CN106728077B - 具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物及其制备方法与应用 - Google Patents
具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物及其制备方法,它由大枣提取物1~50份,酸枣提取物1~20份,丹参提取物1~10份制成。本发明提供的天然植物组合物,通过大量试验筛选、优化制备得到,采用具有多重药食两用保健功效的天然传统药食两用植物,经现代制备工艺制取其具有保健功效的植物提取物制备而成,实验结果表明,本发明提供的组合物可显著缩短便秘动物模型首便时间及增加排便数量和重量,且增加小鼠肠道双歧杆菌及乳杆菌数量,表明本发明提供的组合物具有防治便秘及调节肠道菌群结构的保健功能,可用于肠道菌群结构失调及便秘人群长期服用。
Description
技术领域
本发明涉及一种天然组合物,特别是涉及一种具有调节肠道菌群结构、防治便秘作用的天然组合物及其制备方法与应用。
背景技术
肠道为承载消化、吸收和营养物质交换功能的重要场所,同时也是人体最大的免疫器官。人体肠道内存在数量庞大、结构复杂的肠道菌群,其与宿主构成一个具有共生关系的复杂生态系统。根据肠道菌群在宿主体内的生化反应及对宿主的作用效果,可分为有益菌和有害菌两大类。其中有害菌通过产生毒素、引起肠粘膜破坏、诱发感染等多种途径而呈现出致病作用。目前研究已证实其与糖尿病、高血压、高血脂、癌症等多种疾病的发生密切相关。而有益菌除了可通过自身的代谢活动供给或促进营养物质的吸收及有害物质的排泄,也能通过自身的代谢,如产生大量有机酸、分泌蛋白质等活动,阻止致病菌的侵袭。
正常情况下,肠道菌群、宿主和外部环境建立起一个动态的生态平衡,对人体的健康起着重要作用。但是,由于机体衰老、环境变化、饮食改变、滥用抗生素等原因,常易使肠道微生态系统受到破坏,从而引起菌群失调,其正常生理组合被破坏,产生病理性组合而引起便秘、泄泻等临床症状,称为肠道菌群失调症。
目前改变肠道菌群的方式主要集中在三个方向,主要包括粪菌移植、饮食调整、使用益生菌和益生元等。这些方法目前还存在多种缺陷,例如对于粪菌移植,受体的肠道菌群会排斥移植而来的供体粪便菌群,且患者依存性较差。
肠道菌群紊乱,中医认为其病机主要与脾胃虚弱,脾气不升,胃气不降,气机逆乱等有关,以脾为主脏,治疗时应注重健脾,且具有较好疗效。因此,基于中医理论,以药食同源之品为主要原料开发具有调节肠道菌群结构保健食品及药品具有较好的市场前景。
发明内容
发明目的:本发明的目的在于提供一种具有调节肠道菌群结构、防治便秘作用,且安全性高、无不良反应的组合物。本发明的另一目的是提供上述组合物的制备方法和应用。
技术方案:为了实现以上目的,本发明采取的技术方案为:
一种具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物,它由下列重量份数的原料制成:大枣提取物1~50份,酸枣提取物1~20份,丹参提取物1~10份。
作为优选方案,以上所述的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物,它由下列重量份数的原料制成:大枣提取物1~20份,酸枣提取物1~5份,丹参提取物1~5份。
作为更优选方案,以上所述的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物,它由下列重量份数的原料制成:大枣提取物10份,酸枣提取物2份,丹参提取物3份。
本发明所述的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)取干燥成熟大枣果实,加水清洗后,加8~16倍量水加热提取1~3次,合并提取液,浓缩后,喷雾干燥得到大枣提取物;
(2)取干燥成熟酸枣果实,加水清洗后,加8~16倍量水加热提取1~3次,合并提取液,浓缩后,喷雾干燥得到酸枣提取物;
(3)取丹参药材,加水清洗后,加8~16倍量水加热提取1~3次,合并提取液,浓缩,加乙醇至含醇量达80%,静置,取沉淀加水复溶后喷雾干燥得到丹参提取物。
(4)按权利要求1、2或3所述的重量份数分别取步骤(1)所得的大枣提取物,步骤(2)所得的酸枣提取物,步骤(3)所得的丹参提取物,置于混匀机中混合均匀,即得。
作为优选方案,以上所述的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物的制备方法,步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)的提取时间为1~3小时。
