CN106589116A - 一种黄病毒人源单克隆抗体及应用 - Google Patents

一种黄病毒人源单克隆抗体及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种黄病毒人源单克隆抗体及应用，属于医药技术领域。本发明获得了3个可以与ZIKV‑E蛋白结合的抗体并确定了3个抗体的结合位点。本发明的3株抗体与已经报道的ZIKV抗体序列完全不同，是3个新发现的抗体。这三株抗体与ZIKV‑E的结合常数分别为39.9pM(Z5)，44.7pM(Z6)和200pM(Z7)，说明三株人源抗体均有很强的寨卡病毒E蛋白结合能力。通过竞争实验，三株抗体结合的位点都与2A10G6存在竞争关系，说明三株抗体结合位点在FL附近，而黄病毒科的E蛋白在FL处高度保守。本发明的抗体有效检测常见的黄病毒科的病毒：寨卡病毒，登革1‑4型以及黄热病毒的感染，巨大的临床检测及基础研究的应用价值。

Description

一种黄病毒人源单克隆抗体及应用
技术领域
本发明涉及一种黄病毒人源单克隆抗体及应用，属于医药技术领域。
背景技术
2015年中南美洲暴发寨卡疫情，目前已经造成69个国家数百万人感染，我国也出现数例输入性病例。随着人口的流动及气候变化，寨卡病毒在我国存在较高的流行风险。然而，由于寨卡病毒感染时，80％患者无明显症状，20％患者症状轻微，不会引起患者重视。寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)属于黄病毒科，主要由蚊虫叮咬传播。同时，寨卡病毒可以通过母胎屏障，造成新生儿小头症。除此之外，寨卡病毒可以通过性传播。临床数据显示寨卡病毒既可以通过男性患者传染女性，也可以通女性患者传染男性。并且，研究表明男性精液中的寨卡病毒可存活62天，在他发病42天后仍能将寨卡病毒通过性接触传染给女性伴侣。越来越多的证据表明寨卡病毒感染的危害超出我们的认识：如引起新生儿小头症和神经症状(“格林-巴利综合征”等)。最近的研究揭示寨卡病毒感染雄性小鼠可造成睾丸损伤，并最终导致不育。因此必须要对寨卡病毒持续监控及检测，尤其对于育龄人群的检测更为重要。另外，为了研究寨卡病毒及其它黄病毒的致病机制、评估疫苗和治疗性药物效果等，动物模型，如小鼠模型的研究必不可少，这也迫切需要亲和力高，背景低的抗体用于实验研究。
寨卡病毒是有囊膜的正链RNA病毒。囊膜上有E蛋白。E蛋白负责受体识别、结合及膜融合，含有重要的中和抗体表位。同时，E蛋白也是检测病毒的理想抗原。X-射线晶体学结构显示黄病毒E蛋白有三个结构域：DI，DII和DIII。DII头部(98-110位氨基酸)包含一个高度保守的融合区(fusion loop，FL)，在病毒入侵的膜融合过程中起关键作用。不同黄病毒FL区域保守性非常高，在病毒感染过程中，免疫细胞会产生大量的针对FL的抗体。
已有研究发现有一些针对黄病毒的广谱抗体，如：2A10G6、4G2，这些抗体都是通过鼠杂交瘤融合产生的针对FL的抗体，其中2A10G6与E蛋白的亲和力KD＝2.7nM，4G2与E蛋白的亲和力未知，未见文献报道，因此在基础研究和临床检测中，可能存在亲和力较低，特异性不好，背景高的问题，一定程度上限制了抗体的使用及灵敏度。
本发明的目的是鉴定高亲和力的人源抗体，用于基础研究和临床检测。
发明内容
为了解决上述问题，本发明以大肠杆菌表达的寨卡E蛋白作为抗原，从一例康复期寨卡患者的PBMCs中筛选到可以结合寨卡E蛋白的记忆B细胞。然后对筛选的单一B细胞进行RT-PCR，获得抗体的可变区序列与片段，并进一步与恒定区连接至表达载体中。经哺乳动物细胞表达、纯化后，检测与ZIKE-E蛋白的结合力。本发明获得了3株高亲力结合E蛋白的人源单克隆抗体。
本发明的单克隆抗体，或抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列和/或轻链可变区的氨基酸序列，包含至少一个(比如三个)克隆Z5、克隆Z6或克隆克隆Z7的重链和/或轻链可变区的互补决定区(CDR)。
本发明的第一个目的是提供一种抗体，或抗原结合片段，其包含(A)或(B)或(C)或(D)：
(A)抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:1的26-35位，53-59位，和/或98-105位的氨基酸残基，且抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:2的26-34位，52-54位，和/或91-100位的氨基酸残基；
(B)抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:11的26-35位，53-59位，和/或98-107位氨基酸残基，及抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:12的27-32位，50-52位，和/或89-97位氨基酸残基；
(C)抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:21的26-35位，53-59位，和/或98-111位氨基酸残基，及抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:22的26-33位，51-53位，和/或90-100位氨基酸残基；
(D)在上述(A)、(B)、(C)中限定的位点处的氨基酸进行任何修饰或者替换而得到的抗体。
其中，所述的抗体或抗原结合片段特异性结合ZIKE-E蛋白。
在本发明的一种实施方式中，所述抗体或抗原结合片段，其重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的序列具有至少90％的序列相似度且轻链可变区氨基酸序列与SEQ IDNO:2的序列具有至少90％的序列相似度，或者其重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:11的序列具有至少90％的序列相似度且轻链可变区氨基酸序列与SEQ ID NO:21的序列具有至少90％的序列相似度，或者其重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:31的序列具有至少90％的序列相似度且轻链可变区氨基酸序列与SEQ ID NO:32的序列具有至少90％的序列相似度。
在本发明的一种实施方式中，所述抗体或抗原结合片段，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:1且轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:2，或者其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:11且轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:21，或者其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:31且轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:32。
在本发明的一种实施方式中，所述抗体命名为Z5；其重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO:3、轻链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO:4。
在本发明的一种实施方式中，所述抗体命名为Z6；其重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO:13、轻链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO:14。
在本发明的一种实施方式中，所述抗体命名为Z7；其重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO:23、轻链可变区的核苷酸序列为SEQ ID NO:24。
在本发明的一种实施方式中，所述抗体的重链，包括重链可变区和重链恒定区，其中重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示(核苷酸序列如SEQ ID NO:32所示)。
在本发明的一种实施方式中，所述抗体Z6的轻链为κ链，Z5和Z7的轻链为λ链；轻链包括轻链可变区和轻链恒定区；κ链的轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:33所示(核苷酸序列如SEQ ID NO:34所示)，λ链的轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:35所示(核苷酸序列如SEQ ID NO:36所示)。
本发明的三个抗体，来源于同一病患者，并且均靶向寨卡病毒特有的囊膜蛋白-E蛋白，通过结合E蛋白的DII区域的fusion loop与E蛋白高亲和力结合。
本发明的第二个目的是提供编码所述抗体片段或者抗原结合片段的核苷酸序列、含有所述核苷酸序列的质粒、含有所述质粒的宿主细胞等。
在本发明的一种实施方式中，编码所述抗体的重链的序列，依次包括CMV启动子序列、EcoR I酶切位点序列、前导序列、编码重链可变区的序列、编码重链恒定区的序列、XhoI酶切位点序列。
在本发明的一种实施方式中，所述抗体的轻链，为κ链和/或λ链；轻链包括轻链可变区和轻链恒定区。
在本发明的一种实施方式中，编码所述抗体的轻链的序列，依次包括CMV启动子序列、第一酶切位点序列、前导序列、编码轻链可变区的序列、编码轻链恒定区的序列、酶切位点序列Xho I。
在本发明的一种实施方式中，所述抗体的轻链为κ链，第一酶切位点为Sac I。
在本发明的一种实施方式中，所述抗体的轻链为λ链，第一酶切位点为EcoR I。
在本发明的一种实施方式中，所述前导序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:37所示(核苷酸序列如SEQ ID NO:38所示)。
在本发明的一种实施方式中，所述质粒为病毒质粒。
本发明的第三个目的是提供所述抗体或者抗原结合片段、编码所述抗体片段或者抗原结合片段的核苷酸序列、含有所述核苷酸序列的质粒、含有所述质粒的细胞在制备治疗和/或预防黄病毒病毒的药物方面的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述黄病毒病毒为寨卡病毒、登革1-4型或者黄热病毒。
本发明的第四个目的是提供一种药物组合物，所述药物组合物含有有效预防剂量的本发明所述的抗体或者抗原结合片段。
在本发明的一种实施方式中，所述药物组合物还含有医药学上可接受的载体。
本发明的第五个目的是提供一种试剂盒，所述试剂盒中含有本发明所述的抗体或者抗原结合片段，或者编码所述抗体或者抗原结合片段的核苷酸序列，或者表达所述抗体或者抗原结合片段的重组载体/表达盒/转基因细胞系/重组菌。
本发明的有益效果：
本发明获得了3个可以与ZIKV-E蛋白结合的抗体：Z5、Z6和Z7，并确定了3个抗体的结合位点。本发明的3株抗体与已经报道的ZIKV抗体序列完全不同，是3个新发现的抗体。这三株抗体与ZIKV-E的结合常数分别为39.9pM(Z5)，44.7pM(Z6)和200pM(Z7)，说明三株人源抗体均有很强的寨卡病毒E蛋白结合能力。通过竞争实验，三株抗体结合的位点都与2A10G6存在竞争关系，说明三株抗体结合位点在FL附近，而黄病毒科的E蛋白在FL处高度保守。本发明的抗体有效检测常见的黄病毒科的病毒：寨卡病毒，登革1-4型以及黄热病毒的感染，有巨大的临床检测及基础研究的应用价值。
附图说明
图1：ZIKV-E蛋白纯化分子筛与SDS-PAGE结果；
图2：Z5纯化的分子筛层析结果；
图3：Z6纯化的分子筛层析结果；
图4：Z7纯化的分子筛层析结果；
图5：Z5、Z6、Z7与ZIKV-E的动力学曲线；
图6：Z5、Z6、Z7与2A10G6的竞争性试验；
图7：Z6检测寨卡病毒感染；
图8：Z6检测登革-1感染；
图9：Z6检测登革-2感染；
图10：Z6检测登革-3感染；
图11：Z6检测登革-4感染；
图12：Z6检测黄热病毒疫苗株YF-17D感染。
具体实施方式
实施例1：寨卡E蛋白的表达与纯化
ZIKVE(氨基酸序列如SEQ ID NO:39所示、核苷酸序列如SEQ ID NO:40所示)胞外区DNA片段通过NdeI和XhoI酶切后，连接到pET21a载体上。其中ZIKV E蛋白编码区的3’端连上6个组氨酸标签(hexa-His-tag)的编码序列及翻译终止密码子。再将连接产物转化到BL21大肠杆菌感受态细胞。单克隆接种到40mL LB培养基中，培养6-8小时。接种到4L的LB培养基中，37℃培养至OD600＝0.4-0.6，加入IPTG至终浓度1mM，37℃继续培养4-6小时。收获包涵体，通过在稀释法复性包涵体。复性液浓缩后换成20mM Tris，150mM NaCl，pH8.0缓冲液。将浓缩后的蛋白溶液进一步以分子排阻层析纯化，使用AKTA-purifier(GE)和superdex200 Hiload 16/60柱子(GE)，使用缓冲液A(20mM Tris，150mM NaCl，pH8.0，同时监测280nm的紫外吸收值，收取目的蛋白，并通过SDS-PAGE鉴定蛋白纯度。结果如图1。
实施例2：ZIKV-E蛋白特异性记忆B细胞的分离
在病人的知情同意下，采集15mL的血液，分离PBMCs。将分离的PBMCs以107/mL的密度与终浓度是100nM的ZIKV-E蛋白冰上孵育结合半小时，然后用PBS洗2次，再与下列抗体孵育：anti-human CD3/PE-Cy5，anti-human CD16/PE-Cy5，anti-human CD235a/PE-Cy5，anti-human CD19/APC-Cy7，anti-human CD27/Pacific Blue，anti-human CD38/APC，anti-human IgG/FITC，以及anti-His/PE。抗体冰上孵育半小时后，用PBS洗2次。
经FACSAria III分选收集PE-Cy5-APC-APC-Cy7+Pacific Blue+FITC+PE+的细胞，直接收集到96孔板内，1细胞/孔。
实施例3：单一B细胞PCR及序列分析
将实施例2获得的细胞通过Superscript III reverse transcriptase(Invitrogen)逆转录，逆转录引物如表1，55℃反应60min。将此逆转录产物作为模板，用HotStar Tap Plus酶(QIAgen)进行PCR，扩增抗体可变区序列(PCRa)。引物如表2和3，反应条件如下：95℃，5min；95℃30s，55℃(重链/κ链)/50℃(λ链)30s，72℃90s，35个循环，72℃7min。将此作为模板再进行1轮PCR(PCRb)，条件如下：95℃5min；95℃30s，58℃(重链)/60℃(κ链)/64℃(λ链)30s，72℃90s，35个循环，72℃7min。
1.2％的琼脂糖凝胶电泳，分离PCR产物。条带大小在400-500bp的切胶回收后送测序公司测序。测序结果用IMGT在线软件进行分析。
分析正确的可变区序列与相应的重链/κ链/λ链的恒定区通过搭桥PCR连接,克隆至表达载体pCAGGS中。其中重链与λ链以EcoRI和XhoI连接，κ链以SacI与XhoI连接。表达质粒构建如下：
人源抗体设计策略如下：
重链：CMV promoter-EcoR I-Leader sequences-重链可变区-CH-Xho I；
轻链(κ)：CMV promoter-Sac I-Leader sequences-轻链可变区-CL(κ)-Xho I；
轻链(λ)：CMV promoter-EcoR I-Leader sequences-轻链可变区-CL(λ)-Xho I。
其中，Leader sequences的氨基酸序列如SEQ ID NO:37所示(核苷酸序列如SEQID NO:38所示)。
得到了3个抗体Z5、Z6、Z7，其轻、重链CDR序列如表1所示。
表1抗体Z5、Z6、Z7的轻、重链CDR序列
注：H代表重链、L代表轻链。
其中Z5的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:1(核苷酸序列如SEQ ID NO:3)，SEQ ID NO.5～SEQ ID NO.7的CDR-H序列分别位于SEQ ID NO:1序列的第26-35位、53-59位、98-105位；Z5的轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:2(核苷酸序列如SEQ ID NO:4)，SEQ ID NO.8～SEQ ID NO.10的CDR-L序列分别位于SEQ ID NO:2序列的第26-34位、52-54位、91-100位。
其中Z6的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:11(核苷酸序列如SEQ ID NO:13)，SEQ ID NO.15～SEQ ID NO.17的CDR-H序列分别位于SEQ ID NO:11序列的第26-35位、53-59位、98-107位；Z6的轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:12(核苷酸序列如SEQ IDNO:14)，SEQ ID NO.18～SEQ ID NO.20的CDR-L序列分别位于SEQ ID NO:12序列的第27-32位、50-52位、89-97位。
其中Z7的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:21(核苷酸序列如SEQ ID NO:23)，SEQ ID NO.25～SEQ ID NO.27的CDR-H序列分别位于SEQ ID NO:21序列的第26-35位、53-59位、98-111位；Z7的轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:22(核苷酸序列如SEQ IDNO:24)，SEQ ID NO.28～SEQ ID NO.30的CDR-L序列分别位于SEQ ID NO:22序列的第26-33位，51-53位，和/或90-100位。
所述抗体Z5、Z6、Z7的重链恒定区CH的氨基酸序列为SEQ ID NO:31(核苷酸序列如SEQ ID NO:32)。
Z6轻链均为κ型，轻链恒定区CL(κ)的氨基酸序列为SEQ ID NO:33(核苷酸序列如SEQ ID NO:34)
Z5和Z7的轻链为λ型，轻链恒定区CL(λ)的氨基酸序列为SEQ ID NO:35(核苷酸序列如SEQ ID NO:36)
实施例4：抗体的表达及纯化
用含10％FBS的DMEM培养293T细胞。用含有特定抗体轻、重链编码基因的质粒共转染293T。转染4-6小时后给细胞换液成无血清的DMEM继续培养3天，收集上清，并补加DMEM，再培养4天，收集上清。
收集的上清经过5000rpm离心30min后，与含有20mM磷酸钠(pH 8.0)等体积混合，经过0.22μm滤膜过滤后，与protein A预装柱结合(5mL，GE Healthcare)。以10mM甘氨酸(pH3.0)洗脱结合的蛋白。收集此蛋白浓缩后进行分子筛层析。目的峰通过SDS-PAGE确定，结果如图2、3以及4。
实施例5：抗体的性能检测
(1)表面等离子共振技术检测与ZIKV-E的结合能力
表面等离子共振分析利用Biacore T100(Biacore Inc.)进行。具体步骤如下：
首先，将anti-human IgG的抗体以氨基偶联的方式固定在CM5芯片的通道(flowcell,Fc)1与Fc2。固定量控制在10,000响应值(response units,RU)左右。将通道调至Fc2，然后以抗体捕获的方式结合纯化的抗体，此时，液流速度控制在10μL/min，进样1min，抗体捕获量在100RU左右。再以10mM HEPES，150mM NaCl，pH 7.4溶液倍比稀释ZIKV-E蛋白，流速调至30μL/min，通道调至Fc2-Fc1的模式后，从低浓度开始逐一上样ZIKA-E蛋白。曲线组成图如图5所示的动力学曲线。结果如表2所示。结合动力学常数的计算是利用BIAevaluationsoftware T100(Biacore，Inc.)软件进行。
表2人源抗体与ZIKV E蛋白结合的动力学常数
结果显示，三株抗体均可以与ZIKV-E蛋白结合。
(2)Z5、Z6与Z7结合位点的确定
确认3个抗体可以与ZIKV-E蛋白结合后，发明人通过竞争实验确认3个抗体的结合位点。2A10G6与ZIKV-E蛋白的结合位点已经确定(PDB:5JHL)，靶向FL。发明人通过与2A10G6竞争实验检测3个抗体的结合位点与FL的关系。Ni-NTA探针首先与ZIKV-E(C端含有6*His)蛋白结合，用buffer洗去未结合的E蛋白，然后分别与Z5、Z6和Z7结合，当抗体达到饱和后，再与Z5/Z6/Z7+2A10G6结合，检测后者是否有额外的响应值的上升。结果如图6所示，2E6是MERS-CoV的中和抗体，作为阴性对照，2E6不能结合ZIKV-E蛋白，在第一相不能引起响应值的增高，再与2A10G6结合后，响应值提高。当3个抗体分别与含有E蛋白的探针结合并达到饱和后，再结合2A10G6并不能引起额外的响应值的提高，说明三个抗体都与2A10G6存在竞争关系，也提示了Z5、Z6和Z7都是结合FL的抗体。
(3)Z6抗体用于黄病毒科病毒感染检测
由于不同的黄病毒科的病毒在FL处高度保守，因此发明人检测了Z6对常见的几种黄病毒科的病毒，如寨卡病毒，登革1-4型病毒以及黄热病毒的检测能力。用不同的稀释倍数的病毒感染Vero细胞，检测E蛋白阳性细胞的比例，判断病毒感染情况。具体操作如下：
首先，提前24小时传代Vero细胞至24孔板(1*105/孔)；病毒感染前用无血清的DMEM洗细胞1-2次，然后将病毒母液用DMEM按如下各图所示稀释，再加入300μL/孔感染Vero，37℃孵育，期间每隔15分钟轻轻摇晃平板；1小时后补加正常培养基DMEM+10％FBS至1mL。细胞培养一定时间后检测阳性细胞比例：寨卡病毒(ZIKA-SMGC-1,GenBank accessionnumber:KX266255)：48小时；登革1-4型(登革1:DENV1/CN/GZ27/2014 strain,GenBankaccession number:KP723473；登革2：DENV-2 strain 43,GenBank accession number:AF204178；登革3：DENV-3 YN02 strain,GenBank accession number:KF824903；登革4：DENV-4 China Guangzhou B5 strain,GenBank accession number:AF289029；)：62小时；黄热病毒(YF-17D疫苗株)：60小时。
