CN114409770B - 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用 - Google Patents

一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114409770B
CN114409770B CN202210038774.8A CN202210038774A CN114409770B CN 114409770 B CN114409770 B CN 114409770B CN 202210038774 A CN202210038774 A CN 202210038774A CN 114409770 B CN114409770 B CN 114409770B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ser
gly
val
leu
thr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210038774.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114409770A (zh
Inventor
严景华
王奇慧
马桐
杨化冰
高福
马素芳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Microbiology of CAS
Original Assignee
Institute of Microbiology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Microbiology of CAS filed Critical Institute of Microbiology of CAS
Priority to CN202210038774.8A priority Critical patent/CN114409770B/zh
Publication of CN114409770A publication Critical patent/CN114409770A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114409770B publication Critical patent/CN114409770B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用，属于医药技术领域。本发明以杆状病毒表达的RVFV糖蛋白Gn和Gc作为抗原，从一例裂谷热康复患者的PBMCs中筛选到可以结合RVFV糖蛋白Gn和Gc的记忆B细胞，且通过单一B细胞测序、体外中和以及体内保护等实验，鉴定出8株高效中和RVFV感染的Gn人源单克隆抗体以及一株Gc人源单克隆抗体。本发明的人源单克隆抗体具有非常高的体外中和活性(IC50可低至1.93±0.6pM，达到pM级)，可以有效治疗被RVFV感染的小鼠，预防RVFV对小鼠的感染，具有极高的临床治疗和预防RVFV感染的应用价值。

Description

一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用
技术领域
本发明涉及一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用，属于医药技术领域。
背景技术
裂谷热病毒(Rift Valley fever virus，RVFV)是严重威胁人类和动物健康的虫媒病毒之一，属于布尼亚病毒目(Bunyavirale)白细病毒科(Phenuiviridae)白蛉病毒属(Phlebovirus)，可引起人畜共患病裂谷热(Rift Valley fever，RVF)，致牲畜死亡和流产。其表面覆有囊膜及糖蛋白突起，由3段负链RNA构成病毒基因组(S、M和L)，其中，M片段编码表面糖蛋白Gn和Gc，且在Gn的5’端编码非结构蛋白(NSm)，而Gn和Gc是病毒的主要囊膜蛋白，是病毒进行入侵和膜融合的关键蛋白；其传播范围十分广，绵羊、山羊、牛、水牛、骆驼等家畜均可感染该病毒；其致死率十分高，尤其是年幼的动物，一旦感染，病死率接近100％。
人也会感染RVFV，且多数症状轻微，可自愈，但是，也有部分患者出现重症，其中，5-10％的患者的视网膜会产生退行性病变，重者可导致单眼或双眼永久性失明；<1％的患者会出现出血热，其中，50％的患者会死亡；<1％的患者会出现脑炎，出现此症状的患者虽死亡率不高，但通常会留下严重的后遗症，如偏瘫等。
就时间上来说，1930年，科学家Danbney等在肯尼亚大裂谷的一次绵羊疾病暴发调查中首次分离到RVFV，自此，人们发现RVF疫情会在动物和人类中定期暴发，造成重大损失。例如，1977-1978年，RVF疫情在埃及暴发，当时共计有20万人感染，其中包括18,000例重症患者及600例死亡病例；而自2000年到2018年6月，全球共向世界卫生组织(WHO)通报了4830例重症RVF病例，其中包括967例死亡病例，死亡率约为20.0％。
就地域上来说，通常，RVFV在非洲地区流行。但是，2000年9月，阿拉伯半岛(沙特阿拉伯和也门)也暴发了RVF疫情，这也是首个非洲以外地区报道该疫情；2016年，我国也出现一例输入病例，该患者从安哥拉返回中国。
就传播方式上来说，RVFV主要通过蚊虫叮咬传播。已知的可传播本病的蚊子种类多达30种，分布在北极以外的其它各个大陆，因此，RVFV继续向世界扩散的风险非常高。
目前，针对动物的RVFV感染的有效预防手段是疫苗。在兽用疫苗方面，肯尼亚和南非使用RVFV的减毒活疫苗，埃及和南非使用福尔马林灭活疫苗。通常，减毒活疫苗仅在绵羊免疫中有效，不能保护牛，且副作用较高，经常引起母羊流产；福尔马林灭活疫苗虽具有更高的安全性，但存在成本高、免疫不持久的问题。而其它种类疫苗仍在研究阶段，包括：DNA疫苗、基因工程改造株、VLPs等。
针对人群的RVFV感染的有效预防手段主要仍是通过免疫家畜、切断传染源。此外，非洲地区的高危人群可接种福尔马林灭活疫苗，但是由于成本问题，不可能大范围接种。人患病后，病毒唑(ribavirin)可能会有治疗效果，但目前临床数据不多。
因此，亟需研究出有效的RVFV感染治疗药物，尤其是可治愈重症患者的治疗。在这方面，抗体显示出巨大潜力。
发明内容
为解决上述问题，本发明对RVFV疫苗进行了研究，发现单独的Gn或是Gn与Gc一起的疫苗形式可有效产生RVFV的中和抗体，也就是说，针对Gn或Gc的抗体极有可能中和RVFV的感染，成为治疗RVFV感染的药物。
因此，本发明以杆状病毒表达的RVFV糖蛋白Gn和Gc作为抗原，从一例裂谷热康复患者的PBMCs中筛选到可以结合RVFV糖蛋白Gn和Gc的记忆B细胞，且通过单一B细胞测序、体外中和以及体内保护等实验，鉴定出8株高效中和RVFV感染的Gn人源单克隆抗体(R4、R12、R13、R15、R16、R17、R19、R22)以及一株Gc人源单克隆抗体(R5)。
本发明的人源单克隆抗体具有非常高的体外中和活性(IC50可低至1.93±0.6pM，达到pM级)，可以有效治疗被RVFV感染的小鼠，预防RVFV对小鼠的感染，具有极高的临床治疗和预防RVFV感染的应用价值。
本发明的技术方案如下：
本发明提供了一种抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含重链以及轻链；所述重链包含重链可变区以及重链恒定区；所述轻链包含轻链可变区以及轻链恒定区；所述抗体或抗原结合片段命名为R4，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；
或所述抗体或抗原结合片段命名为R12，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；
或所述抗体或抗原结合片段命名为R13，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:5所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；
或所述抗体或抗原结合片段命名为R15，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:7所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；
或所述抗体或抗原结合片段命名为R16，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:9所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示；
或所述抗体或抗原结合片段命名为R17，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:11所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；
或所述抗体或抗原结合片段命名为R19，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:13所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示；
或所述抗体或抗原结合片段命名为R22，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:15所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；
或所述抗体或抗原结合片段命名为R5，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。
在本发明的一种实施方式中，所述R4、R12、R13、R15、R16、R17、R19、R22以及R5的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示。
在本发明的一种实施方式中，所述R4、R12、R13、R15、R16、R17以及R5的轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；所述R19以及R22的轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ IDNO:21所示。
在本发明的一种实施方式中，所述R4、R12、R13、R15、R16、R17以及R5的重链与轻链均通过EcoR I和Xho I连接；所述R19和R22的重链通过EcoR I和Xho I连接，轻链通过SacI和Xho I连接。
本发明提供了编码上述抗体或抗原结合片段的核苷酸序列，所述核苷酸序列包含编码重链的核苷酸序列以及编码轻链的核苷酸序列；所述编码重链的核苷酸序列依次包含CMV启动子序列、前导序列、编码重链可变区的序列、编码重链恒定区的序列；
