CN106729613A - 一种高效浓缩杆菌肽锌发酵液的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于肽类药物制造领域，涉及生物发酵技术制造杆菌肽锌过程中的浓缩工序，具体涉及将干基物质6.5%～7.5%的杆菌肽锌发酵液通过新的浓缩方法提高到30%～33%，获得杆菌肽锌浓缩液的方法。本方法包括以下步骤：第一步，进料;第二步，加热；第三步，蒸发；第四步，缓冲分离；第五步，冷凝回收；第六步，出料与清洗。本发明在蒸发室和冷凝器之间增加的缓冲室，有效的避免了物料的逃逸，并实现了二级分离，大大提高了物料的收率；在低温下、短时间内，一次性完成批发酵液的浓缩，能够有效避免杆菌肽锌生物活性的降低；实现了连续进料和连续出料，同时能够实现在线清洗，确保物料的品质安全，符合《药品生产质量管理规范》的要求。
Description
技术领域
本发明涉及肽类药物制造领域，具体涉及生物发酵技术制造杆菌肽锌过程中的浓缩工序，该浓缩工序是以杆菌肽锌发酵液为原料，经真空单效浓缩的方法浓缩，获得固形物浓度在30～33%的浓缩液，以适用后续工序的使用。
技术背景
杆菌肽锌是由杆菌肽与锌络合所得，而杆菌肽是地衣芽孢杆菌生物发酵后的次级代谢产物，对革兰氏阳性菌和部分阴性菌有强烈的抑制作用。杆菌肽锌预混剂作为一种重要的兽用药物使用。
现有杆菌肽锌的工业制备方法属于全发酵的方法制备，具体是通过地衣芽孢杆菌在液态发酵的条件下代谢杆菌肽，然后在含有杆菌肽的发酵液中添加氧化锌或硫酸锌混合，使其中的杆菌肽与锌络合，经真空浓缩，使干基物质由6.5%～7.5%提高到30%～33%，再由喷雾干燥得杆菌肽锌原粉，最后在原粉中添加载体材料，混合后得到杆菌肽锌预混剂。
中国发明专利CN102161693A只是在技术背景中提到“真空蒸发浓缩”，没有就该问题给予具体说明和相应的权利要求，中国发明专利CN104621360A采用隔膜板框压滤机的过滤的方式达到浓缩发酵液的目的；中国发明专利CN105169728A公开了一种单效浓缩器，为解决药液浓缩时的泡沫问题，在立式冷凝器和蒸发室之间增加了一个卧式冷凝器，同时增强了冷凝的效果，但无法解决快速浓缩时杆菌肽锌发酵液的冲料问题，中国发明专利CN105013199A公开了一种外循环单效浓缩器，并将其应用于骨肽的制备，在立式冷凝器和蒸发室之间增加了一个分离器，从而使浓缩液中的乙醇含量低于10 mg/ml，虽然其所采用的分离器的方式与本发明所采用的缓冲器的方式类似，但是在浓缩过程中不能够连续操作，批处理量仅为50～400L，无法达到高效浓缩杆菌肽锌发酵液的目的。
发明内容
本发明的目的是针对杆菌肽锌预混剂制备过程中的真空浓缩环节，公开一种高效浓缩杆菌肽锌发酵液的方法，使每批50 m3～55 m3发酵液在较低的温度下、较短的受热时间内、并实现连续操作，减少杆菌肽锌活性的降低，使活性的损失率在2%～3%。
本发明的技术方案：发酵液在真空带动下由进料口连续进入加热室，加热后通过蒸汽喷汽口喷射进入蒸发室，雾化的物料由于重力等作用实现汽、液分离，液体作为重相落入蒸发室底部，再通过物料循环口回到加热室；水蒸汽在进入冷凝器前，先进入缓冲室，在缓冲室内不但能对水蒸汽再次进行分离，更重要的是确保冲料、泡沫等情况下，起到缓冲作用，避免物料的逃逸，在缓冲室内同样由于重力的作用实现水蒸汽中的汽、液分离，液体作为重相通过回流口回流至蒸发室，由于压力差的存在，水蒸气进入冷凝器；水蒸汽通过冷凝器被冷凝成水，水再经冷却器降温，进入液体接受器；重相经加热器底部出料口进入浓缩液储罐，备用下一工序。其详细步骤如下：
