CN106814057A - 一种基于聚集诱导荧光增强特性用于选择性识别atp的荧光探针、合成方法及其应用 - Google Patents

一种基于聚集诱导荧光增强特性用于选择性识别atp的荧光探针、合成方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于聚集诱导荧光增强特性用于选择性识别ATP的荧光探针、合成方法及其应用。本发明以二苯甲酮衍生物为起始原料合成荧光探针1。本发明开展了荧光探针1对ATP、ADP、AMP及焦磷酸(PPi)的检测研究，发现其对ATP具有很好的灵敏度和选择性，与现有技术相比，本发明具有合成原料易得、荧光探针荧光量子产率高、抗光漂白能力强等优点，避免了传统荧光染料不宜在高浓度下检测的缺点，并且该荧光探针1成功用于溶液中一种ATP水解酶Apyrase的反应过程监控，并用于细胞内ATP的成像研究。因此，荧光探针1在检测体内ATP含量方面具有很大的应用前景。

Description

一种基于聚集诱导荧光增强特性用于选择性识别ATP的荧光 探针、合成方法及其应用
技术领域
本发明属于生物化学材料领域，涉及一种基于聚集诱导荧光增强特性用于选择性识别ATP的荧光探针、合成方法及应用。
背景技术
ATP是一种腺苷三磷酸，在细胞内以辅酶的形式存在，是细胞内能量转移过程的最小分子单位。ATP在细胞内具有重要的生理功能，如在细胞信号传导、保持细胞结构、DNA或RNA的生物合成过程中都起着重要作用。通常，健康成人体内平均含有250g的ATP，ATP含量异常通常与心血管病、局部缺血、组织缺氧、低血糖及帕金森、老年痴呆症等疾病密切相关。ATP的重要生理作用激发了科学家们对其检测方法的研究，比如目前常用的检测ATP的方法有：生物发光法、色谱法、荧光法、电化学方法等。在这些检测方法中，荧光探针由于具有操作简单、灵敏度高、检测限低、可应用于细胞内或活体成像等优点得到了广泛的发展。然而，传统的ATP荧光探针所采用的荧光分子在高浓度时极易发生荧光猝灭，即聚集诱导荧光猝灭现象(Aggregation Caused Quenching,ACQ)。这种现象迫使研究人员在检测过程中只能使用稀溶液，导致检测信噪比低，限制了传统ATP荧光探针的实际应用。
2001年，唐本忠等人发现了一种在溶液状态下呈现无荧光或弱荧光，但是在聚集态呈现强荧光的特殊荧光分子，并将这种特殊的发光现象称为聚集诱导荧光(AggregationInduced Emission,AIE)。具有AIE效应的荧光分子由于具有高荧光量子产率、强抗漂白性、无需低浓度下检测等优点，为Turn-on型的荧光探针的设计提出了新的思路，其中四苯乙烯类分子(Tetraphenylethylene,TPE)更是设计AIE类荧光探针的热门分子。本发明利用TPE分子的AIE特性，通过调节TPE分子的聚集/解聚过程，设计一种基于TPE分子的ATP荧光探针，具有选择性强、灵敏度高、抗漂白能力强等特点，能够有效避免ADP、AMP及PPi的干扰，可在水溶液中监测一种ATP水解酶的反应进程，并在活细胞中检测ATP，并且我们通过改变荧光探针的浓度可实现对ATP检测范围的调控。
发明内容
本发明的内容是一种基于聚集诱导荧光增强特性用于选择性识别ATP的荧光探针、合成方法及其应用。
实现本发明目的的技术解决方案是，一种选择性识别ATP的荧光探针1，具有如下结构：
该探针具有聚集诱导荧光增强特性，即在溶液状态下具有弱荧光，聚集状态下具有强荧光。
一种选择性识别ATP的荧光探针1的合成方法，合成路线如下：
第一步：4,4-二溴二苯甲酮和锌粉加入到四氢呋喃中，搅拌下冷却到-20℃半小时，然后缓慢滴加四氯化钛，在-20℃继续搅拌半小时后，缓慢升至室温，然后加热回流过夜，冷却，过滤，浓缩后用柱层析分离纯化，得到具有聚集诱导荧光增强特性的化合物2；
第二步：将化合物2、4-吡啶硼酸、Pd(dppf)Cl2、CH2Cl2、Bu4NI和碳酸钾水溶液加入甲苯中，将混合液在氮气保护条件下回流16h，冷却，加入二氯甲烷和饱和食盐水分液、萃取，干燥、浓缩、柱层析分离后得到化合物3；
第三步：将化合物3和溴苄溶于甲苯中，80℃下反应过夜，反应液冷却后进行重结晶得到荧光探针1，荧光探针1的结构经1HNMR、13C NMR和高分辨质谱鉴定。
一种选择性识别ATP的荧光探针1的应用研究：