或所述编码重链的核苷酸序列依次包含CMV启动子序列、连接序列、前导序列、编码重链可变区的序列、编码重链恒定区的序列、连接序列。
在本发明的一种实施方式中，所述编码重链的核苷酸序列不包含连接序列时，所述编码重链的核苷酸序列之间可通过PCR相连。
在本发明的一种实施方式中，所述编码重链的核苷酸序列包含连接序列时，所述连接序列可为酶切位点序列。
在本发明的一种实施方式中，所述编码重链的核苷酸序列包含连接序列时，所述编码重链的核苷酸序列依次包含CMV启动子序列、EcoR I酶切位点序列、前导序列、编码重链可变区的序列、编码重链恒定区的序列、Xho I酶切位点序列。
在本发明的一种实施方式中，所述编码轻链的核苷酸序列依次包含CMV启动子序列、前导序列、编码轻链可变区的序列、编码轻链恒定区的序列；
或所述编码轻链的核苷酸序列依次包含CMV启动子序列、连接序列、前导序列、编码轻链可变区的序列、编码轻链恒定区的序列、连接序列。
在本发明的一种实施方式中，所述编码轻链的核苷酸序列不包含连接序列时，所述编码重链的核苷酸序列之间可通过PCR相连。
在本发明的一种实施方式中，所述编码轻链的核苷酸序列包含连接序列时，所述连接序列可为酶切位点序列。
在本发明的一种实施方式中，所述编码轻链的核苷酸序列包含连接序列时，所述编码轻链的核苷酸序列分为编码R4、R12、R13、R15、R16、R17、R19以及R22轻链的核苷酸序列以及编码R5轻链的核苷酸序列；所述编码R4、R12、R13、R15、R16、R17、R19以及R22轻链的核苷酸序列依次包含CMV启动子序列、Sac I酶切位点序列、前导序列、编码轻链可变区的序列、编码轻链恒定区的序列、Xho I酶切位点序列；所述编码R5轻链的核苷酸序列依次包含CMV启动子序列、EcoR I酶切位点序列、前导序列、编码轻链可变区的序列、编码轻链恒定区的序列、Xho I酶切位点序列。
在本发明的一种实施方式中，所述前导序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示。
本发明提供了含有上述核苷酸序列的质粒。
在本发明的一种实施方式中，所述质粒为病毒质粒。
本发明提供了含有上述质粒的宿主细胞。
本发明提供了上述抗体或抗原结合片段或上述核苷酸序列或上述质粒或上述宿主细胞在制备治疗和/或预防裂谷热病毒的药物方面的应用。
本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有有效预防剂量的上述抗体或抗原结合片段。
在本发明的一种实施方式中，所述药物组合物还含有医药学上可接受的载体。
本发明提供了一种试剂盒，所述试剂盒中含有上述抗体或抗原结合片段或上述核苷酸序列或上述质粒或上述宿主细胞。
有益效果：
(1)本发明通过筛选RVF康复病人的Gn和Gc特异结合的记忆B细胞，获得8株结合Gn的人源高中和活性抗体：R4，R12，R13，R15，R16，R17，R19和R22，以及1株结合Gc的人源中和活性抗体：R5；
(2)本发明的8株Gn-特异性抗体具有非常高的体外中和活性，其中，R15和R16两株Gn-特异性抗体的IC50可达到pM级，且体内检测结果表明，这8株Gn-特异性抗体可以有效治疗被RVFV感染的小鼠、预防小鼠RVFV的感染；同时，本发明的1株Gc-特异性抗体R5在高剂量下也可以中和RVFV感染；
(3)本发明的8株Gn-特异性人源抗体以及1株Gc-特异性人源抗体在临床治疗和预防RVFV感染方面有极高的应用价值。
附图说明
图1：RVFV Gn蛋白纯化分子筛与SDS-PAGE结果。
图2：RVFV Gc蛋白纯化分子筛与SDS-PAGE结果。
图3：R12轻链与R13轻链与胚系基因比对结果。
图4：R16轻链与R17轻链与胚系基因比对结果。
图5：R4纯化的分子筛层析结果。
图6：R5纯化的分子筛层析结果。
图7：R12纯化的分子筛层析结果。
图8：R13纯化的分子筛层析结果。
图9：R15纯化的分子筛层析结果。
图10：R16纯化的分子筛层析结果。
图11：R17纯化的分子筛层析结果。
图12：R19纯化的分子筛层析结果。
图13：R22纯化的分子筛层析结果。
图14：抗体与RVFV Gn和Gc结合的动力学曲线。
图15：抗体对RVFV的中和曲线。
图16：抗体对感染RVFV小鼠的治疗效果。
图17：抗体预防小鼠感染RVFV的效果。
图18：RVFV抗体对Gn四聚体与Huh7细胞结合的阻断作用。
图19：RVFV抗体对RVFV病毒粒子与Vero细胞结合的阻断作用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的阐述。
下述实施例中涉及的pFastBac1载体、pCAGGS载体购自优宝生物；下述实施例中涉及的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞、HEK293T细胞、Hi5昆虫细胞购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司；下述实施例中涉及的昆虫SF9细胞购自北纳生物。
实施例1：RVFV Gn与Gc蛋白的表达与纯化
将编码RVFV Gn(氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示)与Gc(氨基酸序列如SEQ IDNO:24所示)蛋白的基因分别连接到pFastBac1载体中，其中，Gn与Gc蛋白基因的N端连接有昆虫细胞膜蛋白Gp67信号肽序列，用于抗体的分泌；C末端连接有His标签，便于纯化和B细胞的染色；所有编码基因均进行了昆虫细胞密码子优化。
将含有目的基因的pFastBac1载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，在含有氨苄霉素，卡那霉素和四环霉素以及Blue-gal的平板上，进行蓝白斑筛选重组的杆状病毒。白色菌斑经过M13上下游引物PCR鉴定后，阳性的克隆摇菌，通过异丙醇沉淀的方法提取重组的Bacmid。
用重组的Bacmid转染昆虫SF9细胞，在无血清的培养基中培养3天，观察细胞形态变化和增殖情况。当SF9细胞明显膨胀，出现少量死亡细胞，且不在增殖时收取病毒液上清，此为P1代。继续扩增杆状病毒至P4代后，感染Hi5昆虫细胞，用于Gn和Gc的表达。
将含有目的蛋白的Hi5细胞培养上清通过离心和过滤(0.22μM)去除细胞碎片后，与HisTrap FF(GE healthcare)镍螯合柱结合，再以不同浓度的咪唑洗脱层析柱，分别收集洗脱蛋白，通过SDS-PAGE结果判断含有目的蛋白的样品。
收集含有目的蛋白的洗脱峰，浓缩后，进行分子筛层析，根据蛋白大小确定出峰位置，结合SDS-PAGE的结果判断的蛋白的大小和纯度(SDS-PAGE与分子筛结果见图1-2)。
实施例2：RVFV Gn与Gc蛋白特异性记忆B细胞的分离
在病人的知情同意下，采集30mL的血液，分离PBMCs。
将分离的PBMCs以107个/mL的密度与终浓度100nM的RVFV Gn和RVFV Gc蛋白于冰上孵育结合半小时，然后用PBS洗2次，再与下列抗体冰上孵育半小时：anti-human CD3/PE-Cy5，anti-human CD16/PE-Cy5，anti-human CD235a/PE-Cy5，anti-human CD19/APC-Cy7，anti-human CD27/Pacific Blue，anti-human CD38/APC，anti-human IgG/FITC以及anti-His/PE，然后用PBS洗2次。
经FACSAria III分选收集PE-Cy5-APC-APC-Cy7+Pacific Blue+FITC+PE+的细胞，直接收集到96孔板内，1细胞/孔。
实施例3：单一B细胞PCR及序列分析
将实施例2获得的细胞通过Superscript III reverse transcriptase(Invitrogen)逆转录，55℃反应60min。
将此逆转录产物作为模板，用HotStar Tap Plus酶(QIAgen)进行PCR，扩增抗体可变区序列(PCRa)，反应条件如下：95℃，5min；95℃，30s，55℃(重链/κ链)/50℃(λ链)，30s，72℃，90s，35个循环，72℃，7min。
将此作为模板再进行1轮PCR(PCRb)，条件如下：95℃，5min；95℃，30s，58℃(重链)/60℃(κ链)/64℃(λ链)，30s，72℃，90s，35个循环，72℃，7min。
1.2％的琼脂糖凝胶电泳，分离PCR产物，条带大小在400-500bp的切胶回收后送测序公司测序，测序结果用IMGT在线软件进行分析。
分析正确的可变区序列与相应的重链/κ链/λ链的恒定区通过搭桥PCR连接，克隆至表达载体pCAGGS中，得到含有特定抗体轻、重链编码基因的重组质粒；其中，重链与λ链以EcoRI和XhoI连接，与κ链以SacI与XhoI连接。
人源抗体设计策略如下：
重链：CMV promoter-EcoR I-Leader sequences-重链可变区-CH-Xho I；
轻链(κ)：CMV promoter-Sac I-Leader sequences-轻链可变区-CL(κ)-Xho I；
轻链(λ)：CMV promoter-EcoR I-Leader sequences-轻链可变区-CL(λ)-Xho I；
得到了9个抗体：R4、R12、R13、R15、R16、R17、R19、R22以及R5，其中，R4的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；R12的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；R13的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；R15的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；R16的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示；R17的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；R19的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示；R22的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；R5的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示；CH区氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；CL(κ)区(即R4、R12、R13、R15、R16、R17以及R5的轻链)氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；CL(λ)区(即R19以及R22的轻链)氨基酸序列如SEQID NO:21所示；Leader sequences的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示。
