CN106613971A - 一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法 - Google Patents
一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106613971A CN106613971A CN201611119666.4A CN201611119666A CN106613971A CN 106613971 A CN106613971 A CN 106613971A CN 201611119666 A CN201611119666 A CN 201611119666A CN 106613971 A CN106613971 A CN 106613971A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fast
- growing
- culture
- locust tree
- vitro
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241001493421 Robinia <trematode> Species 0.000 title abstract 7
- 238000012136 culture method Methods 0.000 title abstract 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 240000008375 Hymenaea courbaril Species 0.000 claims description 92
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 33
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 24
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000005972 6-Benzyladenine Substances 0.000 claims description 17
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 15
- 241000206575 Chondrus crispus Species 0.000 claims description 13
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 13
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 12
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 12
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 241000004441 Sorites Species 0.000 claims description 9
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 claims description 9
- 239000010451 perlite Substances 0.000 claims description 9
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 claims description 9
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 8
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 8
- 230000006872 improvement Effects 0.000 claims description 8
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 6
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 6
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 claims description 4
- YGGXZTQSGNFKPJ-UHFFFAOYSA-N methyl 2-naphthalen-1-ylacetate Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)OC)=CC=CC2=C1 YGGXZTQSGNFKPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004576 sand Substances 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229910021580 Cobalt(II) chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 3
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 3
- 241001237160 Kallima inachus Species 0.000 claims description 3
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052927 chalcanthite Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 3