在荧光探针1中含有四个吡啶盐结构，赋予了该化合物一定的水溶性，因此，该探针可以用于水样检测，简单实用。在本发明中，用于检测ATP的溶剂为羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲溶液(5mM,pH 7.4，含1％的DMSO)，向溶液中加入不同浓度的ATP，测定荧光探针1的荧光强度随ATP浓度的变化情况。在1.0μM至4.0μMATP浓度范围内荧光探针1的荧光强度呈现良好的线性关系。当改变荧光探针1浓度为20.0μM时，向溶液中加入不同浓度的ATP，测定荧光探针1的荧光强度随ATP浓度的变化情况。在2.0μM至20.0μM ATP浓度范围内荧光探针1的荧光强度呈现良好的线性关系。同样的，将荧光探针1浓度继续增大为40.0μM时，向溶液中加入不同浓度的ATP，测定荧光探针1的荧光强度随ATP浓度的变化情况。在20.0μM至40.0μMATP浓度范围内荧光探针1的荧光强度呈现良好的线性关系。由此可实现对ATP浓度的检测范围调控，实现在较大浓度范围内准确定量ATP。
向荧光探针1的溶液中加入ATP后，带有四个正电荷的荧光探针1可以通过静电相互作用和疏水作用沿着带有四个负电荷的ATP分子链发生排列，形成聚集态，从而荧光强度大大增强。为了了解荧光探针1对ATP的选择性，本发明对ADP、AMP及焦磷酸(PPi)与荧光探针1反应前后的荧光强度也进行了测定，结果表明，除ATP外其他化合物与荧光探针1反应前后的荧光强度均没有明显增强。
溶液中一种ATP水解酶Apyrase反应过程的监测：向含有20μM荧光探针1和20μMATP的HEPES缓冲溶液中分别加入不同浓度的ATP水解酶Apyrase(0,5,10,15,25,50mU)，监测体系在500nm处荧光强度随反应时间的变化情况。ATP水解酶Apyrase可将ATP、AMP水解为ADP和无机磷(Pi)。未加入Apyrase时，体系的荧光在50min的实验时间内变化不大，当加入Apyrase后，荧光强度迅速下降，如加入50mU Apyrase后，体系荧光可在10min内被完全猝灭。当在体系中加入酶的抑制剂Na3VO4后，重复上述实验。我们发现，抑制剂的加入显著抑制了Apyrase的活性，降低了ATP的水解速率，使得体系荧光基本保持不变，这些结果都说明，荧光探针1的加入不会影响ATP水解酶Apyrase的活性，因此荧光探针1可在水溶液中监测Apyrase水解ATP的反应进程。
HeLa细胞ATP荧光成像：荧光探针1用二甲基亚砜(DMSO)溶解准确配制成1mM的母液，然后再用RPMI 1640培养基稀释成10μM的稀释液。移取200μL的稀释液加入到细胞培养皿中，于37℃、5％CO2、100％饱和湿度的培养箱中孵育12h，用RPMI 1640培养基冲洗细胞培养皿洗去多余染料分子。在405nm激发下用共聚焦荧光显微镜观察细胞的荧光成像情况，采集450-550nm的荧光信号进行荧光成像。结果表明，HeLa细胞内呈现绿色荧光。同样条件下，先将HeLa细胞与5U/mL的Apyrase于37℃、5％CO2、100％饱和湿度的培养箱中孵育6h，用新鲜培养基清洗细胞3遍，然后再用200μL 10μM的荧光探针1的培养基稀释液于37℃、5％CO2、100％饱和湿度的培养箱中孵育12h，用新鲜培养基清洗细胞3遍洗去多余染料分子。在405nm激发下用共聚焦荧光显微镜观察细胞的荧光成像情况，采集450-550nm的荧光信号进行荧光成像。结果表明，HeLa细胞内的绿色荧光较无Apyrase处理的细胞更弱，说明荧光探针1可对HeLa细胞内的ATP荧光成像。
发明人通过简单的设计与合成，将荧光探针1成功用于ATP检测。与现有技术相比，本发明合成步骤简单，较易大规模生产和应用，克服了传统染料分子易漂白、仅能在稀溶液中检测的缺点，能够有效避免ADP、AMP及PPi的干扰，可在水溶液中监测一种ATP水解酶的反应进程，并在活细胞中检测ATP，并且我们通过改变荧光探针1的浓度可实现对ATP检测范围的调控。
附图说明
图1(a)在40μM荧光探针1的HEPES缓冲溶液中加入不同浓度的ATP，荧光发射光谱的变化；(b)5μM荧光探针1在500nm处荧光强度变化比值(I0-I)/I0与ATP浓度的关系及线性拟合曲线图；(c)20μM荧光探针1在500nm处荧光强度变化比值(I0-I)/I0与ATP浓度的关系及线性拟合曲线图；(d)40μM荧光探针1在500nm处荧光强度变化比值(I0-I)/I0与ATP浓度的关系及线性拟合曲线图。
