CN106722473A

CN106722473A - 一种阿根廷奶油南瓜保健食品及其制备方法

Info

Publication number: CN106722473A
Application number: CN201611132140.XA
Authority: CN
Inventors: 王霄
Original assignee: Gansu Golden Pumpkin Biology Gaoke Ltd
Current assignee: Gansu Golden Pumpkin Biology Gaoke Ltd
Priority date: 2016-12-09
Filing date: 2016-12-09
Publication date: 2017-05-31

Abstract

本发明公开了一种阿根廷奶油南瓜保健食品，以南瓜深加工中的副产品——南瓜籽、南瓜叶为原料，全程采用低温加工技术，不添加任何香精、香料、食品添加剂和化学物质，最大限度地保持了南瓜的天然风味、品质和口感，有效提高了南瓜粉组分原料的食品安全性和提取率，将南瓜发酵粉、聚葡萄糖、南瓜芽粉、芦荟凝胶冻干粉、南瓜叶粉、冬黑麦肽、抗性糊精、β‑葡聚糖、低聚糖多种功能性原料科学复配，协同作用，显著增强了南瓜粉的营养性、功能性、速溶性、流动性、保健效果和保质期。同时为南瓜种植及深加工开辟了一条新的捷径，增加了种植户经济收入，解决了因副产品废弃而造成的环境污染，有力地解决了“三农问题”，具有一定的经济和社会价值。

Description

一种阿根廷奶油南瓜保健食品及其制备方法

技术领域

本发明涉及南瓜深加工，具体涉及一种阿根廷奶油南瓜保健食品及其制备方法。

背景技术

南瓜(学名：Cucurbita moschata(Duch.ex Lam.)Duch.ex Poiret)葫芦科南瓜属的一个种，一年生蔓生草本植物，茎常节部生根，叶柄粗壮，叶片宽卵形或卵圆形，质稍柔软，叶脉隆起，卷须稍粗壮，雌雄同株，果梗粗壮，有棱和槽，因品种而异，外面常有数条纵沟或无，种子多数，长卵形或长圆形，具有良好的食疗作用。南瓜具有较高的营养价值：每100克南瓜含蛋白质0.6克，脂肪0.1克，碳水化合物5.7克，粗纤维1.1克，灰分0.6克，钙10毫克，磷32毫克，铁0.5毫克，胡萝卜素0.57毫克，核黄素0.04毫克，尼克酸0.7毫克，抗坏血酸5毫克。此外，还含有瓜氨素、精氨酸、天门冬素、葫芦巴碱、腺瞟吟、葡萄糖、甘露醇、戊聚糖、果胶等。

阿根廷奶油南瓜，作为南瓜中一种独特的品种，其中含有丰富的微量元素钴和果胶。钴的含量较高，是其他任何蔬菜都不可相比的，它是胰岛细胞合成胰岛素所必需的微量元素，常吃奶油南瓜有助于防治糖尿病。果胶则可延缓肠道对糖和脂质吸收。不但适合不想肥胖的中青年食用，而且被广大妇女称为“最佳美容食品”。其原因在于南瓜维生素A含量胜过绿色蔬菜。吃奶油南瓜可以预防高血压以及肝脏和肾脏的一些病变。

南瓜籽，又名南瓜子，性微寒，入肾经、肝经。南瓜籽所含的高含量亚油酸，能够有效地降低血糖，是糖尿病患者的良药。陕西陕北地区为南瓜籽的主产地。专家研究表明：南瓜多糖和南瓜蛋白可显著提高糖尿病大鼠胰岛素水平，南瓜籽油中的蛋白质和精氨酸可改善糖尿病大鼠的糖耐量。防癌：南瓜能消除亚硝酸铵的突变作用，制止癌细胞出现。

南瓜叶，南瓜叶中含有多种维生素、蛋白质与矿物质，其中维生素C的含量很高，使它具有出色的清热解毒功效，夏季时用南瓜叶煮水喝，可以起到消暑除烦的作用。南瓜叶的功效：(1)南瓜叶有治疗刀伤的作用，大家平时可以把南瓜叶晒末，制成粉末存放起来，在生活中意外被刀伤害时，可以直接取出南瓜叶的粉末撒在伤品上，就能起到止血和止疼的作用。(2)南瓜叶有治疗有儿疳积的作用，如果小孩出现了疳积病症，大家可以用南瓜叶五百克和腥豆叶两百五十克一起晒干制成粉末，然后每次取出五钱与猪肝同时蒸，然后让孩子食用，治疗疳积的效果特别好。(3)南瓜有治疗痢疾的作用，特别是对于风火引起的下痢有出色功效，具体用法是把十片左右的南瓜叶去掉叶柄，然后加水煎制，煎好后加入少量的食盐，然后饮用，连用五到六次，痢疾就能痊愈。

目前，已经公开的涉及制备南瓜保健食品及其制备方法的专利文献众多，例如公布号为104738443 A的发明专利公开了一种保健食品，各成分含量为：冬瓜粉65％、南瓜粉15％、盐0.5％、黑芝麻0.8％，该产品制作简单，营养丰富，可作为正餐的佐餐食品或饮品食用，糖尿病患者长期使用，病情得到明显的缓解，非患者食用可起到保健作用。

中国专利CN 104957477 A公开了一种南瓜子保健食品的制作方法，属于食品技术领域。该方法在制作食品的过程中以玉米、绿豆、南瓜子和黑芝麻为原料，在合理搭配和烹饪后，制备出南瓜子保健食品，以解决人们合理膳食和营养失衡的问题。该南瓜子保健食品剧院保护胃粘膜帮助消化的作用，南瓜子能消除致癌物质亚硝胺的突变作用，有防癌功效，并能帮助肝、肾功能的恢复，增强肝、肾细胞的再生能力，促进生长发育，南瓜子中含有丰富的锌，参与人体内核酸、蛋白质的合成，是肾上腺皮质激素的固有成分，为人体生长发育的重要物质。总之，该南瓜子保健食品克服了人们日常生活中饮食单一化，营养摄取不均衡等问题。

中国专利CN 104413360 A公开了一种既能预防高血糖，又能降低血糖的保健食品片剂。该发明是通过这样的技术方案来实现的：选用具有调节血糖作用，同时含有丰富营养保健成份的豇豆，辅以多种药食植物苦瓜、南瓜、荞麦、蜂胶、沙棘油等加工成片剂。该发明的有益效果是克服现有技术存在的不足，提出一种患者服用后可增强体质、有效降低血糖；延缓动脉粥样硬化，增强红细胞活力，减少血清含量、控制并发症、自然康复的降血糖保健食品。

中国专利CN 104286831 A公开了一种糖尿病人的保健食品。技术方案包括：南瓜粉6，玉米粉5，螺旋藻3，大豆粉5，海苔粉2，燕麦粉5，山药粉5，灵芝粉5，茯苓粉4，猪胰5，桑叶3，麦芽粉4，葛根粉3，高粱粉5，荞麦粉4。该发明的功效：搭配合理，共起扶助正气、补中益气、降低血糠、增强免疫、恢复胰岛素分泌，适宜糖尿病人长期食用，疗效高。

中国专利CN 102038158A公开了一种即食南瓜粉及其制备方法，其中即食南瓜粉的原料构成为：南瓜，复合酶，复合酶由纤维素酶、液化酶和果胶酶构成；其制备方法是由上述原料经酶解和喷雾干燥制得即食南瓜粉。此发明不仅能有效改善南瓜粉的冲调性和口感，利于消化吸收，同时也能提高降血糖、降胆固醇的医疗保健作用。

中国专利CN 104738449 A公开了一种酶解法制备速溶南瓜粉的方法，其特征在于，所述方法是将南瓜原料经预处理、酶解、灭酶、过滤和喷雾干燥后得到速溶南瓜粉；所述南瓜原料预处理是指：将南瓜去籽，然后将带皮和瓤的南瓜切块，加水粉碎打浆，得南瓜浆；所述酶解配方为：0.05-0.25％的果胶酶，0.01-0.03％的纤维素酶。本发明产品色泽极佳，速溶性好，口味酸甜，营养丰富，利于人体吸收，可以温水直接冲调食用，也可以作食品原料添加到其它食品中去使用。

中国专利CN 103621929 A公开了一种制备去糖脱腥南瓜粉的方法，具体是一种制备去糖脱腥南瓜粉的方法。该方法以新鲜老熟南瓜为原料，采用胶体研磨制浆工艺辅助果胶酶、糖化酶和去腥木瓜蛋白酶酶解脱腥技术，并利用超声波絮凝效应结合低温沉降固液分离工艺，最后调配加工而成。该工艺不仅有效去除了南瓜的腥气，而且改善了南瓜粉的口感和冲调性，该方法制得的南瓜粉可溶性膳食纤维含量高，含糖量低，适宜于糖尿病、高血压患者食用。同时既可作为食品工业调配加工的原料，也可根据个人口味加工食用。该方法的特点是成本低、能耗少、热敏性营养物质损失少。

中国专利CN 105124457 A公开了一种微纳米南瓜粉的制备方法，发明包括原料清洗去皮瓤、切片晾晒、清洗、烘干、初粉碎、超音速气流粉碎、行星球磨粉碎、真空冷冻干燥；最终将南瓜果肉加工成微纳米级别的超细粉体。该发明制得的微纳米南瓜粉，不仅具有良好的口感，而且还避免了营养成分在加工过程中的流失，最重要的是通过比较不同粒度的微纳米南瓜粉的有效成分提取率的和消化率的不同，分别得出了合适的粉碎粒度，为微纳米南瓜粉在食品加工、制药等领域的应用及研究提供数据基础。

上述公开的相关南瓜保健食品的专利没有充分利用南瓜原料的保健作用，其营养及生物活性物质含量低，功能性单一，营养及保健效果差(抗氧化性、降血糖、降胆固醇等)，消化吸收率低；同时没有对高糖南瓜原料食品处理，保健食品中糖含量高，不适宜糖尿病患者食用。

中国专利CN 106070630 A公开了一种南瓜酸奶，由以下重量份配比的原料制成：鲜牛奶300-900份、南瓜粉10-50份、柠檬汁液1-5份、发酵剂0.5-1.5份、稳定剂2-10份、蜂蜜10-30份、水100-300份。该发明的酸奶味道可口，有益健康，适合长期食用。

中国专利CN 103404809 B公开了一种南瓜自发粉及其专用发酵剂。该发明所提供的南瓜自发粉，由如下重量分数的各物质混合而成：南瓜粉150-200份，麦芯粉770-820份，安琪活性干酵母10-20份，梅山即发干酵母3-5份，安琪酿酒酵母2-5份。该发明所提供的南瓜自发粉原料纯天然，无添加剂，营养丰富，利于平衡人类膳食结构，同时对于血糖具有辅助调节作用，既可用于制备馒头、花卷等传统面食，也可用于烘焙西式点心，制作过程无需额外添加酵母、碱面等，制得的面食色泽金黄、结构蓬松、富弹性、口感绵软、有特征南瓜香气。该发明操作简单、易于生产、安全无毒无污染，在简化传统面食制作工艺、丰富面粉市场的同时，解决了我国南瓜资源大量滞留的问题，提供了南瓜利用的新途径。

中国专利CN 103783616 B公开了一种发酵南瓜饮料的制备方法，它包括南瓜护色处理、南瓜面包干的制备以及南瓜面包干浸出物与南瓜浆混合后用植物乳杆菌菌液和酵母发酵处理的步骤。其中，植物乳杆菌菌液占发酵基质液体积的2-3％，酵母占发酵基质液重量的0.08-0.2％。该发明制得的发酵南瓜饮料营养价值丰富，含有独特的焙烤风味和发酵制品的风味，色泽金黄，质地均一，香气馥郁，口感适中，产品保存期长，深受消费者喜爱，为南瓜的深加工利用开辟了一条新途径。

上述公开的专利虽然对南瓜原料处理并进行发酵，但发酵菌种增殖密度低，代谢产物功能性成分含量低，产品功能性不全面，功能性差。

综上，以阿根廷奶油南瓜为原料，充分利用南瓜种植和加工后的南瓜叶、南瓜籽等副产物，制备一种功能性及溶解性强、营养及保健效果好、易于消化吸收、保质期长、适合糖尿病患者食用的保健食品很有必要。

发明内容

本发明所解决的技术问题是克服上述现有技术中南瓜保健食品制备的缺陷，以阿根廷奶油南瓜为原料，通过制备抗氧化性及生物活性强、具有降低血糖以及胆固醇功能、含有高密度酵母葡聚糖(酿酒酵母β-葡聚糖)的南瓜发酵粉；科学复配改善末稍组织对胰岛素的感受性，降低对胰岛素的要求，抑制胰岛素的分泌，阻碍对糖的吸收，且聚葡萄糖本身不被吸收，从而达到降低血糖水平的目的聚葡萄糖；可提高消化吸收率、抗氧化性含有丰富植物酶源的南瓜芽粉；含有高含量乙酰化甘露聚糖的肠道淀粉酶抑制剂，可以使得淀粉质在肠道中缓慢降解为单糖，人体缓释吸收，从而达到降糖效果的芦荟凝胶冻干粉；可提高南瓜保健食品风味及抗氧化特性的南瓜叶粉；可显著提高南瓜保健食品抗冻效果、延缓和防止南瓜保健食品在冻藏时冰晶的形成和重结晶、防止南瓜保健食品结构、品质和风味受到破坏、延长市场流通期限的冬黑麦肽；具有调节血糖和胰岛素水平，抑制糖类消化道吸收，耐冷冻冷藏，水溶液溶解性和稳定性强，抗粘结，可作为肠道益生菌营养因子的抗性糊精和低聚糖；可降低血脂、血糖、胆固醇和预防心血管疾病、提高免疫能力的β-葡聚糖。最终制得一种功能性及溶解性强、营养及保健效果好、易于消化吸收、保质期长、适合糖尿病患者食用的阿根廷奶油南瓜保健食品。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种阿根廷奶油南瓜保健食品，主要由以下重量份数的原料制备：

南瓜发酵粉30-50份，聚葡萄糖8-12份，南瓜芽粉4-8份，芦荟凝胶冻干粉3-5份，南瓜叶粉2-6份，冬黑麦肽2-6份，抗性糊精2-6份，β-葡聚糖2-5份，低聚糖1-3份；

进一步地，所述南瓜发酵粉是以南瓜为原料，经清洗，去皮、去籽、去瓤，破碎、胶磨、二级均质、真空脱气、酶解得发酵基质，然后向其中加入功能性酿酒酵母进行发酵、喷雾干燥而制得；

优选地，所述南瓜发酵粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜清洗，去皮、去籽、去瓤，切片，破碎，加入破碎物质量1-3倍的水，搅拌均匀，于80-90℃灭酶、灭菌20-40min，然后置胶体磨中，调节定子和转子之间的间隙，使出口南瓜汁粒径达到200-400μm，接着于温度50-70℃，低压10-20MPa、高压40-60MPa二级均质，使出口南瓜汁粒径达到2-10μm，真空脱气得南瓜原汁；调节南瓜原汁pH值为4-6，加入其质量0.08-0.12％的混合酶，于45-65℃酶解40-60min,过滤，向滤液中加入葡萄糖，使葡萄糖浓度为100-200g/L,于80-90℃灭酶10-14min得发酵基质，加入发酵基质质量5-10％的酿酒酵母种子液进行发酵，通气量4-6L/min,罐压0.01-0.03MPa，400-600rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至20-30h时，一次性添加终浓度为24-26mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵20-24h；发酵液于孔径80-120μm筛网过滤得最终发酵液，经喷雾干燥即得南瓜发酵粉；

所述最终发酵液中GSH的含量为3268-3308mg/L；

所述最终发酵液中酿酒酵母活菌含量为6×10¹¹-8×10¹¹cfu/ml；

所述最终发酵液中总糖含量为2-10g/L；

所述混合酶为纤维素酶、糖化酶、蛋白酶、单宁酶按质量比2-4:1-3:1-2:0.5-1.5均匀混合；

所述酿酒酵母种子液培养条件：取酿酒酵母斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得酿酒酵母种子液；

所述摇瓶培养基质量组成为：(NH₄)₂SO₄ 6g/L，葡萄糖35g/L，K₂HPO₄·3H₂O 3g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，酵母粉11g/L，MnSO₄ 0.1g/L，KCL 0.1g/L，FeSO₄ 0.1g/L，MgSO₄·7H₂O0.1g/L，余量为水，pH 6.0；

所述酿酒酵母菌株具体为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，该菌株已于保藏于2016年7月15日中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12789，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101；

所述酿酒酵母tlj2016是从一株诱变菌株，经过诱变后获得的菌株tlj2016其葡萄糖耐受能力以及L-半胱氨酸耐受能力均得到提高，一方面在高浓度葡萄糖培养下能够提高细胞密度，另一方面L-半胱氨酸耐受能力的提高将有利于GSH在胞内大量合成，从而提高菌株大规模生产GSH的能力。

进一步地，所述南瓜芽粉是以南瓜籽为主要原料，依次经高压静电、冷冻、微波瞬时处理、超声辅助生物酶解浸泡、发芽、干燥、低温粉碎工艺而制得；

优选地，所述南瓜芽粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜籽于电场强度2-4kV/cm高压静电处理3-5min；依次在1-3℃冷藏6-10h,-4--6℃冷冻18-24h,立即放入0.8-1.2％的碳酸氢钠溶液中室温浸泡8-12min,取出,沥干，于3-5℃静置18-24h,于频率2450MHz、功率3000W、温度30-34℃、料层厚度2-4cm微波干燥5-9s,然后置温度为33-36℃、pH值为6-8的浸泡液中浸泡4-6h，浸泡液含有质量百分比浓度为0.03-0.05％的复合酶，每隔15-20min通风一次，通风压力0.13-0.15MPa，浸泡同时于电场强度10-15kV/cm，脉冲时间100-300μs,脉冲频率60-80Hz条件进行高压脉冲电场处理，直至南瓜籽水分含量为40-45％；浸泡后的南瓜籽沥干，在发芽室内进行暗发芽，暗发芽温度保持20-24℃，暗发芽时间为20-24h，经发芽后的南瓜籽干燥至水分含量为5-8％，低温粉碎，过80-100目筛即得南瓜芽粉；

所述复合酶为纤维素酶、β-葡聚糖酶、木聚糖酶按质量比3-5:1-3:1-2均匀混合。

进一步地，所述南瓜叶粉是南瓜叶经过超声清洗、漂烫、干燥、低温粉碎而制得；

优选地，所述南瓜叶粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜叶放在装有0.01-0.03％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于功率200-400W、频率20-30KHz室温超声清洗3-5min，漂洗，沥干，切断，95℃热水漂烫，取出，立即放在10-14℃水中冷却，沥干，于40-60℃热风干燥至叶片水分含量至4-8％，低温粉碎，过60目筛，然后气流粉碎，过200目筛即得南瓜叶粉。

进一步地，所述冬黑麦肽是以含有丰富抗冻基质的冬黑麦种子为原料制备的冬黑麦提取物与海藻糖、丝胶肽科学复配而成，不仅可显著提南瓜保健食品的抗冻性，进而大大提高其生物活性、营养性、功能性，而且又增加了南瓜保健食品的溶解性和稳定性，产生了意想不到的有益效果，特别适合作为南瓜保健食品的抗冻保护剂；

优选地，所述冬黑麦肽的质量组成为：冬黑麦提取物:海藻糖:丝胶肽＝10-18:5-7:1-3；

优选地，所述冬黑麦提取物是以冬黑麦的种子为原料，经高压静电、高压脉冲电场辅助水杨酸浸泡、冷藏冷冻处理后再经啤酒麦芽粉分段酶解而制得；

更优选地，所述冬黑麦提取物的制备方法，包括如下步骤：将冬黑麦的种子装盘，首先于电场强度4-6kV/cm高压静电处理3-5min；接着在浓度为12-18mg/L的水杨酸溶液中室温浸泡1-3h，同时在电场强度2-6kV/cm，脉冲时间50-100μs,脉冲频率100-150Hz条件下进行高压脉冲电场处理；漂洗、沥干，于3-5℃静置18-24h,然后依次在1-3℃冷藏2-4d,-3--5℃冷冻1-3d、-15--18℃冷冻10-15h,立即放在室外自然光照5-7h，使混合料半解冻后立即进行粉碎，粉碎物粒径0.5-1.5mm,接着加入粉碎物质量4-6倍的水，用乳酸调节pH值为5.8-6.2；最后加入冬黑麦种子质量10-30％的啤酒麦芽粉，首先于35-50℃酶解10-30min,然后于60-70℃酶解20-40min；酶解液过滤、滤液减压浓缩、冷冻干燥、低温粉碎至粒径0.1-0.3mm即得冬黑麦提取物。

本发明另一目的是提供上述阿根廷奶油南瓜保健食品的制备方法，包括如下步骤：按照配方，首先依次将南瓜发酵粉、南瓜叶粉、南瓜芽粉、冬黑麦肽、芦荟凝胶冻干粉、抗性糊精、β-葡聚糖、低聚糖、聚葡萄糖质量的10-30％加入V型混合罐均匀混合15-25min,搅拌转速20-40r/min,然后加入剩余聚葡萄糖均匀混合20-40min,搅拌转速40-60r/min,无菌灌装、密封、包装即得阿根廷奶油南瓜保健食品。

有益效果：

本发明以阿根廷奶油南瓜为原料，充分利用南瓜深加工中的副产品——南瓜籽、南瓜叶为原料，全程采用低温加工技术，不添加任何香精、香料、食品添加剂和化学物质，最大限度地保持了南瓜的天然风味、品质和口感，有效提高了南瓜保健食品组分原料的食品安全性和提取率，将多种功能性提取物科学复配，协同作用，显著增强了南瓜保健食品的营养性、功能性、速溶性、流动性、保健效果和保质期。通过制备抗氧化性及生物活性强、具有降低血糖以及胆固醇功能、含有高密度酵母葡聚糖(酿酒酵母β-葡聚糖)的南瓜发酵粉；科学复配改善末稍组织对胰岛素的感受性，降低对胰岛素的要求，抑制胰岛素的分泌，阻碍对糖的吸收，且聚葡萄糖本身不被吸收，从而达到降低血糖水平的目的聚葡萄糖；可提高消化吸收率、抗氧化性含有丰富植物酶源的南瓜芽粉；含有高含量乙酰化甘露聚糖的肠道淀粉酶抑制剂，可以使得淀粉质在肠道中缓慢降解为单糖，人体缓释吸收，从而达到降糖效果的芦荟凝胶冻干粉；可提高南瓜保健食品风味及抗氧化特性的南瓜叶粉；可显著提高南瓜保健食品抗冻效果、延缓和防止南瓜保健食品在冻藏时冰晶的形成和重结晶、防止南瓜保健食品结构、品质和风味受到破坏、延长市场流通期限的冬黑麦肽；具有调节血糖和胰岛素水平，抑制糖类消化道吸收，耐冷冻冷藏，水溶液溶解性和稳定性强，抗粘结，可作为肠道益生菌营养因子的抗性糊精和低聚糖；可降低血脂、血糖、胆固醇和预防心血管疾病、提高免疫能力的β-葡聚糖。最终制得一种功能性及溶解性强、营养及保健效果好、易于消化吸收、保质期长、适合糖尿病患者食用的阿根廷奶油南瓜保健食品。试验表明：1)实验组、对照组A和对照组B的小鼠摄入样品的量是相同的，实验组小鼠的消化吸收率明显高于对照组A和对照组B，达到88.75％，而普通南瓜保健食品的消化吸收率却仅有53.75％和74.50％，表明本发明阿根廷奶油南瓜保健食品含有大量生物活性物质、消化酶、益生菌和益生因子，可促进营养物质的消化和吸收，更容易被机体消化吸收，具有十分显著的易消化吸收的特点；从体重更可以看出，较对照组A和B，实验组的小鼠体重有明显的升高，与初始体重20.03g相比提高了3.82g，平均增长率为24.06％。2)阿根廷奶油南瓜保健食品本身均具有降低血糖的作用，但相比于空白对照组以及实验组1和实验组2，实验组3在降低空腹血糖方面有显著作用，更显著有利于餐后血糖的改善；实验进行50d后,禁食12h,眼框取血,用放免法测定胰岛素水平,空白对照组,实验组1，实验组2，实验组3分别为18.97±12.54，21.78±4.83，24.67±11.73mmol/L，34.45±6.76mmol/L。实验组3胰岛素水平与实验组1以及实验组2相比有显著性差别,P<0.01。表明本发明的阿根廷奶油南瓜保健食品具有有效刺激胰岛素分泌功能。3)本发明的阿根廷奶油南瓜保健食品对羟自由基的清除能力显著。且随着浓度的增加而增大。当浓度为16mg/mL时，清除率可达到96.88％，较市售的南瓜保健食品的清除率显著提高了18.18％，故本发明的阿根廷奶油南瓜保健食品具有很强的抗氧化功能。4)冲饮本发明阿根廷奶油南瓜保健食品后，成年人血液中的总胆固醇的含量发生明显变化。与普通市售南瓜保健食品相比，本发明阿根廷奶油南瓜保健食品对成年人血液中的总胆固醇的含量明显的降低，其下降率为市售的6倍以上，而氯化钠组成年人血液中的总胆固醇的含量明显的增加，市售南瓜保健食品虽然有所降低，但与本发明产品相比，效果不显著，由此可知，本发明阿根廷奶油南瓜保健食品具有显著的降低胆固醇的保健效果。5)发明制备的阿根廷奶油南瓜保健食品从外观、质地、风味和口感任何一方面都要明显优于市售南瓜保健食品，特别是外观、风味和口感极好，同时也适合不同年龄段、不同消费层次的消费者食用。6)在-12℃和40℃条件下储存12个月，本发明阿根廷奶油南瓜保健食品与市售相比，其蛋白酶酶活损失分别降低45％和16.9％，具有优良的温度储存性，酶活力非常稳定，同时也说明本发明阿根廷奶油南瓜保健食品含有的其它生物活性物质的损失率极低，具有较好的抗冻、抗热性能，产品质量稳定，保质期长。7)酿酒酵母tlj2016经5L高糖培养基发酵试验，发酵液中GSH的含量为3308mg/L；对于出发菌株，培养基中添加L-半胱氨酸，细胞停止生长，并且开始自溶，导致GSH增长率随着L-半胱氨酸浓度的升高而降低；而低浓度L-半胱氨酸下，tlj2016仍能够缓慢生长，随着L-半胱氨酸浓度的提高，tlj2016菌株的细胞干重缓慢下降，而GSH浓度持续增长，这一结果将有利于GSH生产过程中通过添加前体氨基酸-L-半胱氨酸提促进GSH的生产；酿酒酵母tlj2016不仅可以在常规环境中生存，在高盐条件下依然具有活力，可应用于酱油、腌制品等高盐食品加工过程中耗糖产谷胱甘肽。具体试验效果见实施例7-15，具体技术原理如下：

