CN106666707B - 方格星虫抗氧化提取物的制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及方格星虫抗氧化提取物的制备方法和用途，所述方法是采用乙醇提取，乙酸乙酯和水两相萃取，然后减压浓缩得到抗氧化活性的提取物，最后模拟化学体系产生自由基检测其抗氧化活性。本发明采用方格星虫活体和废弃的方格星虫体腔液制备抗氧化活性物质，提高方格星虫的附加值，变废为宝，是一种绿色产业；且工艺较为简单，无需较大设备投资，非常适合于大规模产业化生产，为下一步开发学系列方格星虫功能性食品打下基础。所制备的抗氧化活性物质适用于食品抗氧化剂、功能性食品和医药行业。
Description
技术领域
本发明涉及方格星虫抗氧化提取物的制备方法和用途，属于海洋活性物质提取技术领域。
背景技术
方格星虫是海洋渔业资源中具有重要经济价值的生物资源。目前，国外主要对方格星虫进行代谢生理、生态特征等的研究，对方格星虫药用价值的研究较少。国内主要对其进行繁殖生物学及食用功效的研究，对其药用价值的研究主要以粗提物、多糖及多肽的研究为主，药理活性主要集中在抗疲劳、抗氧化、提高免疫力、抗辐射、延缓衰老、抗病毒活性、护肝作用、提高记忆力等方面。在方格星虫中含有清除自由基的抗氧化成份，自由基是一类能与生物膜脂质、蛋白质、酶、DNA等生物大分子相互作用，并引起机体氧化损伤的物质，机体过量的自由基与衰老、肿瘤、心血管疾病、免疫功能低下等很多退行性疾病的发生关系密切，因此，寻找天然、无毒、高效的抗氧化活性成分，对维持健康、延缓衰老具有重要作用，现已成为多个学科领域的研究重点。但遗憾的是在现有技术中，未有针对方格星虫水层中的抗氧化成份的提取方法披露，也没有方格星虫水层中抗氧化成份的应用报道，本发明的意义就在于寻找一种方格星虫抗氧化水层的提取方法及提取物的应用。
发明内容
本发明的目的在于提供方格星虫抗氧化提取物的制备方法，本发明的另一目的在于提供方格星虫抗氧化提取物的用途，克服目前对方格星虫抗氧化成份研究中所存在的不足。
为实现上述目的，本发明采取了下述技术方案：方格星虫抗氧化提取物的制备方法，主要技术步骤是：
(1)方格星虫初加工：取鲜活成熟方格星虫个体，翻转其体壁后，于烘箱中60-80℃烘干至含水量15-20％，粉碎为粒径是0.3-0.5厘米的粗粒，按照1:2-1:4的重量比加入90％-99％的乙醇浸泡，备用；另取加工废弃的鲜方格星虫体腔液，按照1:1-1:4的重量比，加入90％-99％乙醇浸泡，并混合均匀备用。
(2)从方格星虫中提取醇溶性提取物：室温条件下，采用40KHz超声提取的方法，对方格星虫粗粒和体腔液浸泡提取，每次0.5-1h，共提取3-6次；收集合并方格星虫乙醇提取液，用极速滤纸过滤2-4次，然后用旋转蒸发仪和蒸发工作站减压浓缩，将滤液在45-55℃、100–300hPa大气压下，减压浓缩至40℃热测时相对密度是1.2-1.3，得到方格星虫乙醇浸膏。
(3)制备方格星虫水相萃取物：以1：6.8-7.2的重量比，于方格星虫乙醇浸膏中加入蒸馏水并充分混悬，然后用等体积的乙酸乙酯萃取，常温萃取3-6次，得到乙酸乙酯和水相萃取液；水相萃取液经旋转蒸发仪和蒸发工作站减压浓缩，45-55℃、100–300hPa大气压减压浓缩至40℃热测时相对密度是1.2-1.3，得到方格星虫抗氧化提取物。
(4)抗氧化活性检测：通过模拟化学体系产生自由基，取所述方格星虫抗氧化提取物利用各种方法检测对自由基的清除率，结果是除了还原力略弱于VC，清除DPPH·(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)的效果是VC的两倍，清除·OH的作用是VC的三倍，其抗氧化活性显著。
采取上述措施的本发明，具有以下突出优点和效果：(1)本发明应用方格星虫体壁的同时，采用方格星虫加工产业的副产品——方格星虫体腔液为原料制备抗氧化的活性物质，变废为宝，是一种绿色产业：且工艺较为简单，无需较大设备投资，非常适合于大规模产业化生产，为下一步开发出系列方格星虫功能性食品打下基础；(2)本发明所制备的方格星虫抗氧化提取物，经各种自由基清除作用检测，抗氧化作用如下表所示：
表1 方格星虫抗氧化提取物的抗氧化作用
提示本发明的方格星虫抗化提取物具有较强的抗氧化作用，能用于清除人体自由基，能作为制备抗氧化药品或食品的应用。
具体实施方式
本发明通过以下实施例进一步详述，但本实施例所叙述的技术内容是说明性的，而不是限定性的，不应该以此来局限本发明的保护范围。
实施例1
方格星虫抗氧化提取物制备：
(1)方格星虫初加工
取鲜活方格星虫S.nudus 29斤，洗净，翻转其体壁后，将体壁于烘箱中70℃烘干得到含水量为20％的干燥方格星虫，粉碎为粒径0.5厘米的粗粒，加入3公斤95％乙醇浸泡，备用；另收集方格星虫体腔液2公斤，加入3公斤95％乙醇浸泡，并混合均匀备用；