第一步，进料：由进料口将干基物质浓度为6.5%～7.5%的杆菌肽锌发酵液通过真空带动连续进入浓缩器的加热室；
第二步，加热：进入加热室的发酵液，通过加热室内的换热装置加热至45℃～55℃，或在蒸发过程中维持45℃～55℃；
第三步，蒸发：在真空度为-0.06～-0.1MPa的真空状态下，加热后的发酵液通过蒸汽喷汽口喷射进入蒸发室，发酵液成雾化状，雾化的物料由于重力等作用实现汽、液分离，液体作为重相落入蒸发室底部，再通过物料循环口回到加热室，完成循环；水蒸气通过缓冲室进入冷凝器；
第四步，缓冲分离：水蒸汽在进入冷凝器前，先进入缓冲室，由于操作过程中冲料、泡沫等情况的存在，水蒸气携带的部分液体物料，在缓冲室内进行汽、液分离，在重力作用下，液体物料回流至蒸发室，由于压力差的作用，水蒸气进入冷凝器；
第五步，冷凝回收：水蒸气进入冷凝器，被冷凝成温度为65℃～85℃水， 冷凝后的水进入冷却器，进一步被降温为15℃～35℃的水，进入液体接受器；
第六步，出料与清洗：浓缩过程中，浓缩液即连续的由出料口排出并收集于浓缩液储罐，冷却后的水经液体接受器下方的冷凝液出口连续排出并收集；批生产结束后，通过加热室喷淋头对加热室完成在线清洗，通过蒸发室喷淋头对蒸发室完成在线清洗，通过缓冲室喷淋头对缓冲室完成在线清洗。
待浓缩的杆菌肽锌发酵液的干基物质浓度为6.5%～7.5%，浓缩后获得的杆菌肽锌浓缩液干基物质浓度为30%～33%，满足喷雾干燥的要求。
杆菌肽锌发酵液在浓缩的过程中实现连续操作，包括发酵液通过进料口进入加热室的进料过程是连续的，浓缩液由出料口的出料过程是连续的，冷却后的水经液体接受器下方的冷凝液出口的排出是连续的。
本发明的有益效果：
本发明在蒸发室和冷凝器之间增加的缓冲室，有效的避免了物料的逃逸，并实现了二级分离，使物料的收率由原来的88%提高至95%；
本发明在低温下、短时间内，一次性完成批发酵液的浓缩，能够有效避免杆菌肽锌生物活性的降低，使活性的损失率由原来的6%～8%降低到2%～3%；由于杆菌肽是一种生物来源的活性肽类物质，在制备的各环节中由于温度、受热时间、操作强度等因素都会造成其活性的降低，因此，本发明针对杆菌肽锌预混剂制备过程中的真空浓缩环节，公开一种高效浓缩杆菌肽锌发酵液的方法，使杆菌肽锌发酵液在较低的温度下、较短的受热时间内、连续操作完成50 m3～55 m3发酵液的浓缩，使该环节杆菌肽锌活性降低保持在2%～3%。本发明实现了连续进料和连续出料，同时能够实现在线清洗，确保物料的品质安全，符合《药品生产质量管理规范》的要求；本发明中所采用的整套设备在蒸发室和冷凝器之间增加缓冲室，能够有效的避免了物料的逃逸，并实现了二级分离，大大提高了物料的收率。
附图说明：
图1所示为本发明所采用的设备结构示意图。
图中，1.加热室，2.蒸发室，3.缓冲室，4.冷凝器，5.液体接收器，6.进料口，7.最终物料出口，8.物料回收出口，9. 回收管道，10.真空管道，11.缓冲腔，12.储液腔，13.U型管，14.进气口，15.出气口，16.出液口。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步说明本发明的技术方案，但是不以具体实施例为限。
实施例1：
第一步，进料：由进料口将干基物质浓度为6.5%的杆菌肽锌发酵液通过真空带动连续进入浓缩器的加热室；
第二步，加热：进入加热室的发酵液，通过加热室内的换热装置加热至45℃，或在蒸发过程中维持45℃；
第三步，蒸发：在真空度为-0.06MPa的真空状态下，加热后的发酵液通过蒸汽喷汽口喷射进入蒸发室，发酵液成雾化状，雾化的物料由于重力等作用实现汽、液分离，液体作为重相落入蒸发室底部，再通过物料循环口回到加热室，完成循环；水蒸气通过缓冲室进入冷凝器；
第四步，缓冲分离：水蒸汽在进入冷凝器前，先进入缓冲室，由于操作过程中冲料、泡沫等情况的存在，水蒸气携带的部分液体物料，在缓冲室内进行汽、液分离，在重力作用下，液体物料回流至蒸发室，由于压力差的作用，水蒸气进入冷凝器；
第五步，冷凝回收：水蒸气进入冷凝器，被冷凝成温度为65℃水， 冷凝后的水进入冷却器，进一步被降温为15℃的水，进入液体接受器；
第六步，出料与清洗：浓缩过程中，浓缩液即连续的由出料口排出并收集于浓缩液储罐，冷却后的水经液体接受器下方的冷凝液出口连续排出并收集；批生产结束后，通过加热室喷淋头对加热室完成在线清洗，通过蒸发室喷淋头对蒸发室完成在线清洗，通过缓冲室喷淋头对缓冲室完成在线清洗。
实施例2：
第一步，进料：由进料口将干基物质浓度为7%的杆菌肽锌发酵液通过真空带动连续进入浓缩器的加热室；
第二步，加热：进入加热室的发酵液，通过加热室内的换热装置加热至50℃，或在蒸发过程中维持50℃；
第三步，蒸发：在真空度为-0.08MPa的真空状态下，加热后的发酵液通过蒸汽喷汽口喷射进入蒸发室，发酵液成雾化状，雾化的物料由于重力等作用实现汽、液分离，液体作为重相落入蒸发室底部，再通过物料循环口回到加热室，完成循环；水蒸气通过缓冲室进入冷凝器；
第四步，缓冲分离：水蒸汽在进入冷凝器前，先进入缓冲室，由于操作过程中冲料、泡沫等情况的存在，水蒸气携带的部分液体物料，在缓冲室内进行汽、液分离，在重力作用下，液体物料回流至蒸发室，由于压力差的作用，水蒸气进入冷凝器；
第五步，冷凝回收：水蒸气进入冷凝器，被冷凝成温度为75℃水， 冷凝后的水进入冷却器，进一步被降温为25℃的水，进入液体接受器；
第六步，出料与清洗：浓缩过程中，浓缩液即连续的由出料口排出并收集于浓缩液储罐，冷却后的水经液体接受器下方的冷凝液出口连续排出并收集；批生产结束后，通过加热室喷淋头对加热室完成在线清洗，通过蒸发室喷淋头对蒸发室完成在线清洗，通过缓冲室喷淋头对缓冲室完成在线清洗。
实施例3：
第一步，进料：由进料口将干基物质浓度为7.5%的杆菌肽锌发酵液通过真空带动连续进入浓缩器的加热室；
第二步，加热：进入加热室的发酵液，通过加热室内的换热装置加热至55℃，或在蒸发过程中维持55℃；
第三步，蒸发：在真空度为-0.1MPa的真空状态下，加热后的发酵液通过蒸汽喷汽口喷射进入蒸发室，发酵液成雾化状，雾化的物料由于重力等作用实现汽、液分离，液体作为重相落入蒸发室底部，再通过物料循环口回到加热室，完成循环；水蒸气通过缓冲室进入冷凝器；
第四步，缓冲分离：水蒸汽在进入冷凝器前，先进入缓冲室，由于操作过程中冲料、泡沫等情况的存在，水蒸气携带的部分液体物料，在缓冲室内进行汽、液分离，在重力作用下，液体物料回流至蒸发室，由于压力差的作用，水蒸气进入冷凝器；
