CN106616233A - 一种可降解霉菌毒素的预混合饲料、其制备方法及猪日粮 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种可降解霉菌毒素的预混合饲料、其制备方法及猪日粮。该预混合饲料包括凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌。本发明一实施方式的可降解霉菌毒素的预混合饲料，性质稳定，不吸附维生素和其他营养物质，能高效清除霉菌毒素造成的饲料污染，改善适口性，提高动物食欲，使其增重加快，提早出栏。

Description

一种可降解霉菌毒素的预混合饲料、其制备方法及猪日粮

技术领域

本发明涉及畜牧业的预混合饲料，具体为一种可降解霉菌毒素的预混合饲料。

背景技术

霉菌毒素是由真菌(霉菌)产生的具有毒性的次级代谢产物，主要的霉菌毒素包括：黄曲霉毒素、单端孢霉烯族毒素(T2毒素、呕吐毒素)、玉米赤霉烯酮、赭曲霉素、烟曲霉素等。

联合国粮农组织(FAO)估计，全世界谷物25％受霉菌毒素污染，平均有2％的粮食由于霉变不能食用，全世界由于霉菌毒素污染造成每年数千亿美元的损失。据美国农业部统计，由于畜禽食用霉菌毒素污染的饲料，畜牧业每年遭受14.4亿美元的经济损失。我国华南、华东乃至华北地区收获季节雨量较多，农作物在田间就会受到霉菌的污染。因此，解决粮食霉菌毒素污染是一个世界性问题，是解决食品安全和人类健康的大问题。

联合国粮农组织(FAO)于1995年建议将危害分析与关键控制(HACCP)系统应用于霉菌毒素管理，通过加强作物生长、成熟、收获和贮存等各个环节的控制来最大限度的减少食品和饲料中的霉菌毒素。

霉菌毒素传统的物理和化学去毒方法存在效果不稳定、营养成分损失大、影响饲料适口性，且难以规模化生产等缺点而不能被广泛应用到实际生产中。而微生物及生物酶解毒因具有解毒效率高、特异性强、对饲料和环境没有污染等特点和优势，备受研究者的关注。

发明内容

为解决上述现有技术中的至少一种缺陷，本发明提供了一种可降解霉菌毒素的预混合饲料，包括凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌。

根据本发明的一实施方式，所述预混合饲料包括25～30质量份凝结芽孢杆菌、20～25质量份枯草芽孢杆菌和20～25质量份丁酸梭菌。

根据本发明的一实施方式，所述预混合饲料还包括酵母细胞壁和复合维生素。

根据本发明的一实施方式，所述预混合饲料包括25～30质量份凝结芽孢杆菌、20～25质量份枯草芽孢杆菌、20～25质量份丁酸梭菌、10～15质量份酵母细胞壁和5～10质量份复合维生素。

根据本发明的一实施方式，所述预混合饲料包括25质量份凝结芽孢杆菌、20质量份枯草芽孢杆菌、20质量份丁酸梭菌、10质量份酵母细胞壁和5质量份复合维生素。

本发明一实施方式还提供了一种可降解霉菌毒素的预混合饲料的制备方法，包括：

配制发酵液；

将凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌在所述发酵液中分别进行扩大培养，然后经液体深层发酵；以及

将发酵完成的各菌分别制成粉剂，按照一定质量比例混合后粉碎，制得所述可降解霉菌毒素的预混合饲料。

根据本发明的一实施方式，所述质量比例为，凝结芽孢杆菌:枯草芽孢杆菌:丁酸梭菌＝(25～30):(20～25):(20～25)。

本发明一实施方式进一步提供了一种猪日粮，包含上述的可降解霉菌毒素的预混合饲料。

本发明一实施方式的可降解霉菌毒素的预混合饲料，性质稳定，不吸附维生素和其他营养物质，能高效清除霉菌毒素造成的饲料污染，改善适口性，提高动物食欲，使其增重加快，提早出栏。

附图说明

图1为本发明应用例4的对照组、处理组Ⅰ、处理组Ⅱ的中毒猪阴户面积影响的统计图；

图2A为本发明应用例4中试验前对照组的母猪阴户状况的示意图；

图2B为本发明应用例4中试验后对照组的母猪阴户状况的示意图；

图3A为本发明应用例4中试验前处理组Ⅰ的母猪阴户状况的示意图；

图3B为本发明应用例4中试验后处理组Ⅰ的母猪阴户状况的示意图；

图4A为本发明应用例4中试验前处理组Ⅱ的母猪阴户状况的示意图；

图4B为本发明应用例4中试验后处理组Ⅱ的母猪阴户状况的示意图。

具体实施方式

体现本发明特征与优点的典型实施例将在以下的说明中详细叙述。应理解的是本发明能够在不同的实施例上具有各种的变化，其皆不脱离本发明的范围，且其中的描述在本质上是当作说明之用，而非用以限制本发明。