作为优选方案,以上所述的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物的制备方法,步骤(2)中所述的酸枣提取物,可以加工酸枣仁过程中产生的酸枣果肉为原料,加8倍量水加热提取1~3次,每次1~3小时,合并提取液,浓缩后,喷雾干燥得到酸枣提取物;
作为优选方案,以上所述的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物的制备方法,步骤(3)中所述的丹参提取物,可以制备丹酚酸类物质过程中产生的丹参水提醇沉沉淀为原料,加水复溶后喷雾干燥制得。
本发明根据大枣、酸枣、丹参中与调节肠道菌群结构、防治便秘相关的活性组分理化性质和其它杂质的理化性质,通过大量实验筛选提取工艺,其中大枣、酸枣均采用水提取、喷雾干燥等工艺,避免了有机溶剂的残留及活性组分的破坏,且酸枣提取物以加工酸枣仁药材过程中产生的副产物酸枣果肉为原料可进一步简化工艺、节约成本;丹参提取物以目前制药工业制备丹参酚酸类物质过程中经水提取、乙醇沉淀所得的沉淀物加水复溶、喷雾干燥制得,其有效组分水苏糖含量可大50%以上,既实现了有效组分的有效富集,又有效利用了目前以丹参为原料的制药工业中产生的副产物,节约资源、降低成本,同时也减少了环境危害。
经过大量实验研究表明,本发明提供的组合物可显著缩短便秘动物模型首便时间及增加排便数量和重量,且增加小鼠肠道双歧杆菌及乳杆菌数量,表明本发明提供的组合物具有防治便秘及调节肠道菌群结构的保健功能,可应用于制备具有防治便秘及与肠道菌群结构失调相关疾病的药物或保健食品。
本发明提供的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物在制备具有防治便秘及与肠道菌群结构失调相关疾病中的应用,将组合物食品载体或药学上可接受的载体制成口服液、颗粒剂、糖浆剂、煎膏剂等剂型的保健食品或药物。
本发明提供的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物制成口服液时,把组合物加水溶解后,加入食用防腐剂,充分溶解后,离心除去杂质,灌封,即得。
本发明提供的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物制成颗粒剂时,把组合物和蔗糖、糊精混合均匀,整粒,干燥,制成颗粒剂。
本发明提供的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物制成硬胶囊剂时,把植物油组合物和玉米淀粉或乳糖混合均匀,经整粒,然后装胶囊制成硬胶囊剂。
本发明提供的组合物制成其它剂型时,可按药学常规方法制备得到。
有益效果:本发明提供的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物,依据传统中药养生、保健理论和现代药理研究成果,通过大量实验筛选得到,以大枣、酸枣、丹参等药食两用中药为主要原料经现代工艺制备而成,并通过大量实验筛选大枣、酸枣、丹参的最佳提取物的重量组成,特别优选大枣提取物10份,酸枣提取物2份,丹参提取物3份组成的组合物,具有特别优的调节肠道菌群结构及防治便秘作用。
本发明提供的组合物,大枣在中医典籍记载其具有补益气血、补脾益胃之功,为重要的食疗用品,以其为原料制备的大枣提取物含有丰富的葡果低聚糖、核苷、氨基酸等营养保健物质,在达到调节肠道菌群结构的同时可达到增加机体营养、增强免疫的作用;酸枣提取物含有大量的小分子有机酸及核苷类物质,除具有促进食物消化、增加肠蠕动作用外,其味酸甜,同时可起到矫味作用;丹参为具有活血化瘀功效的药食两用中药,以其为主要原料,经水提取、乙醇沉淀所得的提取物,其水苏糖含量可达50%以上,为肠道益生菌生长的重要天然益生元,同时含有少量具有促进微循环作用的丹酚酸类物质,可起到改善肠道内皮微循环的作用,增强肠道吸收与分泌功能,从而起到调节肠道菌群结构及防治便秘。将以上具有多重保健功效的天然传统药食两用植物提取物进行组合,分别从增强免疫、增加益生元、调节肠道内皮微循环、促进肠蠕动等多个作用环节协同达到调节肠道菌群结构、防治便秘的作用。此外,本发明提供的组合物,其中酸枣提取物可以生产加工酸枣仁过程中产生的酸枣果肉副产物为原料,丹参提取物可以中药工业中提取丹酚酸类物质过程中产生的水提取、乙醇沉淀为原料进行加工制备而成,可有效降低生产成本,同时也可减少资源浪费与环境污染,达到资源资源循环利用的效果,符合国家绿色发展的理念。
本发明通过大量实验筛选各组分的配比,科学合理;并且整个制备工艺,自动化程度高,制备效率高,能很好地保留原料中的有效成分,且其口味酸甜,无需额外添加其他矫味剂,不带入任何杂质,无毒副作用,适合用于调节肠道菌群结构、防治便秘人群的长期食用。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐明本发明,应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围,在阅读了本发明之后,本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施例1 一种具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物的制备方法,包括如下步骤:
(1)取干燥成熟大枣果实,加水清洗后,加大枣重量8倍体积量水加热提取2次,每次2h,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.1,喷雾干燥得到大枣提取物;
(2)取干燥成熟酸枣果实,加水清洗后,加酸枣果实重量8倍体积量水加热提取2次,每次2h,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.1,喷雾干燥得到酸枣提取物;
(3)取丹参药材,加水清洗后,加丹参药材8倍体积量水加热提取3次,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.15,加乙醇至含醇量达80%,静置,取沉淀加3倍量水复溶后喷雾干燥得到丹参提取物。
(4)分别取步骤(1)所得的大枣提取物10份,步骤(2)所得的酸枣提取物2份,步骤(3)所得的丹参提取物3份,置于混匀机中混合均匀,即得。
实施例2 一种具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物的制备方法,包括如下步骤:
(1)取干燥成熟大枣果实,加水清洗后,加大枣重量8倍体积量水加热提取3次,每次2h,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.1,喷雾干燥得到大枣提取物;
(2)取加工酸枣仁过程中产生的酸枣果肉,加酸枣果肉重量8倍体积量水加热提取2次,每次2h,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.1,喷雾干燥得到酸枣提取物;
(3)取制备丹红注射液过程中产生的丹参水提醇沉沉淀为原料,加3倍量水复溶后喷雾干燥得到丹参提取物。
(4)分别取步骤(1)所得的大枣提取物10份,步骤(2)所得的酸枣提取物2份,步骤(3)所得的丹参提取物3份,置于混匀机中混合均匀,即得。
实施例3 一种具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物
分别取实施例1步骤(1)所得的大枣提取物15份,步骤(2)所得的酸枣提取物3份,步骤(3)所得的丹参提取物3份,置于混匀机中混合均匀,得天然组合物。
实施例4 一种具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物
(1)分别取实施例1步骤(1)所得的大枣提取物15份,步骤(2)所得的酸枣提取物4份,步骤(3)所得的丹参提取物2份,置于混匀机中混合均匀,得天然组合物。
(2)取步骤(1)中制得的组合物,加10倍量水溶解后,按0.3%的比例加入苯甲酸钠,离心,上清液灌装,每瓶10mL。
实施例5 一种具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物
(1)分别取实施例1步骤(1)所得的大枣提取物8份,步骤(2)所得的酸枣提取物2份,步骤(3)所得的丹参提取物4份,置于混匀机中混合均匀,得天然组合物。
(2)取步骤(1)中制得的组合物,与蔗糖、糊精混合均匀,经制粒、整粒,干燥,制成颗粒剂。
实施例6 一种具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物
(1)分别取实施例1步骤(1)所得的大枣提取物30份,步骤(2)所得的酸枣提取物10份,步骤(3)所得的丹参提取物8份,置于混匀机中混合均匀,得天然组合物。
(2)取步骤(1)中制得的组合物和玉米淀粉或乳糖混合均匀,经整粒,然后装胶囊制成硬胶囊剂。
实施例7 调节肠道菌群结构的实验研究
一、仪器与材料
1.受试药物
实施例1、实施例2、实施例3制备得到的组合物,加水溶解配制成所需浓度。
2.仪器与试剂
培养皿:上海五一玻璃仪器厂;一次性灭菌涂布棒Biologix Group Limited;锥形瓶(蜀牛);生化培养箱,型号:SPX-150BX,产自天津泰斯特;微型旋涡混合仪,型号:XW-80A,产自上海沪西分析仪器厂;电子天平,型号:ML-204/02,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;冰箱,型号:DW-25L262,青岛海尔特种电器有限公司;移液枪(量程:1000μL、200μL、20μL),型号:Q/SGYN-1002,产自梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;日本三洋高压蒸汽灭菌器,型号:MLS-3750,产自上海创迅医疗器械有限公司;单人单面水平送风净化工作台,型号:SW-CJ-IB,,自苏州净化设备有限公司;电热鼓风干燥箱(烘箱),型号:WGL-230B,产自上海精宏实验设备有限公司;三菱厌氧罐/厌氧袋,产地日本,购自北京赛百奥科技有限公司。