图2(a)在20μM荧光探针1的HEPES缓冲溶液中分别加入20μM或100μM的ATP、ADP、AMP或PPi，在500nm处荧光强度变化比值(I0-I)/I0柱状图。(b)在365nm紫外灯照射下，荧光探针1对100μM的ATP、ADP、AMP或PPi的响应发光情况照片。1：荧光探针1；2：荧光探针1+ATP；3：荧光探针1+ADP；4：荧光探针1+AMP；5：荧光探针1+PPi。
图3(a)在含有20μM荧光探针1和20μMATP的HEPES缓冲溶液中分别加入不同浓度的ATP水解酶Apyrase(0,5,10,15,25,50mU)，在500nm处荧光强度随时间变化图；(b)含有20μM荧光探针1、20μMATP和50mUApyrase的HEPES缓冲溶液，在Na3VO4抑制剂存在或不存在条件下，500nm处荧光强度随时间变化图。
图4荧光探针1对HeLa细胞中ATP的荧光成像照片。(a)荧光探针1与HeLa细胞在37℃下孵化12h后的明场照片；(b)荧光探针1与HeLa细胞在37℃下孵化12h后的荧光照片；(c)为(a)与(b)的叠加图；(d)5U/mLApyrase与HeLa细胞在37℃下孵化6h，再与荧光探针1孵化12h后的明场照片；(e)5U/mLApyrase与HeLa细胞在37℃下孵化6h，再与荧光探针1孵化12h后的荧光照片；(f)为(d)与(e)的叠加图，荧光探针1浓度为10μM。
具体实施方式
本实施例中所用的原料均为已知化合物，可以由商业途径获得。
实施例1
荧光探针1的合成
(1)化合物2的合成：将锌粉(1.56g,24mmol)、4,4’-二溴二苯甲酮(408mg,1.2mmol)加入无水四氢呋喃中，将悬浮液在搅拌下冷却到0℃。然后用注射器缓慢滴入四氯化钛(2.276g,12mmol)，0℃下继续搅拌30min后，混合液回流4h。冷却，搅拌下滴入碳酸钠溶液直至无气泡产生为止。加入二氯甲烷和饱和食盐水分液、萃取，有机相用饱和食盐水洗涤三次，有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩、柱层析分离后得到化合物2，产率为86％。
(2)化合物3的合成：将化合物2(200mg,0.31mmol)、4-吡啶硼酸(305mg,2.48mmol)、Pd(dppf)Cl2(200mg,0.245mmol)、CH2Cl2(1mL)、Bu4NI(25mg,0.068mmol)和碳酸钾水溶液(2M,10mL)加入甲苯(20mL)中，将混合液在氮气保护条件下回流16h。冷却，加入二氯甲烷和饱和食盐水分液、萃取，有机相用饱和食盐水洗涤三次，有机相用无水硫酸钠干燥、浓缩、柱层析分离后得到化合物3，产率61％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(d,J＝5.7Hz,8H),7.52–7.44(m,16H),7.23(d,J＝8.3Hz,8H).HR-MS:440.20082,[M+H]+。
(3)荧光探针1的合成：将化合物3和溴苄溶于甲苯中，80℃下反应过夜。反应液冷却后过滤，再用氯仿洗涤得到化合物1，产率89％。1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.00(d,J＝6.8Hz,8H),8.37(d,J＝6.9Hz,8H),7.89(d,J＝8.4Hz,8H),7.57–7.44(m,20H),7.40(d,J＝8.4Hz,8H),5.82(s,8H).13C NMR(101MHz,MeOD)δ155.83,146.37,144.40,141.81,133.31,132.75,132.39,129.58,129.31,128.70,127.86,124.73,63.47.HRMS:m/z＝251.12007(M4 +),304.47531([M-CH2Ph]3+)。
实施例2
ATP探针性能测试
(1)荧光探针1对ATP的荧光滴定测试：取5μL荧光探针1的DMSO溶液(1mM)于2mLHEPES缓冲溶液中，然后加入不同量的ATP水溶液(1mM)。测定加入不同浓度ATP后溶液的荧光发射光谱(Ex＝344nm)，在1.0μM至4.0μMATP浓度范围内混合液的荧光强度呈现良好的线性关系(如图1b所示)。当改变荧光探针1浓度为20.0μM时，体系可在2.0μM至20.0μMATP浓度范围内与荧光探针1的荧光强度呈现良好的线性关系(如图1c所示)。同样的，将荧光探针1浓度继续增大为40.0μM时，体系可在20.0μM至40.0μMATP浓度范围内与荧光探针1的荧光强度呈现良好的线性关系(如图1d所示)。由此可实现对ATP浓度的检测范围的调控，从而实现在较大的浓度范围内定量ATP。
