CN106581193A - 一种治疗慢性阻塞性肺疾病的补肺活血胶囊 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物的用途及其制备方法，所述的补肺活血胶囊主要由黄芪、赤芍和补骨脂组成。

Description

一种治疗慢性阻塞性肺疾病的补肺活血胶囊
技术领域
本发明属于中药技术领域，涉及补肺活血胶囊用于治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病药物的用途及其制备方法。
背景技术
祖国医学没有慢性阻塞性肺疾病专用的病名记载，根据其临床表现，现代学者多将其纳入“肺胀”、“内伤咳嗽”、“喘证”、痰饮”等范畴。《内经五脏生成篇》云“诸气者，皆归于肺”；《灵枢胀论》说“肺胀者，虚满而喘咳”；《灵枢经脉》又说肺手太阴之脉……是动则病肺胀满，膨膨而喘咳”。明确指出了本病的病位和主要临床症状。清代沈金鳌《杂病源流犀烛·咳嗽哮喘源流》云：“肺不伤不咳，脾不伤不久咳，肾不伤火不炽，咳不甚，其大较也……”。《类证治裁喘证》亦云：肺为气之主，肾为气之根，肺主出气，肾主纳气，阴阳相交，呼吸乃和”。提出咳喘不仅局哏于肺，随着疾病病程的进展也与脾、肾有着密切的联系，肺、脾、肾三脏功能协调是保证呼吸调匀的关键。
现代学者多认为本病的病机多属本虚标实。急性发作期主要是以标实为主，多见痰油、血疾、热毒等。缓解期主要是以肺脾肾三脏虚损为特点，早期表现为外邪侵袭、首先犯肺致肺气虚损，易感外邪，致病情反复发作，迁延不愈。周仲琪认为，其病因主要为嗜烟或反复感受外邪，烟毒或六淫之邪犯肺，易致肺气虚损，布津失职，蕴津成痰，内阻于肺，气失肃降。薛汉荣认为，气阳之虚和痰擦之实贯穿于本病始终。二者相互并存、相互影响。气阳虚衰是关键，是内在发病因素，与宿根“痰瘀伏肺”相关。刘忠义等认为，发作期病位在肺，以痰气交阻、气机壅塞、行滞湿、痰疲互结为主要病机，肺病日久。损伤脾、肾，导致肺、脾、肾俱虚，从而加重痰浊内生，壅塞气道，气滞血疾，痰疾互结。
针对呼吸系统疾病，强调“正气存内，邪不可干”，考虑通过补益肺气可增强机体抵御外邪的能力，防止外邪入侵、并阻止疾病传变。
鉴此，临床迫切需要疗效明确、毒副作用小、服用方便且药物易于储存的可用于治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物，以满足市场和患者之需。
发明内容
本发明旨在提供补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性疾病的药物的用途，该中药组合物选用药材配伍相宜，符合中医药及现代医学研究理论，药效好且毒副作用低。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物的用途，所述的补肺活血胶囊主要由黄芪、赤芍和补骨脂组成，所述的补肺活血胶囊的制备方法为：
(1)将黄芪切片、赤芍和补骨脂粉碎成粗粉，加入60-70％的乙醇浸润24h，之后以1ml/min速度渗漉速度提取，收集10倍量的渗漉液，减压浓缩至1.30～1.40的流浸膏，并真空干燥得干膏，粉碎；
(2)加1.0～2.0倍重量份的淀粉，混匀，90％乙醇制粒，干燥，加入不超过5％的滑石粉和0.1％-2％的硬脂酸镁，混匀，装入胶囊，即得。
优选的，黄芪为50～100份(重量)、赤芍为50～100份(重量)、补骨脂为25～50份(重量)。更优选的，黄芪为72份(重量)、赤芍为72份(重量)、补骨脂为36份(重量)。
补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物的用途，所述的补肺活血胶囊含有重量百分比的下列活性物质：≥1.8％的黄芪甲苷、≥2％的毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮葡萄糖苷、≥2.5％的芍药苷和≥0.62％的补骨脂素和异补骨脂素。
补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物的用途，所述的补肺活血胶囊降低呼吸系统阻力和主气道阻力，升高呼吸系统弹力和呼吸系统顺应性。
补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物的用途，所述的补肺活血胶囊降低肺组织分泌型免疫球蛋白和TNF-α的分泌。
补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物的用途，所述的补肺活血胶囊降低肺组织免疫球蛋白和肺组织角质细胞生长因子的含量。
本发明具有以下优点：
(1)本发明补肺活血胶囊选用优质中药材制成，成本低廉且配伍相宜，符合中医药及现代医学研究理论，并利用现代医药制药技术制成相关剂型，安全毒副作用低。