将R4、R12、R13、R15、R16、R17、R19、R22以及R5的轻链序列分别与胚系基因进行比对，其中，R12轻链与R13轻链与胚系基因比对结果见图3，R16轻链与R17轻链与胚系基因比对结果见图4。
如图3所示，序列分析显示，R12轻链与R13轻链具有相同的序列一致性最高的胚系基因，即IGLV5-37*01和LJ3*02，并且，R12轻链和R13轻链具有相同CDR3序列；如图4所示，序列分析显示，R16和R17轻链具有相同的序列一致性最高的胚系基因，即IGLV3-21*03和LJ1*01，但是，由于序列V与J基因在序列插入和缺失中的模式不同，R16轻链和R17轻链的CDR3序列和数目不同。
实施例4：抗体的表达及纯化
用含10％FBS的DMEM培养293T细胞，用实施例3得到的含有特定抗体轻、重链编码基因的重组质粒共转染293T，转染4-6小时后给细胞换液成无血清的DMEM继续培养3天，收集上清，并补加DMEM，再培养4天，收集上清。
收集的上清经过5000rpm离心30min后，与含有20mM磷酸钠(pH 8.0)等体积混合，经过0.22μm滤膜过滤后，与protein A预装柱结合(5mL，GE Healthcare)，以10mM甘氨酸(pH3.0)洗脱结合的蛋白，收集此蛋白浓缩后进行分子筛层析，目的峰通过SDS-PAGE确定，得到纯化后的抗体R4、R12、R13、R15、R16、R17、R19、R22以及R5(分子筛层析结果如图5-13)。
实施例5：抗体的性能检测
(1)表面等离子共振技术检测抗体与RVFV Gn和Gc的结合能力
表面等离子共振分析利用Biacore T100(Biacore Inc.)进行，具体步骤如下：
将anti-human IgG的抗体以氨基偶联的方式固定在CM5芯片的通道(flow cell,Fc)1与Fc2，固定量控制在10000响应值(response units，RU)左右，将通道调至Fc2，然后以抗体捕获的方式结合实施例4得到的纯化后的抗体，此时，液流速度控制在10μL/min，进样1min，抗体捕获量在100RU左右。
以10mM HEPES，150mM NaCl，pH 7.4溶液倍比稀释ZIKV-E蛋白，流速调至30μL/min，通道调至Fc2-Fc1的模式后，从低浓度开始逐一上样RVFV Gn蛋白或Gc，其中，结合动力学常数的计算是利用BIAevaluation software T100(Biacore，Inc.)软件进行(抗体与Gn或Gc结合的动力学曲线如图14所示，抗体对RVFV Gn和Gc的亲和力如表1所示)。
表1抗体对RVFV Gn和Gc的亲和力
Figure BDA0003469250020000051
(2)中和试验
将实施例4得到的纯化后的抗体以3倍倍比稀释，与8x 103PFU的RVFV(Vero扩增)混合，37℃共孵育60分钟，然后将混合液加入到已铺满Vero细胞的24孔板中，300μL/孔，37℃孵育1小时后，每孔补充培养基(DMEM,10％FBS)1mL，继续培养48小时后染色。
收集细胞，用含4％多聚甲醛，0.05％的soponin的PBS处理细胞，冰上避光静置30min。然后以solution溶液(PBS，1％BSA，0.01％soponin)洗涤细胞2次，与2μg/mL的R4抗体冰上孵育30min后，solution溶液洗涤细胞2次，再与1:200稀释的anti-human IgG避光冰上孵育30min，solution溶液洗2次后，用FACSCanto检测细胞阳性比例，根据不同浓度下阳性比例，计算抗体对RVFV的中和能力(抗体对RVFV的中和曲线如图15所示，抗体对RVFV的体外中和能力如表2)。
表2抗体对RVFV的体外中和能力
Ab <![CDATA[IC<sub>50</sub>(Mean±SD，pM)]]>
R4 312±146
R5 21600±21600
R12 12.3±10.7
R13 375±210
R15 3.53±1.67
R16 1.93±0.6
R17 16.9±15.9
R19 341±131
R22 481±3.93
(3)动物保护试验
RVFV感染可致BALB/c小鼠死亡，下面以同型抗体作为阴性对照，应用预防和治疗两种方法检测实施例4得到的纯化后的抗体治疗RVFV感染的效果。
治疗效果：将小鼠以4-5只分组，每只小鼠腹腔注射1x 103PFU的RVFV，感染24小时后，再分别通过腹腔注射单一剂量的抗体，剂量为10mg/kg，记录14天内小鼠的存活与体重变化，体重变化超过20％的小鼠处死，其中，Z3L1组注射的是同型抗体(结果如图16所示)。
预防效果：将小鼠以4-5只分组，每只小鼠腹腔注射单一剂量的抗体，剂量为10mg/kg，24小时后，再分别通过腹腔注射1x 103PFU的RVFV，记录14天内小鼠的存活与体重变化，体重变化超过20％的小鼠处死，其中，Z3L1组注射的是同型抗体(结果如图17所示)。
(4)抗体作用机制检测
在Gn的C端引入生物素化标签，通过HEK293T细胞表达，再经过HisTrap FF(GEhealthcare)镍螯合柱和分子筛层析柱纯化。纯化的Gn蛋白经过BirA的反应，在生物素化标签上加上Biotin分子。Biotin分子与Streptavidin有极高的结合能力。向Gn-biotin加入Streptavidin/PE后Gn会标记上PE荧光素，同时形成四聚体。10μg/mL Gn的四聚体先与终浓度为0.6mg/mL的抗体孵育，然后与Huh7细胞结合，再与终浓度为5μg/mL的anti-hIgG/APC结合，最后经过流式分析(分析结果如图18所示)。
5×104PFU的RVFV病毒与终浓度为200μg/mL的抗体37℃孵育1小时后，置冰上冷却，再与提前预冷的2×105的Vero细胞冰上孵育30min。PBS清洗后，用0.5％的多聚甲醛冰上固定30min，然后与终浓度为5μg/mL的anti-hIgG/APC结合(结合结果如图19所示)。
综上所述，本发明通过筛选RVF康复病人的Gn和Gc特异结合的记忆B细胞，获得8株结合Gn的人源高中和活性抗体：R4，R12，R13，R15，R16，R17，R19和R22，以及1株结合Gc的人源中和活性抗体：R5。
虽然8株Gn-特异性抗体与Gn的结合常数较低(表1)，但是却具有非常高的体外中和活性(表2)，其中，R15和R16两株Gn-特异性抗体的IC50达到pM级，且体内检测结果表明，分离到的8株Gn-特异性抗体可以有效治疗被RVFV感染的小鼠(图16)，同时，这8株抗体也可以有效预防RVFV的感染(图17)，进一步的实验表明，RVFV的Gn特异性抗体可以阻断Gn与易感细胞的结合(图18)，并且病毒水平的实验也揭示Gn特异性抗体可以阻断RVFV病毒粒子与易感细胞的结合(图19)。
因此，Gn特异性抗体通过结合到RVFV病毒粒子上的Gn，阻断病毒与细胞的结合，从而发挥抑制病毒感染的功能。
虽然Gc-特异性抗体R5的中和活性较弱(表2)，但在高剂量下仍可以中和RVFV感染。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
序列表
<110> 中国科学院微生物研究所
<120> 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用
<160> 24
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Ala Phe
    50                  55                  60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Trp Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
        115
<210> 2
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
            20                  25                  30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Arg
        35                  40                  45
Leu Ile Tyr Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65                  70                  75                  80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
                85                  90                  95
Leu Ser Phe Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
Gln Pro Lys Ala
        115
<210> 3
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu
            20                  25                  30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Gly Phe Asp Arg Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Tyr Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ile Asp Pro Ile Arg Tyr Asn Trp Asn Tyr Gly Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210> 4
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ser Ser Ala Ser Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Ser Ala Arg Leu Thr Cys Thr Leu Pro Ser Asp Ile Ser Val Ser Ser
            20                  25                  30
Tyr Asn Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Pro Pro Arg Phe
        35                  40                  45