3.受试动物
动物来源:ICR雄性小鼠32只,18-22g,由扬州大学动物实验中心提供。
饲养环境:SPF级,室温:(20~22℃),相对湿度:(46~51)%RH。
二、实验方法
1.动物分组、处理及剂量设置
动物适应性饲养3d后,依据体重随机分为4组,分别为:空白对照组、实施例1给药组、实施例2给药组、实施例3给药组,每组8只。按人体口服推荐量(15g/d)计算,给药剂量相当于人体推荐量的5倍。受试药物配制好后按BW体积给小鼠灌胃,空白对照组灌胃予以生理盐水,每天一次,连续14d后,无菌采集粪便,检测肠道菌群。
2.方法及步骤
(1)细菌培养法
改良GAM肉汤(青岛高科园海博生物技术有限公司批号:20150428)用途:用于脆弱拟杆菌的增菌培养
乳杆菌:乳酸杆菌选择性琼脂(杭州百思生物技术有限公司批号:20160316001),37℃,24h厌氧培养;
双歧杆菌:BBL琼脂(杭州百思生物技术有限公司批号:20160122001),37℃,24h厌氧培养;
肠杆菌:伊红美蓝琼脂(杭州百思生物技术有限公司批号:20160308001),37℃,24h厌氧培养;
肠球菌:肠球菌琼脂(杭州百思生物技术有限公司),37℃,24h厌氧培养;
产气荚膜菌:胰月示-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础(TSC)(杭州百思生物技术有限公司),37℃,24h厌氧培养;
上述培养基均需加入蒸馏水1L,加热溶解,分装三角瓶,经121℃15min高压灭菌,备用。
(2)实验步骤
在给予受试药品之前,无菌采取小鼠粪便0.1g,10倍系列稀释,选择合适的稀释度分别接种在各培养基上。培养后,以菌落形态、革兰氏染色镜检、生化反应等鉴定计数菌落,计算出每克湿便中的菌数,取对数后进行统计处理。最后一次给予受试样品之后24h,与实验前同样方式取直肠粪便,检测肠道菌群,方法同上。观察指标:体重、双歧杆菌、乳酸菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜菌。
三、实验结果
实验前后自身及组间双歧杆菌、乳酸菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜菌的变化情况见表1。
注:**与给药前空白比较p<0.01;*与给药前空白比较<0.05。
由以上实验结果可知,本发明提供的组合物可使受试动物的粪便中双歧杆菌和或乳酸杆菌明显增加,产气荚膜梭菌减少,肠杆菌明显增加,但增加的幅度低于双歧杆菌和乳酸杆菌增加的幅度;实验前后各组小鼠体重变化未见显著差异。按照《保健食品功能学评价程序和检验方法》的规定,本发明提供的组合物基于动物实验具有调节肠道菌群结构的保健功能。
实施例8、防治便秘功能评价
一、仪器与试药
1.受试药物
实施例1、实施例2、实施例3制备得到的组合物,加水溶解配制成所需浓度。
2.仪器和试剂
仪器与器材:眼科镊、注射器(江苏华达医疗器械有限公司国食药监械(准)字2012第3150392)、分析天平(METTLER TOLEDO)、活性炭粉、阿拉伯树胶、复方地芬诺酯(长春长红制药有限公司,批号:20150806)。
墨汁的配制:准确称取阿拉伯树胶100g,加水800mL,煮沸至溶液透明,再称取活性炭(粉状)50g加至上述溶液中煮沸三次,待溶液凉后加水定容至1000mL,于冰箱中4℃保存,用前摇匀。
复方地芬诺酯混悬液的配制:浓度为0.025%。取复方地芬诺酯片(每片含复方地芬诺酯2.5mg)10片,用研钵研碎后加蒸馏水至100mL,临用前配制。
3.受试动物
动物来源:ICR雄性小鼠40只,18-22g,由常州卡文斯实验动物有限公司提供(许可证号:SCXK(苏)2011-0003)。
饲养环境:SPF级,室温:(20~22℃),相对湿度:(46~51)%RH。
二、实验方法
1.动物分组、处理及剂量设置
动物适应性饲养3日后,依据体重随机分为5组,分别为:空白对照组、模型对照组和实施例1给药组、实施例2给药组、实施例3给药组,每组8只。按人体口服推荐量(15g/d)计算,给药剂量相当于人体推荐量的5倍。受试药物配制好后按BW体积给小鼠灌胃,空白对照组、模型对照组灌胃予以生理盐水,每天一次,连续8天后,采用复方地芬诺酯造模,并测定其排便时间、排便粒数和粪便重量等通便功能指标。
2.通便功能实验原理和实验步骤
(1)通便功能实验原理