(2)在COPD小鼠模型中，本发明补肺活血胶囊与模型对照组相比，可明显降低呼吸系统阻力及主气道阻力，明显升高呼吸系统弹力和呼吸系统顺应性，可显著降低小鼠血清分泌型免疫球蛋白(sIga)和TNF-α的分泌，可显著降低小鼠肺组织中免疫球蛋白(Iga)和肺组织角质细胞生长因子(KGF)的含量，使COPD模型小鼠肺组织形态学改变有所改善。
(3)在COPD小鼠模型中，本发明补肺活血胶囊对照药组相比，可明显降低呼吸系统阻力及主气道阻力，明显升高呼吸系统弹力和呼吸系统顺应性，可明显降低小鼠血清血清分泌型免疫球蛋白(sIga)和TNF-α的分泌，可明显降低小鼠肺组织中免疫球蛋白(Iga)和肺组织角质细胞生长因子(KGF)的含量。
(4)本发明补肺活血胶囊采用渗漉法提取，制备工艺简单易操作，活性物质黄芪甲苷、毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芍药苷和补骨脂素、异补骨脂素的含量高，明显高于对照组合物。
(5)本发明补肺活血胶囊制备简单，易于临床应用。
(6)本发明补肺活血胶囊对活性物质黄芪甲苷、毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芍药苷和补骨脂素、异补骨脂素的含量进行限定，质量更为可控。
附图说明
图1为COPD模型小鼠肺组织形态学。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。
实施例1本发明补肺活血胶囊的原料配方
组合物1：黄芪500g，赤芍1000g，补骨脂360g。
组合物2：黄芪1000g，赤芍500g，补骨脂250g。
组合物3：黄芪720g，赤芍720g，补骨脂360g。
实施例2本发明补肺活血胶囊的提取物的制备及活性物质的含量
称取实施例1中的3组组合物的原料配方，将黄芪切片、赤芍和补骨脂粉碎成粗粉，加入60-70％的乙醇浸润24h，之后以1ml/min速度渗漉速度提取，收集10倍量的渗漉液，减压浓缩至1.30～1.40的流浸膏，并真空干燥得干膏，粉碎。
所述补肺活血胶囊提取物中含有下列活性物质：黄芪甲苷、芍药苷、补骨脂素和异补骨脂素，结果见表1，测定方法依照《中国药典》(2015版)第一部的方法。
毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法如下：
(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.3％甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260nm。
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～12 80～63 20～37
12～16 63～60 37～40
16～22 60～50 40～50
22～28 50～0 50～100
(2)对照品溶液的制备：取毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮葡萄糖苷适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
(3)供试品溶液的制备：取制得的提取物适量，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。。
(4)测定法：分别精密称取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
表1本发明补肺活血胶囊活性物质含量
对照组合物制备方法：
黄芪720g，赤芍720g，补骨脂360g，取赤芍180g粉碎成细粉，备用；其余药味加水煎煮二次，第一次加8倍量水，第二次加6倍量水，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.15(80℃)，加乙醇使含醇量达60％，充分搅拌，静置24小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，继续浓缩至相对密度为1.35～1.40(80℃)，加入上述赤芍细粉，混匀，干燥，粉碎。
表2对照组合物活性物质含量
实施例3本发明补肺活血胶囊剂的制备
根据实施例2的制备方法制得的提取物，加1.0～2.0倍重量份的淀粉，混匀，90％乙醇制粒，干燥，加入不超过5％的滑石粉和0.1％-2％的硬脂酸镁，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
实施例4本发明补肺活血胶囊对COPD小鼠模型的影响
动物：
试验用动物为SPF级健康ICR雌性小鼠40只，体重18-20g。在温度22℃-28℃，适应性饲养1周，随机分为4组，即空白对照组、模型对照组、对照药组(实施例2中的对照组合物)和本发明补肺活血胶囊组(实施例1的组合物3)，每组10只。
