CN106901377B - 一种含麦角甾醇的钙片及其制备方法 - Google Patents
一种含麦角甾醇的钙片及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106901377B CN106901377B CN201710144448.4A CN201710144448A CN106901377B CN 106901377 B CN106901377 B CN 106901377B CN 201710144448 A CN201710144448 A CN 201710144448A CN 106901377 B CN106901377 B CN 106901377B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ergosterol
- drying
- saccharomyces cerevisiae
- calcium
- substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 59
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 59
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 59
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 title claims abstract description 59
- DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H](CC[C@]3([C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N 0.000 title claims abstract description 59
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 43
- 239000011575 calcium Substances 0.000 title claims abstract description 43
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 43
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 33
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims abstract description 33
- 230000005684 electric field Effects 0.000 claims abstract description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 18
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 12
- GRTOGORTSDXSFK-XJTZBENFSA-N ajmalicine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN3C[C@@H]4[C@H](C)OC=C([C@H]4C[C@H]33)C(=O)OC)=C3NC2=C1 GRTOGORTSDXSFK-XJTZBENFSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229940057070 sugarcane extract Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000010441 alabaster Substances 0.000 claims abstract description 3
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 14
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 14
- 241001052560 Thallis Species 0.000 claims description 10
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 10
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 9
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 9
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 8
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 8
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 5
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 abstract description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 abstract description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N Vitamin D2 Natural products C1CCC2(C)C(C(C)C=CC(C)C(C)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 229960002061 ergocalciferol Drugs 0.000 description 4
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N vitamin D2 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N 0.000 description 4
- 235000001892 vitamin D2 Nutrition 0.000 description 4
- 239000011653 vitamin D2 Substances 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229940069978 calcium supplement Drugs 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SATHPVQTSSUFFW-UHFFFAOYSA-N 4-[6-[(3,5-dihydroxy-4-methoxyoxan-2-yl)oxymethyl]-3,5-dihydroxy-4-methoxyoxan-2-yl]oxy-2-(hydroxymethyl)-6-methyloxane-3,5-diol Chemical compound OC1C(OC)C(O)COC1OCC1C(O)C(OC)C(O)C(OC2C(C(CO)OC(C)C2O)O)O1 SATHPVQTSSUFFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000001904 Arabinogalactan Substances 0.000 description 1
- 229920000189 Arabinogalactan Polymers 0.000 description 1
- 206010006956 Calcium deficiency Diseases 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 235000019312 arabinogalactan Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000013064 chemical raw material Substances 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000007222 ypd medium Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/20—Preparation of steroids containing heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种含麦角甾醇的钙片及其制备方法。本发明通过用优化培养基对酿酒酵母进行好氧发酵培养，提高酿酒酵母对麦角甾醇的表达量；然后将酵母发酵液进行固液分离，得到的上清液冷冻干燥，得到物质I；得到的菌体用生理盐水稀释后通过脉冲电场作用，固液分离，得到的上清液冷冻干燥，得到物质II；将物质I和物质II合并，得到物质A；将物质A、阿拉乳钙、全脂奶粉、麦芽糊精和甘蔗提取物混合均匀，得到混合料；再用水溶解混合料，喷雾干燥，制粒，干燥，整粒、压片，得到含麦角甾醇的钙片。本发明提供的含麦角甾醇的钙片不仅有利于钙的吸收，而且能有效增强人体免疫力。
Description
技术领域
本发明属于保健食品技术领域，特别涉及一种含麦角甾醇的钙片及其制备方法。
背景技术
麦角甾醇又称麦角固醇，是脂溶性维生素D2的前体，当受到紫外线照射时可转化为维生素D2，麦角甾醇可部分代替维生素D2的作用，促进钙吸收。麦角甾醇可以增强人体抵抗疾病的能力具有明显的抑菌、抗肿瘤旧功效。麦角甾醇也可以作为重要的医药化工原科，用于生产“可的松”、“激素黄体酮”等甾醇类药物。
钙质对各年龄组的人群都具有重要营养作用，是人体内最重要的矿物质之一。根据卫生部研究资料表明，我国有40％的儿童和60％的中老年缺钙，但市面现有的补钙产品大多价格昂贵，口味较差，且补钙效果和产品吸收率也有待验证。
目前，人们仍然期望获得一种更为天然、口感更好、更有利于钙吸收的钙片。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种含麦角甾醇的钙片的制备方法。
本发明的另一目的在于提供通过上述制备方法得到的含麦角甾醇的钙片。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种含麦角甾醇的钙片的制备方法，包含以下步骤：
(1)酿酒酵母的培养：用优化培养基对酿酒酵母进行好氧发酵培养，得到酿酒酵母菌液；
优化培养基的组成如下：1％(w/v)酵母膏、2％(w/v)蛋白胨、2％(w/v)葡萄糖、10％(v/v)乙醇，1～3％(w/v)NaCl、0～0.01mol/ml Mg2+、0～0.01mol/ml Ca2+、0～0.01mol/ml Fe3+、0～0.01mol/ml NH4 +、0～0.01mol/ml Al3+、0～0.01mol/ml K+；
(2)含麦角甾醇的提取：
①将步骤(1)获得的酿酒酵母菌液进行固液分离，分别得到发酵上清和菌体；
②发酵上清冷冻干燥，得到固体物质I；
③将菌体用无菌去离子清洗后，再用生理盐水稀释菌体，得到的菌体悬浮液通过脉冲电场破碎细胞，进行固液分离，取上清；将上清进行冷冻干燥，得到固体物质II；
④将固体物质I和固体物质II合并，得到固体物质A；
(3)含麦角甾醇的钙片的制备：将固体物质A50质量份、阿拉乳钙50质量份、全脂奶粉80质量份、麦芽糊精50质量份和甘蔗提取物20质量份混合均匀，得到混合料；再用水溶解混合料，喷雾干燥，制粒，干燥，整粒、压片，得到含麦角甾醇的钙片。
步骤(1)中所述的酿酒酵母优选为酿酒酵母GIM 2.182。
步骤(1)中所述的好氧发酵培养的条件优选为于25～30℃、100～200rpm条件下振荡培养。
步骤(1)中所述的优化培养基的组成优选如下：1％(w/v)酵母膏、2％(w/v)蛋白胨、2％(w/v)葡萄糖、10％(v/v)乙醇，2％(w/v)NaCl、0.01mol/ml Mg2+。
步骤(2)①和③中所述的固液分离的方式优选为离心。
所述的离心的条件优选为3000r/min离心15min。
步骤(2)②和③中所述的冷冻干燥的条件优选为0.2mbar、-50℃。
步骤(2)③中所述的生理盐水的体积用量优选为相当于菌体体积的9倍。
步骤(2)③中所述的脉冲电场的条件优选为13μs脉宽，40kV/cm电场强度，15个脉冲电场。
步骤(3)中所述的水的体积用量优选为相当于混合料体积的10倍。
所述的水优选为纯水。
步骤(3)中所述的喷雾干燥的温度优选为65℃。
步骤(3)中所述的制粒得到颗粒优选为16目的湿颗粒。
步骤(3)中所述的干燥的条件优选为温度为70℃、蒸汽压为1.5MPa，干燥至水分降至5％以内。
步骤(3)中所述的整粒得到颗粒优选为通过14目筛的颗粒。
步骤(3)中所述的压片的条件优选为压力20kn、压片直径6mm、压片深度8mm、片剂厚度3mm、转盘转数20r/min。
一种含麦角甾醇的钙片，通过上述制备方法得到。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明在钙片中加入甘蔗提取物，甘蔗提取物中氨基酸和各种矿物质，结合酵母提取物，可以改善钙片风味口感，同时提高人体免疫力。
(2)本发明在钙片中加入麦角甾醇，部分代替维生素D2的作用，可以促进钙的吸收，同时还能抑菌，抗肿瘤。
(3)本品原料筛选过程中，具有合法性和安全性，同时具有更佳的口感。
(4)本发明将脉冲电场作用于酵母细胞，提高酵母细胞膜通透性，可显著提高细胞内麦角甾醇、蛋白质和氨基酸释放量，增加钙离子在细胞中的浓度。
附图说明
图1是使用不同碳源发酵酿酒酵母08-h后菌体中麦角甾醇含量的检测结果图。
图2是使用不同浓度的NaCl发酵酿酒酵母08-h后菌体中麦角甾醇含量的检测结果图。
图3是使用不同金属离子发酵酿酒酵母08-h后菌体中麦角甾醇含量的检测结果图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
原始菌种中麦角甾醇的含量
(1)菌种购买
酿酒酵母08-h菌种购于广东省微生物菌种保藏中心，编号GIM 2.182。、
(2)菌种培养
将4℃保藏菌种在斜面培养基(组成成分为：1.5％(w/v)酵母膏，0.5％(w/v)蛋白胨，1％(w/v)葡萄糖，2％(w/v)琼脂)上活化后，接种于装有8mL液态种子培养基(为YPD培养基，组成成分为：1％(w/v)酵母膏，2％(w/v)蛋白胨，2％(w/v)葡萄糖)的试管中，28℃下120rpm培养12h，得到一级液态菌种。取1mL一级液态菌种接种于装有50mL种子培养基的250mL三角瓶中，在28℃下以150rpm恒温振荡培养20h，制得二级液态菌种。
(3)发酵液处理和麦角甾醇提取
将20mL菌液(即二级液态菌种)于4000rpm，10min离心洗涤2次，收集细胞，加入醇-碱溶液(8g KOH溶解于32mL浓度为60％(v/v)乙醇溶液得到)，85～90℃皂化4h，冷却至室温，25mL正庚烷萃取，收集上清液，液相检测。
(4)麦角甾醇检测-高效液相色谱
色谱柱：Brown Validated C18(250×6mm)；
流动相为水：甲醇(体积比)＝2：98；
流速为1.5ml/min；
检测波长为282nm。
(5)菌种的筛选和麦角甾醇初期含量的测定
利用YPD培养基，考察了广东省菌种保藏中心的酿酒酵母08-h中麦角甾醇的含量，菌种添加量为2％(v/v)，于28℃下以150rpm恒温振荡培养20h，对发酵液进行处理(具体条件同步骤(3))，采用高效液相色谱对麦角甾醇含量进行检测(具体条件同步骤(4))，结果显示，酵母中麦角甾醇含量达到细胞干重的1.73％，今后工作都将以酿酒酵母08-h作为实验菌种。
(6)碳源对麦角甾醇含量的影响
利用YPD培养基，葡萄糖、蔗糖、糖蜜、果糖、麦芽糖分别作为碳源(YPD培养基中本身含2％葡萄糖，其他碳源相应取代同样量的葡萄糖得到不同碳源的培养基)，酿酒酵母08-h菌种添加量为2％(v/v)，于28℃下以150rpm恒温振荡培养20h，对发酵液进行处理(具体条件同步骤(3))，采用高效液相色谱对麦角甾醇含量进行检测(具体条件同步骤(4))，结果如图1显示，同样消耗等量基质，在葡萄糖为碳源的培养基中麦角甾醇含量最高，达到1.67％。
(7)盐胁迫对麦角甾醇含量的影响
Na+胁迫时，由各种信号传导途径将胁迫信号逐级放大，并最终启动Na+胁迫的各种应答蛋白的表达，对麦角甾醇含量会有一定影响。
本实验中以葡萄糖为碳源，YPD培养基培养酿酒酵母08-h菌种，在该培养基中分别添加不同浓度的NaCl，菌种添加量为2％(v/v)，于28℃下以150rpm恒温振荡培养20h，对得到的发酵液进行处理(具体条件同步骤(3))，采用高效液相色谱对麦角甾醇含量进行检测(具体条件同步骤(4))。结果如图2所示，NaCl浓度为2％时，麦角甾醇含量达到1.87％，比对照组提高了16.1％。
(8)金属离子对麦角甾醇含量的影响
许多金属离子对微生物生理活性的作用与其浓度相关，低浓度时往往呈刺激作用，高浓度时却表现出抑制作用。最适浓度要依据菌种的生理特性和发酵工艺条件来确定。
本实验中以葡萄糖为碳源，YPD培养基培养酿酒酵母08-h菌种，在该培养基中分别添加在该培养基中分别添加0.01mol/ml的10种金属离子，分别是Fe2+、Fe3+、Mn2+、Cu2+、Ca2+、Na+、NH4 +、Mg2+、Al3+、K+，菌种添加量为2％(v/v)，于28℃下以150rpm恒温振荡培养20h，对得到的发酵液进行处理(具体条件同步骤(3))，采用高效液相色谱对麦角甾醇含量进行检测(具体条件同步骤(4))。结果如图3所示，可见Mg2+和Fe3+离子的刺激作用最为明显，麦角甾醇含量达到2.05％和1.98％，比对照组分别提高了28.9％和24.5％，Fe2+、Mn2+和Cu2+离子对酵母表现出抑制作用，相比对照组，麦角甾醇含量明显降低。
(9)本实验将酿酒酵母08-h作为原始菌种，发酵条件为如下：
对照培养基：1％(w/v)酵母膏、2％(w/v)蛋白胨、2％(w/v)葡萄糖。
优化培养基：1％(w/v)酵母膏、2％(w/v)蛋白胨、2％(w/v)葡萄糖、10％(v/v)乙醇，2％(w/v)NaCl、0.01mol/ml Mg2+。
发酵培养条件：2％(v/v)接种量，28℃、150rpm恒温振荡培养20h。
提取方式：收集菌体，微波+超声共同作用；微波的条件为：500w，60℃，超声的条件为：600w，作用10s，停止10s，共同作用30min。
检测方法：同步骤(4)。
结果：经过条件最佳优化后，达到2.34％，比原始含量的1.73％提高35.3％。
实施例2高脉冲电泳(HPEF)对酵母进行处理，以提高发酵液中麦角甾醇的释放量。
(1)酵母预处理：2～4℃水洗离心(3000r/min、15min)，0.5％质量体积比NaHCO3洗涤三次，离心(3000r/min、15min)，收集上清液，用生理盐水将沉淀稀释10倍，备用。
(2)选择HPEF参数：在13μs脉宽下，分别在10、20、30、40kV/cm电场强度下循环处理，记录处理的时间或循环次数。根据系统中液体流速、脉冲频率、处理循环次数来计算处理介质被处理的脉冲数，分别在0、15、30、45、60个脉冲时采样，处理结束时测蛋白质、氨基酸、麦角甾醇溶出量，以未用电场处理的酵母悬浮液作对照。
(3)结果：对酵母细胞进行脉冲电场处理，经过40kV/cm电场强度15个脉冲电场处理后，酵母细胞全部死亡；经过30kV/cm电场强度15个脉冲电场处理后，酵母细胞半数死亡，并随脉冲处理数增加酵母细胞死亡率增大；经过10kV/cm电场强度15-60个脉冲电场处理后的酵母细胞全部存活。通过显微镜观察发现处理前的酿酒酵母细胞表面光滑，体积饱满。处理后的酿酒酵母细胞发现空洞，有内容物流出，细胞体积缩小或变塌陷。最后确定13μs脉宽，40kV/cm电场强度，15个脉冲电场作为最终条件。
实施例3麦角甾醇钙片制备
(1)在最优化发酵条件(使用实施例1步骤(9)的优化培养基和培养条件)下培养酵母，将酵母细胞进行离心，收集上清液，用冷冻干燥机(0.2mbar，-50℃)进行干燥，得到固体物质I。收集菌体，用无菌水清洗两次。
(2)用生理盐水和菌体按体积比9：1混合，悬浮菌体。在最优化条件(即13μs脉宽，40kV/cm电场强度，15个脉冲电场)下，对酵母细胞进行脉冲电场处理，结束后离心酵母(3000r/min、15min)，收集上清液，利用冷冻干燥机干燥上清液(0.2mbar，-50℃)，收集固体物质II。将固体物质I和固体物质II合并，得到固体物质A。
(3)配料：按比例称量阿拉乳钙，奶粉，麦芽糊精，甘蔗提取物，麦角甾醇，与步骤(2)得到的固体物质混合30min。其中，各成分按质量份计：固体物质A 50份，阿拉乳钙50份，全脂奶粉80份，麦芽糊精50份，甘蔗提取物20份。
(4)干燥：将步骤(1)制得的混合料用相当于混合料10倍体积的纯水溶解后，65℃喷雾干燥。
(5)制粒：置于制粒机中，制得16目的湿颗粒。
(6)干燥：将湿颗粒送入高效沸腾干燥机，设定温度70℃，蒸汽压1.5MPa，将水分降至5％以内干燥。
(7)整粒：干燥后的颗粒通过高效整粒机的14目筛。
(8)压片：压片压力20kn，压片直径6mm，压片深度8mm，片剂厚度3mm，转盘转数20r/min。
经过以上方法制备的钙片，因添加了酵母被脉冲电场作用后其胞内物质释放物，提高了其中氨基酸、蛋白质、麦角甾醇的含量；因含有麦角甾醇，可以促进人体对钙的吸收，甘蔗提取物的添加，既增加了钙片营养，也有效改善了钙片风味。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种含麦角甾醇的钙片的制备方法，其特征在于包含以下步骤：
（1）酿酒酵母的培养：用优化培养基对酿酒酵母进行好氧发酵培养，得到酿酒酵母菌液；
优化培养基的组成如下：1%（w/v）酵母膏、2%（w/v）蛋白胨、2%（w/v）葡萄糖、10%（v/v）乙醇，1～3%（w/v） NaCl、0～0.01mol/ml Mg2+、0～0.01mol/ml Ca2+、0～0.01mol/ml Fe3+、0～0.01mol/ml NH4 +、0～0.01mol/ml Al3+、0～0.01mol/ml K+；
（2）含麦角甾醇的提取：
①将步骤（1）获得的酿酒酵母菌液进行固液分离，分别得到发酵上清和菌体；
②发酵上清冷冻干燥，得到固体物质I；
③将菌体用无菌去离子清洗后，再用生理盐水稀释菌体，得到的菌体悬浮液通过脉冲电场破碎细胞，进行固液分离，取上清；将上清进行冷冻干燥，得到固体物质II；
④将固体物质I和固体物质II合并，得到固体物质A；
（3）含麦角甾醇的钙片的制备：将固体物质A 50质量份、阿拉乳钙50质量份、全脂奶粉80质量份、麦芽糊精50质量份和甘蔗提取物20质量份混合均匀，得到混合料；再用水溶解混合料，喷雾干燥，制粒，干燥，整粒、压片，得到含麦角甾醇的钙片。
2.根据权利要求1所述的含麦角甾醇的钙片的制备方法，其特征在于：
步骤（1）中所述的酿酒酵母为酿酒酵母GIM 2.182。
3.根据权利要求1所述的含麦角甾醇的钙片的制备方法，其特征在于：
步骤（1）中所述的好氧发酵培养的条件为于25～30℃、100～200rpm条件下振荡培养。
4.根据权利要求1所述的含麦角甾醇的钙片的制备方法，其特征在于：
步骤（1）中所述的优化培养基的组成如下：1%（w/v）酵母膏、2%（w/v）蛋白胨、2%（w/v）葡萄糖、10%（v/v）乙醇，2%（w/v） NaCl、0.01mol/ml Mg2+。
5.根据权利要求1所述的含麦角甾醇的钙片的制备方法，其特征在于：
步骤（2）③中所述的脉冲电场的条件为13μs脉宽，40 kV/cm电场强度，15个脉冲电场。
6.根据权利要求1所述的含麦角甾醇的钙片的制备方法，其特征在于：
步骤（2）①和③中所述的固液分离的方式为离心；
步骤（2）②和③中所述的冷冻干燥的条件为0.2mbar、-50℃；
步骤（2）③中所述的生理盐水的体积用量为相当于菌体体积的9倍。
7.根据权利要求6所述的含麦角甾醇的钙片的制备方法，其特征在于：
所述的离心的条件为3000r/min离心15 min。
8.根据权利要求1所述的含麦角甾醇的钙片的制备方法，其特征在于：
步骤（3）中所述的水的体积用量为相当于混合料体积的10倍；
步骤（3）中所述的喷雾干燥的温度为65℃；
步骤（3）中所述的制粒得到颗粒为16目的湿颗粒；
步骤（3）中所述的干燥的条件为温度为70℃、蒸汽压为1.5MPa，干燥至水分降至5%以内；
步骤（3）中所述的整粒得到颗粒为通过14目筛的颗粒；
步骤（3）中所述的压片的条件为压力 20kn、压片直径 6mm、压片深度 8mm、片剂厚度3mm、转盘转数 20r/min。
9.一种含麦角甾醇的钙片，其特征在于：通过权利要求1～8任一项所述的制备方法得到。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710144448.4A CN106901377B (zh) | 2017-03-13 | 2017-03-13 | 一种含麦角甾醇的钙片及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710144448.4A CN106901377B (zh) | 2017-03-13 | 2017-03-13 | 一种含麦角甾醇的钙片及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106901377A CN106901377A (zh) | 2017-06-30 |
| CN106901377B true CN106901377B (zh) | 2020-12-18 |
Family
ID=59186943
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710144448.4A Expired - Fee Related CN106901377B (zh) | 2017-03-13 | 2017-03-13 | 一种含麦角甾醇的钙片及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106901377B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110129824B (zh) * | 2019-06-20 | 2020-08-21 | 福清市火麒麟食用菌技术开发有限公司 | 一种电场-半仿生技术制备绣球菌麦角固醇的方法 |
| CN112142815B (zh) * | 2020-09-29 | 2023-09-26 | 内蒙古麦维生物科技有限公司 | 一种从发酵菌渣中提取麦角甾醇的方法及系统 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59183669A (ja) * | 1983-04-04 | 1984-10-18 | Inomata Mitsuyo | しいたけ錠剤及びその製造方法 |
| CN1388243A (zh) * | 2001-05-30 | 2003-01-01 | 中国科学院微生物研究所 | 一株酿酒酵母工程菌及其生产酒精和麦角固醇的方法 |
| JP2003212775A (ja) * | 2002-01-16 | 2003-07-30 | Tadashi Goino | 生理活性組成物 |
| CN1456093A (zh) * | 2002-05-06 | 2003-11-19 | 关令华 | 鲜味钙 |
| CN1844407A (zh) * | 2005-04-06 | 2006-10-11 | 北京化工大学 | 酵母发酵联产麦角固醇和谷胱甘肽的方法 |
| CN103951728A (zh) * | 2014-04-25 | 2014-07-30 | 华南理工大学 | 一种选择性提取酵母细胞蛋白质的方法 |
| CN105054044A (zh) * | 2015-09-17 | 2015-11-18 | 福建省幸福生物科技有限公司 | 一种孕妇乳母专用钙片及其制备方法 |
| CN105950476A (zh) * | 2016-06-08 | 2016-09-21 | 广东工业大学 | 一种基于脉冲电场与碳纳米管协同驱动酿酒酵母细胞破壁的方法 |
| CN106434401A (zh) * | 2016-10-21 | 2017-02-22 | 广东五洲药业有限公司 | 一种富含麦角甾醇的酵母菌株及麦角酵母粉的制备方法 |
-
2017
- 2017-03-13 CN CN201710144448.4A patent/CN106901377B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59183669A (ja) * | 1983-04-04 | 1984-10-18 | Inomata Mitsuyo | しいたけ錠剤及びその製造方法 |
| CN1388243A (zh) * | 2001-05-30 | 2003-01-01 | 中国科学院微生物研究所 | 一株酿酒酵母工程菌及其生产酒精和麦角固醇的方法 |
| JP2003212775A (ja) * | 2002-01-16 | 2003-07-30 | Tadashi Goino | 生理活性組成物 |
| CN1456093A (zh) * | 2002-05-06 | 2003-11-19 | 关令华 | 鲜味钙 |
| CN1844407A (zh) * | 2005-04-06 | 2006-10-11 | 北京化工大学 | 酵母发酵联产麦角固醇和谷胱甘肽的方法 |
| CN103951728A (zh) * | 2014-04-25 | 2014-07-30 | 华南理工大学 | 一种选择性提取酵母细胞蛋白质的方法 |
| CN105054044A (zh) * | 2015-09-17 | 2015-11-18 | 福建省幸福生物科技有限公司 | 一种孕妇乳母专用钙片及其制备方法 |
| CN105950476A (zh) * | 2016-06-08 | 2016-09-21 | 广东工业大学 | 一种基于脉冲电场与碳纳米管协同驱动酿酒酵母细胞破壁的方法 |
| CN106434401A (zh) * | 2016-10-21 | 2017-02-22 | 广东五洲药业有限公司 | 一种富含麦角甾醇的酵母菌株及麦角酵母粉的制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| breeding of high ergosterol-producing yeast strains;X He,et al;《Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology》;20001231(第25期);第39-44页 * |
| 酵母菌产麦角固醇发酵条件的研究;惠丰立等;《生物技术》;20031231;第13卷(第6期);第28-29页 * |