Leu Leu Tyr Tyr Tyr Ser Asp Ser Asp Lys Gly Gln Gly Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Asp Ala Ser Asp Asn Thr Gly Ile
65                  70                  75                  80
Leu Leu Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Met Ile Trp Pro Ser Asn Ala Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
            100                 105                 110
Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala
        115                 120
<210> 5
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
            20                  25                  30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Asp Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65                  70                  75                  80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Ser Leu Pro Tyr Cys Ser Gly Arg Ile Cys Arg Pro Arg Thr
            100                 105                 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210> 6
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 6
Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ser Ser Ala Ser Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Ser Ala Arg Leu Thr Cys Thr Leu Pro Ser Asp Ile Asn Val Gly Ser
            20                  25                  30
Tyr Asn Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Pro Pro Arg Tyr
        35                  40                  45
Leu Leu Tyr Tyr Tyr Ser Asp Ser Asp Lys Gly Gln Gly Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Asp Ala Ser Ala Asn Thr Gly Ile
65                  70                  75                  80
Leu Leu Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Met Ile Trp Pro Ser Asn Ala Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
            100                 105                 110
Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala
        115                 120
<210> 7
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Tyr
            20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
    50                  55                  60
Thr Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Ser Asp Tyr Gly Asp Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210> 8
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 8
Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Val
            20                  25                  30
Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
        35                  40                  45
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
    50                  55                  60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Cys Asp Ser Ser Thr Val Phe
                85                  90                  95
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala
            100                 105                 110
<210> 9
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Tyr Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Thr Thr Val Leu Gly Pro Gly Ser Gly Tyr Asp Ser Phe Glu
            100                 105                 110
Asp Phe Arg Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val
        115                 120                 125
Ser Ser
    130
<210> 10
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 10
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1               5                   10                  15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
            20                  25                  30
His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
        35                  40                  45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
    50                  55                  60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
                85                  90                  95
Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
            100                 105                 110
Ala
<210> 11
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Pro Gly Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Ser Ala Asp Val Tyr Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210> 12
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 12
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1               5                   10                  15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
            20                  25                  30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
        35                  40                  45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
    50                  55                  60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
                85                  90                  95
Leu Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln Pro