(2)荧光探针1对ATP的选择性测试：取20μL荧光探针1的DMSO溶液(1mM)于2mLHEPES缓冲溶液中，然后加入20μL或100μL的ATP、ADP、AMP或PPi水溶液(1mM)，然后测定溶液的荧光发射光谱(Ex＝344nm)。结果表明，除ATP外的其他磷酸化合物与荧光探针1反应前后的荧光强度均没有明显增强(如图2所示)，说明该荧光探针1可以选择性识别ATP。
实施例3
溶液中一种ATP水解酶Apyrase反应过程的监测：向含有20μM荧光探针1和20μMATP的HEPES缓冲溶液中分别加入不同浓度的ATP水解酶Apyrase(0,5,10,15,25,50mU)，监测体系在500nm处荧光强度随反应时间的变化情况，结果表明，当不存在Apyrase时，荧光探针1的荧光强度在50min的时间内变化较小(<15％)，当存在Apyrase时，体系在500nm处荧光强度随反应时间延长逐渐下降，并且下降的速率随着酶浓度的增大逐渐加快。当在体系中加入酶的抑制剂Na3VO4后，重复上述实验发现，由于酶的活性被Na3VO4抑制，体系的荧光强度随反应时间的下降速率明显变慢(如图3b所示)。说明荧光探针1可用于在溶液中监测ATP水解酶Apyrase的反应过程。
实施例4
HeLa细胞激光共聚焦荧光显微成像：HeLa细胞经过复苏接种于含10％胎牛血清的RPMI1640培养基中，然后在37℃、5％CO2、100％饱和湿度的培养箱中培养。然后在18mm盖玻片上培养24h，待用。
将HeLa细胞浸入含10μM荧光探针1的培养基中，在37℃、5％CO2、100％饱和湿度的培养箱中培养12h后，倒出培养基，用新鲜培养基清洗细胞3遍。在405nm激发下用共聚焦荧光显微镜观察细胞的荧光成像情况，采集450-550nm的荧光信号进行荧光成像。结果表明，HeLa细胞内呈现绿色荧光(如图4b所示)。同样条件下，先将HeLa细胞与5U/mL的Apyrase于37℃、5％CO2、100％饱和湿度的培养箱中孵育6h，用新鲜培养基清洗细胞3遍，然后再用200μL 10μM的荧光探针1的培养基稀释液于37℃、5％CO2、100％饱和湿度的培养箱中孵育12h，用新鲜培养基清洗细胞3遍洗去多余染料分子。在405nm激发下用共聚焦荧光显微镜观察细胞的荧光成像情况，采集450-550nm的荧光信号进行荧光成像。结果表明，HeLa细胞内的绿色荧光较无Apyrase处理的细胞更弱(如图4e所示)，说明荧光探针1可对HeLa细胞内的ATP荧光成像。

Claims (7)

1.一种选择性检测ATP的荧光探针1，其特征在于：所述选择性检测ATP的荧光探针1具有如下结构：
2.根据权利要求1所述的选择性检测ATP的荧光探针1，其特征在于：含有四苯乙烯结构作为荧光信号基团。
3.根据权利要求1所述选择性检测ATP的荧光探针1的合成方法，其特征在于：包括以下步骤：
第一步：4,4-二溴二苯甲酮在四氯化钛和锌粉的作用下发生McMurry反应，生成具有聚集诱导荧光增强(AIE)特性的化合物2；
第二步：化合物2与4-吡啶硼酸在[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(Pd(dppf)Cl2)的催化下发生Suzuki偶联反应，生成化合物3；
第三步：溴苄与化合物3在甲苯中回流得到荧光探针1，利用柱层析法进行分离后，荧光探针1的结构经1H NMR、13C NMR和高分辨质谱鉴定。
4.根据权利要求3所述的选择性检测ATP的荧光探针1的合成方法，其特征在于：包括以下步骤：
第一步：4,4-二溴二苯甲酮和锌粉加入到四氢呋喃中，搅拌下冷却到-20℃半小时，然后缓慢滴加四氯化钛，在-20℃继续搅拌半小时后，缓慢升至室温，然后加热回流过夜，冷却，过滤，浓缩后用柱层析分离纯化，得到具有聚集诱导荧光增强特性的化合物2；
第二步：将化合物2、4-吡啶硼酸、Pd(dppf)Cl2、CH2Cl2、Bu4NI和碳酸钾水溶液加入甲苯中，将混合液在氮气保护条件下回流16h，冷却，加入二氯甲烷和饱和食盐水分液、萃取，干燥、浓缩、柱层析分离后得到化合物3；
第三步：将化合物3和溴苄溶于甲苯中，80℃下反应过夜，反应液冷却后进行重结晶得到荧光探针1，荧光探针1的结构经1H NMR、13C NMR和高分辨质谱鉴定。
5.根据权利要求1所述荧光探针1在ATP荧光检测中的应用，其特征在于：可通过调节荧光探针1的浓度来调节ATP检测的浓度范围。
6.根据权利要求1所述荧光探针1在ATP荧光检测中的应用，其特征在于：可用于水溶液中检测一种ATP水解酶Apyrase的反应过程。
7.根据权利要求1所述荧光探针1在ATP荧光检测中的应用，其特征在于：可用于细胞内ATP的成像研究。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107311957A (zh) * 2017-06-21 2017-11-03 海南大学 一种基于聚集诱导发光和激发态分子内质子转移化合物及其制备方法和应用
CN110208225A (zh) * 2019-03-25 2019-09-06 东莞理工学院 一种荧光阵列传感器及其制备方法和在同时检测多种磷酸根离子中应用
CN111004624A (zh) * 2019-12-24 2020-04-14 南开大学 一种具有ptt效应及聚集诱导发光增强效应的近红外荧光探针的制备
CN112121182A (zh) * 2020-10-10 2020-12-25 中国药科大学 一种检测缺氧细胞用纳米探针及其制备方法与应用
CN112964682A (zh) * 2021-02-05 2021-06-15 中国科学院高能物理研究所 一种可视化定量标记细胞中聚集型功能蛋白的方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002068649A2 (en) * 2001-01-31 2002-09-06 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
JP2003034697A (ja) * 2001-07-19 2003-02-07 Fuji Photo Film Co Ltd 蛍光ヌクレオチド及びそれを用いた標識法
US20140348753A1 (en) * 2013-05-24 2014-11-27 National University Of Singapore Heterocycle-functionalized luminogens exhibiting aggregation-induced emission
CN104931467A (zh) * 2015-02-28 2015-09-23 青岛科技大学 一种细胞内atp的荧光成像方法
CN105154066A (zh) * 2015-08-28 2015-12-16 南京大学 一种高灵敏荧光探针及其制备方法和应用
US9315465B2 (en) * 2013-01-29 2016-04-19 The Hong Kong University Of Science And Technology Photostable AIE luminogens for specific mitochondrial imaging and its method of manufacturing thereof
CN105541754A (zh) * 2016-01-29 2016-05-04 西北农林科技大学 三磷酸腺苷近红外荧光探针的制备方法
CN105623645A (zh) * 2014-10-29 2016-06-01 香港科技大学深圳研究院 一种基于聚集诱导发光原理的荧光探针及其制备方法、应用和检测内毒素方法
CN105949473A (zh) * 2016-05-16 2016-09-21 南昌大学 稀土配位聚合物荧光探针的制备方法及其h2o2和葡萄糖检测应用
CN106243170A (zh) * 2016-07-08 2016-12-21 赣南师范学院 具有聚集诱导荧光增强特性的β‑半乳糖苷酶传感器的合成及应用

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002068649A2 (en) * 2001-01-31 2002-09-06 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