| 麦角甾醇的研究进展;曹龙辉等;《中国酿造》;20141231;第33卷(第4期);第9-11页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106901377A (zh) | 2017-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9301967B2 (en) | Method for preparing pharmaceutical composition for enhancing immunity and pharmaceutical composition prepared according to the method | |
| CN112195139B (zh) | 植物乳杆菌菌株ldvs007及其应用 | |
| WO2017005134A1 (zh) | 一种具有抗病毒和免疫活性的亚麻籽多糖的制备及其应用 | |
| CN107048349B (zh) | 一种复方羊肚菌菌丝体多糖颗粒剂 | |
| CN106901377B (zh) | 一种含麦角甾醇的钙片及其制备方法 | |
| CN115572738A (zh) | 一种具有抗炎、舒缓和修护功效的铁皮石斛发酵液及其制备方法和应用 | |
| CN113151067B (zh) | 一种乳酸菌发酵提取物的提取分离工艺 | |
| CN113651898A (zh) | 一种鸡腿菇菌丝体多糖及其制备方法和应用 | |
| CN104744601A (zh) | 一种阿魏菇多糖提取与纯化的方法 | |
| CN108866144B (zh) | 一种制备和纯化虾青素的方法 | |
| CN113599413B (zh) | 一种提升核桃青皮黄酮提取率及抑菌活性的方法 | |
| CN116103206A (zh) | 鼠乳杆菌byu8其菌剂及应用 | |
| CN113999325B (zh) | 一种米糠发酵多糖，制备及应用 | |
| CN106916759A (zh) | 一种高抗氧化乳酸菌粉剂的制备方法 | |
| KR102303125B1 (ko) | 진세노사이드 함량 및 보존성이 증진된 이중 코팅 홍삼 과립의 제조방법 | |
| CN110302216B (zh) | 一种蝉花虫草提取液的制备方法及其应用 | |
| JP2018186797A (ja) | モズクを用いた発酵酢の製造方法 | |
| CN106977562B (zh) | 一种超临界萃取海参中脑苷脂的方法 | |
| CN108103113B (zh) | 一种富含芪类化合物食药真菌发酵产物的制备方法 | |
| CN115820511B (zh) | 一株联产叶酸和谷胱甘肽的嗜热链球菌及其应用 | |
| CN104928329B (zh) | 一种铜藻多糖酶解物及其应用 | |
| CN113372463B (zh) | 一种从蒸馏米酒蒸馏残液中提取益生功能糖的方法 | |
| RU2699656C1 (ru) | Способ получения плодово-ягодных экстрактов | |
| CN115948280B (zh) | 一株产淀粉酶菌株r26及其应用 | |
| CN115716865B (zh) | 具有肝癌细胞毒性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的环色-苏-酪-缬-亮肽及制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 510316, 10, pomegranate Road, Guangzhou, Guangdong, Haizhuqu District Applicant after: Institute of bioengineering, Guangdong Academy of Sciences Address before: 510316 Haizhuqu District, Guangzhou Province, Guangdong, No. 10, No. Applicant before: GUANGDONG PROVINCIAL BIOENGINEERING INSTITUTE (GUANGZHOU SUGARCANE INDUSTRY Research Institute) |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: No.10, shiliugang Road, Haizhu District, Guangzhou City, Guangdong Province 510000 Patentee after: Institute of biological and medical engineering, Guangdong Academy of Sciences Address before: 510316, 10, pomegranate Road, Guangzhou, Guangdong, Haizhuqu District Patentee before: Institute of bioengineering, Guangdong Academy of Sciences |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20201218 |