            100                 105                 110
Lys Ala
<210> 13
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Arg Ile Glu Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
    50                  55                  60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Val Arg His Gly Val Asp Tyr Tyr Asp Thr Ser Gly Tyr Tyr Tyr Tyr
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210> 14
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 14
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala
            100                 105                 110
<210> 15
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 15
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
            20                  25                  30
Asp Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65                  70                  75                  80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Gly Ser Val Asp Ser Tyr Gly Leu Asp Ala Phe Asp Ile
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210> 16
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
            20                  25                  30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
            100                 105                 110
<210> 17
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Ser Arg Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Ser Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Asp Gly Gly Gly Tyr Gly Ser Trp Trp Asn Gln Asn Trp
            100                 105                 110
Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
<210> 18
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 18
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1               5                   10                  15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
            20                  25                  30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
        35                  40                  45
Gly Thr Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Val Ser
    50                  55                  60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65                  70                  75                  80
Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His
                85                  90                  95
Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Ala Val Leu Gly Gln Pro Lys
            100                 105                 110
Ala
<210> 19
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 19
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
            100                 105                 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
        115                 120                 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
    130                 135                 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                165                 170                 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            180                 185                 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        195                 200                 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    210                 215                 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225                 230                 235                 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                245                 250                 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            260                 265                 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
        275                 280                 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
    290                 295                 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                325                 330
<210> 20
<211> 101
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 20
Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala
1               5                   10                  15
Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala
            20                  25                  30
Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val
        35                  40                  45
Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser
    50                  55                  60
Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr
65                  70                  75                  80
Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala
                85                  90                  95
Pro Thr Glu Cys Ser
            100
<210> 21
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 21
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
