CN106770885B - 一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法 - Google Patents

一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法，结合芩黄清肺散组方的特征和甘草的性质，采用盐酸加热回流后先用乙醚得到低极性的物质，除去色素，再让氨水与甘草次酸和其它成分结合，后加盐酸得到甘草次酸，然后再用乙醚萃取得到更纯的甘草次酸和甘草它他成分，将其溶解在甲醇溶液中作为芩黄清肺散中甘草成分薄层色谱鉴别的供试品溶液；该分离方法简单易操作，且分离效果极佳，采用所述供试品溶液与对照药材溶液和阴性对照液进行薄层色谱鉴别，能够得到准确的鉴别结果。

Description

一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法
技术领域
本发明涉及薄层色谱领域，尤其涉及的是一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法。
背景技术
薄层色谱又称薄层层析(thin—layer chromatography），是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。这是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法，从50年代发展起来至今，仍被广泛采用。
芩黄清肺散是一种由黄芩、大黄、枇杷叶和甘草四位中药组成的纯中药制剂，具有清肺热、止咳喘的功效。在药物申报的过程中，通常需要采用薄层色谱法对药品中的各种成分进行定性检测，然而在对芩黄清肺散中的甘草成分进行薄层色谱鉴别的过程中，往往因为甘草成分在芩黄清肺散中的含量较低导致薄层色谱鉴别失败，从而得出错误的结论，影响药物申报结果。
因此，现有技术还有待于改进和发展。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法，旨在解决现有方法对芩黄清肺散中的甘草成分进行薄层色谱鉴别的效果较差，无法得出准确的结论，影响药物申报结果的问题。
本发明的技术方案如下：
一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法，其中，包括步骤：
A、取芩黄清肺散样品5~10g加入质量百分比为60~80%的乙醇中，超声处理25~35min后进行第一次过滤，得到一次滤液；
B、在一次滤液中添加2~5ml盐酸，加热回流预定时间后进行第二次过滤，得到二次滤液；
C、将二次滤液蒸干得到的残渣加水溶解，然后用乙醚萃取，得到一次乙醚萃取液；
D、在一次乙醚萃取液中添加6~12ml氨水，萃取得到二次乙醚萃取液；
E、在二次乙醚萃取液中添加8~12ml盐酸后，再次用乙醚萃取，得到三次乙醚萃取液；
F、将三次乙醚萃取液蒸干得到的残渣加入到甲醇溶液中，得到供试品溶液；
G、分别吸取所述供试品溶液、对照药材溶液以及阴性对照液各1~2μL滴加到同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸作为展开剂，展开完成后取出、晾干，喷洒显色剂，加热至预定温度使斑点显色清晰，最后放置在日光或紫外灯光下检视。
较佳地，所述的对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法，其中，所述步骤B中，加热回流的时间为40~80min。
较佳地，所述的对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法，其中，所述步骤C中，将二次滤液蒸干得到的残渣加水进行多次溶解，每次溶解后添加相同体积用量的乙醚进行萃取，将每次萃取的乙醚溶液合并，得到一次乙醚萃取液。
较佳地，所述的对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法，其中，所述步骤C之后还包括：
C1、将一次乙醚萃取液用水洗涤3~5次，每次用水量为20ml，洗涤完成后弃去水液。
较佳地，所述的对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法，其中，所述步骤G中的显色剂为质量百分比为8~12%硫酸乙醇溶液。
较佳地，所述的对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法，其中，所述步骤G中的预定温度为90~110℃。
有益效果：本发明结合芩黄清肺散组方的特征和甘草的性质，采用盐酸加热回流后先用乙醚得到低极性的物质，除去色素，再让氨水与甘草次酸和其它成分结合，后加盐酸得到甘草次酸，然后再用乙醚萃取得到更纯的甘草次酸和甘草它他成分，将其溶解在甲醇溶液中作为芩黄清肺散中甘草成分薄层色谱鉴别的供试品溶液；该分离方法简单易操作，且分离效果极佳，采用所述供试品溶液与对照药材溶液和阴性对照液进行薄层色谱鉴别，能够得到准确的鉴别结果。
附图说明
图1为本发明一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法较佳实施例的流程图。
