CN106617079A - 灵芝多糖在制备具有调节肠道内菌群功效的保健食品中的用途 - Google Patents
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Classifications
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，特别涉及灵芝多糖在制备具有调节肠道内菌群功效的保健食品中的用途。本发明提供了灵芝多糖在制备提高肠道内菌群中有益菌丰度，并且降低有害菌丰度的保健食品中的用途。本发明申请人通过高脂饲料诱导小鼠肥胖二型糖尿病模型，观察灵芝多糖通过肠道菌群对小鼠脂代谢的影响，本发明所述灵芝多糖能够调节由饮食引起的肠道菌群紊乱，可明显改变肠道菌群有益有害菌的比例，使体内失衡的肠道菌群趋于正常，进而调节由饮食引起的肠道菌群紊乱所导致的肥胖的血脂和血糖指标，可明显降低血浆甘油三脂的含量，可以降低胆固醇、低密度脂蛋白和游离脂肪酸的含量。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及灵芝多糖在制备具有调节肠道内菌群功效的保健食品中的用途。
背景技术
人们的饮食习惯多偏好于高脂高糖高热量饮食，随着物质生活水平的提高，人们对于高脂饮食的需求也在增加。而高脂饮食也是肥胖、糖尿病等疾病的重要诱因之一。近年来的研究发现，一些富含多糖的食品药品在降糖、降脂方面有较好地效果。研究显示肠道菌群可以控制脂肪代谢、引发全身性的慢性低度炎症，诱发肥胖和胰岛素抵抗。饮食结构是决定肠道菌群组成的重要因素。保持肠道微生态平衡是维持人体健康所必需的。现有的微生态调节剂多是双歧杆菌、乳杆菌等活菌制剂，但是活菌制剂存在活菌数量难以保证、稳定性差等问题。近年来研究发现，一些中草药具有扶植正常菌群生长的作用，起到益生元的效果，是理想的微生态调节剂。而中药微生态调节剂与益生菌相比有许多优越性，如不存在保存活菌的技术难题，其稳定性强、有效期长和价格较低等。尤其是中药不仅扶植正常菌群生长，而且还可以提高机体的免疫功能，从而达到调整阴阳、扶正祛邪的目的。
灵芝多糖(Ganoderma Lucidum Polysaccharide,GLP)是多孔菌科灵芝属真菌菌丝体的次生代谢产物，存在于灵芝属真菌的菌丝体和子实体中。灵芝多糖是灵芝的最有效成分之一，因此，也特别受到药科技工作者的重视，对它的研究报道也最多。已分离到的灵芝多糖有200多种，其中有数十种的结构已被搞清，分子量已被测定。灵芝多糖有多方面的药理活性：能提高机体免疫力，加速血液微循环，提高血液供氧能力，降低机体静止状态下的无效耗氧量，消除体内自由基，提高机体细胞膜的封闭度，抗放射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA,RNA，蛋白质的能力，延长寿命等。灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关，但未有灵芝多糖对肠道菌群中能够调节具体哪些有益有害菌的宏基因组学研究报道。
发明内容
有鉴于此，本发明提供灵芝多糖在制备具有调节肠道内菌群功效的保健食品中的用途。本发明公开了灵芝多糖能够调节由饮食引起的肠道菌群紊乱，可明显改变肠道菌群的组成，使体内失衡的肠道菌群趋于正常，进而调节由饮食引起的肠道菌群紊乱所导致的肥胖的血脂和血糖指标，可明显降低血浆甘油三脂的含量，可以降低胆固醇、低密度脂蛋白和游离脂肪酸的含量。通过宏基因组学的研究，发现在肠道内菌群中哪些是有益菌，哪些是有害菌，其中富集在健康人里面的菌就是有益菌，富集在病人里面的就是有害菌，而灵芝多糖能够提高富集在健康人肠道内菌群中有益菌的丰度，并能降低富集在肥胖和胰岛素抵抗的病人中有害菌的丰度。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了灵芝多糖在制备调节肠道菌群紊乱的药物和/或食品中的应用。
在本发明中，所述食品指各种供人食用或者饮用的成品和原料以及按照传统既是食品又是药品的物品，但是不包括以治疗为目的的物品。具体的，本发明中的食品为可供人类食用或饮用的物质，包括加工食品，半成品和未加工食品，还包括保健食品，不包括烟草或只作药品用的物质。本发明中所述食品包括但不限于保健食品。凡是本领域的技术人员能够接受的食品形式，均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。
在本发明中，保健食品是食品的一个种类，具有一般食品的共性，能调节人体的机能，适用于特定人群食用，但不以治疗疾病为目的。凡是本领域的技术人员能够接受的保健食品形式，均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。
在本发明的一些具体实施方案中，灵芝多糖在制备调节肠道菌群紊乱的药物和/或食品中的应用中所述调节肠道菌群紊乱包括提高有益菌丰度和/或降低有害菌丰度。
在本发明的一些具体实施方案中，灵芝多糖在制备调节肠道菌群紊乱的药物和/或食品中的应用中所述有益菌包括Bifidobacterium longum，Lactobacillusplantarum，Lactobacillus acidophilus，Allobaculum stercoricanis，Streptococcus thermophilus。
在本发明的一些具体实施方案中，灵芝多糖在制备调节肠道菌群紊乱的药物和/或食品中的应用中所述有害菌包括Porphyromonas circumdentaria，Porphyromonas crevioricanis，Porphyromonas canoris，Porphyromonas somerae。
本发明还提供了灵芝多糖在制备预防和/或治疗肠道菌群紊乱导致的疾病的药物或食品中的应用。
在本发明中，所述食品指各种供人食用或者饮用的成品和原料以及按照传统既是食品又是药品的物品，但是不包括以治疗为目的的物品。具体的，本发明中的食品为可供人类食用或饮用的物质，包括加工食品，半成品和未加工食品，还包括保健食品，不包括烟草或只作药品用的物质。本发明中所述食品包括但不限于保健食品。凡是本领域的技术人员能够接受的食品形式，均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。
在本发明中，保健食品是食品的一个种类，具有一般食品的共性，能调节人体的机能，适用于特定人群食用，但不以治疗疾病为目的。凡是本领域的技术人员能够接受的保健食品形式，均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。
在本发明的一些具体实施方案中，灵芝多糖在制备预防和/或治疗肠道菌群紊乱导致的疾病的药物或食品中的应用中所述肠道菌群紊乱包括有益菌丰度降低和/或有害菌丰度提高。
在本发明的一些具体实施方案中，灵芝多糖在制备预防和/或治疗肠道菌群紊乱导致的疾病的药物或食品中的应用中所述疾病为肥胖、胰岛素抵抗、结肠功能紊乱、肠炎或代谢综合征。
本发明中所述代谢综合征是指人体的蛋白质、脂肪、碳水化合物等物质发生代谢紊乱的病理状态，是一组复杂的代谢紊乱症候群，是导致糖尿病心脑血管疾病的危险因素。其具有以下特点：①多种代谢紊乱集于一身，包括肥胖、高血糖、高血压、血脂异常、高血黏、高尿酸、高脂肪肝发生率和高胰岛素血症，这些代谢紊乱是心、脑血管病变以及糖尿病的病理基础。可见糖尿病不是一个孤立的病，而是代谢综合征的组成部分之一。②有共同的病理基础，目前多认为它们的共同原因就是肥胖尤其是中心性肥胖所造成的胰岛素抵抗和高胰岛素血症。③可造成多种疾病增加，如高血压、冠心病、脑卒中、甚至某些癌症，包括与性激素有关的乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺癌，以及消化系统的胰腺癌、肝胆癌、结肠癌等。④有共同的预防及治疗措施，防治住一种代谢紊乱，也就有利于其他代谢紊乱的防治。临床表现为：1.腹部肥胖或超重；2.脂代谢异常；3.高血压；4.糖尿病、胰岛素抵抗及/或葡萄糖耐量异常。
在本发明中，所述食品指各种供人食用或者饮用的成品和原料以及按照传统既是食品又是药品的物品，但是不包括以治疗为目的的物品。具体的，本发明中的食品为可供人类食用或饮用的物质，包括加工食品，半成品和未加工食品，还包括保健食品，不包括烟草或只作药品用的物质。本发明中所述食品包括但不限于保健食品。凡是本领域的技术人员能够接受的食品形式，均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。
在本发明中，保健食品是食品的一个种类，具有一般食品的共性，能调节人体的机能，适用于特定人群食用，但不以治疗疾病为目的。凡是本领域的技术人员能够接受的保健食品形式，均在本发明的保护范围之内，本发明在此不做限定。
在本发明的一些具体实施方案中，灵芝多糖在制备预防和/或治疗肠道菌群紊乱导致的疾病的药物或食品中的应用中所述食品为固体制品、乳制品、溶液制品、粉末制品或悬浮液制品中的一种或多种。
在本发明的一些具体实施方案中，灵芝多糖在制备预防和/或治疗肠道菌群紊乱导致的疾病的药物或食品中的应用中所述食品的剂型为软胶囊、硬胶囊、片剂、蜜膏、露剂、散剂、鲜汁、茶饮、酒剂、口服液、颗粒剂中的一种或多种。
在本发明的一些具体实施方案中，灵芝多糖在制备预防和/或治疗肠道菌群紊乱导致的疾病的药物或食品中的应用中所述药物的剂型为片剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、丸剂、口服液、糖浆剂、冲剂、滴丸剂或汤剂。
在本发明的另一些具体实施方案中，灵芝多糖在制备预防和/或治疗肠道菌群紊乱导致的疾病的药物或食品中的应用中所述药物的剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液或散剂中的一种或多种。
在本发明的一些具体实施方案中，所述灵芝多糖的剂量为10mg/(kg·d)至200mg/kg，优选为100mg/(kg·d)。
本发明提供了一种灵芝多糖在制备调节肠道有益菌与有害菌的保健食品及食品中的用途。本发明申请人通过高脂饲料诱导小鼠肥胖二型糖尿病模型，观察中药通过肠道菌群对小鼠脂代谢的影响，本发明所述灵芝多糖能够调节由饮食引起的肠道菌群紊乱，可明显改变肠道菌群的组成，使体内失衡的肠道菌群趋于正常，进而调节由饮食引起的肠道菌群紊乱所导致的肥胖的血脂和血糖指标，灵芝多糖组甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇显著降低(P<0.05)，同时高密度脂蛋白胆固醇显著升高(P<0.05)，喂饲高脂饲料9周后，模型小鼠各项血脂指标进一步升高，灵芝多糖体现出良好的降低低密度脂蛋白胆固醇的效果，可以降低胆固醇、低密度脂蛋白和游离脂肪酸的含量。
蛋白芯片测炎症因子结果表明，灵芝多糖组能够显著的降低炎性反应，进而改善肠炎。这是因为高脂或高能量饮食诱导肠道菌群结构失调，增加了病菌的数量，减少了保护肠屏障细菌的数量，影响肠上皮细胞基因表达，导致肠道通透性增加，使得进入血液的内毒素增加，肌肉、肝脏和脂肪组织中多种炎性因子的表达量增加有关，如IL-1、TNF-α、MCP-1和IL-6等。而灵芝多糖调节菌群比例，降低炎症因子水平，从而改善结肠功能紊乱，肠炎，代谢紊乱症等疾病。与模型组比较，灵芝多糖组的IL-6、IL-1β、IL-2、MCP-1、IFN-γ、IL-10、TNF-α、Leptin分别表现为显著地降低46％、17％、24％、13％、64％、10％、23％、9％。
通过宏基因组学的研究，发现在肠道内菌群中哪些是有益菌，哪些是有害菌，其中富集在健康人里面的菌就是有益菌，富集在病人里面的就是有害菌，而灵芝多糖能够提高富集在健康人肠道内菌群中有益菌的丰度，并能降低富集在肥胖和胰岛素抵抗的病人中有害菌的丰度。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示本发明实施例中3所述灵芝多糖的药理实验第12周不同组别小鼠粪便样品中菌群的基于effect size的宏基因组学的热图；
图2示本发明实施例2中正常组、模型组、小檗碱、灵芝多糖组的肝脏的病理切片图；
图3示本发明实施例2中正常组、模型组、小檗碱、灵芝多糖组的小肠的病理切片图。
具体实施方式
本发明公开了灵芝多糖在制备具有调节肠道内菌群功效的保健食品中的用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明的第一方面提供了一种灵芝多糖在制备提高肠道内菌群中有益菌丰度，并且降低有害菌丰度的保健食品中的用途，所述灵芝多糖的剂量为10mg/(kg·d)至200mg/kg，优选为100mg/(kg·d)。
特别地，所述肠道内的有益菌为Bifidobacterium longum(长双歧杆菌)，Lactobacillus plantarum(植物乳杆菌)，Lactobacillus acidophilus(嗜酸乳杆菌)，Allobaculum stercoricanis，Streptococcus thermophilus(嗜热链球菌)，所述有害菌为Porphyromonas circumdentaria(齿周卟啉单胞菌)，Porphyromonascrevioricanis(狗口腔卟啉单胞菌)，Porphyromonas canoris(犬嘴卟啉单胞菌)，Porphyromonas somerae(拟杆菌门细菌)。
本发明还提供了一种调节肠道有益菌与有害菌的食品组合物，所述食品组合物包含灵芝多糖。
优选地，所述食品组合物的剂型为固体、乳品、溶液制品、粉末制品和悬浮液制品中的一种。
本发明还提供了一种调节肠道有益菌与有害菌的保健食品组合物，所述保健食品组合物包含灵芝多糖。
优选地，所述保健食品组合物的剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液和散剂中的一种。
本发明的另一方面提供了一种灵芝多糖在制备治疗或预防由肠道内菌群有益有害菌比例失调导致的疾病的保健食品中的用途。
特别的，所述疾病为由饮食引起的肠道菌群紊乱所导致的肥胖、胰岛素抵抗、结肠功能紊乱、肠炎或代谢综合症。
本发明的有益效果在于：本发明提供了一种灵芝多糖在制备调节肠道有益菌与有害菌的保健食品及食品中的用途。本发明申请人通过高脂饲料诱导小鼠肥胖二型糖尿病模型，观察中药通过肠道菌群对小鼠脂代谢的影响，本发明所述灵芝多糖能够调节由饮食引起的肠道菌群紊乱，可明显改变肠道菌群的组成，使体内失衡的肠道菌群趋于正常，进而调节由饮食引起的肠道菌群紊乱所导致的肥胖的血脂和血糖指标，可明显降低血浆甘油三脂的含量，可以降低胆固醇、低密度脂蛋白和游离脂肪酸的含量。通过宏基因组学的研究，发现在肠道内菌群中哪些是有益菌，哪些是有害菌，其中富集在健康人里面的菌就是有益菌，富集在病人里面的就是有害菌，而灵芝多糖能够提高富集在健康人肠道内菌群中有益菌的丰度，并能降低富集在肥胖和胰岛素抵抗的病人中有害菌的丰度。
本发明提供的多糖的应用中所用原料及试剂均可由市场购得。本发明所述灵芝多糖还可以通过以下制备方法制备获得：将灵芝粉碎后，按照灵芝∶水＝1g∶5mL的比例加水，在75℃下加热搅拌提取3h，过滤获得的滤渣按照上述料液比、温度和时间继续提取两次，合并三次提取液，经过减压浓缩和离心获得澄清浓缩液，按照澄清浓缩液∶95％乙醇＝1∶9的体积比将9倍体积95％乙醇加入到澄清浓缩液中，混匀后于4℃下过夜静置沉淀，离心收集沉淀，经过真空冷冻干燥即获得灵芝多糖。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
本发明所述灵芝多糖通过以下制备方法制备获得：将灵芝粉碎后，按照灵芝∶水＝1g∶5mL的比例加水，在75℃下加热搅拌提取3h，过滤获得的滤渣按照上述料液比、温度和时间继续提取两次，合并三次提取液，经过减压浓缩和离心获得澄清浓缩液，按照澄清浓缩液∶95％乙醇＝1∶9的体积比将9倍体积95％乙醇加入到澄清浓缩液中，混匀后于4℃下过夜静置沉淀，离心收集沉淀，经过真空冷冻干燥即获得灵芝多糖。
实施例2
本发明申请人使用上述实施例1所制得的灵芝多糖进行了药理学实验，
实验结果如下：
1、实验材料
1.1、实验仪器
Thermo全波长酶标仪：赛默飞世尔科技中国，1510；
JA1203N型分析天平：上海精密仪器有限公司产品；
电子天平：常熟市双杰测试仪器厂，T1000。
1.2、实验试剂
葡萄糖测定试剂盒：上海荣盛生物药业有限公司，20131207147；
总胆固醇测定试剂盒：上海荣盛生物药业有限公司，20131105146；
甘油三酯测定试剂盒：上海荣盛生物药业有限公司，20131105121；
低密度脂蛋白测定试剂盒：上海荣盛生物药业有限公司，20140302124；
游离脂肪酸定量检测试剂盒：和光纯药工业株式会社，AME6194。
1.3、实验动物与饲料
C57BL/6小鼠40只，SPF级，18～22g，50～60天，雄性：广东省医学实验动物中心SCXK(粤)2013-0002；
大小鼠维持饲料：广东省医学实验动物中心SCXK(粤)2013-0002；
高脂纯化饲料MD45％：江苏美迪森生物医药有限公司。
表1不同脂肪含量的饲料主要成分及能量构成
1.4、实验药物
表2动物实验原料清单
2、实验方法
受试动物进入广州中医药大学大学城实验动物中心后，3～4只/盒，20～25℃，RH40～70％，12h：12h昼夜间断照明；自由进食饮水，饮用水为实验动物中心制备的蒸馏水。
2.1、小鼠空腹血液生化指标测定
每日观察小鼠毛色，体重，精神状态，记录进食量，每周记录一次小鼠体重，每4weeks采集一次小鼠新鲜粪便(0weeks，4weeks，9weeks，14weeks共4批粪便)。
给药9周后，取非空腹血样，测定胆固醇(TC)，甘油三酯(TG)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。
给药11周后，禁食12h，进行口服糖耐量实验(OGTT)。
给药14周后，禁食12h，取空腹血样测量血浆TG，TC，LDL-C，HDL-C。
给药15周后，小鼠采血后，脱颈椎处死，分离取组织脏器(肝、小肠等)根据需要放置于中性甲醛固定或速冻于液氮后转移保存于-80℃冰箱。
2.2、肝脏与小肠病理切片结果
图2的肝脏的病理切片结果显示，与正常组比较，模型组的肝脏组织出现明显的脂肪肝，肝细胞肿大，胞浆淡染，细胞中的小脂滴将细胞核挤压至一边，肝细胞间隙有较为明显的炎性浸润。实验组与模型组的肝脏比较，脂肪肝有明显改善，细胞中的脂滴明显较少。
图3的小肠的病理切片结果显示，模型组小鼠的小肠绒毛多断裂，可能是由于长度较长，绒毛间隙增加；正常组和灵芝多糖组小肠绒毛形态较完整，后面将结合肠道菌群的结果进行分析。
实验组与阳性对照组，脂肪肝均有明显改善，细胞中的脂滴均明显较少，实验组与阳性对照组比较无显著差异(P＞0.05)。
2.3、蛋白质芯片技术测小鼠炎症因子
蛋白质芯片的检测原理主要是基于抗原抗体特异性非共价结合。本实验采用双抗体夹心法。夹心法抗体芯片是将捕获抗体预先固定在固相载体上，生物样品加入到芯片上一起孵育反应后，其特异性的抗原与捕获抗体结合，然后加入生物素标记的检测抗体一起孵育，最后通过HRP-链霉亲和素与化学发光底物、或者荧光染色剂-链霉亲和素结合作为信号检测。
胶片显影、定影后用quantity one软件分析膜上斑点的灰度值。一张膜上附有39种细胞因子的抗体，一组样本在一张膜上检测。以模型组的灰度值为单位1作为对照，其余各组与模型组比较分析。
表3蛋白芯片测炎症因子结果
表3结果显示，与模型组比较，灵芝多糖组1的IL-6、IL-1β、IL-2、MCP-1、IFN-γ、IL-10、TNF-α、Leptin分别表现为显著地降低47％、25％、33％、27％、59％、23％、31％、15％。灵芝多糖组2的IL-6、IL-1β、IL-2、MCP-1、IFN-γ、IL-10、TNF-α、Leptin分别表现为显著地降低39％、9％、15％、9％、53％、8％、18％、5％。灵芝多糖组3的IL-6、IL-1β、IL-2、MCP-1、IFN-γ、IL-10、TNF-α、Leptin分别表现为显著地降低46％、17％、24％、13％、64％、10％、23％、9％。
表3的蛋白芯片测炎症因子结果表明，实验组能够显著(P＜0.05)的降低炎性反应，进而改善肠炎。这是因为高脂或高能量饮食诱导肠道菌群结构失调，增加了病菌的数量，减少了保护肠屏障细菌的数量，影响肠上皮细胞基因表达，导致肠道通透性增加，使得进入血液的内毒素增加，肌肉、肝脏和脂肪组织中多种炎性因子的表达量增加有关，如IL-1、TNF-α、MCP-1和IL-6等。而灵芝多糖调节菌群比例，降低炎症因子水平，从而改善结肠功能紊乱，肠炎，代谢紊乱症等疾病。且与对照组相比，本发明公开的灵芝多糖与阳性对照组的效果无显著差异(P＞0.05)。
3、统计学分析：本实验所有数据均采用均值±标准差表示，组间差异性分析采用statview软件进行单因素方差分析和t检验，以P<0.05作为统计学差异参考标准。
4、实验结果
给药9周后，正常组非空腹血糖与模型组无明显差异，模型组总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇比正常组显著升高(P<0.01)；灵芝多糖组甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇显著降低(P<0.05)，同时高密度脂蛋白胆固醇显著升高(P<0.05)，喂饲高脂饲料9周后，模型小鼠各项血脂指标进一步升高，灵芝多糖体现出良好的降低低密度脂蛋白胆固醇的效果。
表4第九周小鼠非空腹血液生化指标
给药14周后，与模型组比较，阳性对照小檗碱组与灵芝多糖组血浆甘油三酯、游离脂肪酸、游离脂肪酸、低密度脂蛋白胆固醇均显著性降低(P<0.05)。
对比第九周实验数据，灵芝多糖降低血浆中甘油三酯的效果稳定，可一定程度上降低血中游离脂肪酸的含量。
表5第十四周小鼠空腹血液生化指标
从表5的实验结果可以看出，本发明所述灵芝多糖能显著(P＜0.05)改善二型糖尿病肥胖的血脂和血糖指标，可明显(P＜0.05)降低血浆甘油三脂的含量，可以降低胆固醇、低密度脂蛋白和游离脂肪酸的含量，对于治疗或预防由肠道菌群紊乱导致的肥胖或胰岛素抵抗有很好的有益效果。
从图2和图3的病理切片结果显示，灵芝多糖能够减少肝脏和小肠的脂肪，促进改善胰岛素抵抗。而长期过量的高脂饮食可引起血脂的异常升高，过多的脂质也会在非脂肪组织中聚集，如肝脏和小肠。肝脏中的TG堆积，导致高脂血症以及肝脏脂质代谢紊乱。
取实施例1制得的或市场购买的灵芝多糖的剂量为10mg/(kg·d)至200mg/kg时，进行上述多项试验，试验结果与实施例1灵芝多糖剂量为100mg/(kg·d)的功效无显著差异(P＞0.05)，能够达到实施例1灵芝多糖剂量为100mg/(kg·d)的的功效至少90％。
实施例3
采集应用实施例1中小鼠实验第12周的小鼠新鲜粪便，将不同组别之间的肠道菌落进行差异分析。图1和表6中B、阳性药组，C、正常组，D、灵芝多糖组1，E、灵芝多糖组2，F、灵芝多糖组3，M、模型组(分组同实施例2中表2)。
本研究最关心的是M模型组和C正常组有差异的菌是否用药后得到调节，做出了图1。图1中挑选的OTU是在C正常组和M模型组有差异的OTU(其effectsize>1.96)，然后这些OTU同样在其他组和M模型组之间做检验，得出的effectsize画出上面的热图。从图1可以轻易看出，阳性药效果很显著，富集在M模型组上的菌的数量全部下降了。D灵芝多糖能调控部分的OTU，使得它恢复正常。
表6相比病患组对于有益菌与有害菌的调节作用结果
表6展示了灵芝多糖组对于肠道菌群中的各种有益菌与有害菌的调节作用，通过宏基因组学的手段分析比对各组第12周的小鼠新鲜粪便中的菌落，可知小鼠肠道中的有益菌为Bifidobacterium longum，Lactobacillus plantarum，Lactobacillus acidophilus，Allobaculum stercoricanis，Streptococcusthermophilus，所述有害菌为Porphyromonas circumdentaria，Porphyromonascrevioricanis，Porphyromonas canoris，Porphyromonas somerae。本发明实施例中的灵芝多糖对上述有益菌的丰度有提高作用，对上述有害菌的丰度有降低作用。
本发明实施例中的灵芝多糖对上述有益菌的丰度有提高作用，对上述有害菌的丰度有降低作用。根据宏基因组学研究的方法和原理(参见Li et al.Innate immunity and intestinal microbiota in the development of Type 1 diabetesNature 455,1109-1113，23rd，October 2008)，将上述有益菌和有害菌在人肠道中的灵芝多糖(100mg/(kg·d))调节作用进行测序鉴定，得到灵芝多糖能够提高肠道内菌群中有益菌Bifidobacterium longum，Lactobacillus plantarum，Lactobacillus acidophilus，Allobaculum stercoricanis，Streptococcus thermophilus的丰度，降低有害菌Porphyromonas circumdentaria，Porphyromonascrevioricanis，Porphyromonas canoris，Porphyromonas somerae的丰度。实验表明，所述实验组灵芝多糖的剂量为10mg/(kg·d)至200mg/kg时，试验结果相比模型组均具有良好的调节作用，显著差异(P<0.05)，在实验组灵芝多糖组1的100mg/(kg·d)的剂量时功效最优。
可见灵芝多糖能使有益菌的丰度显著(P＜0.05)增加，使有害菌的丰度明显(P＜0.05)降低，呈现出明显地改善肠道菌群紊乱的作用(通过上述宏基因组学的研究，富集在健康人里面的菌就是有益菌，富集在病患者里面的就是有害菌)。
与阳性对照组相比，本发明公开的实验组灵芝多糖与对照组的效果无显著差异(P＞0.05)。
取实施例1制得的或市场购买的灵芝多糖的剂量为10mg/(kg·d)至200mg/kg时，进行上述多项试验，试验结果与上述的功效无显著差异(P＞0.05)，能够达到上述的功效至少90％。
实施例4保健食品的制备
取本发明实施例1提供的灵芝多糖或购自市场的灵芝多糖，添加食品中允许的辅料，按照常规方法制得食品。制得的食品可以为固体制品、乳制品、溶液制品、粉末制品或悬浮液制品。其中，保健食品的剂型可以为软胶囊、硬胶囊、片剂、蜜膏、露剂、散剂、鲜汁、茶饮、酒剂、口服液、颗粒剂。实施例5药物的制备
取本发明实施例1提供的灵芝多糖或购自市场的灵芝多糖，添加药学上可接受的辅料，按照常规方法制得药物。制得的药物的剂型可以为片剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、丸剂、口服液、糖浆剂、冲剂、滴丸剂或汤剂。
实施例6制得保健食品的检验
取本发明实施例4制得的保健食品，按照中华人民共和国国家标准GB16740-2014《食品安全国家标准保健食品》进行检测，结果如下：