1               5                   10                  15
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
            20                  25                  30
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
        35                  40                  45
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
65                  70                  75                  80
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
                85                  90                  95
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Ser
            100                 105
<210> 22
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 22
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1               5                   10                  15
Gly Ser Thr Gly Asp
            20
<210> 23
<211> 316
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 23
Glu Asp Pro His Leu Arg Asn Arg Pro Gly Lys Gly His Asn Tyr Ile
1               5                   10                  15
Asp Gly Met Thr Gln Glu Asp Ala Thr Cys Lys Pro Val Thr Tyr Ala
            20                  25                  30
Gly Ala Cys Ser Ser Phe Asp Val Leu Leu Glu Lys Gly Lys Phe Pro
        35                  40                  45
Leu Phe Gln Ser Tyr Ala His His Arg Thr Leu Leu Glu Ala Val His
    50                  55                  60
Asp Thr Ile Ile Ala Lys Ala Asp Pro Pro Ser Cys Asp Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Ala His Gly Asn Pro Cys Met Lys Glu Lys Leu Val Met Lys Thr His
                85                  90                  95
Cys Pro Asn Asp Tyr Gln Ser Ala His Tyr Leu Asn Asn Asp Gly Lys
            100                 105                 110
Met Ala Ser Val Lys Cys Pro Pro Lys Tyr Glu Leu Thr Glu Asp Cys
        115                 120                 125
Asn Phe Cys Arg Gln Met Thr Gly Ala Ser Leu Lys Lys Gly Ser Tyr
    130                 135                 140
Pro Leu Gln Asp Leu Phe Cys Gln Ser Ser Glu Asp Asp Gly Ser Lys
145                 150                 155                 160
Leu Lys Thr Lys Met Lys Gly Val Cys Glu Val Gly Val Gln Ala Leu
                165                 170                 175
Lys Lys Cys Asp Gly Gln Leu Ser Thr Ala His Glu Val Val Pro Phe
            180                 185                 190
Ala Val Phe Lys Asn Ser Lys Lys Val Tyr Leu Asp Lys Leu Asp Leu
        195                 200                 205
Lys Thr Glu Glu Asn Leu Leu Pro Asp Ser Phe Val Cys Phe Glu His
    210                 215                 220
Lys Gly Gln Tyr Lys Gly Thr Ile Asp Ser Gly Gln Thr Lys Arg Glu
225                 230                 235                 240
Leu Lys Ser Phe Asp Ile Ser Gln Cys Pro Lys Ile Gly Gly His Gly
                245                 250                 255
Ser Lys Lys Cys Thr Gly Asp Ala Ala Phe Cys Ser Ala Tyr Glu Cys
            260                 265                 270
Thr Ala Gln Tyr Ala Asn Ala Tyr Cys Ser His Ala Asn Gly Ser Gly
        275                 280                 285
Ile Val Gln Ile Gln Val Ser Gly Val Trp Lys Lys Pro Leu Cys Val
    290                 295                 300
Gly Tyr Glu Arg Val Val Val Lys Arg Glu Leu Ser
305                 310                 315
<210> 24
<211> 429
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 24
Cys Ser Glu Leu Ile Gln Ala Ser Ser Arg Ile Thr Thr Cys Ser Thr
1               5                   10                  15
Glu Gly Val Asn Thr Lys Cys Arg Leu Ser Gly Thr Ala Leu Ile Arg
            20                  25                  30
Ala Gly Ser Val Gly Ala Glu Ala Cys Leu Met Leu Lys Gly Val Lys
        35                  40                  45
Glu Asp Gln Thr Lys Phe Leu Lys Ile Lys Thr Val Ser Ser Glu Leu
    50                  55                  60
Ser Cys Arg Glu Gly Gln Ser Tyr Trp Thr Gly Ser Phe Ser Pro Lys
65                  70                  75                  80
Cys Leu Ser Ser Arg Arg Cys His Leu Val Gly Glu Cys His Val Asn
                85                  90                  95
Arg Cys Leu Ser Trp Arg Asp Asn Glu Thr Ser Ala Glu Phe Ser Phe
            100                 105                 110
Val Gly Glu Ser Thr Thr Met Arg Glu Asn Lys Cys Phe Glu Gln Cys
        115                 120                 125
Gly Gly Trp Gly Cys Gly Cys Phe Asn Val Asn Pro Ser Cys Leu Phe
    130                 135                 140
Val His Thr Tyr Leu Gln Ser Val Arg Lys Glu Ala Leu Arg Val Phe
145                 150                 155                 160
Asn Cys Ile Asp Trp Val His Lys Leu Thr Leu Glu Ile Thr Asp Phe
                165                 170                 175
Asp Gly Ser Val Ser Thr Ile Asp Leu Gly Ala Ser Ser Ser Arg Phe
            180                 185                 190
Thr Asn Trp Gly Ser Val Ser Leu Ser Leu Asp Ala Glu Gly Ile Ser