(2)方格星虫乙醇浸膏的制备
室温条件下，采用40KHz超声提取的方法，对方格星虫粗粒和体腔液进行提取，每次0.5-1h，共提取3-6次；取方格星虫乙醇提取液用极速滤纸过滤两次，然后用旋转蒸发仪和蒸发工作站减压浓缩滤液，将滤液在45-55℃、100–300hPa大气压下，减压浓缩至40℃热测时相对密度是1.2-1.3，得到方格星虫乙醇浸膏；
(3)方格星虫抗氧化提取物的制备
取方格星虫乙醇浸膏323.4g，用500毫升水分散后，用600毫升乙酸乙酯萃取，常温震荡萃取4次；在45-55℃、100–300hPa大气压下，萃取液经旋转蒸发仪和蒸发工作站减压浓缩，至40℃热测时相对密度是1.2-1.3，得到方格星虫抗氧化提取物(234.9g)。
实施例2
(1)方格星虫抗氧化提取物还原力检测：
取不同浓度的样品0.5mL，分别加入1.25mL PBS(0.2mol/L，PH＝6.6)和K3Fe(CN)6(1％，g/mL)，混匀，于50℃反应20min后快速冷却，加入1.25mL 10％的三氯乙酸，混匀，于3000r/min离心10min，取上清液5.0mL，加蒸馏水4.0mL，及FeCl3(0.1％，m/v)溶液1mL，混匀，10min后于1cm比色皿中700nm处测定吸光度。以VC为阳性对照，每个测定对象平行测定3次，取平均值。
(2)方格星虫水层对DPPH·(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)的清除作用：
取不同浓度的样品2mL，加入2mL DPPH乙醇溶液(0.14mmol/L)，混匀后在室温下避光反应20min，于517nm处测定吸光度A1；以无水乙醇代替样品为空白体系，其吸光度为A0；以无水乙醇代替DPPH自由基作为对照体系，其吸光度为A2。同时以VC为对照，按以下公式计算清除率
(3)方格星虫水层对·OH的清除作用
向25mL容量瓶中依次加入7.5mmol/mL邻二氮菲溶液1.0mL，PBS(pH7.4)5.0mL，7.5mmol/mL FeSO4溶液1.0mL，一定量的抗氧化剂溶液(损伤管及未损伤不加提取液)，体积分数为0.1％H2O2 1.0mL(未损伤管不加)，以蒸馏水定容，暗处放置60min，在536nm处测吸光度。以上每加一次试剂均需混匀。同时以VC为对照。羟自由基清除率计算按下列公式
Claims (1)
1.方格星虫抗氧化提取物的制备方法，其特征在于所述制备方法的主要技术步骤是：
（1）方格星虫初加工：取鲜活成熟方格星虫个体，翻转其体壁后，于烘箱中60-80℃烘干至含水量15-20%，粉碎为粒径是0.3-0.5厘米的粗粒，按照1:2-1:4的重量比加入90%-99%乙醇浸泡，备用；取加工废弃的新鲜方格星虫体腔液，按照1:1-1:4的重量比，加入90%-99%的乙醇，并混合均匀备用；
（2）从方格星虫中提取醇溶性提取物：室温条件下，采用40KHz超声提取的方法，对方格星虫粗粒和体腔液浸泡提取，每次0.5-1 h，共提取3-6次；收集合并方格星虫乙醇提取液，用极速滤纸过滤2-4次，然后用旋转蒸发仪和蒸发工作站减压浓缩，将滤液在45-55℃、100–300hPa大气压下，将滤液减压浓缩至40℃热测时相对密度是1.2-1.3，得到方格星虫乙醇浸膏；
（3）制备方格星虫水相萃取物：以1：6.8-7.2的重量比，于方格星虫乙醇浸膏中加入蒸馏水并充分混悬，然后用等体积的乙酸乙酯萃取，常温萃取3-6次，得到乙酸乙酯和水相萃取液，水相萃取液经旋转蒸发仪和蒸发工作站减压浓缩，100–300 hPa大气压减压浓缩至40℃ 热测时相对密度是 1.2-1.3，得到方格星虫抗氧化提取物。
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Address after: 536000 No. 92 Changqing East Road, Beihai City, Guangxi Zhuang Autonomous Region Patentee after: Guangxi Ocean Research Institute Co.,Ltd. Address before: No. 92, Changqing East Road, Haicheng District, Beihai City, Guangxi Zhuang Autonomous Region Patentee before: GUANGXI ZHUANG AUTONOMOUS REGION INSTITUTE OF OCEANOLOGY |
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