图2为本发明对芩黄清肺散样品中的甘草成分进行薄层色谱鉴别的第一结果示意图。
图3为本发明对芩黄清肺散样品中的甘草成分进行薄层色谱鉴别的第二结果示意图。
图4为本发明对芩黄清肺散样品中的甘草成分进行薄层色谱鉴别的第三结果示意图。
图5为本发明对芩黄清肺散样品中的甘草成分进行薄层色谱鉴别的第四结果示意图。
图6为本发明对芩黄清肺散样品中的甘草成分进行薄层色谱鉴别的第五结果示意图。
具体实施方式
本发明提供一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照附图并举实例对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
具体地，本发明所提供的一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法中所用到的仪器如下所示：
HN1012超声波仪（ 中国广州华南超声设备厂 ）、点样毛细管（华西医科大学仪器厂生产），电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司，型号：BSA2245-CW)，100 mm × 200mm双槽玻璃层析缸（上海信谊仪器厂有限公司，型号：P-1）；薄层层析硅胶G和硅胶H板（青岛海洋化工有限公司，型号：201509012）；
进一步，本发明所提供的芩黄清肺散中甘草成分薄层色谱中所用到的药品和试剂如下所示：
甘草对照药材（批号：120904-201519）；均购自中国食品药品检定研究院。芩黄清肺散（由本实验室自制）；缺甘草的阴性对照样品（有本实验室自制）；三氯甲烷、乙醇、甲醇、正丁醇、甲酸、甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸、硫酸、盐酸、氨水和乙醚均为分析纯。
请参阅图1，图1为本发明一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法较佳实施例的流程图，如图所示，其包括步骤：
S100、取芩黄清肺散样品5~10g加入质量百分比为60~80%的乙醇中，超声处理25~35min后进行第一次过滤，得到一次滤液；
具体地说，本发明提供的薄层色谱鉴别方法主要是鉴别芩黄清肺散样品中甘草的甘草酸和甘草次酸成分，其中甘草的主要活性成分为甘草酸，也叫甘草甜素或甘草皂苷等，所述甘草酸的极性较大，非常容易溶于烯醇中；因此本发明采用质量百分比为60~80%的乙醇来溶解所述甘草中的甘草酸成分；优选地，本发明采用质量百分比为70%的乙醇来溶解甘草中的甘草酸成分，其提取效果达到最佳。
进一步，将样品溶解在乙醇中后，采用超声处理是为了进一步的提高溶解效果，为了达到充分溶解的效果，本发明优选超声处理30min，超声完成后进行过滤，得到充分溶解有甘草酸的一次滤液。
S200、在一次滤液中添加2~5ml盐酸，加热回流预定时间后进行第二次过滤，得到二次滤液；
具体来说，通过在一次滤液中添加2~5ml的质量百分比为37%的盐酸，使得一次滤液中的甘草酸水解成甘草次酸，进一步，采用加热回流40~80min的方式可使甘草酸充分水解成甘草次酸；优选地，通过添加3ml的盐酸，加热回流60min，可使得一次滤液中的甘草次酸充分、且快速地水解成甘草次酸，经过过滤后，得到二次过滤液。
S300、将二次滤液蒸干得到的残渣加水溶解，然后用乙醚萃取，得到一次乙醚萃取液；
具体来说，由于甘草次酸属于低极性化合物，因此，本发明采用乙醚来萃取二次滤液中的甘草次酸；具体地，可将二次滤液蒸干得到的残渣加水进行多次溶解，每次溶解后添加相同体积用量的乙醚进行萃取，将每次萃取的乙醚溶液合并，得到一次乙醚提取液。通过多次溶解、萃取过程可有效除去二次滤液中的极性较强的化合物，得到浓度较高的溶解有甘草次酸的一次乙醚萃取液；
进一步，为了去除溶解在一次乙醚萃取液中的某些杂质，可将一次乙醚提取液用水洗涤3~5次，每次用水量为20ml，洗涤完成后弃去水液。
S400、在一次乙醚萃取液中添加6~12ml氨水，萃取得到二次乙醚萃取液；
具体地，通过在一次乙醚萃取液中添加质量百分比为25%的氨水，可使得进一步除去一次乙醚中的杂质；氨水可以与一次乙醚提取液中的甘草次酸发生反应，通过萃取得到杂质更少的二次乙醚萃取液。优选地，通过添加10ml的氨水，即可萃取得到含杂质更少的二次乙醚萃取液。
S500、在二次乙醚萃取液中添加8~12ml盐酸后，再次用乙醚萃取，得到三次乙醚萃取液；
具体地，通过在二次乙醚萃取液中添加质量百分比为37%盐酸，是为了再次从二次乙醚萃取液中获取甘草次酸；优选地，通过添加10ml的盐酸，再用乙醚萃取，可得到含杂质更少的三次乙醚萃取液。
本发明通过先加碱液再加酸液，然后重复采用乙醚萃取、水洗的方式，可有效分离得到芩黄清肺散中甘草的甘草次酸成分，并有效去除了除甘草次酸以外的各种杂质。
S600、将三次乙醚萃取液蒸干得到的残渣加入到甲醇溶液中，得到供试品溶液；
具体地，所述三次乙醚萃取液蒸干后得到的残渣主要为甘草次酸和极少量的杂质，将所述残渣溶解到甲醇溶液后，即可得到以甘草次酸为主的供试品溶液。
S700、分别吸取所述供试品溶液、对照药材溶液以及阴性对照液各1~2μL滴加到同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸作为展开剂，展开完成后取出、晾干，喷洒显色剂，加热至预定温度使斑点显色清晰，最后放置在日光或紫外灯光下检视。
