CN110672518A - 一种稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

一种稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及临床诊断技术，具体涉及一种稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒及其制备方法。试剂盒成分为：二甲苯胺蓝0.05‑0.24g/L，掩蔽剂0.025‑0.059g/L，表面活性剂0.4‑1.2g/L，1.0‑1.5g/L pH在10.2‑11.3碱性缓冲液，余量为水。依次将碳酸氢钠、碳酸钠、掩蔽剂、表面活性剂以及二甲苯胺蓝加入至水中，搅拌下溶解，溶解后定容，即得试剂。本发明试剂盒抗钙离子干扰能力强，稳定性好，线性范围广，操作简易，便于储存和运输。适用于半自动或全自动生化分析仪，临床应用价值较大。

Description

一种稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及临床诊断技术，具体涉及一种稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
镁是人体中重要的阳离子，能够激活多种酶的催化功能，参与人体生理生化反应。血清镁离子含量的测定在临床上已作为患者疾病诊断的重要依据。随着诊断技术的发展，临床应用的血清镁离子含量检测方法也越来越多。现阶段，临床检测主要运用的方法包括酶法、原子吸收分光光度法、比色法等。原子吸收分光光度法和酶法的准确性最为临床认可，但是检测仪器要求程度高，价格昂贵，不利于常规分析和推广。比色法在临床常规分析中应用最为广泛，包括甲基百里酚蓝法(MTB)、Calmagite染料法、偶氮胂Ⅲ法等。但是甲基百里酚蓝法(MTB)和Calmagite染料法存在胆红素或阳离子干扰问题，试剂稳定性差，为改善稳定性，加入剧毒物质，对临床检验操作人员存在潜在危害。
目前，二甲苯胺蓝法检测血清镁离子的含量在临床常规检验中得到广泛应用。二甲苯胺蓝法检测过程简便、成本低，适用于半自动或全自动生化分析仪。但此方法仍然存在一些问题急需解决，二甲苯胺蓝法是在碱性条件下，血清镁离子与二甲苯胺蓝生成有色复合物，505nm波长处有最大吸收。但是试剂开瓶后易吸收二氧化碳导致pH改变而影响稳定性，试剂易受共存离子钙的干扰等。因此，现有的二甲苯胺蓝法检测血清镁离子试剂的稳定性及抗干扰不能满足临床诊断的需求，二甲苯胺蓝法检测血清镁离子的研究还需进一步的改进和完善。
发明内容
本发明目的是针对二甲苯胺蓝法检测血清镁离子试剂易受钙离子干扰及易吸收二氧化碳导致稳定性受到影响的问题，提供了一种稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒及制备方法。
为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
一种稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒，试剂盒成分为：二甲苯胺蓝0.05-0.24g/L，掩蔽剂0.025-0.059g/L，表面活性剂0.4-1.2g/L，1.0-1.5g/L pH在10.2-11.3碱性缓冲液，余量为水，其中水为纯化水。
所述碱性缓冲液为按质量比为0.084-0.920：0.840-14.250碳酸氢钠和碳酸钠。
所述试剂盒为二甲苯胺蓝0.05-0.12g/L，掩蔽剂0.025-0.036g/L，表面活性剂0.4-0.8g/L，0.084-0.367g/L碳酸氢钠，0.954-4.404g/L碳酸钠pH在10.2-11.3，余量为水，其中水为纯化水。
所述掩蔽剂为乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸(EGTA)或盐酸羟胺，优选乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸(EGTA)；表面活性剂为Triton X-100或吐温20，优选吐温20。
所述的稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒的制备方法为按上述比例，依次将碳酸氢钠、碳酸钠、掩蔽剂、表面活性剂以及二甲苯胺蓝加入至水中，搅拌下溶解，每次添加物料必须溶解完全后才能添加下一种物料，待所有物料完全溶解后，用纯化定容，定容后使用微孔滤膜将试剂经过蠕动泵过滤后，对试剂进行分装，于2-8℃保存，待用。
本发明提供的稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒中，二甲苯胺蓝主要是与血清镁离子反应生成有色复合物，此复合物在505nm波长处有最大吸收峰，且与镁离子生成络合物的稳定性高于钙，起到显色作用和防止阳离子钙的干扰。碳酸氢钠和碳酸钠共同组成碱性缓冲液，pH在10.2-11.3范围内。
所述掩蔽剂主要是与阳离子钙结合生成络合物的稳定性极高，形成二次掩蔽，可排除钙离子对血清镁检测的干扰。
所述碳酸钠和碳酸氢钠形成双碱性缓冲系统，碳酸钠能够与空气中的二氧化碳反应，致使缓冲液的pH降低，但是缓冲液中的碳酸氢钠会随着HCO3-的解离生成OH-，使缓冲液pH恢复到10.2-11.3范围内。因此，采用碳酸钠和碳酸氢钠共同形成碱性环境可排除空气中二氧化碳对试剂pH的影响。
所述纯化水为饮用水通过纯化水设备经过反渗透、离子交换等方法将水中的导电介质几乎完全除去，又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除而制备所得的水。纯化水制备过程(1)预处理，由活性炭过滤器进行预处理，预处理主要目的是去除原水中含有的泥沙、铁锈、胶体物质、悬浮物、色度、异味、生化有机物，(2)反渗透，主要目的是脱盐，出水导电率≦10us.CM以下，(3)离子交换，由离子交换床设备进行，根据要求，出水阻率达到18.2MΩ.CM。
本发明用于体外血清样本诊断时，具体操作方法如下，波长设置为505nm，终点法，样本量：试剂＝3μL：300μL。使用Randox校准品采用线性校准模式进行校准后采用匹配的质控品进行内部质量控制，测定值在可接受范围内；试剂和血清样本加入到反应杯进行温育5分钟后，以空白管进行调零，读取各管的吸光度值A。血清镁离子浓度＝(ΔA标本/ΔA标准)标准物质浓度。
本发明所具有的优点：
本发明试剂盒抗钙离子干扰能力强，稳定性好，线性范围广，操作简易，便于储存和运输。适用于半自动或全自动生化分析仪，临床应用价值较大。并且采用本发明制备方法避免了交叉污染的问题，显著提高了试剂的抗干扰能力、灵敏性及稳定性。目前市售的试剂盒开瓶后易吸收空气中二氧化碳，导致试剂pH改变，从而改变试剂稳定性。本发明试剂盒加入了碳酸氢钠和碳酸钠组成的碱性缓冲系统，根据碳酸根、碳酸氢根和二氧化碳之间的动态平衡，维持试剂的pH值，解决了二氧化碳的干扰，提高了本发明试剂的灵敏性、稳定性及抗干扰能力。
附图说明
图1为对照试剂盒与本发明相关性图。
具体实施方式
下面结合实例对本发明作进一步详细说明，但应理解本发明保护的范围并非仅限于这些实例的范围。
实施例1
本实施中，试剂盒中每升试剂中成分为：
Figure BDA0001717824630000031
余量为纯化水；
具体配置方法：
首先，物料称量。二苯甲胺蓝称取量为0.3250g，EGTA取量为0.1626g，吐温20称取量为2.6014g，碳酸氢钠称取量为0.5462g，碳酸钠称取量为6.2011g。
其次，搅拌。向含800ml纯化水的反应釜中，依次加入上述称取的碳酸氢钠、碳酸钠、掩蔽剂、表面活性剂以及二甲苯胺蓝，设置转速为300r/min进行搅拌。每次添加物料必须溶解完全后才能添加下一种物料。待所有物料完全溶解后，用纯化水定容至1L。
最后，试剂过滤和分装。使用微孔滤膜将试剂经过蠕动泵过滤后，对试剂进行分装。于2-8℃保存，待用。
实施例2
本实施中，试剂盒中每升试剂中成分为：
Figure BDA0001717824630000032
Figure BDA0001717824630000041
余量为纯化水；
具体配置方法：
首先，物料称量。二苯甲胺蓝称取量为0.0501g，EGTA称取量为0.0252g，吐温20称取量为0.4012g，碳酸氢钠称取量为0.0841g，碳酸钠称取量为0.9541g。
其次，搅拌。向含800ml纯化水的反应釜中，依次加入碳酸氢钠、碳酸钠、掩蔽剂、表面活性剂以及二甲苯胺蓝，设置转速为300r/min进行搅拌。每次添加物料必须溶解完全后才能添加下一种物料。待所有物料完全溶解后，用纯化水定容至1L。
最后，试剂过滤和分装。使用微孔滤膜将试剂经过蠕动泵过滤后，对试剂进行分装。于2-8℃保存，待用。
应用例
1)稳定性试验检测
以上述实施例1制备的试剂为例，对试剂稳定性进行了研究，并与目前市场上流通的镁测定试剂盒(二甲苯胺蓝法)(购自北京百奥泰康生物技术有限公司)作为对照进行对比。校准品和质控品分别是朗道914UE和793UE，使用仪器为全自动生化分析仪TBA-40FR，参数设置如下，波长为505nm,反应方向为正方向，样本量：试剂(实施例1试剂或对照)＝3μL：300μL。检测结果见表1和表2，结果表明本发明试剂稳定性，优于市售的同类产品。
表1
Figure BDA0001717824630000042
备注：单位为mmol/L。
表2
Figure BDA0001717824630000051
备注：单位为mmol/L。
2)阳离子钙干扰试验检测
采用上述实施例1制备的试剂，对试剂抗阳离子钙干扰性进行了研究，并与目前市场上流通的镁测定试剂盒(二甲苯胺蓝法)(购自北京百奥泰康生物技术有限公司)作为对照进行对比。进行血清镁检测，干扰试验中于朗道质控品793UE中分别加入碳酸氢钙4.0、6.0和8.0mmol/L，本发明试剂对镁离子检测值分别为1.63、1.76和1.84mmol/L，未见钙离子的干扰，而对比试剂测定镁离子时，样本中钙离子在4.0mmol/L时，即对测定结果产生显著的干扰作用。
3)临床样本检测试验
本发明实施例2试剂盒与对比试剂盒，分别对随机N＝100例血清样本进行血清镁检测，结果见表3。同时根据医学统计学方法，对检测数据作散点图并进行相关性分析，相关系数r应不小于0.990，即为发明试剂盒与对比试剂盒具有较高的一致性。根据公式(1)，将测试结果经计算得出，本发明试剂盒与市售同类产品的相关性(参见表3和图1)。
Figure BDA0001717824630000052
所述具体检测过程为：波长设置为505nm，终点法，样本量：试剂＝3μL：300μL。使用Randox校准品采用线性校准模式进行校准后采用匹配的质控品进行内部质量控制，测定值在可接受范围内；试剂和血清样本加入到反应杯进行温育5分钟后，以空白管进行调零，读取各管的吸光度值A。血清镁离子浓度＝(ΔA标本/ΔA标准)标准物质浓度。
表3
Figure BDA0001717824630000061
Figure BDA0001717824630000071
本发明试剂盒与对比试剂盒临床相关性图谱如图1所示。结合表3和图1可知，本发明试剂盒与对比试剂盒在检测临床血清样本时具有良好的相关性，相关系数r＝0.9982。
综上所述，本发明试剂盒通过临床血清样本进行了验证，与对比试剂盒的相关性较好。但是，稳定性试验检测结果表明，本发明试剂盒的稳定性要强于对比试剂盒的稳定性。在抗阳离子钙干扰方面，结果表明本发明试剂盒能够检测含量8.0mmol/L钙离子的样本，而且能够保证检测结果的准确性。本发明试剂盒稳定性好，抗阳离子钙干扰性能好，成本低，操作简便，可行性强，适于临床常规诊断。

Claims (8)

1.一种稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒，其特征在于：试剂盒成分为：二甲苯胺蓝0.05-0.24g/L，掩蔽剂0.025-0.059g/L，表面活性剂0.4-1.2g/L，1.0-1.5g/L pH在10.2-11.3碱性缓冲液，余量为水。
2.按权利要求1所述的稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒，其特征在于：所述碱性缓冲液为按质量比为0.084-0.920：0.840-14.250碳酸氢钠和碳酸钠。
3.按权利要求1或所述的稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒为二甲苯胺蓝0.05-0.12g/L，掩蔽剂0.025-0.036g/L，表面活性剂0.4-0.8g/L，0.084-0.367g/L碳酸氢钠，0.954-4.404g/L碳酸钠pH在10.2-11.3，余量为水。
4.按权利要求1或2所述的稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒，其特征在于：所述掩蔽剂为乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸(EGTA)或盐酸羟胺；表面活性剂为Triton X-100或吐温20。
5.按权利要求4所述的稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒，其特征在于：所述掩蔽剂为乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸(EGTA)；表面活性剂为吐温20。
6.一种权利要求1所述的稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒的制备方法，其特征在于：按上述比例，依次将碳酸氢钠、碳酸钠、掩蔽剂、表面活性剂以及二甲苯胺蓝加入至水中，搅拌下溶解，溶解后定容，即得试剂。
7.按权利要求6所述的稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述定容后经微孔滤膜过滤，分装后于2-8℃保存，待用。
8.按权利要求6所述的稳定的二甲苯胺蓝法血清镁检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述依次添加的各物质过程中前一加入物质溶解完全后再添加下一种物料。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111239120A (zh) * 2020-02-26 2020-06-05 绍兴市人民医院 一种血液钙离子检测试纸
CN112051259A (zh) * 2020-08-31 2020-12-08 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种一氧化氮检测试剂盒及检测方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1869705A (zh) * 2006-06-06 2006-11-29 周铁丽 血清镁检测试剂盒及其制备方法
CN108169224A (zh) * 2017-12-27 2018-06-15 山东博科生物产业有限公司 一种血清镁检测试剂及制备

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1869705A (zh) * 2006-06-06 2006-11-29 周铁丽 血清镁检测试剂盒及其制备方法
CN108169224A (zh) * 2017-12-27 2018-06-15 山东博科生物产业有限公司 一种血清镁检测试剂及制备

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
宋克征等: "血清镁的二甲苯胺蓝比色测定法", 《临床检验杂志》 *
曹建明等: "二甲苯胺蓝I(XB-I)光度法测定血清镁", 《江西医学检验》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111239120A (zh) * 2020-02-26 2020-06-05 绍兴市人民医院 一种血液钙离子检测试纸
CN112051259A (zh) * 2020-08-31 2020-12-08 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种一氧化氮检测试剂盒及检测方法

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