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052603 melanterite Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 claims description 3
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 claims description 3
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000005648 plant growth regulator Substances 0.000 claims description 3
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 3
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 claims description 3
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 claims description 3
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 claims description 3
- 229910004619 Na2MoO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 239000011684 sodium molybdate Substances 0.000 claims description 2
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- VGKONPUVOVVNSU-UHFFFAOYSA-N naphthalen-1-yl acetate Chemical compound C1=CC=C2C(OC(=O)C)=CC=CC2=C1 VGKONPUVOVVNSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 claims 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 claims 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 claims 1
- 229910052564 epsomite Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 11
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 11
- 244000046101 Sophora japonica Species 0.000 description 7
- 235000010586 Sophora japonica Nutrition 0.000 description 7
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 6
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 6
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000002585 base Substances 0.000 description 4
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 3
- 244000100205 Robinia Species 0.000 description 3
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 3
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 206010054949 Metaplasia Diseases 0.000 description 1
- 229910018890 NaMoO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000015689 metaplastic ossification Effects 0.000 description 1
- -1 methyl α-naphthyl acetates Chemical class 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000004017 vitrification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Cultivation Of Plants (AREA)
Abstract
一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法,包括:(1)实验材料的选择;(2)具体实验步骤:(2.1)无菌外植体的获取;(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤;(2.3)速生无刺槐生根培养步骤;(2.4)速生无刺槐继代培养及生根培养条件;和(2.5)速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽。本发明通过继代增殖培养实现速生无刺槐的大规模生产,增殖系数高,平均增殖系数达到4以上;生根率高,最高可达95%;炼苗成活率高,平均为90%以上。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物组织培养的方法,具体涉及一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法,属于生物技术领域。