        195                 200                 205
Gly Ser Asn Ser Phe Ser Phe Ile Glu Ser Pro Gly Lys Gly Tyr Ala
    210                 215                 220
Ile Val Asp Glu Pro Phe Ser Glu Ile Pro Arg Gln Gly Phe Leu Gly
225                 230                 235                 240
Glu Ile Arg Cys Asn Ser Glu Ser Ser Val Leu Ser Ala His Glu Ser
                245                 250                 255
Cys Leu Arg Ala Pro Asn Leu Ile Ser Tyr Lys Pro Met Ile Asp Gln
            260                 265                 270
Leu Glu Cys Thr Thr Asn Leu Ile Asp Pro Phe Val Val Phe Glu Arg
        275                 280                 285
Gly Ser Leu Pro Gln Thr Arg Asn Asp Lys Thr Phe Ala Ala Ser Lys
    290                 295                 300
Gly Asn Arg Gly Val Gln Ala Phe Ser Lys Gly Ser Val Gln Ala Asp
305                 310                 315                 320
Leu Thr Leu Met Phe Asp Asn Phe Glu Val Asp Phe Val Gly Ala Ala
                325                 330                 335
Val Ser Cys Asp Ala Ala Phe Leu Asn Leu Thr Gly Cys Tyr Ser Cys
            340                 345                 350
Asn Ala Gly Ala Arg Val Cys Leu Ser Ile Thr Ser Thr Gly Thr Gly
        355                 360                 365
Thr Leu Ser Ala His Asn Lys Asp Gly Ser Leu His Ile Val Leu Pro
    370                 375                 380
Ser Glu Asn Gly Thr Lys Asp Gln Cys Gln Ile Leu His Phe Thr Val
385                 390                 395                 400
Pro Glu Val Glu Glu Glu Phe Met Tyr Ser Cys Asp Gly Asp Glu Arg
                405                 410                 415
Pro Leu Leu Val Lys Gly Thr Leu Ile Ala Ile Asp Pro
            420                 425

Claims (10)

1.一种针对裂谷热病毒糖蛋白Gn的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段包含重链以及轻链；所述重链包含重链可变区以及重链恒定区；所述轻链包含轻链可变区以及轻链恒定区；
所述抗体或抗原结合片段命名为R15，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。
2.如权利要求1所述的一种针对裂谷热病毒糖蛋白Gn的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述R15的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示。
3.如权利要求1或2所述的一种针对裂谷热病毒糖蛋白Gn的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述R15的轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
4.编码权利要求1-3任一所述针对裂谷热病毒糖蛋白Gn的抗体或抗原结合片段的核酸，其特征在于，所述核酸包含编码重链的核酸以及编码轻链的核酸；所述编码重链的核酸依次包含CMV启动子序列、前导序列、编码重链可变区的序列、编码重链恒定区的序列；
或所述编码重链的核酸依次包含CMV启动子序列、连接序列、前导序列、编码重链可变区的序列、编码重链恒定区的序列、连接序列。
5.如权利要求4所述的核酸，其特征在于，所述编码轻链的核酸依次包含CMV启动子序列、前导序列、编码轻链可变区的序列、编码轻链恒定区的序列；
或所述编码轻链的核酸依次包含CMV启动子序列、连接序列、前导序列、编码轻链可变区的序列、编码轻链恒定区的序列、连接序列。
6.含有权利要求4或5所述核酸的质粒。
7.含有权利要求6所述质粒的宿主细胞。
8.权利要求1-3任一所述针对裂谷热病毒糖蛋白Gn的抗体或抗原结合片段或者权利要求4或5所述核酸或者权利要求6所述质粒或者权利要求7所述宿主细胞在制备治疗和/或预防裂谷热病毒的药物方面的应用。
9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有有效预防剂量的权利要求1-3任一所述抗体或抗原结合片段。
10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求1-3任一所述针对裂谷热病毒糖蛋白Gn的抗体或抗原结合片段或者权利要求4或5所述核酸或者权利要求6所述质粒或者权利要求7所述宿主细胞。
CN202210038774.8A 2019-02-15 2019-02-15 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用 Active CN114409770B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210038774.8A CN114409770B (zh) 2019-02-15 2019-02-15 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910116927.4A CN109734800B (zh) 2019-02-15 2019-02-15 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用
CN202210038774.8A CN114409770B (zh) 2019-02-15 2019-02-15 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910116927.4A Division CN109734800B (zh) 2019-02-15 2019-02-15 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114409770A CN114409770A (zh) 2022-04-29
CN114409770B true CN114409770B (zh) 2023-05-09

Family

ID=66367483

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910116927.4A Active CN109734800B (zh) 2019-02-15 2019-02-15 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用
CN202010860411.3A Active CN111978400B (zh) 2019-02-15 2019-02-15 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用
CN202210037887.6A Active CN114409769B (zh) 2019-02-15 2019-02-15 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用
CN202210038774.8A Active CN114409770B (zh) 2019-02-15 2019-02-15 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用

Family Applications Before (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910116927.4A Active CN109734800B (zh) 2019-02-15 2019-02-15 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用
CN202010860411.3A Active CN111978400B (zh) 2019-02-15 2019-02-15 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用
CN202210037887.6A Active CN114409769B (zh) 2019-02-15 2019-02-15 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (4) CN109734800B (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111041000B (zh) * 2019-12-31 2022-07-05 江苏省农业科学院 一株分泌抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用
EP4088113A4 (en) * 2020-01-12 2024-05-15 Univ Vanderbilt HUMAN ANTIBODIES AGAINST RIFT VALLEY FEVER VIRUS
BR112022016784A2 (pt) * 2020-02-24 2022-11-08 Inst Microbiology Cas Anticorpo monoclonal humanizado para o coronavírus 2019 e seu uso
CN114605528B (zh) * 2022-05-11 2022-07-12 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种抗裂谷热病毒的单克隆抗体a38及应用
CN114634565B (zh) * 2022-05-18 2022-08-02 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种抗裂谷热病毒的单克隆抗体e44及应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4735800A (en) * 1983-09-09 1988-04-05 Molecular Genetics, Inc. Vaccines against rift valley fever virus
WO2007104979A1 (en) * 2006-03-15 2007-09-20 London School Of Hygiene & Tropical Medicine Virus-like particles of rift valley fever virus
EP2133358A1 (en) * 2008-06-10 2009-12-16 Universitätsklinikum Freiburg Rift valley fever virus-like particles and their use for immunization and as test system
KR20100105974A (ko) * 2009-03-23 2010-10-01 대한민국(관리부서 : 농림수산식품부 국립수의과학검역원) 재조합 ｎ 단백질에 대한 단클론 항체를 이용한 리프트계곡열 경합적 효소결합면역측정법
CN106589116A (zh) * 2016-12-06 2017-04-26 中国科学院微生物研究所 一种黄病毒人源单克隆抗体及应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2501422C (en) * 2004-04-29 2014-08-12 University Of Rochester Lymphoid chemokines in the diagnosis, monitoring and treatment of autoimmune disease
CN102433392B (zh) * 2011-12-13 2013-05-15 中国检验检疫科学研究院 用于检测裂谷热病毒s片段的引物和探针
WO2014123614A2 (en) * 2012-12-06 2014-08-14 Theusa, As Represented By The Secretary Of The Army On Behalf Of The Us Army Mri Infectious Diseases Antiviral rift valley fever virus virus peptides and methods of use
BR112015027611A2 (pt) * 2013-01-28 2022-03-03 Univ Kansas State Molécula de ácido nucleico isolada; célula hospedeira; vetor; proteína ou polipeptídeo isolado; imunorreagente específico de vírus da febre do vale do rift (rvfv); uso de uma composição; uso de uma composição para o diagnóstico de febre do vale do rift (rvf) em um indivíduo; e kit
CN103952494A (zh) * 2014-03-06 2014-07-30 中国动物卫生与流行病学中心 一种裂谷热病毒rt-lamp的检测方法
CN105738624B (zh) * 2015-12-28 2018-07-10 中华人民共和国上海出入境检验检疫局 一种裂谷热病毒IgG抗体的间接免疫荧光检测方法
CN107478838A (zh) * 2017-09-25 2017-12-15 贵州省人民医院 一种检测人及动物血清抗rvf病毒抗体的胶体金免疫层析试纸条

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4735800A (en) * 1983-09-09 1988-04-05 Molecular Genetics, Inc. Vaccines against rift valley fever virus
WO2007104979A1 (en) * 2006-03-15 2007-09-20 London School Of Hygiene & Tropical Medicine Virus-like particles of rift valley fever virus
EP2133358A1 (en) * 2008-06-10 2009-12-16 Universitätsklinikum Freiburg Rift valley fever virus-like particles and their use for immunization and as test system
KR20100105974A (ko) * 2009-03-23 2010-10-01 대한민국(관리부서 : 농림수산식품부 국립수의과학검역원) 재조합 ｎ 단백질에 대한 단클론 항체를 이용한 리프트계곡열 경합적 효소결합면역측정법
CN106589116A (zh) * 2016-12-06 2017-04-26 中国科学院微生物研究所 一种黄病毒人源单克隆抗体及应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN114409770A (zh) 2022-04-29
CN109734800B (zh) 2020-11-06
CN114409769B (zh) 2023-05-09
CN111978400A (zh) 2020-11-24
CN109734800A (zh) 2019-05-10
CN111978400B (zh) 2022-04-01
CN114409769A (zh) 2022-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114409770B (zh) 一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用
CN106279409B (zh) 一种寨卡病毒人源单克隆抗体及其应用
JPH09501933A (ja) 植物、動物、およびヒトのワクチンとして並びに免疫療法に有用な抗体の免疫優性エピトープの弱化
CN111304253B (zh) 非洲猪瘟病毒疫苗、其制备方法与应用
WO2015200522A2 (en) Monoclonal antibodies directed against envelope glycoproteins from multiple filovirus species
KR20210013000A (ko) Sftsv에 결합 가능한 나노 항체 및 이의 응용
Pan et al. Development of horse neutralizing immunoglobulin and immunoglobulin fragments against Junín virus
WO2020186687A1 (zh) 一种特异性结合四种血清型登革病毒的人源抗体
CN111153988A (zh) 广谱抗肠道病毒d68型的中和性单克隆抗体
EP3212666B1 (en) Human monoclonal antibody specific for the f protein of respiratory syncytial virus (rsv)
CN105085672B (zh) 3d蛋白特异性单克隆免疫球蛋白a抗体及其组合物
CN113248608B (zh) 一种基孔肯雅病毒e2蛋白兔单克隆抗体及其用途
CN114736291B (zh) 特异性结合发热伴血小板减少综合征病毒的囊膜蛋白Gn的人源单克隆抗体及其用途
CN114805579A (zh) 一种抗人ace2蛋白单克隆抗体、核酸分子及应用
CN105085671B (zh) 抗肠道病毒3d蛋白的单克隆免疫球蛋白g抗体及其免疫原性组合物
AU2018323502B2 (en) Modified HSV gD protein and vaccine containing same
Flynn et al. Antibody-mediated activation of Sindbis virus
CN114773461B (zh) 乙型脑炎病毒抗体1d11及其应用
CN113248607B (zh) 一种基孔肯雅病毒e2蛋白兔单克隆抗体及其在开发治疗性抗体中的用途
Wang et al. A human bispecific neutralization antibody against four serotypes of dengue virus
WO2022250107A1 (ja) ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２野生株および変異株に対するヒト中和抗体およびその抗原結合性断片
Marghani COVID-19 immunotherapy: novel humanized 47D11 monoclonal antibody
WO2016115664A1 (en) 3d protein-specific monoclonal immunoglobulin a antibodies
WO2016115665A1 (en) Immunoglobulin g monoclonal antibodies against 3d proteins of enteroviruses
KR20180131709A (ko) 특정 항원 정제 방법 및 이를 이용한 단일클론 항체 제조 방법

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant