术方案为：步骤1中，黄嘌呤氧化酶的浓度为0.8-1.2mg/mL，反应的时间为35-45min；由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，3，3'，5，5'-四甲基联苯胺溶液的浓度为0.8-1.2mmol/L，醋酸-醋酸钠缓冲液的浓度为0.1mol/L，3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液两者之间的体积比为1：18-20；振荡均匀后在43-47℃条件下反应13-17分钟。
优选的技术方案为：建立次黄嘌呤回归方程的方法包括：将10μL的浓度为1mg/mL的黄嘌呤氧化酶加入100μL含不同浓度梯度的黄嘌呤氧化酶的pH值为8.0，且浓度为5mmol/L的Tris-Hcl缓冲液中，常温下分别反应40min，然后取20μL反应产物加入由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，再加入5μL的浓度为2.0mg/mL的Fe-PDA，使用醋酸-醋酸钠缓冲液将总体积定容至200μL，振荡均匀后在45℃反应15分钟，随后，样品在8000rpm离心3分钟，测量上清液在653nm处的吸光度；以吸光度值为纵坐标，黄嘌呤氧化酶的浓度为横坐标，利用Origin软件进行线性方程的拟合，得出黄嘌呤氧化酶的浓度与吸光度值在0-200μmol/L呈线性，回归方程为y＝0.00364x+0.20824，式中x为黄嘌呤氧化酶的浓度，y为吸光度值。
由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是：
1、本发明设计并合成了一种新型纳米酶Fe-PDA，具有优异的过氧化物酶模拟活性，并以此构建了检测次黄嘌呤的生物传感器，通过Fe-PDA催化TMB与由XOD和Hx产生的H2O2产生的紫外吸光度信号就可知道Hx的浓度。
2、本发明通过高温水热法3h合成了Fe-PDA纳米酶，合成方法简单快速。
3、本发明设计的检测体系简单快速，选择性好，线性范围为5.13-200μmol/L，检出限为1.54μmol/L，稳定性好且检测成本低。
4、本发明实现了通过对猪肉、鸡肉、鱼肉中次黄嘌呤的定量检测，快速判断肉类新鲜度，实用性较好。
附图说明
图1为定量检测Hx的紫外光谱图(A)和标准曲线(B)。
图2为H2O2、Fe-PDA、PDA+H2O2、Fe-PDA+H2O2对TMB的吸收光谱(A)和TMB+Fe-PDA+H2O2在0～15分钟的吸收光谱变化(B)。
图3为基于该Fe-PDA纳米酶传感系统检测的最佳条件Fe-PDA纳米酶的PH值(A)，培养温度(B)，Fe-PDA纳米酶的浓度(C)，XOD的浓度(D)，XOD的pH值(E)，Hx与XOD反应的培养时间(F)。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
请参阅图1-3。须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整。提供以下实施例以便更好地理解本发明，而非限制本发明。以下实施例中的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料如无特殊说明，均为常规生化试剂商店购买所得。
实施例1：一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法
一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，其特征在于，包括以下技术步骤。
(1)掺杂Fe2+的聚多巴胺(Fe-PDA)的合成
Fe-PDA纳米颗粒是通过水热法合成的。11.4mg的盐酸多巴胺(DOPA)，溶解在30mL的去离子水(盐酸多巴胺溶液的pH值约为5)中。然后，加入16.2mg的FeCl3以实现1:1的Fe/DOPA摩尔比。当溶液的颜色从无色变为绿色(混合物的pH值变为3.5)时，立即将混合物转移到衬有聚四氟乙烯的高压釜中，密闭，在160℃下反应3h。反应后，将高压釜自然冷却至室温。将反应物料通过离心(4000-8000rpm，5-15min)至液固分离，弃上清后，用去离子水多次清洗沉淀并再次离心，收集沉淀物即为掺杂Fe2+的聚多巴胺(Fe-PDA)。所述的FeCl3，其纯度应大于98％，盐酸多巴胺纯度应为分析纯。
(2)建立次黄嘌呤定量检测方程
将10μL 1mg/mL黄嘌呤氧化酶加入100μL含不同浓度Hx的Tris-Hcl缓冲液中(pH8.0,5mmol/L)常温下分别反应40min。然后取20μL反应产物加入含有1mmol/L TMB溶液和0.1mol/L HAc-NaAc缓冲液(pH3.5)的混合溶液中，再加入5μL的2.0mg/mL的Fe-PDA，使用HAc-NaAc缓冲液(pH 3.5)将混合溶液总体积定容至200μL，振荡均匀后在45℃反应15分钟，随后，样品在8000rpm离心3分钟，测量上清液在653nm处的吸光度。从图1的A可以看出，随着次黄嘌呤浓度的增加，溶液的吸光度值增加。因此以吸光度值为纵坐标，Hx的浓度为横坐标，利用Origin软件进行线性方程的拟合。得出Hx的浓度与吸光度值在0-200μmol/L呈线性，回归方程为y＝0.00364x+0.20824(x为Hx的浓度，y为吸光度值)，相关系数为0.9980，检测限为1.54μmol/L。样品经过处理后，加入TMB与Fe-PDA反应15min，测量其在653nm处的吸光度值，带入方程可以得到溶液中Hx的浓度。3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液两者之间的体积比为1：19。
所述的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.5)，是利用盐酸溶液并使用PH计将pH＝5.5的醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH至3.5而得到。
所述的Tris-Hcl缓冲液(pH 8.0，5mmol/L)由pH 8.0,1mol/L的Tris-Hcl缓冲液稀释得到。
所述的TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)，纯度为色谱纯级，纯度大于99％。
所述的生物试剂黄嘌呤氧化酶(XOD)购自上海源业生物科技有限公司。
(3)肉类样品预处理
所述的肉类样品，为猪肉、鸡肉、鱼肉中的一种。
取一定量的肉类样品，使用市政自来水冲洗表面至干净，沥干表面水分后保存于25℃下。取5.0g清洗后的肉类样品，切成粒径2mm的小颗粒，与10mL的10％三氯乙酸溶液混合，并使用超声波均质机均质10min，得到混合物。将均质后的混合物以4000r/m离心3分钟，并使用0.45μm滤纸过滤上清液，得到肉样品溶液，备用。
所述的三氯乙酸，纯度大于99％。
(4)样品检测与定量计算
取预处理后的样品溶液90μL，加入10uL 1mg/mL XOD，常温下分别反应40min。然后取20ul反应产物加入含有1mmol/L TMB溶液和0.1mol/L HAc-NaAc缓冲液(pH 3.5)的混合溶液中，再加入5μL 2.0mg/mL的Fe-PDA，使用HAc-NaAc缓冲液(pH 3.5)将混合溶液总体积定容至200μL，振荡均匀后在45℃反应15分钟，随后，样品在8000r/m离心3分钟，测量上清液在653nm处的吸光度。以吸光度值代入回归方程为y＝0.00364x+0.20824(x为Hx的浓度，y为吸光度值)可得到溶液中Hx的浓度。
(5)判别样品新鲜度
利用次黄嘌呤含量判别鱼肉新鲜度：
新鲜鱼类：次黄嘌呤≤3.7×10-3g/5g；
腐败鱼类：次黄嘌呤＞3.7×10-3g/5g。
利用次黄嘌呤含量判别猪肉新鲜度：
新鲜猪肉：次黄嘌呤≤4.75×10-3g/5g；
不新鲜猪肉：次黄嘌呤＞4.75×10-3g/5g。
利用次黄嘌呤含量判别鸡肉新鲜度：
新鲜鸡肉：次黄嘌呤≤7.2×10-3g/5g；
不新鲜鸡肉：次黄嘌呤＞7.2×10-3g/5g。
(一)Fe-PDA具有过氧化物模拟酶催化性能的验证研究
使用3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB，纯度>99％)为显色剂，H2O2为底物，测试Fe-PDA的过氧化物模拟酶催化性能。实验步骤如下：将5μL 2.0mg/mL的Fe-PDA加入含有1mmol/LTMB溶液和0.1mol/L的醋酸-醋酸钠(HAc-NaAc)缓冲液(Phygene，pH 3.5)的混合溶液中，加入10uL的2mmol/L H2O2，使混合溶液总体积达到200μL。混合均匀后，在45℃金属浴恒温器下静置反应15分钟，观察溶液颜色的变化，使用紫外分光光度器检测其在653nm处的吸光度，并与不加入Fe-PDA、不加入H2O2和加PDA的三个体系作对比。
如图2所示，当体系同时含有H202、TMB、Fe-PDA时，在653nm处有很强的吸光度值，与此同时，反应体系的颜色由原本的无色透明最终变为蓝色。实验还考察了不同反应体系在653nm处的吸光度随着反应时间增加的变化，图2的B为不同体系在653nm处的吸光度与反应时间曲线，从图中可以看到，当体系中只含H2O2、TMB或只含Fe-PDA、TMB时，653nm处的吸光度在15min内没有明显变化，而当H202、TMB、Fe-PDA共同存在时，随时间增加653nm处的吸光度有着明显的增长，这一切均说明了Fe-PDA有明显的过氧化物模拟酶活性。因此，利用Fe-PDA的过氧化物模拟酶活性可以对次黄嘌呤灵敏地检测，优异的过氧化物酶活性有利于提高检测体系的灵敏度和线性范围，更好的实现对肉制品新鲜度的检测。
(二)最优条件验证
为了优化Fe-PDA的分析性能，对浓度、检测系统的pH值、孵育时间和温度等实验参数进行了详细研究。实验首先探究了pH值在3.0-5.5范围内Fe-PDA的模拟酶催化活性，实验选择了醋酸盐缓冲液(NaAc-HAc)作为反应的缓冲体系。结果如图3的A所示，当pH值在3.0至3.5范围内，反应体系的吸光度随着缓冲体系pH值的增加而增加。当pH值超过3.5增大到5.5时，吸光度随着其增大而逐渐降低，说明Fe-PDA的催化活性有所下降。因此选择3.5作为体系的最适pH值。接下来考察了温度在25℃-50℃范围内Fe-PDA的模拟酶性能。实验发现在这一温度区间内反应体系的吸光度在45℃达到最高，因此选择45℃作为反应体系的最适温度。(如图3的B所述)通过以上实验，确定了模拟酶催化体系的最适反应条件为pH值3.5，温度45℃。Fe-PDA的浓度对显色反应有显着影响。因此，优化了Fe-PDA的浓度，结果如图3的C所示，在50μg处获得了最高的吸光度信号。因此，将使用50μg Fe-PDA用于下一个实验。
为了得到更好的检测效果，实验对XOD催化Hx的浓度、孵育时间和缓冲液pH值进行了优化，通过加入不同浓度的XOD和将催化反应在不同孵育时间和pH值下的产物加入模拟酶体系测得的653nm处吸光度的变化情况得到最佳反应条件。实验结果如图3的D-F所示，从图3的D可以看出，当XOD浓度从0.001mg/ml增加到0.1mg/ml时，由于酶促反应增加，响应增加。然而，高于1U/ml的XOD浓度不会产生显着的响应变化，因为所有底物分子都与酶结合。因此，选择了0.1mg/ml的优化XOD浓度以实现最佳响应。pH值影响酶的功能。因此，通过使用范围为6.2至9.0的50mmol/L磷酸盐缓冲液来研究XOD的pH值。图3的E中显示的结果表明当催化反应的缓冲液pH值在8.0时，模拟酶体系在653nm处有着最高的吸光度。因此在后续实验中将XOD催化反应的pH值设为8.0。反应时间是影响方程式反应的重要因素。因此，研究了反应时间。图3的F显示了当XOD催化生成H2O2(第二个反应的底物)时，次黄嘌呤水解期间反应时间的结果。颜色强度随着反应时间从5分钟到40分钟而增加，随着反应时间从40分钟到60分钟而降低。因此，选择40分钟作为次黄嘌呤和XOD之间的最佳反应时间。
定量检测次黄嘌呤判别鱼肉新鲜度：
取一定量的鱼肉作为检测样品，使用自来水冲洗干净，沥干水分后保存于25℃下。取5.0g清洗后的鱼肉样品，切成两毫米的块状，与10mL的10％三氯乙酸溶液混合，并使用超声波均质机均质10分钟，得到混合物。将均质后的混合物以4000r/m离心3分钟，并使用0.45μm滤纸过滤上清液，得到鱼肉样品溶液。取预处理后的样品溶液90μL，加入10μL 1mg/mLXOD，常温下分别反应40min。然后取20μL反应产物加入含有1mmol/LTMB溶液和0.1mol/LHAc-NaAc缓冲液(pH 3.5)的混合溶液中，再加入5μL 2.0mg/mL的Fe-PDA，使用HAc-NaAc缓冲液(pH 3.5)将混合溶液总体积定容至200μL，振荡均匀后在45℃反应15分钟，随后，样品在8000r/m离心3分钟，测量上清液在653nm处的吸光度。测得653nm处吸光度值为0.425，代入回归方程为y＝0.00364x+0.20824(x为Hx的浓度，y为吸光度值)得出次黄嘌呤的浓度为59.5μmol/L。
定量检测次黄嘌呤判别猪肉新鲜度：
取一定量的猪肉作为检测样品，使用自来水冲洗干净，沥干水分后保存于25℃下。取5.0g清洗后的猪肉样品，切成两毫米的块状，与10mL的10％三氯乙酸溶液混合，并使用超声波均质机均质10分钟，得到混合物。将均质后的混合物以4000r/m离心3分钟，并使用0.45μm滤纸过滤上清液，得到猪肉样品溶液。取预处理后的样品溶液90μL，加入10μL 1mg/mLXOD，常温下分别反应40min。然后取20μL反应产物加入含有1mmol/L TMB溶液和0.1mol/LHAc-NaAc缓冲液(pH 3.5)的混合溶液中，再加入5μL 2.0mg/mL的Fe-PDA，使用HAc-NaAc缓冲液(pH 3.5)将混合溶液总体积定容至200μL，振荡均匀后在45℃反应15分钟，随后，样品在8000r/m离心3分钟，测量上清液在653nm处的吸光度。测得653nm处吸光度值为0.385，代入回归方程为y＝0.00364x+0.20824(x为Hx的浓度，y为吸光度值)得出次黄嘌呤的浓度为48.6μmol/L。
定量检测次黄嘌呤判别鸡肉新鲜度：
取一定量的鸡肉作为检测样品，使用自来水冲洗干净，沥干水分后保存于25℃下。取5.0g清洗后的鸡肉样品，切成两毫米的块状，与10mL的10％三氯乙酸溶液混合，并使用超声波均质机均质10分钟，得到混合物。将均质后的混合物以4000r/m离心3分钟，并使用0.45μm滤纸过滤上清液，得到鸡肉样品溶液。取预处理后的样品溶液90μL，加入10μL 1mg/mLXOD，常温下分别反应40min。然后取20μL反应产物加入含有1mmol/L TMB溶液和0.1mol/LHAc-NaAc缓冲液(pH 3.5)的混合溶液中，再加入5μL 2.0mg/mL的Fe-PDA，使用HAc-NaAc缓冲液(pH 3.5)将混合溶液总体积定容至200μL，振荡均匀后在45℃反应15分钟，随后，样品在8000r/m离心3分钟，测量上清液在653nm处的吸光度。测得653nm处吸光度值为0.298，代入回归方程为y＝0.00364x+0.20824(x为Hx的浓度，y为吸光度值)得出次黄嘌呤的浓度为24.7μmol/L。
实施例2：一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法
一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，包括下列步骤：
步骤1：将洗净后的待测肉类样品切成颗粒，然后与三氯乙酸溶液混合，均质后得到混合物，然后对均质后的混合物进行离心，过滤取上清液，得到样品溶液；
步骤2：向样品溶液中加入黄嘌呤氧化酶，反应后得到反应产物；然后向反应产物中加入由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，再加入Fe-PDA，然后用醋酸-醋酸钠缓冲液将体积定容至200μL，振荡均匀后离心取上清液，测量上清液在653nm处的吸光度；
步骤3：将步骤2得到的吸光度值代入回归方程：
y＝0.00364x+0.20824
式中，x为次黄嘌呤的浓度，y为吸光度值；
当判别鱼肉新鲜度时，
新鲜鱼类：次黄嘌呤的浓度≤3.7×10-3g/5g；
腐败鱼类：次黄嘌呤的浓度＞3.7×10-3g/5g；
当判别猪肉新鲜度时，
新鲜猪肉：次黄嘌呤的浓度≤4.75×10-3g/5g；
不新鲜猪肉：次黄嘌呤的浓度＞4.75×10-3g/5g；
当判别鱼肉新鲜度时，
新鲜鸡肉：次黄嘌呤的浓度≤7.2×10-3g/5g；
不新鲜鸡肉：次黄嘌呤的浓度＞7.2×10-3g/5g。
优选的实施方式为：所述Fe-PDA的制备方法包括：将盐酸多巴胺分散于去离子水中，然后加入FeCl3，当溶液的颜色从无色变为绿色时，将混合物转移到衬有聚四氟乙烯的高压釜中，密闭后在170℃条件下反应3.5h；高压釜自然冷却至室温后对得到的反应物料进行离心，弃上清后，用去离子水多次清洗沉淀并再次离心，收集沉淀物即为Fe-PDA。
优选的实施方式为：步骤1中，颗粒的粒径为2.5mm，三氯乙酸溶液的质量分数为12％，均质使用超声波均质机，离心速度为4500r/m。
优选的实施方式为：步骤1中，黄嘌呤氧化酶的浓度为1.2mg/mL，反应的时间为35-45min；由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，3，3'，5，5'-四甲基联苯胺溶液的浓度为1.2mmol/L，醋酸-醋酸钠缓冲液的浓度为0.1mol/L，3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液两者之间的体积比为1：20；振荡均匀后在47℃条件下反应17分钟。
优选的实施方式为：建立次黄嘌呤回归方程的方法包括：将10μL的浓度为1mg/mL的黄嘌呤氧化酶加入100μL含不同浓度梯度的黄嘌呤氧化酶的pH值为8.0，且浓度为5mmol/L的Tris-Hcl缓冲液中，常温下分别反应40min，然后取20μL反应产物加入由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，再加入5μL的浓度为2.0mg/mL的Fe-PDA，使用醋酸-醋酸钠缓冲液将总体积定容至200μL，振荡均匀后在45℃反应15分钟，随后，样品在8000rpm离心3分钟，测量上清液在653nm处的吸光度；以吸光度值为纵坐标，黄嘌呤氧化酶的浓度为横坐标，利用Origin软件进行线性方程的拟合，得出黄嘌呤氧化酶的浓度与吸光度值在0-200μmol/L呈线性，回归方程为y＝0.00364x+0.20824，式中x为黄嘌呤氧化酶的浓度，y为吸光度值。
以上所述者仅为用以解释本发明之较佳实施例，并非企图具以对本发明做任何形式上之限制，是以，凡有在相同之发明精神下所作有关本发明之任何修饰或变更，皆仍应包括在本发明意图保护之范畴。
Claims (5)
1.一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，其特征在于：包括下列步骤：
步骤1：将洗净后的待测肉类样品切成颗粒，然后与三氯乙酸溶液混合，均质后得到混合物，然后对均质后的混合物进行离心，过滤取上清液，得到样品溶液；
步骤2：向样品溶液中加入黄嘌呤氧化酶，反应后得到反应产物；然后向反应产物中加入由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，再加入Fe-PDA，然后用醋酸-醋酸钠缓冲液将体积定容至200μL，振荡均匀后离心取上清液，测量上清液在653nm处的吸光度；
步骤3：将步骤2得到的吸光度值代入回归方程：
y＝0.00364x+0.20824
式中，x为次黄嘌呤的浓度，y为吸光度值；
当判别鱼肉新鲜度时，
新鲜鱼类：次黄嘌呤的浓度≤3.7×10-3g/5g；
腐败鱼类：次黄嘌呤的浓度＞3.7×10-3g/5g；
当判别猪肉新鲜度时，
新鲜猪肉：次黄嘌呤的浓度≤4.75×10-3g/5g；
不新鲜猪肉：次黄嘌呤的浓度＞4.75×10-3g/5g；
当判别鱼肉新鲜度时，
新鲜鸡肉：次黄嘌呤的浓度≤7.2×10-3g/5g；
不新鲜鸡肉：次黄嘌呤的浓度＞7.2×10-3g/5g。
2.根据权利要求1所述的通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，其特征在于：所述Fe-PDA的制备方法包括：将盐酸多巴胺分散于去离子水中，然后加入FeCl3，当溶液的颜色从无色变为绿色时，将混合物转移到衬有聚四氟乙烯的高压釜中，密闭后在150-170℃条件下反应2.5-3.5h；高压釜自然冷却至室温后对得到的反应物料进行离心，弃上清后，用去离子水多次清洗沉淀并再次离心，收集沉淀物即为Fe-PDA。
3.根据权利要求1所述的通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，其特征在于：步骤1中，颗粒的粒径为1.5-2.5mm，三氯乙酸溶液的质量分数为8-12％，均质使用超声波均质机，离心速度为3500-4500r/m。
4.根据权利要求1所述的通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，其特征在于：步骤1中，黄嘌呤氧化酶的浓度为0.8-1.2mg/mL，反应的时间为35-45min；由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，3，3'，5，5'-四甲基联苯胺溶液的浓度为0.8-1.2mmol/L，醋酸-醋酸钠缓冲液的浓度为0.1mol/L，3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液两者之间的体积比为1：18-20；振荡均匀后在43-47℃条件下反应13-17分钟。
5.根据权利要求1所述的通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，其特征在于：建立次黄嘌呤回归方程的方法包括：将10μL的浓度为1mg/mL的黄嘌呤氧化酶加入100μL含不同浓度梯度的黄嘌呤氧化酶的pH值为8.0，且浓度为5mmol/L的Tris-Hcl缓冲液中，常温下分别反应40min，然后取20μL反应产物加入由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，再加入5μL的浓度为2.0mg/mL的Fe-PDA，使用醋酸-醋酸钠缓冲液将总体积定容至200μL，振荡均匀后在45℃反应15分钟，随后，样品在8000rpm离心3分钟，测量上清液在653nm处的吸光度；以吸光度值为纵坐标，黄嘌呤氧化酶的浓度为横坐标，利用Origin软件进行线性方程的拟合，得出黄嘌呤氧化酶的浓度与吸光度值在0-200μmol/L呈线性，回归方程为y＝0.00364x+0.20824，式中x为黄嘌呤氧化酶的浓度，y为吸光度值。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111557932.2A CN114113506B (zh) | 2021-12-20 | 2021-12-20 | 一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111557932.2A CN114113506B (zh) | 2021-12-20 | 2021-12-20 | 一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114113506A CN114113506A (zh) | 2022-03-01 |
| CN114113506B true CN114113506B (zh) | 2023-06-20 |
Family
ID=80365508
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111557932.2A Active CN114113506B (zh) | 2021-12-20 | 2021-12-20 | 一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114113506B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114660053B (zh) * | 2022-03-22 | 2022-09-13 | 青岛科技大学 | 基于微流体聚集的鱼肉鲜度检测纸基芯片的制作及应用 |
| CN116735580B (zh) * | 2023-08-15 | 2023-11-21 | 中国农业科学院农产品加工研究所 | 基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器及其制备方法 |
| CN117169205B (zh) * | 2023-09-08 | 2024-04-05 | 中国海洋大学 | 基于比色生物传感器的次黄嘌呤的检测方法 |
| CN117417976B (zh) * | 2023-09-13 | 2024-05-24 | 中国海洋大学 | 基于uv与纳米酶协同快速检测水产品早期新鲜度的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008056990A1 (en) * | 2006-11-07 | 2008-05-15 | Atle Hannisdal | Method and device for determining hypoxanthine in biological samples |
| CN106855508A (zh) * | 2017-01-06 | 2017-06-16 | 北京物资学院 | 一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法 |
| CN110082336A (zh) * | 2019-04-25 | 2019-08-02 | 宁波大学 | 一种基于重氮化反应和sers快速检测水产品中总嘌呤含量的方法 |
| CN110423356A (zh) * | 2019-07-09 | 2019-11-08 | 漳州致一环保科技有限公司 | 检测鱼肉中次黄嘌呤的金属有机骨架材料的合成及应用 |
-
2021
- 2021-12-20 CN CN202111557932.2A patent/CN114113506B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008056990A1 (en) * | 2006-11-07 | 2008-05-15 | Atle Hannisdal | Method and device for determining hypoxanthine in biological samples |
| CN106855508A (zh) * | 2017-01-06 | 2017-06-16 | 北京物资学院 | 一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法 |
| CN110082336A (zh) * | 2019-04-25 | 2019-08-02 | 宁波大学 | 一种基于重氮化反应和sers快速检测水产品中总嘌呤含量的方法 |
| CN110423356A (zh) * | 2019-07-09 | 2019-11-08 | 漳州致一环保科技有限公司 | 检测鱼肉中次黄嘌呤的金属有机骨架材料的合成及应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 双酶偶联催化分光光度法测定血清次黄嘌呤;李忠琴;许小平;王武;;光谱学与光谱分析(第09期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114113506A (zh) | 2022-03-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN114113506B (zh) | 一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法 | |
| Weber et al. | Interferences in current methods for measurements of creatinine | |
| AU2020100704A4 (en) | A method of synthesis of ultrathin palladium nanosheet with peroxidase mimetic activity for the colorimetric detection of H2O2 | |
| Rao et al. | An automated enzymic assay for determining the cyanide content of cassava (Manihot esculenta Crantz) and cassava products | |
| US3979262A (en) | Compositions and methods for the determination of oxidizing agents | |
| US3950226A (en) | Novel reagent and method for the determination of urea in biological fluids | |
| CN109738635B (zh) | 一种检测黄曲霉毒素b1的试剂盒及其制备方法 | |
| Rej et al. | Interference by Tris buffer in the estimation of protein by the Lowry procedure | |
| CN105823744B (zh) | 半胱氨酸检测方法、检测试剂盒 | |
| CN112730393A (zh) | 一种显色试剂以及测定抗坏血酸的方法 | |
| US4626511A (en) | Composition for reducing turbidity in samples of biological fluids | |
| CN107505470A (zh) | 稳定的肌酐检测试剂盒及其使用方法 | |
| CN116735580B (zh) | 基于双模态单原子纳米酶的肉品新鲜度检测传感器及其制备方法 | |
| CN111190003A (zh) | 一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN110846378A (zh) | 一种1,5-脱水山梨醇检测试剂盒及其制备方法 | |
| Bell | A rapid method of dietary fibre estimation in wheat products | |
| CN110672518A (zh) | 一种稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒及其制备方法 | |
| O'Neal et al. | An automated, saccharogenic method for determining serum amylase activity | |
| CN112730833A (zh) | 一种免疫透射比浊法的铜蓝蛋白测定试剂盒 | |
| Amaya-F et al. | Automated determination of tryptophan in legumes and cereals | |
| CN117169205B (zh) | 基于比色生物传感器的次黄嘌呤的检测方法 | |
| Dreiling et al. | A new spectrophotometric assay for 2′, 3′-cyclic nucleotide 3′-phosphohydrolase activity in nervous tissue | |
| Kipps et al. | A method for quantitating amylase and its use in the investigation of various body fluids | |
| CN114460052B (zh) | 一种基于荧光碳量子点直接检测丙酮酸钠浓度的方法 | |
| CN115166169B (zh) | 一种可去除本底值干扰的检测鱼肉中组胺含量的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |