CN106617032B - 一种流质营养食品 - Google Patents
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Classifications
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Abstract
本发明提供了一种流质营养食品，该流质营养食品含有24种食品原料，营养素成分涵盖了蛋白质、碳水化合物、膳食纤维、多种维生素、多种矿物质、牛磺酸等。本发明的流质营养食品具有食用简单、并发症少、促进肠道功能恢复，减轻肠道内菌群易位等优点，吸收利用效率极高，可以短时间内被机体快速吸收；营养丰富，食用方便，不需要现用现配，直接冲调食用即可；口味甜咸适中，饱腹感及适口性佳，提高病人的食欲；不添加脂肪和不溶性膳食纤维，缓解肠道消化吸收难度，减轻胃肠道负担，避免消化不良的症状，加速病人康复时间。适合于创伤、烧伤、手术后抗感染治疗阶段病人胃肠道从适应到恢复正常饮食这段时间食用。
Description
技术领域
本发明涉及一种食品，具体涉及一种适合于创伤、烧伤、手术后抗感染治疗阶段病人胃肠道从适应到恢复正常饮食这段时间食用。
背景技术
创伤、烧伤、抗感染手术后病人机体会产生一系列临床及代谢改变，会造成包括肠功能衰竭在内的多器官功能衰竭，以及不同程度的营养不良，导致极为严重的后果，如何有效的减轻此反应的损害，及时有效补充缺失的营养素，是目前关注的焦点之一，营养支持对创伤、烧伤、抗感染手术后病人，是极为重要而且有效的支持及治疗手段。
在临床，创伤病人的病理生理改变都存在较为相似的情况，即由应激反应所引发的神经-内分泌-免疫系统变化。这些变化可引起糖、脂肪、蛋白质代谢的紊乱，心血管功能处于代偿状态，水钠潴留等高代谢反应。同时，机体的免疫功能降低，并通过宿主反应造成组织损害而导致多器官功能障碍综合症，此时机体需要营养支持的迫切性较一般病人更加明显，如果不给予合理的营养支持就会导致难以控制的营养不良和免疫功能障碍，并容易引发细胞功能损害和难治性感染，严重者甚至导致死亡。
在对感染、创伤等病人的临床观察中，对各类疾病机体有着不同的代谢改变，对营养物质的需求和代谢亦不相同，更重要的是使细胞获得所需的营养底物而进行正常或近似正常的代谢，以维持其基本功能，从而保持或改善组织、器官的功能及结构：通过营养素的药理作用调理代谢紊乱，调节免疫功能，增强机体抗病能力，从而影响疾病的发展与转归，达到有利于病人康复的目的。创伤、烧伤、感染、手术后病人的营养支持的难点在于如何适当给病人进行营养补充，不宜过多或过少，营养过少不能满足机体的需要，过多则将加重器官的负担而产生不良反应。
目前在对于创伤、烧伤、抗感染手术后病人的营养支持中，有三种类型，各有优劣。
第一种是肠外营养，肠外营养一般适用于伤后最初几天，特别是在出现肠功能衰竭等情况，采用经外周中心静脉插管技术，经周围血管导入，而给予病人营养补充。但是肠外营养技术及管理要求高，必须在严格无菌的条件下进行，并发症多而且处理较为困难，费用昂贵。肠外营养补充的时间也受限制，例如在病人尚未得到复苏，有效循环量尚未建立，水、电解质与酸碱平衡尚未得到纠正之前，给予营养支持尤其是高能量、高氮源的肠外营养将加重代谢紊乱、同时，若长期进行肠外营养，很难达到各种营养成分齐全，仍然不能解决病人营养不良的问题，还会造成胃肠道功能衰退。
第二种是组件营养，组件型营养补充一般是临床营养科室，根据病人个性化的需要，将多种不同的营养素组件进行搭配，现配出适合病人需要的营养配方，例如匀浆膳。这种方法对临床营养的要求极高，不仅需要病人提供每天所有营养体征，还需要几十种营养素定量的现用现配。处理困难，可行性低，病人的顺应性以及适口性差，而且一旦计算或调配失误，会影响到病人的健康。另外，对病人的全面营养评价，还包括患者的饮食营养调查、人体测量和临床生化检查，但它们的敏感性和特异性还缺乏一种公认的最佳方法，因此大多是临床营养师凭经验或专家共识，缺乏标准性和规范性。
第三种是术后全营养配方食品，术后全营养配方食品食用方便，基本可以满足病人每天的营养需要。但是这类食品需要注册申报、工厂资质及研发要求高，成本高昂，目前市场上国产的还没有，进口的也存在申报问题。另一方面，病人在手术后，在创伤的早期，病人胃肠道的应激状态还未完全缓解，胃肠道功能还未完全恢复，需要一段时间进行胃肠道耐受性适应、感染控制、胃肠道消化功能恢复，这段时间并没有完全适应全营养配方食品，热量供给有可能不能被完全吸收利用，机体可能存在热量供给不足的现象，不宜食用含脂肪、粗纤维等难以消化吸收的营养素，以免引起腹胀、腹泻、恶心呕吐等各种消化不良的症状，延缓康复时间。
目前在流质食品中，在针对的特定人群上，配方的营养充足性上、卫生要求上、口感的适应性、产品的稳定性以及产品性状上都有诸多的不足之处，主要缺点如下：(1)没有针对特定人群：常规的流质食品大多病人理解的是粥、麦片、牛奶、汤汁等，这种在家或餐厅超市购买的流质食物，这些食物一般没有营养标签或营养成分说明，病人看不懂也不知道能不能吃，临床医生也没有参考方法或建议，病人食用后容易造成营养不均衡，而且含有的脂肪更容易造成吸收困难，不能达到良好的营养补充效果。(2)配方的营养充足性不佳：手术后的病人和正常人相比，有着特定的营养需求，比如能量代谢提高、蛋白质需求增加、糖与脂肪的供给比例变化，与增强免疫力、促进伤口愈合相关的氨基酸、维生素和矿物质等明显提高。目前的匀浆膳一般现用现配，粗略的核算，很少有质检报告材料，精细化的给出营养成分证明。(3)卫生要求：常规的饮食或者医院配的匀浆膳，一般是在厨房或者医院配料间进行，环境及卫生方面无法把控，原料来源、微生物、蚊虫等指标无法合理控制。而病人本身手术后免疫力低，食物不卫生更容易感染，影响健康。(4)口感适应性：病人手术后，本身味觉恢复需要时间，再加上麻药苏醒，伤口疼痛，胃口比较差，对不同味道的喜好也有偏好，普通的流食基本是咸味、苦味、无味，感官上不容易刺激病人的进食需求，导致病人的食欲更低。(5)产品稳定性：普通流质食物一般是液体，不容易存放，容易变质。现用现配的流食稳定性差，没有经过均质处理，分布不均匀，容易产生沉淀、漂浮，稳定性差。(6)产品性状：普通流质食物一般是液体状，购买、调配、运输、冷热温度都受限制，食物冷了后再热也不好吃，性状不稳定。
因此，迫切需要研制一种具有食用简单、并发症少、促进肠道功能恢复，减轻肠道内菌群易位等优点的营养食品，以满足创伤、烧伤、感染、手术后病人在手术后，麻醉药消除后，胃肠道从适应到恢复正常饮食的这段时间食用，以加速病人康复。
发明内容
本发明的目的是提供一种适合于创伤、烧伤、手术后抗感染治疗阶段病人食用的流质营养食品。
首先，本发明提供了一种流质营养食品，含有以下成分：水解蛋白质、碳水化合物、可溶性膳食纤维、维生素预混料、矿物质预混料、食品添加剂。
所述水解蛋白质为水解乳清蛋白、海洋鱼低聚肽。
所述碳水化合物为麦芽糊精、菠萝粉、果糖，所述可溶性膳食纤维为果胶和/或酵母β-葡聚糖。
所述维生素预混料含有L-抗坏血酸钠、牛磺酸、烟酸、dl-α-醋酸生育酚、D-泛酸钙、核黄素、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、β-胡萝卜素、醋酸视黄酯、叶酸、氰钴胺、胆钙化醇；
所述矿物质预混料含有L-乳酸钙、葡萄糖酸锌、硫酸亚铁。
本发明在水解蛋白质的选择上，选取适度、中度、高度三种不同类型的水解分离乳清蛋白原料，蛋白质含量≥70％，乳清蛋白属于优质蛋白质，氨基酸的组成合理并且必需氨基酸的含量高，溶解性好，苦涩味低，含盐量及含乳糖量低，从选材上减少病人对盐和乳糖的不良反应；同时搭配另一种水解蛋白——海洋鱼低聚肽，这种经过高度水解为短肽的蛋白质，极易被人体消化吸收，而且富含脯氨酸和羟脯氨酸，非常适合手术后病人伤口愈合、皮肤修复。
本发明在碳水化合物的选择上，既选取了饱腹感强的高升糖指数的麦芽糊精，也搭配了天然甜味而且升糖指数低的食用果糖，两者搭配既能为产品提供充足的能量供给、香甜味道，同时又能调节升糖时间，减少对胃肠道的刺激性，糖尿病人也可以放心服用；
水溶性膳食纤维：选取的果胶，在品质、溶解性、粘度、来源、感官上都属于上乘，果胶不仅能为产品带来黏腻爽滑感，还能促进胃肠道黏膜吸附功能，保护肠道黏膜的完整性，促进病人胃肠道的功能恢复；
维生素预混料：精选多种适合手术后病人的维生素，比如对免疫力提高有好处的维生素C，手术或创伤中极易损失的B族维生素，脂溶性维生素A对上皮细胞的保护和修复，维生素E的抗氧化和皮肤修复作用，对每种维生素的用量及限量都有着严格精密的计算；
矿物质预混料：特别补充矿物质锌，锌是多种酶的组成成分，手术中锌的丢失量严重，在术后一定要及时补充锌，不仅促进代谢免疫，而且还能加快皮肤伤口愈合；钙是人体每日需要的最高量的矿物质，术后病人在卧床过程中，钙丢失严重，需要进补，本品采用的钙来源是有机钙，极易被身体吸收；铁是人体每日需要的重要矿物质，在病人创伤手术等一系列过程中，血液流失会伴随铁元素丢失，需要及时补充铁，增强供血能力，防止贫血。
进一步地，本发明的流质营养食品含有以下成分：水解乳清蛋白、海洋鱼低聚肽、麦芽糊精、果胶、菠萝粉、果糖、L-乳酸钙、L-抗坏血酸钠、酵母β-葡聚糖、牛磺酸、葡萄糖酸锌、硫酸亚铁、烟酸、dl-α-醋酸生育酚、D-泛酸钙、核黄素、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、β-胡萝卜素、醋酸视黄酯、叶酸、氰钴胺、胆钙化醇、甜味剂。
本发明的流质营养食品，其配方为每100g流质营养食品中含有水解乳清蛋白36-90g、海洋鱼低聚肽9-30g、麦芽糊精6.8-22g、果胶3.6-12g、菠萝粉1.5-5g、果糖1.5-5g、L-乳酸钙0.1-4g、L-抗坏血酸钠100-700mg、酵母β-葡聚糖0.1-0.4g、牛磺酸50-500mg、葡萄糖酸锌5-220mg、硫酸亚铁2-100mg、烟酸10-60mg、dl-α-醋酸生育酚10-100mg、D-泛酸钙4-20mg、核黄素1-6mg、盐酸吡哆醇1-6mg、盐酸硫胺素1-5mg、β-胡萝卜素0.2-1.5mg、醋酸视黄酯3000-130000IU、叶酸0.2-2mg、氰钴胺3-30μg、胆钙化醇40-6000IU、甜味剂30-90mg。
优选地，本发明的流质营养食品其配方为每100g流质营养食品中含有水解乳清蛋白50-70g、海洋鱼低聚肽12-20g、麦芽糊精8-20g、果胶4-8g、菠萝粉2-4.5g、果糖2-4g、L-乳酸钙1-3g、L-抗坏血酸钠130-500mg、酵母β-葡聚糖0.1-0.3g、牛磺酸150-400mg、葡萄糖酸锌60-150mg、硫酸亚铁30-90mg、烟酸15-40mg、dl-α-醋酸生育酚12-60mg、D-泛酸钙4.5-10mg、核黄素1.3-3.5mg、盐酸吡哆醇1.0-3.5mg、盐酸硫胺素1.3-3mg、β-胡萝卜素0.5-1mg、醋酸视黄酯3500-9000IU、叶酸0.25-1mg、氰钴胺3.5-18μg、胆钙化醇40–3000IU、甜味剂40-70mg。
更优选地，本发明的流质营养食品其配方为每100g流质营养食品中含有水解乳清蛋白53-65g、海洋鱼低聚肽13-18g、麦芽糊精8-18g、果胶4.1-7g、菠萝粉2.5-4.2g、果糖2.1-3.5g、L-乳酸钙1.3-2.5g、L-抗坏血酸钠150-400mg、酵母β-葡聚糖0.12-0.28g、牛磺酸200-300mg、葡萄糖酸锌70-130mg、硫酸亚铁40-80mg、烟酸18-35mg、dl-α-醋酸生育酚12.5-50mg、D-泛酸钙4.9-8.5mg、核黄素1.5-3mg、盐酸吡哆醇1.0-3mg、盐酸硫胺素1.4-2.5mg、β-胡萝卜素0.55-0.8mg、醋酸视黄酯4000-8000IU、叶酸0.3-0.8mg、氰钴胺4-12μg、胆钙化醇42-2000IU、甜味剂42-65mg。
本发明提供了上述流质营养食品在制备术后病人特殊食品中的应用。
所述术后病人指创伤或烧伤手术后抗感染治疗阶段的病人。
本发明的流质食品食用时，每100g的流质营养食品，用可饮用水冲调至总体积650-750ml。
本发明提供的流质营养食品具有以下优点：
1、满足特定人群营养需求：本品特别适合于创伤、烧伤、手术后抗感染治疗阶段病人在手术后与正常饮食之前食用；
2、营养充足性：满足手术后的病人特定的营养需求；富含水解蛋白质，容易消化吸收，优质蛋白质利用率高；含水溶性膳食纤维，增强术后肠道黏膜修复；富含矿物质和多种维生素，尤其是矿物质锌，维生素C，促进伤口愈合；
3、满足食品卫生要求，生产工艺及环境有严格把控，原辅料、质检、品控严格；口感好：利用原料本身的味道作为产品基味，辅以天然水果粉，味道纯正自然，甜咸适中，刺激病人的食欲；稳定性高：产品工艺中采用造粒、干湿法混匀，最大限度保证了产品的均一性，严格控制产品粒度，做稳定性试验。
4、等渗：本产品冲调后可以达到等渗浓度，适宜于病人的体征调节。
5、消化吸收快：本产品采用的是水解蛋白质，经过水解后的蛋白质极易被身体吸收，可以快速补充；本品水溶性好，不需要咀嚼吞咽，减轻肠道消化负担，节省吸收时间。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段；若未特别指明，实施例中所用试剂均为市售。
以下实施例所述的维生素预混料800mg的原料中含有：L-抗坏血酸钠150-400mg、牛磺酸200-300mg、烟酸18-35mg、dl-α-醋酸生育酚12.5-50mg、D-泛酸钙4.9-8.5mg、核黄素1.5-3mg、盐酸吡哆醇1.0-3mg、盐酸硫胺素1.4-2.5mg、β-胡萝卜素0.55-0.8mg、醋酸视黄酯4000-8000IU、叶酸0.3-0.8mg、氰钴胺4-12μg、胆钙化醇42-2000IU。
以下实施例所述的矿物质预混料2000mg的原料中含有：L-乳酸钙1.3-2.5g、葡萄糖酸锌70-130mg、硫酸亚铁40-80mg。
实施例1
1、组成：每100g流质营养食品中含有水解乳清蛋白60g、海洋鱼低聚肽15g、麦芽糊精9.45g、果胶6g、菠萝粉4g、果糖2.5g、酵母β-葡聚糖0.2g、维生素预混料800mg，矿物质预混料2000mg、甜味剂50mg。本实施例所述甜味剂为阿斯巴甜。
2、制备方法：严格称取每种原料，记录每种称料量。按上述组成用量，先投矿物质预混料、可溶性膳食纤维(果胶和酵母β-葡聚糖)、再投碳水化合物(麦芽糊精、菠萝粉、果糖)、水解蛋白质(水解乳清蛋白、海洋鱼低聚肽)，物料混匀后，进行制粒。制粒后进行干燥，冷却，按上述组成用量，最后投维生素预混料，总料混匀即得流质营养食品的颗粒剂。
实施例2
1、组成：每100g流质营养食品中含有水解乳清蛋白50g、海洋鱼低聚肽20g、麦芽糊精12.85g、果胶8g、菠萝粉3g、果糖3g、酵母β-葡聚糖0.3g、维生素预混料800mg，矿物质预混料2000mg、甜味剂50mg。本实施例选用阿斯巴甜为甜味剂。
2、制备方法：参见实施例1。
实施例3
1、组成：每100g流质营养食品中含有水解乳清蛋白68g、海洋鱼低聚肽10g、麦芽糊精8.35g、果胶6.7g、菠萝粉2g、果糖2g、酵母β-葡聚糖0.1g、维生素预混料800mg，矿物质预混料2000mg、甜味剂50mg。本实施例选用阿斯巴甜为甜味剂。
2、制备方法：参见实施例1。
实施例4配方工艺优化
原料投料后，在冲泡过程中的水温、水源、水质、香味、气味、色泽、甜度、酸度、渗透压、溶解度、pH值都有着精密的测量与质量要求。以渗透压为例，等渗浓度为280-320Osm/kgH2O，采用渗透压测定仪，先测量样品的渗透压，按照原来的设想以100ml冲调，结果产品太稠无法测定，渗透压过高；后来改成200ml冲调，结果产品太稀感官不满意，而且渗透压偏低；后面改成180ml冲调，但是渗透压还是偏低，然后通过更换原料批次，多次调试，由原料本身的特性来影响渗透压。一方面提高渗透压，另一方面还可以在不更改配方的基础上，通过原料批次的更换来改进配方的口感，最后定在当流质营养品为20g时，用纯净水冲调到130-150ml总体积，冲调后可以达到等渗状态，病人按此量冲服对胃肠道的刺激更低，可以达到生理等渗，耐受性高。
临床上，以正常人血浆的渗透浓度(280–320mmol/L)为等渗浓度，低于280mmol/L为低渗溶液，高于320mmol/L为高渗溶液。渗透压的稳定对维持细胞内、外液平衡具有非常重要的意义，虽然口服的流质配方食品需经胃肠道消化吸收，对渗透压并不做特殊要求，但是流质配方食品经冲调后，如果能达到等渗浓度，可以更好的提高病人的耐受性，减轻腹泻症状。本品(每100g)加入650–750ml温水冲服可达到等渗浓度，冲水量低于650ml为高渗溶液，冲水量高于750ml为低渗溶液。
实施例5感官评定试验
1、感官评定志愿者：30人(18岁以上，医生或术后患者)
2、产品处理方式：以20g/袋为标准(实施例1-3制得的流质营养食品随机发放)，每人分发5袋。先打开包装看粉状形式，再用温水冲调至130-150ml，倒入无色透明容器中，置于明亮处，观察其状态、色泽、嗅其气味，品尝其滋味。
3、产品感官基本要求：冲调或冲泡后具有该产品应有的色泽、香气和滋味，无异味，无外来杂质。
4、评价指标及分数(以100分计)：
4.1粉状外观(20分)：
4.1.1包装(喜欢5分，比较喜欢3分，可以接受1分)
4.1.2粒度(均匀细粉状5分，有少量结块但能接受3分，成团状或块状1分)
4.1.3色泽(色泽均匀喜欢5分，色泽不均匀能接受3分，色泽不均匀1分)
4.1.4香味(香味适宜5分，香味能接受3分，过浓或过淡1分)
4.2冲调外观(20分)
4.2.1冲调难易(容易冲调均匀10分，有些结块但能接受6分，难以冲调或冲调麻烦2分)
4.2.2冲调色泽(色泽均匀喜欢10分，色泽不均匀能接受6分，色泽不均匀2分)
4.3冲调气味(20分)
4.3.1香气(冲调后闻着天然喜欢10分，冲调后香味能接受6分，香味过浓或过淡2分)
4.3.2香味(品尝时香味在咽喉鼻中感觉愉悦10分，品尝时余味能接受6分，品尝时香味过淡或有异味2分)
4.4冲调质地(20分)
4.4.1粘稠度(粘稠度适宜10分，粘稠度偏高6分，粘稠度偏低2分)
4.4.2沉淀(冲调后基本无沉淀10分，稍有沉淀可以接受6分，沉淀物或漂浮物较多2分)
4.5冲调风味(20分)
4.5.1甜香粘(风味喜欢且有特点10分，风味能接受但无特色6分，风味不喜欢2分)
4.5.2整体评价(喜欢10分，能接受6分，不喜欢2分)
表1
5、满意度分析：
5.1粉状外观(20×30＝600分)：
包装(5×30＝150分)：146/150＝97％
粒度(5×30＝150分)：146/150＝97％
色泽(5×30＝150分)：136/150＝90％
香味(5×30＝150分)：132/150＝88％
5.2冲调外观(20×30＝600分)
冲调难易(10×30＝300分)：240/300＝80％
冲调色泽(10×30＝300分)：240/300＝80％
5.3冲调气味(20×30＝600分)
香气(10×30＝300分)228/300＝76％
香味(10×30＝300分)204/300＝68％
5.4冲调质地(20×30＝600分)
粘稠度(10×30＝300分)248/300＝83％
沉淀(10×30＝300分)164/300＝55％
5.5冲调风味(20×30＝600分)
甜香粘(10×30＝300分)224/300＝75％
整体评价(10×30＝300分)280/300＝93％
6、整体评价：
本次感官评价中，对产品的口感、色泽、香味、质地等多个方面进行感官考察分析，其中，粉剂形式无论在包装、粒度、色泽、香味上满意度都比较高，整体满意度在88％-97％之间；冲调后风味整体评价满意度在93％；冲调成液体状后，在冲调的外观上，包括冲调难易度、冲调后色泽、冲调粘稠度，满意度在80％-83％，良好；在冲调后散发出来的香气、产品香甜粘搭配的风味上，满意度在75％-76％之间，满意度一般；产品喝进去在咽喉鼻中的香味以及放置产生的沉淀现象，满意度仅55％-68％，属于及格范畴。
7、预期优化：
7.1优化产品冲调后散发的香气、冲调的粘稠度，满意度要达到90％。可以通过原料的品质来改善。
7.2优化产品喝进去在咽喉鼻中的香味，满意度要达到80％。可以通过原料的品质，优选天然味浓的菠萝粉或添加适当的天然香精香料，在试制过程要中注意热、光对香味成分保留的影响。
7.3优化产品冲调后放置产生的沉淀现象，满意度要达到80％。此款产品由于富含多种营养素，且原料来源、指标、规格、稳定性等各有差异，在少添加剂的基础上，如何能保持不分层、不产生沉淀，目前属于行业内技术性难题，后面会针对加工工艺、设备，对产品进行特殊化、均质化处理，在粒度、均匀性等多方面影响产品稳定性因素进行分析和优化，进一步提高产品稳定性。
实施例6本发明的流质营养食品对小鼠皮肤伤口的愈合作用研究
尽管外科手术技术在进步，但在临床实践中由于基础疾病、手术治疗、长期压力或烧伤等的并发症，大部分的伤口会出现推迟愈合的状况。因此，为伤口提供可靠而有效的愈合方案是至关重要的。氧化应激可导致细胞和组织的损伤，从而影响正常的伤口愈合。胶原沉积和血管生成是在伤口愈合的重要过程，加速胶原纤维增生和血管生成的速率均可以促进伤口愈合。本实施例以切除型小鼠皮肤伤口为动物模型，通过研究实施例1制得的流质营养食品对伤口组织羟脯氨酸含量的影响及其对胶原纤维增生、生长因子和表达的影响，从体内探明其加速伤口组织胶原沉积和血管生成的愈合机制。
1、试验材料：羟脯氧酸试剂盒(碱水解法)；Anti-IGF1抗体；Anti-FGF2抗体。
主要仪器设备：皮肤活检打孔器；相机；针芯式滤器(直径0.22μm)；荧光显微镜
试验动物：昆明种小鼠，雄性，18-22g，SPF级。饲养环境温度21-24℃，湿度50％-60％。
一种流质营养食品的配制：将实施例1制得的流质营养食品以100g，冲调至650-750ml，现用现配。
2、试验流程：
2.1小鼠皮肤伤口模型的建立
小鼠皮肤切除型伤口模型可以用来研究伤口愈合率和胶原纤维含量等指标。小鼠经乙醚麻醉，背部剪毛，用剃毛刀将背侧毛剃干净，70％乙醇清洗皮肤消毒。在脊柱左右两侧相同位置各做一个稍大于1cm直径的圆形记号，无菌条件下用直径1cm的皮肤活检打孔器在圆形记号内制造一个全层皮肤伤口。造模后伤口暴露，单笼词养。将致伤当天记为第0天。
2.2试验动物分组
72只SPF级18-22g雄性昆明种小白鼠，适应性喂养1周后随机分为4组，每组18只，包括对照组和3个剂量组。低剂量组给流质营养食品浓度为8.3g·kg-1·bw-1，中剂量组给流质营养食品浓度为16.6g·kg-1·bw-1，高剂量组流质营养食品浓度为24.9g·kg-1·bw-1，分别相当于人体推荐量(100g·60kg-1·bw-1)的5倍、10倍和15倍。每日除了饲喂各组小鼠2g基础饲料，还需在上午11：0 0灌胃相应的产品。灌胃体积为200μL·10g-1·bw-1，对照组给予等体积生理盐水灌胃。分别在第5、10、15天各组随机挑选6只小鼠拉颈处死。
2.3小鼠皮肤伤口愈合率的测定
致伤后每两天给小鼠伤口拍照，采用图像分析软件计算小鼠的伤口面积，直至伤口愈合。
愈合率＝[(原始伤口伤口面积—未愈合伤口面积)/原始伤口面积]×100％
伤口愈合(创面完全上皮化)标准：愈合面积大于原始伤口面积的或者伤口面积小于原始伤口面积的即为完全愈合。
2.4小鼠皮肤伤口组织常规病理结构变化分析
切取小鼠右侧伤口边缘约5mm的全层皮肤组织。用的10％中性缓冲福尔马林溶液固定24h，石蜡包埋，制成5μm厚的石蜡切片后进行H&E染色。在显微镜下观察伤口愈合过程中的病理变化包括炎性细胞浸润、血管生成、胶原纤维增生、成纤维细胞增殖和表皮形成。
2.5小鼠皮肤伤口组织中胶原的含量测定及组织化学病理分析
2.5.1羟脯氨酸含量测定
羟脯氨酸作为胶原蛋白特异性的基本成分，其含量可作为伤口组织胶原含量的重要指标。切取小鼠左侧伤口周围1-2mm的全层皮肤用于测定羟脯氨酸含量。
2.5.2胶原纤维染色病理分析
切取小鼠右侧伤口边缘约5mm的全层皮肤组织。用10％中性缓冲福尔马林溶液固定24h，石蜡包埋，制成5μm厚的石蜡切片后进行进行Masson染色。在显微镜下观察伤口愈合过程中胶原沉积的变化，每个处理组随机找10个不同的视野拍摄照片，使用如下标准评价胶原含量：无(0)，少量(1)，中量(2)和大量(3)。
2.6小鼠皮肤伤口组织中血管生成的免疫组织化学病理分析
免疫组化法可以检测促血管生成因子IGF-1(胰岛素样生长因子-1)和FGF-2(成纤维细胞生长因子-2)的表达。组织切片石蜡化，在pH6.0的10mmol/L柠檬酸缓冲液中用微波炉加热10分钟。再用0.3％过氧化氢甲醇处理15分钟部分阻断内源性过氧化物酶的活性。准备多克隆兔抗IGF-1和FGF-2，然后暴露过夜(4℃)。特异性标记是用过氧化物酶偶联的山羊抗兔IgG和抗生物素蛋白-生物素过氧化物酵复合物进行检测。在显微镜下以100倍的放大倍率观察并拍摄照片做病理分析，棕黄色染色为阳性染色。每个处理组在显微镜下随机找10个不同的视野拍摄照片，按如下标准评估组织中免疫反应的细胞密度：无(0)，少量(1)，中量(2)和大量(3)。从而分析这种流质营养食品对小鼠皮肤伤口组织中血管生成的影响。
统计方法所有的试验测定三次或三次以上，结果以均数±标准差表示。使用SPSS统计软件对每组数据进行分析。
3、结果
3.1流质营养食品对小鼠皮肤伤口愈合率的影响
随着时间的延长，各个处理组中小鼠皮肤伤口面积均逐渐减小，伤口愈合率呈升高趋势。
致伤后第8天，肉眼观察剂量组(低/中/高)的小鼠伤口面积明显小于对照组。致伤后第8天，剂量组(低/中/高)的小鼠伤口出现粉嫩的新组织，而对照组伤口均有结痂。致伤后第14天剂量组(低/中/高)的小鼠伤口愈合时表面光滑并且无结痂，而对照组表面有结痂。其中，在致伤后剂量组的伤口愈合率达到85％，可认为创面完全上皮化，即伤口愈合。试验结果说明这款流质营养食品可以加速伤口愈合。
3.2流质营养食品对小鼠皮肤伤口组织常规病理变化影响
对皮肤伤口进行组织学评价，包括中性粒细胞、装细胞等炎性细胞浸润(炎性细胞在炎症灶聚集的现象)、成纤维细胞增殖、胶原纤维增生、血管生成和表皮形成。
致伤后第5天，对照组伤口组织中大量炎性细胞浸润，大量血管生成，并有少量胶原纤维和成纤维细胞生成，表皮组织尚未形成；剂量组(低/中/高)伤口组织中有少量炎性细胞浸润，成纤维细胞和胶原纤维生成，并有皮肤附属器包括毛囊、汗腺和皮脂腺产生，表皮组织逐渐形成。
致伤后第9天，对照组伤口组织中大量炎性细胞浸润，大量胶原纤维和少量成纤维细胞生成，并有大量皮肤附属器产生，表皮组织逐渐形成；剂量组(低/中/高)伤口组织中少量炎性细胞浸润、大量成纤维细胞和胶原纤维生成，并有皮肤附属器产生，表皮组织逐渐形成。致伤后第15天，对照组伤口组织中大量炎性细胞浸润，大量胶原纤维和少量成纤维细胞生成，并有大量皮肤附属器产生，表皮组织逐渐形成；剂量组(低/中/高)伤口组织中少量炎性细胞浸润、大量有序密集的胶原纤维生成，并有大量包括毛囊的皮肤附属器产生，表皮基本形成。
对照组的H&E染色显微照片反映出伤口愈合过程明显延迟，并一直伴随着大量炎性细胞浸润；三个剂量组的染色显微照片结果表明这款流质营养食品可以减少炎症，促进组织重塑及再上皮化。
3.3流质营养食品对小鼠皮肤伤口组织胶原沉积的影响
3.3.1对对小鼠皮肤伤口组织中羟脯氨酸含量的影响
各处理组伤口处羟脯氨酸含量均随着时间的延长呈上升的趋势。在致伤后第9天，剂量组(低/中/高)羟脯氨酸含量显著高于对照组；第15天，剂量组(低/中/高)羟脯氨酸含量显著高于对照组。试验结果表明这款流质营养食品可以促进伤口愈合过程中的胶原沉积。
3.3.2对小鼠皮肤伤口组织中胶原含量的影响
胶原纤维增生即胶原沉积是在肉芽组织发展的重要事件之一，新形成的胶原的存在可以由Masson三色染色进行验证。Masson染色将胶原纤维染成蓝色，将肌纤维染成红色，将细胞核染成褐色。随着致伤后天数的增加，各处理组中胶原纤维均逐渐增多。致伤后第5天，剂量组胶原含量与对照组相比均无显著性差异；致伤后第9天，剂量组胶原含量显著高于对照组；第15天，高剂量组胶原含量均显著高于对照组。致伤后第5-15天，与对照组相比，各剂量组表现出显著的胶原纤维增生，其胶原纤维更有序、更密集。致伤后第15天，剂量组中大多数溃疡完全愈合，表皮和真皮的外观正常，有大量的胶原纤维产生。证明这款流质营养食品可以促进伤口愈合过程中的胶原沉积。
3.4流质营养食品对小鼠皮肤伤口血管生成的影响
3.4.1对小鼠皮肤伤口组织中IGF-1表达的影响
随着致伤天数的延长，对照组伤口组织中表达IGF-1呈增加趋势，剂量组伤口组织中IGF-1表达先增加后降低。
3.4.2对小鼠皮肤伤口组织中FGF-2表达的影响
随着致伤天数的延长，对照组伤口组织FGF-2表达呈增加趋势，三个剂量组伤口组织中表达均呈减少趋势。第15天，三个剂量组伤口组织中FGF-2表达显著低于对照组。
本实施例通过证明剂量组的伤口愈合率、羟脯氨酸含量均显著增加，在一定程度上说明服用这款流质营养食品能够促进小鼠皮肤伤口的愈合。伤口完全愈合是细胞和非细胞成分之间的相互作用的复杂的结果。在显微镜下，通过H&E染色可以观察到剂量组中炎性细胞减少、新产生毛细血管和成纤维细胞等。成纤维细胞是修复组织损伤所必须的胶原沉积的结缔组织细胞。试验结果说明本发明实施例1制得的流质营养食品可以促进组织重塑及再上皮化。
胶原蛋白是动物体中最丰富的蛋白质之一，占人体内总蛋白质的30％。在正常组织中胶原蛋白为维持其强度、完整性和结构起到重要作用。当组织由于损伤被破坏时，需要胶原来修复缺陷和恢复结构、功能。如果过多胶原在伤口部位沉积，正常的组织结构被破坏，并出现纤维化。相反，如果胶原淀积的量不足，伤口就会很薄弱，并且可能会裂幵。因此，当创面修复有缺陷时刺激适量的胶原蛋白合成将有利于促进伤口愈合。本实施例结果显示采用本发明流质营养食品的剂量组可以使羟脯氨酸含量显著增加。同时通过Masson染色得出结论：剂量组的胶原含量与对照组相比有显著性差异。Masson染色的结果与测得的伤口组织经脯氨酸含量的结果有一致性。
血管生成，就是在已经存在的微脉管系统中形成新的血管，也是伤口愈合的过程中必不可少的步骤。致伤后，血管可以输送氧气、营养物质和炎症细胞到损伤部位。它还帮助肉芽组织的形成发展，最终伤口闭合。血管生成是一个复杂的多阶段过程，其中多种细胞参与新血管的形成。许多细胞因子通过加速或延缓组织修复来影响伤口愈合过程。在这些细胞因子中，生长因子在所有组织伤口愈合的调节上起着至关重要的作用关键的细胞存活因子，如促血管生成因子IGF-1和FGF-2刺激细胞迁移、增殖和血管生成，这对于成功的伤口愈合和组织修复是必不可少的。
本实施例结果表明，在致伤后第5天，使用实施例1制得的流质营养食品剂量组处理使得促血管生成因子IGF-1表达增加，从而促进伤口愈合。结果也显示在致伤后第5天，通过免疫染色后发现在剂量组的伤口中生长因子FGF-2表达最多，与对照组比有极显著性差异。可以推测，本发明实施例1制得的流质营养食品能够提升IGF-1和FGF-2的表达，从而增加细胞增殖和血管生成，进而组促进伤口愈合。
实施例2和3制得的流质营养食品具有上述类似的功效。可见，本发明制得的流质营养食品能够促进皮肤伤口的愈合，减少炎症反应、促进肉芽组织形成包括毛细血管增生和成纤维细胞增殖，加速胶原形成，从而加速皮肤伤口的愈合。其机制可能是通过抑制过度的炎症介质释放来减轻局部的炎症反应和水肿，以及提高胶原蛋白合成的能力，在愈合过程中通过上调促血管生成因子胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)的水平，从而提高小鼠皮肤伤口的愈合速度和愈合质量。
实施例7本发明流质营养食品的体外模拟消化研究
本发明实施例1-3制得的流质营养食品蛋白质原料约占60％-80％，并且都是来源于乳品和鱼的水解型蛋白质，例如水解乳清蛋白、海洋鱼低聚肽。因此，本发明流质营养食品是否容易被人体消化吸收，关键点在于本发明流质营养食品中的蛋白质是否容易被消化吸收。评估一款食品是否容易被消化吸收的方式很多，比如以蛋白质消化吸收来评估的蛋白酶体外消化率试验，或以碳水化合物消化吸收来评估的淀粉酶体外消化试验，或以脂肪消化吸收来评估的脂肪酶体外消化吸收试验。本实施例以蛋白质消化吸收来评估的蛋白酶体外消化率试验，用来评价实施例1制得的流质营养食品消化吸收的特点。
蛋白质消化率是指人体从蛋白质中吸收的氮占摄入氮的比值，反映了食物蛋白质被消化酶分解、吸收的程度，是评价食物营养价值的重要指标之一。本实施例采用胃蛋白酶和胰蛋白酶模拟人体内消化环境，以未经水解的乳清蛋白、未经水解的海洋鱼胶原蛋白，代替试验组中的水解蛋白质而制成的流质营养食品为对照，研究三个对照组流质食品在胃、肠中的消化率及总消化率，并与试验组(实施例1制得的流质营养食品)进行比较。
1、材料
A试验组配方：每100g流质营养食品粉剂中含有水解乳清蛋白60g、海洋鱼低聚肽15g、麦芽糊精9.45g、果胶6g、菠萝粉4g、果糖2.5g、酵母β-葡聚糖0.2g、维生素预混料800mg，矿物质预混料2000mg、阿斯巴甜50mg。
B对照组配方：每100g流质营养食品粉剂中含有未经水解的乳清蛋白60g、未经水解的海洋鱼胶原蛋白15g、麦芽糊精9.45g、果胶6g、菠萝粉4g、果糖2.5g、酵母β-葡聚糖0.2g、维生素预混料800mg，矿物质预混料2000mg、阿斯巴甜50mg。
C对照组配方：每100g流质营养食品粉剂中含有未经水解的乳清蛋白75g、麦芽糊精9.45g、果胶6g、菠萝粉4g、果糖2.5g、酵母β-葡聚糖0.2g、维生素预混料800mg，矿物质预混料2000mg、阿斯巴甜50mg。
D对照组配方：每100g流质营养食品粉剂中含有未经水解的海洋鱼胶原蛋白75g、麦芽糊精9.45g、果胶6g、菠萝粉4g、果糖2.5g、酵母β-葡聚糖0.2g、维生素预混料800mg，矿物质预混料2000mg、阿斯巴甜50mg。
2、试剂
胃蛋白酶(1︰10 000)、凝乳酶(1︰5 000)、胰蛋白酶(1︰250)、盐酸、氢氧化钠、三氯乙酸
3、实验仪器与设备
全自动凯氏定氮仪；电热恒温水浴锅；振荡器；低温高速离心机；pH计。
4、试验方法
4.1体外模拟胃消化
将A、B、C、D样品用各自蒸馏水配制成蛋白质质量分数为1％的乳液，于37℃水浴中预热10min，用1mol/L的HCl调乳液至pH 3。在每百毫升样品中添加3×106U胃蛋白酶，于37℃恒温摇床上消化水解1.5h，然后用l mol/L的NaOH调节乳液至pH 7。灭酶，测定其中蛋白质的胃消化率。
4.2体外模拟肠消化
将A、B、C、D样品用蒸馏水配制成蛋白质质量分数为1％的乳液，于37℃水浴中预热10min，用1mol/L的HCl调乳液至pH 3。在每百毫升乳样中添加3×106U胃蛋白酶，于37℃恒温摇床上消化水解1.5h，然后用l mol/L的NaOH调节乳液至pH 7，再向每百毫升乳样中添加1.25×105U胰蛋白酶，于37℃恒温摇床上消化水解2h，然后沸水浴5min灭活，测定蛋白质的总消化率。
5、蛋白质体外消化率的测定
取10mL消化好的样品，向其中加入等体积24％的三氯乙酸溶液沉淀蛋白，14000r/min离心20min，收集上清液，用凯氏定氮法测定其中氮的含量，样品中蛋白质含量用凯氏定氮法测定，然后用公式(1)计算消化率，其中空白试验以蒸馏水代替样品消化液。
蛋白质消化率＝{[(m1-m0)×6.38]÷m2}×100％
式中：m1-样品上清液中氮的含量，g；m0-空白上清液中氮的含量，g；m2-样品中蛋白质的含量，g。
6、数据处理
试验数据采用SPSS 21.0分析处理，数据应用方差分析进行检验，p＜0.05为统计学有显著差异。
7、结果与分析
不同样品中蛋白质在模拟消化环境下的胃消化率和总消化率有一定差别。胃消化率高低排序为：A的胃消化率显著高于B、C、D；总消化率高低排序为：A的总消化率显著高于B、C、D。
蛋白质是生命的重要基础物质，其被机体吸收利用的程度将直接影响本款产品的营养价值。研究模拟人体胃肠道消化环境，对本发明流质营养食品进行蛋白质体外胃消化和总消化率分析和比较，从试验结果可知，B、C、D配方粉均显著小于A配方粉的胃消化率。这与A是一种易消化配方粉，其配方中的大分子乳清蛋白和海洋鱼胶原蛋白已被部分水解，在一定程度上降低了胃肠消化的负担，与理论上推测一致的。结果反映出，本发明流质营养食品的蛋白消化率高，能较好地被机体吸收利用。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (4)
1.一种流质营养食品，其特征在于，其配方为每100g流质营养食品中含有水解乳清蛋白50 - 70 g、海洋鱼低聚肽12 - 20g、麦芽糊精8 - 20 g、果胶4 - 8 g、菠萝粉2 - 4.5g、果糖2 - 4 g、L-乳酸钙1 - 3g、L-抗坏血酸钠130 - 500mg、酵母β-葡聚糖0.1 - 0.3 g、牛磺酸150 - 400 mg、葡萄糖酸锌60 -150 mg、硫酸亚铁30 - 90 mg、烟酸15 - 40 mg、dl-α-醋酸生育酚12 - 60 mg、D-泛酸钙4.5 - 10 mg、核黄素1.3 - 3.5 mg、盐酸吡哆醇1.0 -3.5 mg、盐酸硫胺素1.3 - 3mg、β-胡萝卜素0.5 - 1 mg、醋酸视黄酯3500 - 9000 IU、叶酸0.25 - 1 mg、氰钴胺3.5 - 18 μg、胆钙化醇40 - 3000IU、甜味剂40-70 mg。
2.如权利要求1所述的流质营养食品在制备术后病人特殊食品中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述术后病人为创伤或烧伤手术后抗感染治疗阶段的病人。
4.如权利要求2或3所述的应用，其特征在于，每100g权利要求1所述的流质营养食品，用可饮用水冲调至总体积650-750 ml。
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