3.1原料和辅料
原料和辅料符合相应食品标准和有关规定。
3.2感官要求
感官要求符合表7的规定。
表7感官要求
3.3理化指标
理化指标符合相应类属食品的食品安全国家标准的规定。
3.4污染物限量
污染物限量符合GB2762中相应类属食品的规定，无相应类属食品的符合表8的规定。
表8污染物限量
| 项目 | 指标 | 检验方法 |
| 铅a(Pb)/(mg/kg) | 2.0 | GB5009.12 |
| 总砷b(As)/(mg/kg) | 1.0 | GB/T5009.11 |
| 总汞c(Hg)/(mg/kg) | 0.3 | GB/T5009.17 |
a袋泡茶剂的铅≤5.0mg/kg；液态产品的铅≤0.5mg/kg；婴幼儿固态或半固态保健食品的铅≤0.3mg/kg；婴幼儿液态保健食品的铅≤0.02mg/kg。
b液态产品的总砷≤0.3mg/kg；婴幼儿保健食品的总砷≤0.3mg/kg。
c液态产品(婴幼儿保健食品除外)不测总汞；婴幼儿保健食品的总汞≤0.02mg/kg。
3.5真菌毒素限量
真菌毒素限量符合GB2761中相应类属食品的规定和(或)有关规定。
3.6微生物限量
微生物限量符合GB29921中相应类属食品和相应类属食品的食品安全国家标准的规定，无相应类属食品规定的符合表9的规定。
表9微生物限量
3.7食品添加剂和营养强化剂
3.7.1食品添加剂的使用符合GB2760的规定。
3.7.2营养强化剂的使用符合GB14880和(或)有关规定。
综合上述检测结果，本发明制得的保健食品符合中华人民共和国国家标准GB16740-2014《食品安全国家标准保健食品》的规定。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.灵芝多糖在制备调节肠道菌群紊乱的药物和/或食品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述调节肠道菌群紊乱包括提高有益菌丰度和/或降低有害菌丰度。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述有益菌包括Bifidobacterium longum，Lactobacillus plantarum，Lactobacillus acidophilus，Allobaculumstercoricanis，Streptococcus thermophilus。
4.根据权利要求1至3任一项所述的应用，其特征在于，所述有害菌包括Porphyromonas circumdentaria，Porphyromonas crevioricanis，Porphyromonas canoris，Porphyromonas somerae。
5.灵芝多糖在制备预防和/或治疗肠道菌群紊乱导致的疾病的药物或食品中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肠道菌群紊乱包括有益菌丰度降低和/或有害菌丰度提高。
7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述疾病为肥胖、胰岛素抵抗、结肠功能紊乱、肠炎或代谢综合征。
8.根据权利要求5至7任一项所述的应用，其特征在于，所述食品为固体制品、乳制品、溶液制品、粉末制品或悬浮液制品中的一种或多种。
9.根据权利要求5至8任一项所述的应用，其特征在于，所述食品的剂型为软胶囊、硬胶囊、片剂、蜜膏、露剂、散剂、鲜汁、茶饮、酒剂、口服液、颗粒剂中的一种或多种。
10.根据权利要求5至9任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、丸剂、口服液、糖浆剂、冲剂、滴丸剂或汤剂中的一种或多种。
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