培养结束时，先用PBS洗2次后，以0.25％胰酶消化2分钟，加入FBS中和胰酶作用，然后轻轻吹打细胞，并转移至圆底96孔板。以300g离心后取点上清，用固定液/通透液(BDCytofix/CytopermTM)处理细胞，冰上30分钟后，同样条件下离心，去除固定液/通透液，再用洗液(BD Cytofix/CytopermTM)重悬细胞，离心2次。加入洗液稀释的终浓度2μg/Ml的Z6抗体，冰上孵育30分钟后，再离心去除染色液；以洗液洗2次，再加入anti-hIgG/FITC(SantaCruz)抗体(1:200)，冰上避光孵育30分钟后，离心去除抗体，再以洗液洗两次后，转移至流式管内，以BD FACSCanto分析FITC阳性的细胞比例。结果如图7-12所示，说明Z6抗体可以有效检测寨卡病毒，登革1-4型以及黄热病毒。此外，Z5、Z7抗体也能有效检测上述病毒。
(4)Z6抗体用于小鼠组织免疫荧光染色
确定Z6可以用于细胞感染的检测后，发明人又尝试了检测小鼠感染模型中的寨卡病毒。用103PFU寨卡病毒感染IFNαR-/-小鼠(4-6周)，8天后取不同部位的雄性生殖系统做冷冻切片，PBS洗3次后，用含1％BSA和0.3％Triton的PBS 37℃封闭30分钟。然后样品与20μg/mL的Z6冰上过夜孵育。PBS洗后，再用1:100稀释的anti-hIgG/FITC(ZSGB-BIO)37℃染色1小时。PBS洗后，再用DAPI(Santa Cruz)染色。荧光显微镜下观察染色情况。结果显示，Z6蛋白特异性地与寨卡病毒E蛋白结合，并且通过染色可以确认寨卡病毒对小鼠雄性生殖系统的感染主要是集中在睾丸和附睾，而对输精管和前列腺则没有感染能力。此外，Z5、Z7抗体也有类似效果。
综上，本发明通过筛选康复病人的ZIKV-E特异结合的记忆B细胞，获得3株人源高中和活性的ZIKV抗体：Z5、Z6与Z7。这3株抗体与已经报道的寨卡抗体序列完全不同，是3株新发现的抗体。三株人源抗体有着临床治疗和预防寨卡的应用价值。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
<110> 中国科学院微生物研究所
<120> 一种黄病毒人源单克隆抗体及应用
<160> 40
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly His Arg Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp
20 25 30
Pro Tyr Leu Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr His Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Arg Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Val Asn Ser Val Thr Ala Thr Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Val Glu Val Ala Pro Pro Glu Lys Trp Gly Arg Gly Ile Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 2
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Ala Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Arg Leu
65 70 75 80
Gln Asp Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Gly Gly Ser
85 90 95
Asn Asn Ile Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala
115
<210> 3
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
caggtgcagc tgcaggagtc gggccaccgg ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agtgaccctt atttatgggg ctggatccgc 120
cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt ggcagtattt atcatagtgg gagtgcctac 180
tacaatccgt ccctcaagag tcgagtcacc ttatccgtag acacgtccag gaaccagttc 240
tccctgaagg tgaactctgt gaccgccaca gacacggctg tctactattg cgtcgaagtt 300
gcaccacctg aaaagtgggg ccggggaatc ctagtcaccg tctcctca 348
<210> 4
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
cagtctgccc tgactcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggctataact atgtctcctg gtatcaacaa 120
cacccaggca aagcccccaa attaatgatt tatgcggtca ataagcggcc ctcaggggtc 180
cctgatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccgt gtctcggctc 240
caggatgatg atgaggctga ttattactgc agctcgtatg gaggcagcaa caatatacta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggtcagccca aggct 345
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp Pro Tyr Leu
1 5 10
<210> 6
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 6
Ile Tyr His Ser Gly Ser Ala
1 5
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
Val Glu Val Ala Pro Pro Glu Lys
1 5
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 8
Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 9
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 9
Ala Val Asn
1
<210> 10
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 10
Ser Ser Tyr Gly Gly Ser Asn Asn Ile Leu
1 5 10
<210> 11
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 11
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Ile Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Arg
20 25 30
Asp Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Gly Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gln Trp Gly Asn Tyr Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Ser
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 12
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 12
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Thr Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Asn Tyr His Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
<210> 13
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
atctgcactg tctctggtgg ctccatcagc actagggatt actattgggg ctggatccgc 120
cagaccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatat attatagtgg aggtacgtac 180
tacagtccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaatcagttc 240
tccctgaagc tgcgctctgt gaccgccgca gacacggctg tttattactg tgcgcgacaa 300
tggggcaact actttgacca ctggggccag ggatccctgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 14
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
gacattgtgc tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca aggcattgac acttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatggt gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag cttaataatt accatttcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa acgcaccgtg 330
<210> 15
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 15
Gly Gly Ser Ile Ser Thr Arg Asp Tyr Tyr
1 5 10
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 16
Ile Tyr Tyr Ser Gly Gly Thr
1 5
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<211> 10
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<213> 人工序列
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Ala Arg Gln Trp Gly Asn Tyr Phe Asp His
1 5 10
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<211> 6
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<213> 人工序列
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Gln Gly Ile Asp Thr Tyr
1 5
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
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Gly Ala Ser
1
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 20
Gln Gln Leu Asn Asn Tyr His Phe Thr
1 5
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<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 21
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Phe Gly Gly Ser Val Asn Asn Pro
20 25 30
Thr Asn Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Val Tyr Tyr Thr Gly Ile Asn Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Glu Ser Arg Val Thr Ile Ala Val Val Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Thr Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Pro Arg Pro Glu Thr Gly Tyr Asp Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 22
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 22
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Leu Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Thr Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Ala Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Val Tyr His Cys Ala Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Glu Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Val Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala
115
<210> 23
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 23
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acttgcactg tctttggtgg ctccgtcaac aatcctacta attactgggg ctggatccga 120
cagtccccag gcaagggact ggagtggatt gggagtgtct actatactgg gatcaactac 180
tacaacccgt ccctggagag tcgagtcacc atagccgtgg tcacgtccaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgacctctgt gaccgccaca gacacggctg tgtattactg tgcgagacat 300
ccccggccgg aaactggcta tgattttgac tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 24
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 24
cagtctgtgy tgackcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcagctc caatattggg aataattatg tatcctggta ccagcagctc 120
ccaggaacag cccccaaact cctcctttat gataataata agcgaccctc agggactcct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tgggcatcgc cggactccag 240
actggggacg aggccgttta tcactgcgca acatgggata gtagcctgag tgctgaggtt 300
ttcggcggag ggactcaggt gaccgtccta ggtcagccca aggct 345
<210> 25
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 25
Gly Gly Ser Val Asn Asn Pro Thr Asn Tyr
1 5 10
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 26
Val Tyr Tyr Thr Gly Ile Asn
1 5
<210> 27
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 27
Ala Arg His Pro Arg Pro Glu Thr Gly Tyr Asp Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 28
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 28
Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr
1 5
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 29
Asp Asn Asn
1
<210> 30
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 30
Ala Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Ala Glu Val
1 5 10
<210> 31
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 31
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 32
<211> 993
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 32
gcgagcacca aaggcccgag cgtgtttccg ctggcgccga gcagcaaaag caccagcggc 60
ggcaccgcgg cgctgggctg cctggtgaaa gattattttc cggaaccggt gaccgtgagc 120
tggaacagcg gcgcgctgac cagcggcgtg catacctttc cggcggtgct gcagagcagc 180
ggcctgtata gcctgagcag cgtggtgacc gtgccgagca gcagcctggg cacccagacc 240
tatatttgca acgtgaacca taaaccgagc aacaccaaag tggataaacg cgtggagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 720
ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tga 993
<210> 33
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 33
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
1 5 10 15
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
20 25 30
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
35 40 45
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
65 70 75 80
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
85 90 95
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Ser
100 105
<210> 34
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 34
gctgccccca gcgtgtttat cttccctccc agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc 60
agcgtggtct gtctcctgaa caacttctat cccagggagg ccaaggtcca gtggaaagtg 120
gacaacgccc tgcaaagcgg caatagccag gagtccgtca cagagcagga cagcaaggac 180
agcacctaca gcctgtccag caccctgacc ctcagcaagg ccgactacga gaagcacaag 240
gtgtacgctt gcgaggtgac ccatcagggc ctgtccagcc ccgtgaccaa gtccttcaac 300
aggggcgaat gcagctaa 318
<210> 35
<211> 101
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 35
Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala
1 5 10 15
Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala
20 25 30
Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val
35 40 45
Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser
50 55 60
Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr
65 70 75 80
Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala
85 90 95
Pro Thr Glu Cys Ser
100
<210> 36
<211> 306
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 36
gcccctagcg tgacactgtt ccctccatct agcgaagaac tgcaagctaa caaagccaca 60
ctcgtgtgcc tcattagcga cttctaccct ggcgccgtga ccgtggcctg gaaagcggac 120
tcctctccag tgaaggccgg cgtggagaca accaccccat ccaagcagtc taacaacaag 180
tacgccgcct cttcctacct gagcctcaca cctgagcagt ggaagtctca caggtcctac 240
tcttgccagg tgacccacga gggctccaca gtggaaaaaa ccgtggcccc aaccgagtgc 300
agctga 306
<210> 37
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 37
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp
20
<210> 38
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 38
atggagacgg atacgctgct cctgtgggtt ttgctgctgt gggttccagg ttccactggt 60
gac 63
<210> 39
<211> 409
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 39
Ile Arg Cys Ile Gly Val Ser Asn Arg Asp Phe Val Glu Gly Met Ser
1 5 10 15
Gly Gly Thr Trp Val Asp Val Val Leu Glu His Gly Gly Cys Val Thr
20 25 30
Val Met Ala Gln Asp Lys Pro Thr Val Asp Ile Glu Leu Val Thr Thr
35 40 45
Thr Val Ser Asn Met Ala Glu Val Arg Ser Tyr Cys Tyr Glu Ala Ser
50 55 60
Ile Ser Asp Met Ala Ser Asp Ser Arg Cys Pro Thr Gln Gly Glu Ala
65 70 75 80
Tyr Leu Asp Lys Gln Ser Asp Thr Gln Tyr Val Cys Lys Arg Thr Leu
85 90 95
Val Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly Cys Gly Leu Phe Gly Lys Gly Ser
100 105 110
Leu Val Thr Cys Ala Lys Phe Ala Cys Ser Lys Lys Met Thr Gly Lys
115 120 125
Ser Ile Gln Pro Glu Asn Leu Glu Tyr Arg Ile Met Leu Ser Val His
130 135 140
Gly Ser Gln His Ser Gly Met Ile Val Asn Asp Thr Gly His Glu Thr
145 150 155 160
Asp Glu Asn Arg Ala Lys Val Glu Ile Thr Pro Asn Ser Pro Arg Ala
165 170 175
Glu Ala Thr Leu Gly Gly Phe Gly Ser Leu Gly Leu Asp Cys Glu Pro
180 185 190
Arg Thr Gly Leu Asp Phe Ser Asp Leu Tyr Tyr Leu Thr Met Asn Asn
195 200 205
Lys His Trp Leu Val His Lys Glu Trp Phe His Asp Ile Pro Leu Pro
210 215 220
Trp His Ala Gly Ala Asp Thr Gly Thr Pro His Trp Asn Asn Lys Glu
225 230 235 240
Ala Leu Val Glu Phe Lys Asp Ala His Ala Lys Arg Gln Thr Val Val
245 250 255
Val Leu Gly Ser Gln Glu Gly Ala Val His Thr Ala Leu Ala Gly Ala
260 265 270
Leu Glu Ala Glu Met Asp Gly Ala Lys Gly Arg Leu Ser Ser Gly His
275 280 285
Leu Lys Cys Arg Leu Lys Met Asp Lys Leu Arg Leu Lys Gly Val Ser
290 295 300
Tyr Ser Leu Cys Thr Ala Ala Phe Thr Phe Thr Lys Ile Pro Ala Glu
305 310 315 320
Thr Leu His Gly Thr Val Thr Val Glu Val Gln Tyr Ala Gly Thr Asp
325 330 335
Gly Pro Cys Lys Val Pro Ala Gln Met Ala Val Asp Met Gln Thr Leu
340 345 350
Thr Pro Val Gly Arg Leu Ile Thr Ala Asn Pro Val Ile Thr Glu Ser
355 360 365
Thr Glu Asn Ser Lys Met Met Leu Glu Leu Asp Pro Pro Phe Gly Asp
370 375 380
Ser Tyr Ile Val Ile Gly Val Gly Glu Lys Lys Ile Thr His His Trp
385 390 395 400
His Arg Ser Gly Ser Thr Ile Gly Lys
405
<210> 40
<211> 1227
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 40
attcgctgca ttggcgtgag caatcgcgac tttgttgaag gcatgagcgg tggcacctgg 60