1.本发明制备的南瓜发酵粉以南瓜为原料经清洗，去皮、去籽、去瓤，破碎、胶磨、二级均质、真空脱气、酶解得发酵基质，然后向其中加入功能性酿酒酵母进行发酵、喷雾干燥而制得；经混合酶酶解将大分子营养物质转化为小分子、微生物可吸收的小分子物质，为后续功能性酿酒酵母发酵提供了天然的发酵基质，最终发酵液中GSH的含量为3268-3308mg/L，酿酒酵母活菌含量为6×10¹¹-8×10¹¹cfu/ml，总糖含量为2-10g/L；制得的发酵南瓜粉含有大量的生物活性物质—谷胱甘肽和活性益生菌(酿酒酵母)，提高了南瓜保健食品的生理活性和营养物质含量，增强了南瓜保健食品的营养性、功能性、抗氧化性和保健作用，同时，高密度酿酒酵母含有大量酵母β-葡聚糖，且果胶含量高、含糖量低，非常适合糖尿病患者食用。本发明酿酒酵母tlj2016是从一株诱变菌株，经过诱变后获得的菌株tlj2016其葡萄糖耐受能力以及L-半胱氨酸耐受能力均得到提高，一方面在高浓度葡萄糖培养下能够提高细胞密度，另一方面L-半胱氨酸耐受能力的提高将有利于GSH在胞内大量合成，从而提高菌株大规模生产GSH的能力。

2.本发明制备的南瓜芽粉含有多种营养及生物活性物质，对浸泡过程的南瓜籽进行高压静电、冷冻和高压脉冲电场处理有效防止了浸泡液污染杂菌，避免了产生臭味渗透到南瓜芽粉产品中，同时，可有效增强种皮细胞壁和细胞膜的相对透性、提高南瓜种子的吸水率，促进种子提前萌发，提高超氧阴离子自由基的产生速率及三磷酸腺苷(ATP)含量，促进发芽前期南瓜种子多种生物酶(淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶、磷酸酯酶等)的激活和释放、胚乳溶解及功能性营养成分、生物活性成分、抗氧化成分的合成，促进了种子的呼吸代谢作用，加快了营养及功能性物质、生物活性成分、抗氧化成分的富集进程，缩短了富集时间，提高了营养及功能性物质、生物活性成分、抗氧化成分的含量，与生物酶解有机结合，可进一步降解种皮纤维素及半纤维素结构，增加种皮通透性，激活各种生物活性物质(内源酶等)活力最强，富集量更大，可溶性纤维素含量随之增大，为南瓜芽粉中的植物乳杆菌提供了营养因子，效果更佳显著；将高压静电、高压脉冲电场技术和生物酶解有机结合，缩短了浸泡时间，提高了发芽率和发芽均一度；可最大限度保持南瓜芽粉热敏性物质含量，尤其是抗氧化物质(谷胱甘肽、六磷酸肌醇、维生素C、多酚等)，最大限度地保证南瓜芽粉的天然色泽、口感和风味，同时还可起到杀菌作用；特别是：1)经高压静电与冷冻工艺结合，可诱导南瓜籽中抗冻蛋白的合成与富集，且便于南瓜籽破壁，增强通透性；2)经微波瞬时适度杀胚后，在不影响南瓜芽种子的生物活性的情况下，随着水分的吸收，南瓜芽胚被抑制但不影响各项酶及生物活性物质的增长和胚乳的溶解，芽生长很短，呼吸作用弱，发芽损失低，提高了南瓜芽粉的产量和质量，显著提高了南瓜芽粉产品中功能性、营养性、生物活性物质的含量，提高了南瓜芽粉的保健功能(提高人体免疫力、去除人体内氧自由基、降血脂、延缓衰老)、营养价值和食品安全性。制备的南瓜芽发芽率达98％以上，芽长0.2-0.5mm,长度均一，发芽损失仅为1.3-1.8％，比现有发芽工艺损失降低5.2-7.5％，功能性物质含量高，其中γ-氨基丁酸含量为304.8-315.6mg/100g，谷胱甘肽16.5-18.5mg/100g，六磷酸肌醇(IP₆)462.8-485.4mg/100g，膳食纤维3.9-4.4mg/100g。

3.本发明制备的南瓜叶粉是南瓜叶经过超声清洗、漂烫、干燥、低温粉碎而制得，最大限度地保留了南瓜叶中的蛋白质、总黄酮类物质等有效成分，进一步提升了南瓜保健食品的天然风味、营养价值及抗氧化等功能特性。

4.本发明制备的冬黑麦肽是以含有丰富抗冻基质的冬黑麦种子为原料制备的冬黑麦提取物与海藻糖、丝胶肽科学复配而成，不仅可显著提南瓜保健食品的抗冻性，进而大大提高其生物活性、营养性、功能性，而且又增加了的溶解性和稳定性，产生了意想不到的有益效果，特别适合作为南瓜保健食品的抗冻保护剂；其中的冬黑麦提取物将含有丰富抗冻基质的冬黑麦种子经高压静电处理、高压脉冲电场辅助水杨酸诱导、低温分段胁迫处理和自然光照有机结合，使得本身含有抗冻基质的活性种子在外界环境的胁迫和诱导下，抗冻基质成分得到了最全面、最丰富的合成和积累，经富含淀粉酶、糖化酶、蛋白酶、纤维素酶、磷酸酯酶、脂肪酶等多种酶系的啤酒麦芽粉分段酶解后可最大化溶出，同时可使抗冻肽含量增加，提高了冬黑麦提取物的渗透性、溶解性和稳定性，进而消除了因抗冻蛋白造成的南瓜保健食品溶解性差的问题，与钙果纤维粉等其它原料科学复配，效果更佳。

需要说明的是本发明阿根廷奶油南瓜保健食品的技术效果是各组分相互协同、相互作用的结果，并非简单的原料功能的叠加，各原料组分的科学复配和提取，产生的效果远远超过各单一组份功能和效果的叠加，具有较好的先进性和实用性。

具体实施方式

下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。

实施例1原料制备

1.酿酒酵母种子液的制备：

所述摇瓶培养基质量组成为：(NH4)₂SO₄ 6g/L，葡萄糖35g/L，K₂HPO4·3H₂O 3g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，酵母粉11g/L，MnSO₄ 0.1g/L，KCL 0.1g/L，FeSO₄ 0.1g/L，MgSO₄·7H₂O0.1g/L，余量为水，pH 6.0；

所述酿酒酵母菌株具体为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789。

2.南瓜芽粉的制备：

所述南瓜芽粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜籽于电场强度3kV/cm高压静电处理4min；依次在2℃冷藏8h,-5℃冷冻21h,立即放入1.0％的碳酸氢钠溶液中室温浸泡10min,取出,沥干，于4℃静置21h,于频率2450MHz、功率3000W、温度32℃、料层厚度3cm微波干燥7s,然后置温度为35℃、pH值为7的浸泡液中浸泡5h，浸泡液含有质量百分比浓度为0.04％的复合酶，每隔18min通风一次，通风压力0.14MPa，浸泡同时于电场强度12kV/cm，脉冲时间200μs,脉冲频率70Hz条件进行高压脉冲电场处理，直至南瓜籽水分含量为42％；浸泡后的南瓜籽沥干，在发芽室内进行暗发芽，暗发芽温度保持22℃，暗发芽时间为22h，经发芽后的南瓜籽干燥至水分含量为6％，低温粉碎，过100目筛即得南瓜芽粉；

所述复合酶为纤维素酶、β-葡聚糖酶、木聚糖酶按质量比4:2:1.5均匀混合。

3.南瓜叶粉的制备：

所述南瓜叶粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜叶放在装有0.02％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于功率300W、频率25KHz室温超声清洗4min，漂洗，沥干，切断，95℃热水漂烫，取出，立即放在12℃水中冷却，沥干，于55℃热风干燥至叶片水分含量至6％，低温粉碎，过60目筛，然后气流粉碎，过200目筛即得南瓜叶粉。

4.冬黑麦提取物的制备：

所述冬黑麦提取物的制备方法，包括如下步骤：将冬黑麦的种子装盘，首先于电场强度5kV/cm高压静电处理4min；接着在浓度为15mg/L的水杨酸溶液中室温浸泡2h，同时在电场强度4kV/cm，脉冲时间80μs,脉冲频率120Hz条件下进行高压脉冲电场处理；漂洗、沥干，于4℃静置21h,然后依次在2℃冷藏3d,-4℃冷冻2d、-16℃冷冻12h,立即放在室外自然光照6h，使混合料半解冻后立即进行粉碎，粉碎物粒径1.0mm,接着加入粉碎物质量5倍的水，用乳酸调节pH值为6.0；最后加入冬黑麦种子质量20％的啤酒麦芽粉，首先于42℃酶解20min,然后于65℃酶解30min；酶解液过滤、滤液减压浓缩、冷冻干燥、低温粉碎至粒径0.2mm即得冬黑麦提取物。

以下实施例2-6所使用的酿酒酵母种子液、南瓜芽粉、南瓜叶粉、冬黑麦提取物均为实施例1制备。其它均为市购食品级，其中：

1.芦荟凝胶冻干粉：购自南通德福芦荟制品有限公司，产品名称：库拉索芦荟凝胶冻干粉；型号：DFGFDP-200X；乙酰化甘露聚糖(mg/100g)≥7500.0,芦荟多糖(mg/100g)≥8000.0；

2.聚葡萄糖：购自河南金润食品添加剂有限公司，聚葡萄糖含量≥99％；

3.抗性糊精：购自河北百优生物科技有限公司，抗性糊精含量≥99％；

4.β-葡聚糖：购自河南金润食品添加剂有限公司，产品名称：酵母β-葡聚糖，β-葡聚糖含量≥80％；

实施例2

南瓜发酵粉40份，聚葡萄糖10份，南瓜芽粉6份，芦荟凝胶冻干粉4份，南瓜叶粉4份，冬黑麦肽4份，抗性糊精4份，β-葡聚糖3份，低聚糖2份；

所述南瓜发酵粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜清洗，去皮、去籽、去瓤，切片，破碎，加入破碎物质量2倍的水，搅拌均匀，于85℃灭酶、灭菌30min，然后置胶体磨中，调节定子和转子之间的间隙，使出口南瓜汁粒径达到300μm，接着于温度60℃，低压15MPa、高压50MPa二级均质，使出口南瓜汁粒径达到8μm，真空脱气得南瓜原汁；调节南瓜原汁pH值为5，加入其质量0.1％的混合酶，于55℃酶解50min,过滤，向滤液中加入葡萄糖，使葡萄糖浓度为150g/L,于85℃灭酶12min得发酵基质，加入发酵基质质量8％的酿酒酵母种子液进行发酵，通气量5L/min,罐压0.02MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至25h时，一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵22h；发酵液于孔径100μm筛网过滤得最终发酵液，经喷雾干燥即得南瓜发酵粉；

所述最终发酵液中GSH的含量为3308mg/L；

所述最终发酵液中酿酒酵母活菌含量为8×10¹¹cfu/ml；

所述最终发酵液中总糖含量为2g/L；

所述混合酶为纤维素酶、糖化酶、蛋白酶、单宁酶按质量比3:2:1.5:1均匀混合；

所述冬黑麦肽的质量组成为：冬黑麦提取物:海藻糖:丝胶肽＝14:6:2。

制备方法，包括如下步骤：按照配方，首先依次将南瓜发酵粉、南瓜叶粉、南瓜芽粉、冬黑麦肽、芦荟凝胶冻干粉、抗性糊精、β-葡聚糖、低聚糖、聚葡萄糖质量的20％加入V型混合罐均匀混合20min,搅拌转速30r/min,然后加入剩余聚葡萄糖均匀混合30min,搅拌转速50r/min,无菌灌装、密封、包装即得阿根廷奶油南瓜保健食品。

实施例3

南瓜发酵粉30份，聚葡萄糖8份，南瓜芽粉4份，芦荟凝胶冻干粉3份，南瓜叶粉2份，冬黑麦肽2份，抗性糊精2份，β-葡聚糖2份，低聚糖1份；

所述南瓜发酵粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜清洗，去皮、去籽、去瓤，切片，破碎，加入破碎物质量1倍的水，搅拌均匀，于80℃灭酶、灭菌20min，然后置胶体磨中，调节定子和转子之间的间隙，使出口南瓜汁粒径达到200μm，接着于温度50℃，低压10MPa、高压40MPa二级均质，使出口南瓜汁粒径达到10μm，真空脱气得南瓜原汁；调节南瓜原汁pH值为4，加入其质量0.08％的混合酶，于45℃酶解40min,过滤，向滤液中加入葡萄糖，使葡萄糖浓度为100g/L,于80℃灭酶10min得发酵基质，加入发酵基质质量5％的酿酒酵母种子液进行发酵，通气量4L/min,罐压0.01MPa，400rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至20h时，一次性添加终浓度为24mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵20h；发酵液于孔径80μm筛网过滤得最终发酵液，经喷雾干燥即得南瓜发酵粉；

所述最终发酵液中GSH的含量为3298mg/L；

所述最终发酵液中酿酒酵母活菌含量为7×10¹¹cfu/ml；

所述最终发酵液中总糖含量为6g/L；

所述混合酶为纤维素酶、糖化酶、蛋白酶、单宁酶按质量比2:1:1:0.5均匀混合；

所述冬黑麦肽的质量组成为：冬黑麦提取物:海藻糖:丝胶肽＝1:5:1。

制备方法，包括如下步骤：按照配方，首先依次将南瓜发酵粉、南瓜叶粉、南瓜芽粉、冬黑麦肽、芦荟凝胶冻干粉、抗性糊精、β-葡聚糖、低聚糖、聚葡萄糖质量的10％加入V型混合罐均匀混合15min,搅拌转速20r/min,然后加入剩余聚葡萄糖均匀混合20min,搅拌转速40r/min,无菌灌装、密封、包装即得阿根廷奶油南瓜保健食品。

实施例4

南瓜发酵粉50份，聚葡萄糖12份，南瓜芽粉8份，芦荟凝胶冻干粉5份，南瓜叶粉6份，冬黑麦肽6份，抗性糊精6份，β-葡聚糖5份，低聚糖3份；

所述南瓜发酵粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜清洗，去皮、去籽、去瓤，切片，破碎，加入破碎物质量3倍的水，搅拌均匀，于90℃灭酶、灭菌40min，然后置胶体磨中，调节定子和转子之间的间隙，使出口南瓜汁粒径达到400μm，接着于温度70℃，低压20MPa、高压60MPa二级均质，使出口南瓜汁粒径达到2μm，真空脱气得南瓜原汁；调节南瓜原汁pH值为6，加入其质量0.12％的混合酶，于65℃酶解60min,过滤，向滤液中加入葡萄糖，使葡萄糖浓度为200g/L,于90℃灭酶14min得发酵基质，加入发酵基质质量10％的酿酒酵母种子液进行发酵，通气量6L/min,罐压0.03MPa，600rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至30h时，一次性添加终浓度为26mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵24h；发酵液于孔径120μm筛网过滤得最终发酵液，经喷雾干燥即得南瓜发酵粉；

所述最终发酵液中GSH的含量为3302mg/L；

所述最终发酵液中酿酒酵母活菌含量为7×10¹¹cfu/ml；

所述最终发酵液中总糖含量为4g/L；

所述混合酶为纤维素酶、糖化酶、蛋白酶、单宁酶按质量比4:3:2:1.5均匀混合；

所述冬黑麦肽的质量组成为：冬黑麦提取物:海藻糖:丝胶肽＝18:7:3。

制备方法，包括如下步骤：按照配方，首先依次将南瓜发酵粉、南瓜叶粉、南瓜芽粉、冬黑麦肽、芦荟凝胶冻干粉、抗性糊精、β-葡聚糖、低聚糖、聚葡萄糖质量的30％加入V型混合罐均匀混合25min,搅拌转速40r/min,然后加入剩余聚葡萄糖均匀混合40min,搅拌转速60r/min,无菌灌装、密封、包装即得阿根廷奶油南瓜保健食品。

实施例5

南瓜发酵粉30份，聚葡萄糖12份，南瓜芽粉4份，芦荟凝胶冻干粉5份，南瓜叶粉2份，冬黑麦肽6份，抗性糊精2份，β-葡聚糖5份，低聚糖1份；

所述南瓜发酵粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜清洗，去皮、去籽、去瓤，切片，破碎，加入破碎物质量1倍的水，搅拌均匀，于90℃灭酶、灭菌20min，然后置胶体磨中，调节定子和转子之间的间隙，使出口南瓜汁粒径达到400μm，接着于温度50℃，低压20MPa、高压40MPa二级均质，使出口南瓜汁粒径达到10μm，真空脱气得南瓜原汁；调节南瓜原汁pH值为4，加入其质量0.08％的混合酶，于65℃酶解40min,过滤，向滤液中加入葡萄糖，使葡萄糖浓度为200g/L,于80℃灭酶14min得发酵基质，加入发酵基质质量5％的酿酒酵母种子液进行发酵，通气量6L/min,罐压0.01MPa，600rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至20h时，一次性添加终浓度为26mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵20h；发酵液于孔径120μm筛网过滤得最终发酵液，经喷雾干燥即得南瓜发酵粉；

所述最终发酵液中GSH的含量为3268mg/L；

所述最终发酵液中酿酒酵母活菌含量为6×10¹¹cfu/ml；

所述最终发酵液中总糖含量为10g/L；

所述混合酶为纤维素酶、糖化酶、蛋白酶、单宁酶按质量比2:3:1:1.5均匀混合；

所述冬黑麦肽的质量组成为：冬黑麦提取物:海藻糖:丝胶肽＝10:7:1。

制备方法，包括如下步骤：按照配方，首先依次将南瓜发酵粉、南瓜叶粉、南瓜芽粉、冬黑麦肽、芦荟凝胶冻干粉、抗性糊精、β-葡聚糖、低聚糖、聚葡萄糖质量的10％加入V型混合罐均匀混合25min,搅拌转速20r/min,然后加入剩余聚葡萄糖均匀混合40min,搅拌转速40r/min,无菌灌装、密封、包装即得阿根廷奶油南瓜保健食品。

实施例6

南瓜发酵粉50份，聚葡萄糖8份，南瓜芽粉8份，芦荟凝胶冻干粉3份，南瓜叶粉6份，冬黑麦肽2份，抗性糊精6份，β-葡聚糖2份，低聚糖3份；

所述南瓜发酵粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜清洗，去皮、去籽、去瓤，切片，破碎，加入破碎物质量3倍的水，搅拌均匀，于80℃灭酶、灭菌40min，然后置胶体磨中，调节定子和转子之间的间隙，使出口南瓜汁粒径达到200μm，接着于温度70℃，低压10MPa、高压60MPa二级均质，使出口南瓜汁粒径达到2μm，真空脱气得南瓜原汁；调节南瓜原汁pH值为6，加入其质量0.12％的混合酶，于45℃酶解60min,过滤，向滤液中加入葡萄糖，使葡萄糖浓度为100g/L,于90℃灭酶10min得发酵基质，加入发酵基质质量10％的酿酒酵母种子液进行发酵，通气量4L/min,罐压0.03MPa，400rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至30h时，一次性添加终浓度为24mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵24h；发酵液于孔径80μm筛网过滤得最终发酵液，经喷雾干燥即得南瓜发酵粉；

所述最终发酵液中GSH的含量为3275mg/L；

所述最终发酵液中酿酒酵母活菌含量为6.5×10¹¹cfu/ml；

所述最终发酵液中总糖含量为8g/L；

所述混合酶为纤维素酶、糖化酶、蛋白酶、单宁酶按质量比4:1:2:0.5均匀混合；

所述冬黑麦肽的质量组成为：冬黑麦提取物:海藻糖:丝胶肽＝18:5:3。

制备方法，包括如下步骤：按照配方，首先依次将南瓜发酵粉、南瓜叶粉、南瓜芽粉、冬黑麦肽、芦荟凝胶冻干粉、抗性糊精、β-葡聚糖、低聚糖、聚葡萄糖质量的30％加入V型混合罐均匀混合15min,搅拌转速40r/min,然后加入剩余聚葡萄糖均匀混合20min,搅拌转速60r/min,无菌灌装、密封、包装即得阿根廷奶油南瓜保健食品。

实施例7南瓜保健食品的消化吸收率以及增重的性能试验

选择4周龄雄性，平均体重为20g昆明种小鼠，随机分为实验组、对照组A、对照组B和氯化钠对照组。实验组为本发明实施例2制备的的阿根廷奶油南瓜保健食品；对照组A和B为市售普通阿根廷奶油南瓜保健食品；

小鼠每组10只。各组动物均用代谢笼单笼词养。实验小鼠于第1天9：00开始禁食不禁水，12h后进行灌胃，正常对照组和实验组动物分别用配好的浓度为0.1g/ml的阿根廷奶油南瓜保健食品，每次1mL，每8h灌胃一次，连续4次。氯化钠对照组小鼠每次只给予相同剂量的氯化钠。收集各组小鼠类便并称量湿重和干重，计算粪便含水量和食物消化吸收率。

其中第二次灌胃后1h后，三组小鼠均给予30％D-木糖溶液0.5mL灌胃，1h后采用眼球后静脉丛取血法取血200μL，1500r/min离心10min，吸取上层血清备用，检测D-木糖含量。

计算食物消化吸收率：

实验组、对照组A和对照组B样品浓度为0.1g/ml，每次灌胃1mL，共灌胃4次，每只小鼠的样品摄入量为0.4g。

按以下公式计算样品吸收率：

D-木糖的含量:采用间苯三酷法检测血清中D-木糖含量。

表1空腹小鼠对南瓜保健食品的吸收率

由本次实验空腹小鼠对南瓜保健食品的消化吸收率检测结果可见，实验组、对照组A和对照组B的小鼠摄入样品的量是相同的，实验组小鼠的消化吸收率明显高于对照组A和对照组B，达到88.75％，而普通南瓜保健食品的消化吸收率却仅有53.75％和74.50％，表明本发明阿根廷奶油南瓜保健食品含有大量生物活性物质、消化酶、益生菌和益生因子，可促进营养物质的消化和吸收，更容易被机体消化吸收，具有十分显著的易消化吸收的特点。

表2小鼠增重情况

从体重更可以看出，较对照组A和B，实验组的小鼠体重有明显的升高，与初始体重20.03g相比提高了3.82g，平均增长率为24.06％。

需要说明的是：本发明实施例3-6制备的阿根廷奶油南瓜保健食品同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。

实施例8南瓜保健食品降血糖性能测试

1.模型制造

预选ICR雄性小鼠68只(18～24g)。其中10只作空白对照,其余58只禁食16h后,经腹腔注射2％四氧嘧啶(190mg/kg),在低血糖时相给20％葡萄糖作饮用水。72h后选用空腹血糖≥13.0mmol/L 30只。随机分成模型对照及南瓜保健食品实验组(高低剂量)3组,每组10只。

2实验设计

实验组1、2、3分别为1：市售的普通南瓜保健食品；2：市售的超细南瓜保健食品；3：本发明实施例2制备的阿根廷奶油南瓜保健食品。

实验组按南瓜保健食品质量10g/kg用水溶解并定容至20ml进行灌胃,每日一次,不足部分喂鼠料,空白对照组按常规饲养。分别测定空腹血糖、餐后血溏:考察给药时间与降糖作用的关系；观察饮水量与排尿量、排便量变化等项目。50d后解剖,取眼眶血测胰岛素水平。

3血糖变化

用南瓜保健食品饲料喂养15d后测空腹及餐后血糖。空腹血糖测定前禁食12h,与0d比较,计算下降百分率,数据如表3。餐后血糖测定在给饲料3h后进行。

实验数据表明南瓜保健食品本身均具有降低血糖的作用，但相比于空白对照组以及实验组1和实验组2，实验组3在降低空腹血糖方面有显著作用，更显著有利于餐后血糖的改善。

表3小鼠血糖变化情况

4胰岛素水平测定

实验进行50d后,禁食12h,眼框取血,用放免法测定胰岛素水平,空白对照组,实验组1，实验组2，实验组3分别为18.97±12.54，21.78±4.83，24.67±11.73mmol/L，34.45±6.76mmol/L。实验组3胰岛素水平与实验组1以及实验组2相比有显著性差别,P<0.01。表明本发明的阿根廷奶油南瓜保健食品具有有效刺激胰岛素分泌功能。

实施例9南瓜保健食品抗氧化性能测试

实验采用Fenton反应体系。在试管中加入6mmol/L FeSO₄ 2mL，不同浓度V_C或待测溶液2mL，6mmol/L H₂O₂溶液2mL，摇匀，静置10min，再加入6mmol/L水杨酸-乙醇2mL反应，37℃温浴30min，于510nm测吸光值。

清除率s＝[A₀-(A_i-A_{i O})]/A₀×100％

式中：A₀为对照,不加南瓜保健食品；A_i为某浓度时的吸光值；A_{i O}为无显色剂时的该浓度的本底值。

表4为对照品VC，市售南瓜保健食品以及本发明实施例2制备的阿根廷奶油南瓜保健食品冲液对羟自由基的清除率的对照表

表4羟自由基的清除率的对照表

数据表明，本发明的阿根廷奶油南瓜保健食品对羟自由基的清除能力显著。且随着浓度的增加而增大。当浓度为16mg/mL时，清除率可达到96.88％，较市售的南瓜保健食品的清除率显著提高了18.18％，故本发明的阿根廷奶油南瓜保健食品具有很强的抗氧化功能。这加大了南瓜的食用和药用价值，更为今后南瓜产品的深加工指明了方向，并提供了可靠的参考。

实验例10食用南瓜保健食品后总胆固醇的变化

选总胆固醇180mg/dl-250mg/dl的成年人50名，男女各半，随机分成三组；第一组每天晚餐饮用100ml氯化钠；第二组每天晚餐冲饮普通市售南瓜保健食品100g，第三组每天晚餐冲饮本发明实施例2制备的阿根廷奶油南瓜保健食品100g，期间每天食用同样的食物，食物包括肉150g、蛋80g、牛奶250ml、蔬菜和水果各200g。分别在实验开始的前一天和第10、20、30天采集试验者的血液，测定血液中的总胆固醇含量，结果如表5：

表5血液中总胆固醇含量检测结果

由上表可知冲饮本发明阿根廷奶油南瓜保健食品后，成年人血液中的总胆固醇的含量发生明显变化。与普通市售南瓜保健食品相比，本发明阿根廷奶油南瓜保健食品对成年人血液中的总胆固醇的含量明显的降低，其下降率为市售的6倍以上，而氯化钠组成年人血液中的总胆固醇的含量明显的增加，市售南瓜保健食品虽然有所降低，但与本发明产品相比，效果不显著，由此可知，本发明阿根廷奶油南瓜保健食品具有显著的降低胆固醇的保健效果。

实施例11南瓜保健食品的感官品评试验

邀请50名人员对本发明阿根廷奶油南瓜保健食品与市售两种同类相同生产日期的南瓜保健食品进行品评，感官打分，其中专业和非专业人员各25名，男女各半；打分包括外观(20分)、质地(25分)、风味(30分)、口感(25分)四个方面，打分人员独立进行，互不影响，以保证品评结果准确。对品评结果进行了统计，均分值取近似值，保留整数，具体见表6：

表6感官品评统计结果

注：同一行内标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，标不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)，标有相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。

以上结果表明，本发明制备的阿根廷奶油南瓜保健食品从外观、质地、风味和口感任何一方面都要明显优于市售南瓜保健食品，特别是外观、风味和口感极好，同时也适合不同年龄段、不同消费层次的消费者食用。

实施例12南瓜保健食品的生物活性(稳定性)试验

将本发明实施例2制备的阿根廷奶油南瓜保健食品与市售相同生产日期的粉状蛋白酶分别于-12℃和40℃条件下储存12个月，采用《GB/T23527-2009中华人民共和国国家标准蛋白酶制剂》中检测方法测定阿根廷奶油南瓜保健食品和蛋白酶的酶活力，计算酶活损失率，酶活损失率是指实际检测的酶活力与产品标注酶活力的差值占标注酶活力的百分率，结果如表7

表7储存期酶活力损失率

以上结果表明，在-12℃和40℃条件下储存12个月，本发明阿根廷奶油南瓜保健食品与市售相比，其蛋白酶酶活损失分别降低45％和16.9％，具有优良的温度储存性，酶活力非常稳定，同时也说明本发明阿根廷奶油南瓜保健食品含有的其它生物活性物质的损失率极低，具有较好的抗冻、抗热性能，产品质量稳定，保质期长。

实施例13高糖条件下酿酒酵母tlj2016发酵产GSH能力实验

(1)摇瓶培养

取tlj2016斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得种子液；

(2)5L发酵罐培养

将种子液按10％接种量，接入装有3L发酵培养基的发酵罐中，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至30h时，一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，总发酵时间为50h；

所述发酵培养基质量组成为：(NH₄)₂SO₄ 10g/L，葡萄糖100g/L，K₂HPO₄·3H₂O 8g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，酵母粉11g/L，MnSO₄ 0.1g/L，KCL 0.1g/L，FeSO4 0.1g/L，MgSO₄·7H₂O0.1g/L，余量为水，pH6.0；

发酵结束后，测定发酵液中GSH的含量为3308mg/L.

实施例14酿酒酵母tlj2016L-半胱氨酸耐受力实验

将出发菌株以及tlj2016斜面菌种各一环，分别接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养进行培养，在培养至12h时，向摇瓶中加入不同终浓度的L-半胱氨酸，再培养10h，测定细胞干重，结果表8、9；

摇瓶培养基(g/L)：(NH₄)₂SO₄ 6、葡萄糖20、K₂HPO₄·3H₂O 3、KH₂PO₄ 0.5、酵母粉11、MnSO₄ 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO₄·7H₂O 0.1，pH6.0；

表8：出发菌株L-半胱氨酸耐受力

L-半胱氨酸浓度mmol/L	0	5	10	15	20	40
							出发菌株干重g/L	22.6	15.7	10.2	4.3	2.2	0.8
GSH浓度(mg/L)	35.6	46.7	43.2	40.7	37.9	25.3

表9 tlj2016L-半胱氨酸耐受力

L-半胱氨酸浓度mmol/L	0	5	10	15	20	40
							tlj2016干重g/L	25.7	28.5	23.6	21.2	20.6	18.7
GSH浓度(mg/L)	73.2	98.3	113.5	121.7	127.5	135.8

从表10、11的结果可以看出，对于出发菌株，培养基中添加L-半胱氨酸，细胞停止生长，并且开始自溶，导致GSH增长率随着L-半胱氨酸浓度的升高而降低；而低浓度L-半胱氨酸下，tlj2016仍能够缓慢生长，随着L-半胱氨酸浓度的提高，tlj2016菌株的细胞干重缓慢下降，而GSH浓度持续增长，这一结果将有利于GSH生产过程中通过添加前体氨基酸-L-半胱氨酸提促进GSH的生产。

实施例15酿酒酵母tlj2016耐盐能力实验

取tlj2016菌液1mL接种菌种于含有不同NaCl浓度的(含量梯度为0％、2％、5％、10％、15％、18％)的10mL YPD液体培养基(pH＝6.5)，置于30℃下分别培养24h，每个处理3个重复。各取1ml样品菌液于9ml生理盐水中混匀，制备稀释度溶液，取0.1ml稀释液于YPD固体平板中涂布，于30℃生化培养箱中倒置培养36小时(每个稀释度做3个平行)记录计算平板上的菌数个数。结果见表10，可知该菌的耐盐浓度为18％，说明酿酒酵母tlj2016不仅可以在常规环境中生存，在高盐条件下依然具有活力，可应用于酱油、腌制品等高盐食品加工过程中耗糖产谷胱甘肽。

表10 耐盐能力检测(×10⁷cfu/ml)

Claims

1.一种阿根廷奶油南瓜保健食品，主要由以下重量份数的原料制备：南瓜发酵粉30-50份，聚葡萄糖8-12份，南瓜芽粉4-8份，芦荟凝胶冻干粉3-5份，南瓜叶粉2-6份，冬黑麦肽2-6份，抗性糊精2-6份，β-葡聚糖2-5份，低聚糖1-3份；

所述南瓜发酵粉是以南瓜为原料，经清洗，去皮、去籽、去瓤，破碎、胶磨、二级均质、真空脱气、酶解得发酵基质，然后向其中加入酿酒酵母进行发酵、喷雾干燥而制得；

所述酿酒酵母菌株具体为酿酒酵母tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789。

2.如权利要求1所述的阿根廷奶油南瓜保健食品，其特征在于：所述南瓜发酵粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜清洗，去皮、去籽、去瓤，切片，破碎，加入破碎物质量1-3倍的水，搅拌均匀，于80-90℃灭酶、灭菌20-40min，然后置胶体磨中，调节定子和转子之间的间隙，使出口南瓜汁粒径达到200-400μm，接着于温度50-70℃，低压10-20MPa、高压40-60MPa二级均质，使出口南瓜汁粒径达到2-10μm，真空脱气得南瓜原汁；调节南瓜原汁pH值为4-6，加入其质量0.08-0.12％的混合酶，于45-65℃酶解40-60min,过滤，向滤液中加入葡萄糖，使葡萄糖浓度为100-200g/L,于80-90℃灭酶10-14min得发酵基质，加入发酵基质质量5-10％的酿酒酵母种子液进行发酵，通气量4-6L/min,罐压0.01-0.03MPa，400-600rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至20-30h时，一次性添加终浓度为24-26mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵20-24h；发酵液于孔径80-120μm筛网过滤得最终发酵液，经喷雾干燥即得南瓜发酵粉；

所述混合酶为纤维素酶、糖化酶、蛋白酶、单宁酶按质量比2-4:1-3:1-2:0.5-1.5均匀混合。

3.如权利要求2所述的阿根廷奶油南瓜保健食品，其特征在于：所述最终发酵液中GSH的含量为3268-3308mg/L；酿酒酵母活菌含量为6×10¹¹-8×10¹¹cfu/ml。

4.如权利要求2所述的阿根廷奶油南瓜保健食品，其特征在于：所述最终发酵液中总糖含量为2-10g/L。

5.如权利要求2所述的阿根廷奶油南瓜保健食品，其特征在于：所述酿酒酵母种子液培养条件：取酿酒酵母斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得酿酒酵母种子液；

所述摇瓶培养基质量组成为：(NH₄)₂SO₄ 6g/L，葡萄糖35g/L，K₂HPO₄·3H₂O 3g/L，KH₂PO₄0.5g/L，酵母粉11g/L，MnSO₄ 0.1g/L，KCL 0.1g/L，FeSO₄ 0.1g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1g/L，余量为水，pH 6.0。

6.如权利要求1所述的阿根廷奶油南瓜保健食品，其特征在于：所述南瓜芽粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜籽于电场强度2-4kV/cm高压静电处理3-5min；依次在1-3℃冷藏6-10h,-4--6℃冷冻18-24h,立即放入0.8-1.2％的碳酸氢钠溶液中室温浸泡8-12min,取出,沥干，于3-5℃静置18-24h,于频率2450MHz、功率3000W、温度30-34℃、料层厚度2-4cm微波干燥5-9s,然后置温度为33-36℃、pH值为6-8的浸泡液中浸泡4-6h，浸泡液含有质量百分比浓度为0.03-0.05％的复合酶，每隔15-20min通风一次，通风压力0.13-0.15MPa，浸泡同时于电场强度10-15kV/cm，脉冲时间100-300μs,脉冲频率60-80Hz条件进行高压脉冲电场处理，直至南瓜籽水分含量为40-45％；浸泡后的南瓜籽沥干，在发芽室内进行暗发芽，暗发芽温度保持20-24℃，暗发芽时间为20-24h，经发芽后的南瓜籽干燥至水分含量为5-8％，低温粉碎，过80-100目筛即得南瓜芽粉；

7.如权利要求1所述的阿根廷奶油南瓜保健食品，其特征在于：所述南瓜叶粉的制备方法，包括如下步骤：将南瓜叶放在装有0.01-0.03％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于功率200-400W、频率20-30KHz室温超声清洗3-5min，漂洗，沥干，切断，95℃热水漂烫，取出，立即放在10-14℃水中冷却，沥干，于40-60℃热风干燥至叶片水分含量至4-8％，低温粉碎，过60目筛，然后气流粉碎，过200目筛即得南瓜叶粉。

8.如权利要求1所述的阿根廷奶油南瓜保健食品，其特征在于：所述冬黑麦肽的质量组成为：冬黑麦提取物:海藻糖:丝胶肽＝10-18:5-7:1-3。

9.如权利要求8所述的阿根廷奶油南瓜保健食品，其特征在于：所述冬黑麦提取物的制备方法，包括如下步骤：将冬黑麦的种子装盘，首先于电场强度4-6kV/cm高压静电处理3-5min；接着在浓度为12-18mg/L的水杨酸溶液中室温浸泡1-3h，同时在电场强度2-6kV/cm，脉冲时间50-100μs,脉冲频率100-150Hz条件下进行高压脉冲电场处理；漂洗、沥干，于3-5℃静置18-24h,然后依次在1-3℃冷藏2-4d,-3--5℃冷冻1-3d、-15--18℃冷冻10-15h,立即放在室外自然光照5-7h，使混合料半解冻后立即进行粉碎，粉碎物粒径0.5-1.5mm,接着加入粉碎物质量4-6倍的水，用乳酸调节pH值为5.8-6.2；最后加入冬黑麦种子质量10-30％的啤酒麦芽粉，首先于35-50℃酶解10-30min,然后于60-70℃酶解20-40min；酶解液过滤、滤液减压浓缩、冷冻干燥、低温粉碎至粒径0.1-0.3mm即得冬黑麦提取物。

10.如权利要求1-9任一所述阿根廷奶油南瓜保健食品的制备方法，包括如下步骤：按照配方，首先依次将南瓜发酵粉、南瓜叶粉、南瓜芽粉、冬黑麦肽、芦荟凝胶冻干粉、抗性糊精、β-葡聚糖、低聚糖、聚葡萄糖质量的10-30％加入V型混合罐均匀混合15-25min,搅拌转速20-40r/min,然后加入剩余聚葡萄糖均匀混合20-40min,搅拌转速40-60r/min,无菌灌装、密封、包装即得阿根廷奶油南瓜保健食品。