具体来说，采用上述相同的方法制备甘草阴性对照溶液；同时取甘草对照药材粉末1g，加70%乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加浓盐酸2ml，摇匀，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
在甘草的薄层色谱鉴别试验中，本发明先采用了正丁醇-冰醋酸-水（6:1:2）为展开剂，以GF254板进行实验，其结果如图2所示，（图2中，1为对照品；2为对照药材；3为阴性对照；4-6为供试品；）效果不好；当采用乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15:1:1:2）作为展开剂后，并在日光下观察结果，阴性对照无干扰，供试品与对照药材相应的位置上出现相应的斑点，而在紫外灯365nm下检视时，结果如图3所示，（图3中，1为对照品；2-4为供试品；5为阴性对照）阴性对照有干扰，因此这种方法也不可以；进一步，本发明用GF254板，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15:1:1:2）为展开剂，跑出来的结果与三氯甲烷-水-甲醇（13:6:2）、正丁醇-水-冰醋酸（8:2:1）跑出来的试验类似，如图4-图5所示，（图4中，1为对照品；2为对照药材；3为阴性对照；4-6为供试品；图5中，1为对照药材，2-3为供试品，4为阴性对照）阴性和供试品跑出的斑点一致，对照药材的点与供试品不在相应的位置。
最后，本发明通过吸取上述对照药材溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（4：1：0.5）上层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8~12%硫酸乙醇溶液，在加热至90~110℃时，斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯（365nm）下检视；
优选地，本发明采用10%的硫酸乙醇溶液作为显色剂、加热温度为105℃时，得到的甘草成分的薄层色谱鉴别结果如图6所示，（图6中，1为对照药材；2-4为供试品；5为阴性对照）供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰。
综上所述，本发明结合芩黄清肺散组方的特征和甘草的性质，采用盐酸加热回流后先用乙醚得到低极性的物质，除去色素，再让氨水与甘草次酸和其它成分结合，后加盐酸得到甘草次酸，然后再用乙醚萃取得到更纯的甘草次酸和甘草它他成分，将其溶解在甲醇溶液中作为芩黄清肺散中甘草成分薄层色谱鉴别的供试品溶液；该分离方法简单易操作，且分离效果极佳，采用所述供试品溶液与对照药材溶液和阴性对照液进行薄层色谱鉴别，能够得到准确的鉴别结果。
应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，特别是对于方剂中甘草含量少的情况可以试着用类似方法除杂，得到较纯的物质，从而鉴定出方剂中的甘草成分，例如，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (1)

1.一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法，其特征在于，包括步骤：
A、取芩黄清肺散样品5~10g加入质量百分比为60~80%的乙醇中，超声处理25~35min后进行第一次过滤，得到一次滤液；
B、在一次滤液中添加2~5ml盐酸，加热回流40-80min后进行第二次过滤，得到二次滤液；
C、将二次滤液蒸干得到的残渣加水进行多次溶解，然后每次溶解后添加相同体积用量的乙醚进行萃取，将每次萃取的乙醚溶液合并，得到一次乙醚萃取液；将一次乙醚萃取液用水洗涤3~5次，每次用水量为20ml，洗涤完成后弃去水液；
D、在一次乙醚萃取液中添加6~12ml质量百分比为25%的氨水，萃取得到二次乙醚萃取液；
E、在二次乙醚萃取液中添加8~12ml质量百分比为37%的盐酸后，再次用乙醚萃取，得到三次乙醚萃取液；
F、将三次乙醚萃取液蒸干得到的残渣加入到甲醇溶液中，得到供试品溶液；
采用与上述相同的方法制备甘草阴性对照溶液，同时取甘草对照药材粉末1g，将70%乙醇20mL，超声处理30min，滤过，滤液加浓盐酸2mL，摇匀，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
G、分别吸取所述供试品溶液、对照药材溶液以及阴性对照液各1~2μL滴加到同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸作为展开剂，比例为4:1:0.5，展开完成后取出、晾干，喷洒8~12%的硫酸乙醇溶液显色剂，加热至90~110℃使斑点显色清晰，最后放置在日光或紫外灯光下检视。
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