背景技术
速生无刺槐是人工选育出的一个刺槐优良无性系新品种,豆科刺槐属落叶乔木,树高可达30~35m。托叶刺小而软,1~2年生树有刺,3年生以后刺基本脱落。树体高大,干型通直,生长迅速,年胸径生长量为2.5~3.0cm,年树高生长量2m以上。叶色浓绿,花白色,有香气,花期5月。主要分布在北部暖温带落叶阔叶林区,分布的城市有沈阳、大连、北京、天津、石家庄、济南、青岛等。适应性强,抗寒、抗旱、耐瘠薄、耐盐碱,是盐碱地以及城市绿化的优良树种。
速生无刺槐属豆科刺槐属树种,有关无刺槐的研究尚处于起始阶段,仅中国农业大学有一篇关于《无刺桅杆槐和无刺槐再生体系的研究》的报道,该文章主要是从叶片再生角度进行无刺槐的研究,主要目的是为了通过建立再生体系进行基因工程育种,文章中无刺桅杆槐和无刺槐的再生率人别为60%、50%,生根率分别为55.6%、72.2%,组培苗移栽成活率为85%。本专利主要目的是通过继代增殖培养实现速生无刺槐的大规模生产,专利中速生无刺槐的增殖系数达到4以上,生根率达到95%以上,大棚炼苗移栽成活率达到90%以上,各项指标标准高,有利于速生无刺槐生产成本的降低,易于实现大规模的工厂化生产。
发明内容
本发明的目的在于,提供一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法,以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。
本发明所需要解决的技术问题,可以通过以下技术方案来实现:
一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法,其特征在于,包括:
(1)实验材料的选择:
选取继代周期为30~40天,生长健壮、叶片舒展,株高为3~5cm的速生无刺槐组培苗为实验材料,切除基部愈伤及基部叶片,保留1cm左右的顶芽、茎段及芽团;
(2)具体实验步骤:
(2.1)无菌外植体的获取;
(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤;
(2.3)速生无刺槐生根培养步骤;
(2.4)速生无刺槐继代培养及生根培养条件;
(2.5)速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽。
其中,步骤(2.1)无菌外植体的获取
选取1~2年生带芽体的健壮根系埋于育苗基质中,待新芽萌发出来后切割成1~2cm长的顶芽或带腋芽的茎段,剪去叶片留3~5mm叶柄,用75%酒精擦拭外植体表面,用洗衣粉水浸泡2min,再置于流水下冲洗0.5~1h;在超净工作台上,用0.05~0.1%的升汞处理10~15min,用无菌水冲洗5~6次,接种至诱导培养基中(MS+0.01~0.1mg/L 6-BA+30g/L糖+5~7g/L卡拉胶),每瓶接种一株,获得的无菌外植体的成功率为80%。
其中,步骤(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤:
(2.2.1)试验材料
选取步骤1中诱导出来的芽直接进行增殖培养,所选材料生长健壮、叶片舒展,利用顶芽、茎段及芽团进行繁殖,其中顶芽高0.8~1.2cm左右、茎段高0.5~1cm左右含至少一个腋芽、芽团高0.5~1cm至少含两个小芽;
(2.2.2)速生无刺槐继代培养的实验方案设计
速生无刺槐继代培养的基本培养基为改良DKW培养基,其中添加蔗糖30g/L,卡拉胶5~7g/L,土豆30g/L,pH为5.8~6.0。
选用6-BA(6-苄基腺嘌呤)、IBA(吲哚丁酸)、NAA(萘乙酸)植物生长调节剂,速生无刺槐继代培养最佳配方为:改良DKW+0.1mg/L 6-BA+0.2~0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+30g/L土豆+30g/L蔗糖+5~7g/L卡拉胶,采用该配方继代培养的速生无刺槐的最大增殖比例为4.1,且植株长高明显,能用于生根培养的单株苗多。
其中,步骤(2.3)速生无刺槐生根培养步骤
(2.3.1)选取继代培养的速生无刺槐组培苗,选取标准为高度1.5~3cm、健壮、叶片舒展的单株组培苗;
(2.3.2)将选取的继代培养的速生无刺槐组培苗接种至1/2MS生根培养基上,
1/2MS生根培养基中包括:NH4NO3 825mg/L、KNO3 950mg/L、KH2PO4 85mg/L、MgSO4·7H2O 185mg/L、CaCl2·2H2O 220mg/L、FeSO4·7H2O 13.9mg/L、Na2·EDTA·2H2O 18.65mg/L、KI 0.42mg/L、H3BO3 3.1mg/L、MnSO4·H2O8.45mg/L、ZnSO4·7H2O 4.25mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.05mg/L、CoCl2·6H2O0.0125mg/L、CuSO4·5H2O 0.0125mg/L、肌醇50mg/L、烟酸0.25mg/L、盐酸吡哆醇0.25mg/L、盐酸硫胺素0.05mg/L、甘氨酸1.0mg/L、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、20g/L蔗糖、5~7g/L卡拉胶;
(2.3.3)接种30天后统计生根率,生根率=生根株数/接种株数×100%;
筛选出的最适生根配方为:1/2MS+0.01mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+0.2mg/L IBA+20g/L土豆+20g/L蔗糖+5~7g/L卡拉胶。
其中,步骤(2.4)速生无刺槐继代培养及生根培养条件
速生无刺槐组培苗继代及生根培养的条件为:光培养与暗培养交替进行,光培养条件为连续进行12h光照,光照强度为3000lx,培养温度为25℃;暗培养条件为连续进行12h,温度为20℃。
其中,步骤(2.5)速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽
(2.5.1)生根培养30~45天的生根苗可进温室炼苗移栽,选取叶色正常、无枯叶黄叶的健壮植株进行移栽;
(2.5.2)将速生无刺槐生根苗根系上的培养基洗净,种植在含珍珠岩、草炭、河沙等基质的营养杯或穴盘中,湿度控制在75~80%,待新根与新叶发出后逐渐降低湿度,培养45~60天,即可得速生无刺槐容器苗,其大棚炼苗成活率为90%以上;
(2.5.3)上述所说基质配方包括上下两层,其中上层1/3容量体积为蛭石:珍珠岩=1:1;下层2/3容量体积为园土:草炭:河沙:珍珠岩=2:1:1:1。该基质配方的特点是上层基质疏松透气、保水保湿,利于炼苗前期新根及新叶的发出;下层基质营养丰富,利于后期组培苗营养生长,且根系与基质易于成团、便于容器苗运输。
本发明的有益效果:
本发明主要目的是通过继代增殖培养实现速生无刺槐的大规模生产,采用该方法繁殖的速生无刺槐具有如下优点:
(1)增殖系数高,平均增殖系数达到4以上;
(2)生根率高,最高可达95%;
(3)炼苗成活率高,平均为90%以上。与扦插繁殖相比,速生无刺槐组织培养繁殖的方式,生产上不受季节的限制,繁殖系数大;与再生培养相比,后代不易发生变异,操作方便,能实现大规模的工厂化生产,利于速生无刺槐的繁育及推广。
具体实施方式
以下结合具体实施例,对本发明作进一步说明。应理解,以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
实施例1
一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法,包括:
一实验材料
选取继代周期为30~40天,生长健壮、叶片舒展,株高为3~5cm的速生无刺槐组培苗为实验材料,切除基部愈伤及基部叶片,保留1cm左右的顶芽、茎段及芽团。
二具体实验步骤
一种速生无刺槐组培苗继代培养的方法,步骤如下:
1、无菌外植体的获取
选取1~2年生带芽体的健壮根系埋于育苗基质中,待新芽萌发出来后切割成1~2cm长的顶芽或带腋芽的茎段,剪去叶片留3~5mm叶柄,用75%酒精擦拭外植体表面,用洗衣粉水浸泡2min,再置于流水下冲洗0.5~1h;在超净工作台上,用0.05~0.1%的升汞处理10~15min,用无菌水冲洗5~6次,接种至诱导培养基中(MS+0.01~0.1mg/L 6-BA+30g/L糖+5~7g/L卡拉胶),每瓶接种一株,获得的无菌外植体的成功率为80%。
2、速生无刺槐继代增殖步骤:
(1)试验材料
选取步骤1中诱导出来的芽直接进行增殖培养,所选材料生长健壮、叶片舒展,利用顶芽、茎段及芽团进行繁殖,其中顶芽高0.8~1.2cm左右、茎段高0.5~1cm左右含至少一个腋芽、芽团高0.5~1cm至少含两个小芽。
(2)速生无刺槐继代培养的实验方案设计
速生无刺槐继代培养的基本培养基为改良DKW培养基,其中添加蔗糖30g/L,卡拉胶5~7g/L,土豆20~30g/L,pH为5.8~6.0。选用6-BA(6-苄基腺嘌呤)、IBA(吲哚丁酸)、NAA(萘乙酸)等植物生长调节剂。每个处理接种50瓶,每瓶接种6株,实验重复三次,培养30天统计增殖比例及生长情况,从而比较不同培养基对不定芽增殖的影响,进一步筛选出最佳继代增殖培养基。
改良DKW培养基主要针对培养基的大量元素进行改良,其它DKW添加物保持不变,改良表如表1:
表1
速生无刺槐继代培养细胞分裂素6-BA的筛选如表2:
表2
由上述表2结果显示,速生无刺槐继代培养所用细胞分裂素的最佳浓度为0.3~0.8mg/L。在此基础上进行速生无刺槐生长素种类的筛选,各处理结果如表3:
表3
由上述表3结果可知,使用6-BA与三种生长素组合培养的速生无刺槐基部愈伤组织大且蓬松;6-BA与IBA的组合培养的速生无刺槐易出现玻璃化现象;6-BA与IAA组合培养的速生无刺槐虽然丛芽多,但是植株不长高,不利于后期生根。综合分析适合速生无刺槐继代培养的生长素为NAA,在此基础上进一步筛选速生无刺槐的激素水平,各处理结果如表4:
表4
由上述表4结果可知,速生无刺槐继代培养最佳配方为:改良DKW+0.1mg/L 6-BA+0.2~0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+30g/L土豆+30g/L蔗糖+5~7g/L卡拉胶,采用该配方继代培养的速生无刺槐的最大增殖比例为4.1,且植株长高明显,能用于生根培养的单株苗多。
3、速生无刺槐生根培养步骤
(1)选取继代培养的速生无刺槐组培苗,选取标准为高度1.5~3cm、健壮、叶片舒展的单株组培苗;
(2)将选取的继代培养的速生无刺槐组培苗接种至1/2MS生根培养基上。
1/2MS生根培养基中包括:NH4NO3 825mg/L、KNO3 950mg/L、KH2PO4 85mg/L、MgSO4·7H2O 185mg/L、CaCl2·2H2O 220mg/L、FeSO4·7H2O 13.9mg/L、Na2·EDTA·2H2O 18.65mg/L、KI 0.42mg/L、H3BO3 3.1mg/L、MnSO4·H2O8.45mg/L、ZnSO4·7H2O 4.25mg/L、NaMoO4·2H2O0.05mg/L、CoCl2·6H2O0.0125mg/L、CuSO4·5H2O 0.0125mg/L、肌醇50mg/L、烟酸0.25mg/L、盐酸吡哆醇0.25mg/L、盐酸硫胺素0.05mg/L、甘氨酸1.0mg/L、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、20g/L蔗糖、5~7g/L卡拉胶。
(3)接种30天后统计生根率,生根率=生根株数/接种株数×100%。
生根培养基激素筛选如表5:
表5
由上述表5结果可知,IBA与NAA单独使用时不利于速生无刺槐组培苗的生根培养,而IBA与NAA配合使用时其生根率明显提高,但是有落叶现象,添加适量6-BA后能解决落叶问题。筛选出的最适生根配方为:1/2MS+0.01mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+0.2mg/L IBA+20g/L土豆+20g/L蔗糖+5~7g/L卡拉胶。该配方培养的速生无刺槐组培苗生根率最高可达95%,且根系数量多、根系粗壮,在炼苗移栽过程中提高了速生无刺槐组培苗的成活率,本发明不仅解决了速生无刺槐组培苗生根率低的问题,而且大大降低了生产成本,加快了速生无刺槐的工厂化生产及推广。
4、速生无刺槐继代培养及生根培养条件
速生无刺槐组培苗继代及生根培养的条件为:光培养与暗培养交替进行,光培养条件为连续进行12h光照,光照强度为3000lx,培养温度为25℃;暗培养条件为连续进行12h,温度为20℃。
5、速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽
(1)生根培养30~45天的生根苗可进温室炼苗移栽,选取叶色正常、无枯叶黄叶的健壮植株进行移栽;
(2)将速生无刺槐生根苗根系上的培养基洗净,种植在含珍珠岩、草炭、河沙等基质的营养杯或穴盘中,湿度控制在75~80%,待新根与新叶发出后逐渐降低湿度,培养45~60天,即可得速生无刺槐容器苗。其大棚炼苗成活率为90%以上。
(3)上述所说基质配方包括上下两层,其中上层1/3容量体积为蛭石:珍珠岩=1:1;下层2/3容量体积为园土:草炭:河沙:珍珠岩=2:1:1:1。该基质配方的特点是上层基质疏松透气、保水保湿,利于炼苗前期新根及新叶的发出;下层基质营养丰富,利于后期组培苗营养生长,且根系与基质易于成团、便于容器苗运输。
三对比分析
目前,国内几乎没有关于速生无刺槐组培苗繁殖方式的报道,一般采用的是扦插繁殖。仅中国农业大学有一篇关于《无刺桅杆槐和无刺槐再生体系的研究》的报道,该文章主要从叶片再生角度进行无刺槐的研究,再生繁殖的主要目的是为了通过建立再生体系进行基因工程育种,文章中无刺桅杆槐和无刺槐的再生率人别为60%、50%,生根率分别为55.6%、72.2%,组培苗移栽成活率为85%。本专利主要目的是通过继代增殖培养实现速生无刺槐的大规模生产,采用该方法繁殖的速生无刺槐具有如下优点:(1)增殖系数高,平均增殖系数达到4以上;(2)生根率高,最高可达95%;(2)炼苗成活率高,平均为90%以上。与扦插繁殖相比,速生无刺槐组织培养繁殖的方式,生产上不受季节的限制,繁殖系数大;与再生培养相比,后代不易发生变异,操作方便,能实现大规模的工厂化生产,利于速生无刺槐的繁育及推广。
以上对本发明的具体实施方式进行了说明,但本发明并不以此为限,只要不脱离本发明的宗旨,本发明还可以有各种变化。
Claims (6)
1.一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法,其特征在于,包括:
(1)实验材料的选择:
选取继代周期为30~40天,生长健壮、叶片舒展,株高为3~5cm的速生无刺槐组培苗为实验材料,切除基部愈伤及基部叶片,保留1cm左右的顶芽、茎段及芽团;
(2)具体实验步骤:
(2.1)无菌外植体的获取;
(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤;
(2.3)速生无刺槐生根培养步骤;
(2.4)速生无刺槐继代培养及生根培养条件;
(2.5)速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽。
2.根据权利要求1所述的一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法,其特征在于:步骤(2.1)无菌外植体的获取,
选取1~2年生带芽体的健壮根系埋于育苗基质中,待新芽萌发出来后切割成1~2cm长的顶芽或带腋芽的茎段,剪去叶片留3~5mm叶柄,用75%酒精擦拭外植体表面,用洗衣粉水浸泡2min,再置于流水下冲洗0.5~1h;在超净工作台上,用0.05~0.1%的升汞处理10~15min,用无菌水冲洗5~6次,接种至诱导培养基中(MS+0.01~0.1mg/L 6-BA+30g/L糖+5~7g/L卡拉胶),每瓶接种一株,获得的无菌外植体的成功率为80%。
3.根据权利要求1所述的一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法,其特征在于:步骤(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤:
(2.2.1)试验材料,
选取步骤1中诱导出来的芽直接进行增殖培养,所选材料生长健壮、叶片舒展,利用顶芽、茎段及芽团进行繁殖,其中顶芽高0.8~1.2cm左右、茎段高0.5~1cm左右含至少一个腋芽、芽团高0.5~1cm至少含两个小芽;
(2.2.2)速生无刺槐继代培养的实验方案设计,
速生无刺槐继代培养的基本培养基为改良DKW培养基,其中添加蔗糖30g/L,卡拉胶5~7g/L,土豆30g/L,pH为5.8~6.0;
选用6-BA(6-苄基腺嘌呤)、IBA(吲哚丁酸)、NAA(萘乙酸)植物生长调节剂,速生无刺槐继代培养最佳配方为:改良DKW+0.1mg/L 6-BA+0.2~0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+30g/L土豆+30g/L蔗糖+5~7g/L卡拉胶,采用该配方继代培养的速生无刺槐的最大增殖比例为4.1,且植株长高明显,能用于生根培养的单株苗多。
4.根据权利要求1所述的一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法,其特征在于:步骤(2.3)速生无刺槐生根培养步骤,
(2.3.1)选取继代培养的速生无刺槐组培苗,选取标准为高度1.5~3cm、健壮、叶片舒展的单株组培苗;
(2.3.2)将选取的继代培养的速生无刺槐组培苗接种至1/2MS生根培养基上,
1/2MS生根培养基中包括:NH4NO3 825mg/L、KNO3 950mg/L、KH2PO4 85mg/L、MgSO4·7H2O185mg/L、CaCl2·2H2O 220mg/L、FeSO4·7H2O 13.9mg/L、Na2·EDTA·2H2O 18.65mg/L、KI0.42mg/L、H3BO3 3.1mg/L、MnSO4·H2O 8.45mg/L、ZnSO4·7H2O 4.25mg/L、Na2MoO4·2H2O0.05mg/L、CoCl2·6H2O 0.0125mg/L、CuSO4·5H2O 0.0125mg/L、肌醇50mg/L、烟酸0.25mg/L、盐酸吡哆醇0.25mg/L、盐酸硫胺素0.05mg/L、甘氨酸1.0mg/L、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、20g/L蔗糖、5~7g/L卡拉胶;
(2.3.3)接种30天后统计生根率,生根率=生根株数/接种株数×100%;
筛选出的最适生根配方为:1/2MS+0.01mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+0.2mg/L IBA+20g/L土豆+20g/L蔗糖+5~7g/L卡拉胶。
5.根据权利要求1所述的一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法,其特征在于:步骤(2.4)速生无刺槐继代培养及生根培养条件,
速生无刺槐组培苗继代及生根培养的条件为:光培养与暗培养交替进行,光培养条件为连续进行12h光照,光照强度为3000lx,培养温度为25℃;暗培养条件为连续进行12h,温度为20℃。
6.根据权利要求1所述的一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法,其特征在于:步骤(2.5)速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽,
(2.5.1)生根培养30~45天的生根苗可进温室炼苗移栽,选取叶色正常、无枯叶黄叶的健壮植株进行移栽;
(2.5.2)将速生无刺槐生根苗根系上的培养基洗净,种植在含珍珠岩、草炭、河沙等基质的营养杯或穴盘中,湿度控制在75~80%,待新根与新叶发出后逐渐降低湿度,培养45~60天,即可得速生无刺槐容器苗,其大棚炼苗成活率为90%以上;
(2.5.3)上述所说基质配方包括上下两层,其中上层1/3容量体积为蛭石:珍珠岩=1:1;下层2/3容量体积为园土:草炭:河沙:珍珠岩=2:1:1:1,该基质配方的特点是上层基质疏松透气、保水保湿,利于炼苗前期新根及新叶的发出;下层基质营养丰富,利于后期组培苗营养生长,且根系与基质易于成团、便于容器苗运输。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201611119666.4A CN106613971B (zh) | 2016-12-08 | 2016-12-08 | 一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201611119666.4A CN106613971B (zh) | 2016-12-08 | 2016-12-08 | 一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106613971A true CN106613971A (zh) | 2017-05-10 |
CN106613971B CN106613971B (zh) | 2019-08-16 |
Family
ID=58819758
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201611119666.4A Expired - Fee Related CN106613971B (zh) | 2016-12-08 | 2016-12-08 | 一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106613971B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109479725A (zh) * | 2019-01-15 | 2019-03-19 | 鲁东大学 | 一种胡杨组培苗瓶外生根的方法 |
CN110178689A (zh) * | 2019-06-06 | 2019-08-30 | 贵州省农科院山茂园艺工程技术有限公司 | 一种百合组培苗炼苗的基质配制方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1582641A (zh) * | 2004-05-25 | 2005-02-23 | 山东省林业科学研究院 | 四倍体刺槐转基因及组培快繁方法 |
CN102499087A (zh) * | 2011-11-01 | 2012-06-20 | 北京林业大学 | 一种刺槐的离体培养和植株再生的方法 |
CN104686327A (zh) * | 2015-02-21 | 2015-06-10 | 杨业云 | 一种单叶刺槐组培快繁体系的建立方法 |
-
2016
- 2016-12-08 CN CN201611119666.4A patent/CN106613971B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1582641A (zh) * | 2004-05-25 | 2005-02-23 | 山东省林业科学研究院 | 四倍体刺槐转基因及组培快繁方法 |
CN102499087A (zh) * | 2011-11-01 | 2012-06-20 | 北京林业大学 | 一种刺槐的离体培养和植株再生的方法 |
CN104686327A (zh) * | 2015-02-21 | 2015-06-10 | 杨业云 | 一种单叶刺槐组培快繁体系的建立方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
田琳琳等: "无刺桅杆槐和无刺槐再生体系的研究", 《中国农业大学学报》 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109479725A (zh) * | 2019-01-15 | 2019-03-19 | 鲁东大学 | 一种胡杨组培苗瓶外生根的方法 |
CN109479725B (zh) * | 2019-01-15 | 2021-07-06 | 鲁东大学 | 一种胡杨组培苗瓶外生根的方法 |
CN110178689A (zh) * | 2019-06-06 | 2019-08-30 | 贵州省农科院山茂园艺工程技术有限公司 | 一种百合组培苗炼苗的基质配制方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106613971B (zh) | 2019-08-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101647392B (zh) | 喜临门杜鹃品种的组织培养快繁方法及其专用培养基 | |
CN102301952B (zh) | 一种甘菊繁殖方法 | |
CN101946703B (zh) | 以叶片为外植体的月季再生植株的方法 | |
CN102845313A (zh) | 狗枣猕猴桃的离体快速繁殖方法 | |
CN101536674A (zh) | 粗肋草的组织培养繁殖方法 | |
CN109392712A (zh) | 一种软枣猕猴桃品种的组培快繁方法 | |
CN107801632A (zh) | 抗寒月季组织培养繁育方法 | |
CN104642109A (zh) | 一种以鳞茎片为外植体构建大蒜微繁的方法 | |
CN101167441B (zh) | 单叶省藤无性系组培快繁方法 | |
CN102823502A (zh) | 毛葡萄离体快速繁殖培养方法 | |
CN105379624A (zh) | 一种粗皮桉的组培快繁方法 | |
CN106665353B (zh) | 一种巨紫荆组培苗的继代培养方法 | |
CN104920225B (zh) | 一种金叶复叶槭的组培快繁方法 | |
CN106613971B (zh) | 一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法 | |
CN105900837B (zh) | 一种通过悬浮培养快速繁育铁兰种苗的方法 | |
CN103503771A (zh) | 澳洲紫蔓豆种苗的组培快繁方法 | |
CN105284621B (zh) | 一种通过体胚培养获得大量小蓬竹再生植株的方法 | |
CN107484665A (zh) | 一种利用黑果枸杞休眠枝条成苗的方法 | |
CN108391591A (zh) | 一种黄花风铃木组织培养快繁方法 | |
CN108112479A (zh) | 一种番木瓜组培苗分化芽的茎段悬空植叶促根方法 | |
CN109526748B (zh) | 一种白鹤芋花序组织培养方法 | |
CN100512629C (zh) | 黄藤无性系组培繁殖方法 | |
CN105340742A (zh) | 一种云南樱桃成年优良单株“广州”樱的组培快繁方法 | |
CN104782499B (zh) | 一种利用茎节腋芽繁殖香根草种苗的方法 | |
CN113475402B (zh) | 一种利用橡胶树幼嫩茎段离体培养试管苗的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230316 Address after: 200333 Room 2403, No. 44, Lane 1817, Zhenbei Road, Putuo District, Shanghai Patentee after: Shanghai Jingyi Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 201801 room 2002, building 2, No. 2762, Bao'an Road, Jiading District, Shanghai Patentee before: SHANGHAI SHANYI PLANT TECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20190816 |