gtggatgtgg tgctggaaca cggcggttgc gtgaccgtta tggcccagga taagccgaca 120
gtggacatcg aactggttac caccacagtg agcaacatgg ccgaggttcg tagctactgc 180
tatgaggcca gcatcagcga catggccagt gacagtcgct gcccgacaca gggcgaggcc 240
tatctggaca aacagagcga cacccagtac gtttgtaaac gcaccctggt ggaccgtggt 300
tggggcaatg gttgtggtct gtttggtaag ggcagcctgg tgacctgcgc caaattcgcc 360
tgcagcaaga aaatgaccgg caagagcatc cagccggaaa acctggagta ccgcattatg 420
ctgagcgtgc atggcagcca gcatagcggc atgattgtga acgacaccgg tcatgagacc 480
gatgaaaacc gcgccaaagt ggaaatcacc ccgaatagtc ctcgtgcaga agccaccctg 540
ggcggttttg gtagcctggg cctggattgc gagcctcgta ccggtctgga ttttagtgat 600
ctgtattacc tgaccatgaa taacaaacat tggctggttc acaaggaatg gttccacgac 660
atccctctgc cgtggcatgc aggtgcagat accggcacac cgcattggaa caacaaagag 720
gccctggtgg agttcaaaga tgcccacgca aaacgccaga ccgttgtggt tctgggtagt 780
caggaaggtg ccgttcatac cgcactggcc ggtgccctgg aagccgaaat ggacggcgcc 840
aaaggccgcc tgagcagtgg tcatctgaaa tgccgtctga agatggacaa gctgcgcctg 900
aagggcgtga gttacagtct gtgtaccgcc gccttcacct tcaccaagat tcctgccgag 960
accctgcatg gtacagtgac cgtggaggtg cagtatgcag gtaccgatgg tccgtgcaaa 1020
gtgccggccc agatggccgt ggacatgcag accttaaccc cggtgggccg cctgattacc 1080
gccaatccgg ttattaccga aagcaccgaa aacagcaaaa tgatgctgga actggaccct 1140
ccgtttggcg atagctacat cgtgattggc gtgggtgaga agaagatcac acaccactgg 1200
caccgtagcg gcagtaccat cggtaag 1227

Claims (10)

1.一种抗体或抗原结合片段，其特征在于，其包含(A)或(B)或(C)或(D)：
(A)抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:1的26-35位，53-59位，和/或98-105位的氨基酸残基，且抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:2的26-34位，52-54位，和/或91-100位的氨基酸残基；
(B)抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:11的26-35位，53-59位，和/或98-107位氨基酸残基，及抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:12的27-32位，50-52位，和/或89-97位氨基酸残基；
(C)抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:21的26-35位，53-59位，和/或98-111位氨基酸残基，及抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:22的26-33位，51-53位，和/或90-100位氨基酸残基；
(D)在上述(A)、(B)、(C)中限定的位点处的氨基酸进行任何修饰或者替换而得到的抗体。
2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段，其重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的序列具有至少90％的序列相似度且轻链可变区氨基酸序列与SEQ ID NO:2的序列具有至少90％的序列相似度，或者其重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:11的序列具有至少90％的序列相似度且轻链可变区氨基酸序列与SEQ ID NO:21的序列具有至少90％的序列相似度，或者其重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:31的序列具有至少90％的序列相似度且轻链可变区氨基酸序列与SEQ ID NO:32的序列具有至少90％的序列相似度。
3.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:1且轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:2，或者其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:11且轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:21，或者其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:31且轻链可变区氨基酸序列为SEQ IDNO:32。
4.编码权利要求1～3任一所述抗体片段或者抗原结合片段的核苷酸序列。
5.含有权利要求4所述核苷酸序列的质粒。
6.含有权利要求5所述质粒的宿主细胞。
7.权利要求1～3任一所述抗体或者抗原结合片段、编码权利要求1～3任一所述抗体片段或者抗原结合片段的核苷酸序列、含有权利要求4所述核苷酸序列的质粒、含有权利要求5所述质粒的细胞在制备治疗和/或预防黄病毒病毒的药物方面的应用。
8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有有效预防剂量的权利要求1～3任一所述的抗体或者抗原结合片段。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还含有医药学上可接受的载体。
10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求1～3任一所述的抗体或者抗原结合片段，或者编码权利要求1～3任一所述抗体或者抗原结合片段的核苷酸序列，或者表达权利要求1～3任一所述抗体或者抗原结合片段的重组载体/表达盒/转基因细胞系/重组菌。
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