霉菌毒素生物降解指微生物、植物及其代谢产生的酶与毒素作用，使其分子结构中毒性基团被破坏而生成无毒降解产物的过程。以肠道菌群为靶标的，通过无菌动物模型、宏基因组技术，检测动物肠道菌群正向或负向丰度变化来评价发酵饲料对动物肠道菌群变化。

本发明一实施方式提供了一种可降解霉菌毒素的预混合饲料，包括凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌。

本发明一实施方式通过在常规预混料中添加凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌等复合微生物活性成分来降解霉菌毒素(例如玉米赤霉烯酮)，能有效替代抗生素添加剂，可提高饲料活性，促进动物健康，进而减少饲料原料浪费，提高饲料产业生产性能，并且提高动物免疫力，改善饲料适口性和转化率等，生产出绿色安全畜牧产品。

丁酸梭菌的主要代谢产物为丁酸，而丁酸是肠道上皮组织细胞的再生和修复的主要营养物质，能有效修复肠道粘膜结构，调节肠道的菌群平衡，增强动物机体的免疫功能。因此，预混合饲料中包含丁酸梭菌对肠道上皮组织的再生和修复有很重要的意义。

于本发明一实施方式中，预混合饲料还包含酵母细胞壁和复合维生素。本发明一实施方式的可降解霉菌毒素的预混合饲料，在凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌脱毒的同时，可通过酵母细胞壁吸附和中和细菌毒素。

本发明一实施方式的可降解霉菌毒素的预混合饲料，采用生物吸附和物理吸附相结合的方式，达到快速高效的吸附多种霉菌毒素的目的，且复合微生物等活性成分对饲料中的维生素、微量元素吸附性差，不破坏饲料营养成分的吸收率，极大地减少了营养成分的损失，且不受饲料加工工艺和高温影响，无停用时间，无残留。

于本发明一实施方式中，预混合饲料包括25～30质量份凝结芽孢杆菌、20～25质量份枯草芽孢杆菌和20～25质量份丁酸梭菌。

于本发明另一实施方式中，预混合饲料包括25～30质量份凝结芽孢杆菌、20～25质量份枯草芽孢杆菌、20～25质量份丁酸梭菌、10～15质量份酵母细胞壁和5～10质量份复合维生素。

于本发明另一实施方式中，预混合饲料包括25质量份凝结芽孢杆菌、20质量份枯草芽孢杆菌、20质量份丁酸梭菌、10质量份酵母细胞壁和5质量份复合维生素。

复合维生素可以去除自由基，保护生物膜和肝脏，免受霉菌毒素的氧化损伤。本发明对复合维生素的种类没有限定，现有的复合维生素均可用于本发明。

本发明对预混合饲料各成分的制备方法没有限定，各成分均可按照现有的方法制得，混合后即可得到本发明的仔猪复合预混料。例如，本发明一实施方式的可降解霉菌毒素的预混合饲料的制备方法，包括：

a、以常规发酵底物配制发酵液；

b、根据各菌株的特性，将凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌分别进行扩大培养，然后经液体深层发酵；

c、终止发酵后采用微囊包被喷雾干燥法，冻干制剂法制成粉剂，所有原料按一定的重量配比混合，搅拌均匀，粉碎成过20目筛的颗粒，制得产品即得到高活性可降解霉菌毒素的复合预混料。

其中，常规发酵底物可以包含玉米粉、蛋白胨、酵母提取物、糖蜜、水等。

本申请一实施方式的预混合饲料，不仅可显著提高仔猪的平均日增重，改善料肉比，显著降低仔猪的腹泻率以及死淘率，提高仔猪的生产性能以及经济效益，还可以提高母猪的采食量，降低母猪产后感染率，并能提高母畜的产奶量和乳汁率。

本申请一实施方式的预混合饲料，可使动物生殖系统免受霉毒素侵害，减少输卵管炎等生殖疾病，从而改善母畜发情、泌乳，减少死胎流产等，提高产仔数，使幼崽成活率高，提高了繁殖效率。本申请一实施方式的预混合饲料，还可保护免疫系统免受霉菌毒素的侵害，提高抗病率，减少发病率，并能高效清除霉菌毒素造的饲料污染。

下面，通过具体实施例对本发明一实施方式的可降解霉菌毒素的预混合饲料做进一步说明。其中，所使用的枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌及丁酸梭菌均购自华中农业大学微生物研究所；枯草芽孢杆菌的保藏号为GIM1.254，凝结芽孢杆菌的保藏号为GIM1.204，丁酸梭菌的保藏号为GIM1.676。如无特别说明，应用例中所使用的基础饲料的组成为：

基础日粮组成

原料	玉米	麸皮	豆粕	菜饼	预混料	磷酸氢钙	石粉	食盐
									日粮组成％	70	13	10	5	1	0	0.64	0.36

实施例

可降解霉菌毒素的预混合饲料的制备

a、以常规发酵底物(玉米粉、蛋白胨、酵母提取物、糖蜜、水)配制发酵液；

b、根据枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌及丁酸梭菌的特性分别进行扩大培养，然后先好氧后厌氧的方式进行液体深层发酵；

c、终止发酵后采用微囊包被喷雾干燥法，冻干制剂法将上述三种菌制成粉剂，按照20质量份枯草芽孢杆菌、25质量份凝结芽孢杆菌及20质量份丁酸梭菌的重量配比将三者混合，搅拌均匀，粉碎成过20目筛的颗粒，制得产品即得到高活性可降解霉菌毒素的预混合饲料。

应用例1活性度试验

以肠道菌群为靶标的活性饲料评价方法：通过无菌动物、宏基因组技术检测本申请实施例制得的预混合饲料对动物肠道菌群正向或负向波动来评价该预混合饲料的活性度。

实验动物与处理：

给猪源菌群小鼠模型(重庆三军医大学无菌实验室提供)分别饲喂实施例制得的预混合饲料(添加量5g/kg)、化学脱霉剂(蒙脱石，添加量5g/kg)、基础饲料

主要试剂与仪器：

DNA提取试剂盒、培养基、离体恒化器、PCR扩增仪、超低温冰箱(-80℃)、超净工作台、显微镜等。

1.体内活性因子评价

以猪源菌群小鼠模型为实验动物，通过16S rRNA检测方法，检测生物脱霉剂对肠道菌群的正向调控作用。

1.1实验动物与处理

将30只小鼠(6周龄，雌雄各半)分为3组，每组10只。对照组饲喂基础饲料，A组饲喂基础饲料+实施例制得的预混合饲料，B组饲喂基础饲料+化学脱霉剂。

1.2样本采集

自饲喂后的第4周起定期取小鼠新鲜粪便样品(3份)并拍照，装于2mL无菌EP管中，冻藏于-80℃待用。

1.3DNA提取

取小鼠粪便20mg，于2mL螺口管中，加入700μL裂解液；具体参照天根的粪便基因组DNA提取试剂盒的说明进行。

1.4 16S rRNA测序

每组3个重复，共9个样品测序。

2.体外活性因子评价

以接种猪肠道菌群的离体恒化器为模型，通过16S rRNA检测方法，检测本申请实施例制得的预混合饲料对肠道菌群的正向调控作用。

2.1离体恒化器分组和处理

使用3套离体恒化器模型，分为空白对照组、预混合饲料组及化学脱霉剂组，离体模型接种猪肠道菌群14d后，向预混合饲料组添加本申请实施例的预混合饲料2.5g，向化学脱霉剂组添加脱霉剂2.5g，连续作用8天。

2.2样本采集

粪便接种发酵罐后，在加预混合饲料及脱霉剂8天后采集培养液，装于2mL无菌EP管中，冻藏于-80℃待用，用于细菌数量检测和菌群结构分析。

2.3DNA提取和16S rDNA测序

方法同1.3与1.4。

3.实验结果

通过16S rDNA测序表明本申请实施例的预混合饲料对肠道菌群有正向激活作用：

(1)拟杆菌、梭菌、双歧杆菌、乳酸杆菌等有益共生菌群的丰度上调；

(2)肠球菌、肠杆菌等条件性致病菌的丰度下调；

(3)沙门氏菌和致病大肠杆菌等外源致病菌群消失。

应用例2仔猪解毒试验

将96只平均体重25±0.5kg健康的三元仔猪，随机分成3个处理，每个处理4个重复，每个重复8头仔猪，饲养期为21天。

空白对照组：饲喂基础日粮(正常玉米)；

霉玉米对照组：饲喂霉变玉米等量替换基础日粮中20％的正常玉米；

试验组：饲喂霉变玉米等量替换基础日粮中20％的正常玉米+1kg/t实施例的预混合饲料。

试验地点：河南某养殖试验场

表1实施例的预混合饲料和霉玉米对小猪的影响

表1的结果显示：霉玉米对照组可以导致仔猪拉稀，本申请实施例的预混合饲料可以防止仔猪拉稀，对霉玉米具有解毒作用。霉玉米对照组试验小猪采食2～3天后，个别小猪出现拉稀和阴门红肿现象，采食量下降，小猪生长缓慢。用液体状的本申请实施例的预混合饲料喷涂于基础饲料表面饲喂霉对照组小猪，2～3天后拉稀现象消失，5～7天后阴门红肿现象消失，后期采食量和日增重恢复到正常水平。

应用例3对断奶仔猪的促生长作用

本试验选用35±1日龄、平均体重7.86±0.06kg健康的三元(杜×长×大)杂交断奶仔猪90头，随机分为3个处理组，每个处理组设5个重复，每个重复6头仔猪(公母各半)，各重复组间初始体重无显著性差异(p>0.05)。3个处理组分别为：空白对照组(基础日粮)、抗生素对照组(金霉素的添加量为75mg/kg饲料)和试验组(本申请实施例的预混合饲料添加量1g/kg饲料)。仔猪自由采食和饮水，饲养管理和免疫程序参照仔猪饲养管理手册。

表2本申请实施例的预混合饲料对断奶仔猪的促生长作用

表2的结果显示：本申请实施例的预混合饲料可显著提高仔猪的平均日增重(p<0.05)，改善料肉比，并显著降低仔猪的腹泻率以及死淘率(p<0.05)，提高仔猪的生产性能以及经济效益，能有效替代抗生素添加剂。

应用例4对玉米赤霉烯酮中毒青年母猪症状的缓解效果

选择平均体重42～45kg左右的三元杂交青年母猪18头，随机分为3个处理，每个处理6个重复，每个重复1头猪。对照组饲喂正常日粮，处理组Ⅰ、Ⅱ前10天饲喂含玉米赤霉烯酮(240ppb)日粮，处理组Ⅱ第11天开始饲喂含玉米赤霉烯酮(240ppb)同时添加本申请实施例的预混合饲料(2kg/t)的日粮。

图1示出了添加本申请实施例的预混合饲料对玉米赤霉烯酮中毒猪阴户面积的影响；图2A至4B示出了试验前后母猪阴户变化情况。由图1至4B可知：饲喂玉米赤霉烯酮含量为240ppb的日粮可引起青年母猪玉米赤霉烯酮中毒，使猪的阴户面积增大，出现外阴红肿现象，在霉变日粮中添加本申请实施例的预混合饲料可缓解猪的中毒症状，使阴户面积恢复到正常组的水平。

应用例5对母猪的影响

将40头母猪按照体重、胎次随机分成两组，对照组饲喂基础日粮，试验组饲喂基础日粮+0.1％本申请实施例的预混合饲料宝，从产前一周开始饲喂，至产后三周断奶结束。

表3本申请实施例的预混合饲料对母猪繁殖和生产性能的改善

由表3可知：本申请实施例的预混合饲料可以提高母猪的采食量，降低母猪产后感染率，可以提高仔猪的日增重，降低仔猪的腹泻率和淘汰率。

除非特别限定，本发明所用术语均为本领域技术人员通常理解的含义。

本发明所描述的实施方式仅出于示例性目的，并非用以限制本发明的保护范围，本领域技术人员可在本发明的范围内作出各种其他替换、改变和改进，因而，本发明不限于上述实施方式，而仅由权利要求限定。

Claims (8)

1.一种可降解霉菌毒素的预混合饲料，包括凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌。

2.根据权利要求1所述的预混合饲料，包括25～30质量份凝结芽孢杆菌、20～25质量份枯草芽孢杆菌和20～25质量份丁酸梭菌。

3.根据权利要求1所述的预混合饲料，还包括酵母细胞壁和复合维生素。

4.根据权利要求3所述的预混合饲料，包括25～30质量份凝结芽孢杆菌、20～25质量份枯草芽孢杆菌、20～25质量份丁酸梭菌、10～15质量份酵母细胞壁和5～10质量份复合维生素。

5.根据权利要求4所述的预混合饲料，包括25质量份凝结芽孢杆菌、20质量份枯草芽孢杆菌、20质量份丁酸梭菌、10质量份酵母细胞壁和5质量份复合维生素。

6.一种可降解霉菌毒素的预混合饲料的制备方法，包括：

配制发酵液；

将凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌在所述发酵液中分别进行扩大培养，然后经液体深层发酵；以及

将发酵完成的各菌分别制成粉剂，按照一定质量比例混合后粉碎，制得所述可降解霉菌毒素的预混合饲料。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述质量比例为，凝结芽孢杆菌:枯草芽孢杆菌:丁酸梭菌＝(25～30):(20～25):(20～25)。

8.一种猪日粮，包含权利要求1至5中任一项所述的可降解霉菌毒素的预混合饲料。