经口灌胃给予药物复方地芬诺酯来造模,建立小鼠便秘模型,测定小鼠的首粒排黑便排便时间、5或6h内排便粒数和排便重量,来反映模型小鼠的排便情况。
(2)实验步骤
模型的建立:给受试样品7d后,各组小鼠禁食不禁水16h。模型对照组和低、中、高剂量组分别灌胃给予复方地芬诺酯(10mg/kgBW),空白对照组灌胃给予等体积生理盐水。
指标测定的具体方法:给予复方地芬诺酯0.5h后,空白对照组和模型对照组小鼠用墨汁灌胃,给药组则给予含受试药物的墨汁,动物均单笼饲养,正常饮水进食。
从灌墨汁开始,记录每只动物首粒排黑便时间、5h内排黑便粒数及重量。
三、数据处理及结果判定
1.对体重的影响
动物初始体重及实验后体重见表2。由表2可以看出,试验期间各组动物体重长势良好,均能正常进食进水。各组之间体重未见显著差异,表明本发明提供的组合物对受试动物体重无明显影响。
2.对首次排便时间的影响
各组动物首次排便时间见表3。由表3可以看出,空白对照组和模型组相比,小鼠5h内首粒黑便时间差异具极显著性,表明模型造模成功。实施例1、实施例2、实施例3给药组小鼠首次排黑便时间及其对数转换后的时间均短于模型组,其中实施例1、实施例2给药组与模型组比较差异具显著性,说明本发明提供的组合物可以缩短小鼠首次排黑便时间。
3.对5h内排黑便粒数的影响
各组动物5h内排黑便粒数见表4。表4可以看出,空白对照组和模型组相比,小鼠5h内排黑便粒数差异具极显著性,表明模型造模成功。实施例1、实施例2给药组小鼠5h内排黑便粒数显著高于模型组,实施例1给药组差异具极显著性,表明本发明提供的组合物可以增加小鼠排黑便粒数。
4.对5h内排黑便总重量的影响
各组动物5h内排黑便总重量见表5。表5可以看出,空白对照组和模型组相比,小鼠5h内排黑便总重量差异具极显著性,表明造模成功。实施例1、实施例2给药组小鼠首次排黑便时间明显多于模型组,且具有显著性差异,表明本发明提供的组合物可以增加小鼠排便总重量。
5.结果判定
由以上实验结果可知,本发明提供的组合物可显著缩短模型小鼠首次排便时间,增加造模后模型小鼠5h内黑便粒数及黑便总重量,按照《保健食品功能学评价程序和检验方法》有关通便功能实验的规定,本发明提供的组合物基于动物实验具有通便保健功能。
综合以上实验结果表明,本发明提供的组合物可显著缩短便秘动物模型首便时间及增加排便数量和重量,且增加小鼠肠道双歧杆菌及乳杆菌数量,表明本发明提供的组合物具有通便及调节肠道菌群结构的保健功能,可用于防治肠道菌群结构失调及便秘。且与现有的药物及保健食品相比,该组合物以具有多重保健功效的天然传统药食两用植物提取物为原料,更加安全,无不良反应。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物,其特征在于,它由下列重量份数的原料制成:大枣提取物10份,酸枣提取物2份,丹参提取物3份;
所述的大枣提取物通过以下方法制备得到:
(1)取干燥成熟大枣果实,加水清洗后,加8~16倍量水,加热提取1~3次,合并提取液,浓缩后,喷雾干燥得到大枣提取物;
所述的酸枣提取物通过以下方法制备得到:
(2)取干燥成熟酸枣果实,加水清洗后,加8~16倍量水,加热提取1~3次,合并提取液,浓缩后,喷雾干燥得到酸枣提取物;
所述的丹参提取物通过以下方法制备得到:
(3)取丹参药材,加水清洗后,加8~16倍量水,加热提取1~3次,合并提取液,浓缩,加乙醇至含醇量达80%,静置,取沉淀加水复溶后喷雾干燥得到丹参提取物。
2.根据权利要求1所述的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物,其特征在于,所述的酸枣提取物为加工酸枣仁过程中产生的酸枣果肉为原料,加8倍量水加热提取1~3次,合并提取液,浓缩后,喷雾干燥得到酸枣提取物。
3.根据权利要求1所述的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物,其特征在于,所述的丹参提取物为制备丹酚酸类物质过程中产生的丹参水提醇沉沉淀为原料,加水复溶后喷雾干燥制得。
4.权利要求1所述的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物在制备调节肠道菌群结构的保健食品或药物中的应用。
5.权利要求1所述的具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的组合物在制备防治便秘作用的保健食品或药物中的应用。
6.一种具有调节肠道菌群结构及防治便秘作用的保健食品或药物,其特征在于,将权利要求1所述的组合物和食用载体或药学上可接受的载体制成口服液、颗粒剂、糖浆剂、煎膏剂的保健食品或药物。
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