JP2003034697A (ja) * 2001-07-19 2003-02-07 Fuji Photo Film Co Ltd 蛍光ヌクレオチド及びそれを用いた標識法
US9315465B2 (en) * 2013-01-29 2016-04-19 The Hong Kong University Of Science And Technology Photostable AIE luminogens for specific mitochondrial imaging and its method of manufacturing thereof
US20140348753A1 (en) * 2013-05-24 2014-11-27 National University Of Singapore Heterocycle-functionalized luminogens exhibiting aggregation-induced emission
CN105623645A (zh) * 2014-10-29 2016-06-01 香港科技大学深圳研究院 一种基于聚集诱导发光原理的荧光探针及其制备方法、应用和检测内毒素方法
CN104931467A (zh) * 2015-02-28 2015-09-23 青岛科技大学 一种细胞内atp的荧光成像方法
CN105154066A (zh) * 2015-08-28 2015-12-16 南京大学 一种高灵敏荧光探针及其制备方法和应用
CN105541754A (zh) * 2016-01-29 2016-05-04 西北农林科技大学 三磷酸腺苷近红外荧光探针的制备方法
CN105949473A (zh) * 2016-05-16 2016-09-21 南昌大学 稀土配位聚合物荧光探针的制备方法及其h2o2和葡萄糖检测应用
CN106243170A (zh) * 2016-07-08 2016-12-21 赣南师范学院 具有聚集诱导荧光增强特性的β‑半乳糖苷酶传感器的合成及应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANUSHRI RANANAWARE.ETAL: "Synthesis of a Tetraphenylethene-Substitute Tetrapyridinium Salt with Multifunctionality:Mechanochromism, Cancer Cell Imaging,and DNA Marking", 《AUSTRALIAN JOURNAL OF CHEMISTRY》 *
XIAOYAN LI.ETAL: "Water-Soluble Triarylboron Compound forATP Imaging In Vivo UsingAnalyte-Induced Finite Aggregation", 《ANGEWANDTE COMMUNICATIONS》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107311957A (zh) * 2017-06-21 2017-11-03 海南大学 一种基于聚集诱导发光和激发态分子内质子转移化合物及其制备方法和应用
CN110208225A (zh) * 2019-03-25 2019-09-06 东莞理工学院 一种荧光阵列传感器及其制备方法和在同时检测多种磷酸根离子中应用
CN111004624A (zh) * 2019-12-24 2020-04-14 南开大学 一种具有ptt效应及聚集诱导发光增强效应的近红外荧光探针的制备
CN111004624B (zh) * 2019-12-24 2022-08-26 南开大学 一种具有ptt效应及聚集诱导发光增强效应的近红外荧光探针的制备
CN112121182A (zh) * 2020-10-10 2020-12-25 中国药科大学 一种检测缺氧细胞用纳米探针及其制备方法与应用
CN112121182B (zh) * 2020-10-10 2023-05-30 中国药科大学 一种检测缺氧细胞用纳米探针及其制备方法与应用
CN112964682A (zh) * 2021-02-05 2021-06-15 中国科学院高能物理研究所 一种可视化定量标记细胞中聚集型功能蛋白的方法

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