第五步，冷凝回收：水蒸气进入冷凝器，被冷凝成温度为85℃水， 冷凝后的水进入冷却器，进一步被降温为35℃的水，进入液体接受器；
第六步，出料与清洗：浓缩过程中，浓缩液即连续的由出料口排出并收集于浓缩液储罐，冷却后的水经液体接受器下方的冷凝液出口连续排出并收集；批生产结束后，通过加热室喷淋头对加热室完成在线清洗，通过蒸发室喷淋头对蒸发室完成在线清洗，通过缓冲室喷淋头对缓冲室完成在线清洗。
Claims (9)
1.一种高效浓缩杆菌肽锌发酵液的方法，其特征在于：其包括如下步骤：依次为：进料、加热、蒸发、缓冲分离、冷凝回收、出料与清洗。
2.如权利要求1所述的高效浓缩杆菌肽锌发酵液的方法，其特征在于：所述的进料步骤为：由进料口将干基物质浓度为6.5%～7.5%的杆菌肽锌发酵液通过真空带动连续进入浓缩器的加热室。
3.如权利要求1所述的高效浓缩杆菌肽锌发酵液的方法，其特征在于：所述的加热步骤为：进入加热室的发酵液，通过加热室内的换热装置加热至45℃～55℃，或在蒸发过程中维持45℃～55℃。
4.如权利要求1所述的高效浓缩杆菌肽锌发酵液的方法，其特征在于：所述的蒸发步骤为：在真空度为-0.06～-0.1MPa的真空状态下，加热后的发酵液通过蒸汽喷汽口喷射进入蒸发室，发酵液成雾化状，雾化的物料由于重力等作用实现汽、液分离，液体作为重相落入蒸发室底部，再通过物料循环口回到加热室，完成循环；水蒸气通过缓冲室进入冷凝器。
5.如权利要求1所述的高效浓缩杆菌肽锌发酵液的方法，其特征在于：所述的缓冲分离步骤：水蒸汽在进入冷凝器前，先进入缓冲室，由于操作过程中冲料、泡沫等情况的存在，水蒸气携带的部分液体物料，在缓冲室内进行汽、液分离，在重力作用下，液体物料回流至蒸发室，由于压力差的作用，水蒸气进入冷凝器。
6.如权利要求1所述的高效浓缩杆菌肽锌发酵液的方法，其特征在于：所述的冷凝回收步骤：水蒸气进入冷凝器，被冷凝成温度为65℃～85℃水， 冷凝后的水进入冷却器，进一步被降温为15℃～35℃的水，进入液体接受器。
7.如权利要求1所述的高效浓缩杆菌肽锌发酵液的方法，其特征在于：所述的出料与清洗步骤：浓缩过程中，浓缩液即连续的由出料口排出并收集于浓缩液储罐，冷却后的水经液体接受器下方的冷凝液出口连续排出并收集；批生产结束后，通过加热室喷淋头对加热室完成在线清洗，通过蒸发室喷淋头对蒸发室完成在线清洗，通过缓冲室喷淋头对缓冲室完成在线清洗。
8.如权利要求1所述的一种高效浓缩杆菌肽锌发酵液的方法，其特征在于：所采用的浓缩设备包括依次连接的加热室、蒸发室、缓冲室、冷凝器、液体接收器，其中加热室上分别设置有进料口和最终物料出口，蒸发室下部设置有物料回收出口与加热室下部连通，蒸发室顶部与缓冲室的进气口连接，蒸发室上部的回收管道与缓冲室下部的出液口通过U型管连接，缓冲室的出气口和冷凝器上部连接，冷凝器的下部连接液体接受室,液体接受室下方有冷凝液出接口。
9.如权利要求8所述的一种高效浓缩杆菌肽锌发酵液的方法，其特征在于：所述设备在批生产结束后能够完成在线清洗，通过加热室喷淋头对加热室完成在线清洗，通过蒸发室喷淋头对蒸发室完成在线清洗，通过缓冲室喷淋头对缓冲室完成在线清洗。
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