药物：
对照药组和本发明补肺活血胶囊组，根据其成人用量，配成0.41g生药/ml，灌胃给药。
小鼠模型建立与药物干预：
采用鼻腔滴入脂多糖(LPS)加熏香烟的方法建立COPD小鼠动物模型。模型对照组、对照药组和本发明补肺活血胶囊组分别于第1、29和57天经鼻腔滴入LPS(30ug/6uL)，第2-84天(除第29、57天)采取熏香烟法，将小鼠放入自制的玻璃熏香，10支/次，30min/次，5d/周，共12周；空白对照组分别于第1、29和57天经鼻腔滴入相同量的0.9％氯化钠溶液，其余时间正常饲养。对照药组和本发明补肺活血胶囊组于第13周开始每只0.2ml/d灌胃，空白对照组和模型对照组以同样方法予0.9％氯化钠溶液灌胃，共4周。
肺组织形态学标本采集及处理：
脱颈处死小鼠(10只/组)，开胸暴露胸腔，取左侧肺叶固定于10％甲醛溶液24h，常规脱水石蜡包埋，切片备用。
试验结果及分析：
1、一般情况
空白对照组小鼠无死亡，毛发光泽，呼吸均匀，活动正常；COPD模型小鼠死亡2只，毛发无光泽，部分有脱毛现象，躁动，熏烟时喜扎堆，倦怠蜷缩，汗出，腹部胀大，呼吸急促，出现点头运动，甚者张口呼吸明显。对照药组死亡3只，造模时一般情况同COPD模型组，灌服对照药后与模型组相比毛发较有光泽，躁动程度减轻，呼吸较均匀。本发明补肺活血胶囊组死亡1只，造模时一般情况同COPD模型组，灌服本发明补肺活血胶囊后与模型组相比毛发有光泽，躁动程度明显减轻，呼吸均匀。
2、对COPD模型小鼠肺功能的影响
表3本发明补肺活血胶囊对COPD模型小鼠肺功能的影响
注：不同组别小鼠肺功能分析，表达量分析用表示，*表示与模型组相比P<0.05；#表示与对照药组相比P<0.05。
肺功能结果提示经熏烟和LPS干预后小鼠肺组织功能明显改变，呼吸系统阻力及主气道阻力较正常小鼠明显增大(P＜0.05)，呼吸系统弹力及呼吸系统顺应性较正常小鼠明显减弱(P＜0.05)；经本发明补肺活血胶囊干预后呼吸系统阻力及主气道阻力较模型组明显降低(P＜0.05)，而呼吸系统弹力及呼吸系统顺应性较模型组小鼠显著升高(P＜0.05)；本发明补肺活血胶囊组与对照药组相比，呼吸系统阻力及主气道阻力较模型组明显降低(P＜0.05)，而呼吸系统弹力及呼吸系统顺应性较模型组小鼠明显升高(P＜0.05)。考虑通过本发明补肺活血胶囊干预后COPD模型小鼠肺组织弹性及肺功能有明显好转，药效好于对照药组。
3、本发明补肺活血胶囊对COPD模型小鼠肺组织形态学影响
空白对照组小鼠肺泡结构清晰，肺泡大小均匀，气道黏膜上皮结构完整，纤毛排列整齐(图1-A)；模型对照组小鼠部分肺泡壁塌陷，肺泡不规则扩大并相互融合，形成肺大泡，肺间质内可见不同程度的炎症细胞浸润，支气管黏膜上皮脱落，黏膜皱襞增多，突入管腔，纤毛黏缩，管腔变窄(图1-B)，符合COPD病理改变；本发明补肺活血胶囊组小鼠肺组织仍存在肺大泡形成，肺组织及气道炎性细胞浸润相对减少，气道纤毛排列整齐，少量纤毛脱落，本发明补肺活血胶囊组使COPD模型小鼠肺组织形态学改变有所改善(图1-C)。
图1：小鼠肺组织切片HE染色。A为空白对照组，A1(×200)可见小鼠肺泡结构清晰，大小均匀，A2(×400)气道黏膜上皮结构完整，纤毛排列整齐；B为模型对照组，B1(×200)可见小鼠肺泡腔不规则扩大，并相互融合，形成肺大泡，B2(×400)肺间质内可见炎症细胞浸润，支气管黏膜皱襞增多，突入管腔，管腔变窄；C为固本止咳中药组，C1(×200)可见仍有肺大泡存在，但肺组织及气道炎性细胞浸润相对减少，C2(×400)气道纤毛排列整齐，少量纤毛脱落。
4、本发明补肺活血胶囊对COPD模型小鼠肺组织相关炎性介质含量的ELISA检测
模型对照组BALF较空白对照组分泌型免疫球蛋白(sIgA)显著性降低(P<0.01)；本发明补肺活血胶囊组较模型对照组sIgA分泌量显著性增高(P<0.01)；本发明补肺活血胶囊组较对照药组sIgA分泌量明显增高(P<0.05)；本发明补肺活血胶囊组sIgA低于空白组(P＜0.01)。表明COPD小鼠气道黏膜sIgA含量减少，sIgA通过中和或防止病毒、细菌和毒素吸附从而对粘膜表面进行保护，同时sIgA可以阻止病原微生物在黏膜上皮层停留繁殖，禁止它们进入上皮层，经本发明补肺活血胶囊治疗后可改善气道黏膜sIgA分泌量，减轻小鼠气道感染状态，延缓COPD疾病进程。由于本发明补肺活血胶囊组小鼠仍存在COPD炎性损伤，故sIgA指标仍低于正常小鼠。
结果显示模型组小鼠血清TNF-α显著高于空白对照组(P＜0.01)，且模型组小鼠血清TNF-α显著高于本发明补肺活血胶囊组(P＜0.01)，本发明补肺活血胶囊组小鼠血清TNF-α明显低于对照药组(P＜0.05)，本发明补肺活血胶囊组小鼠血清TNF-α略高于空白组，但无统计学差异。COPD模型小鼠血清TNF-α显著高于空白组，说明COPD小鼠肺部炎症反应增多，炎性介质TNF-α的表达升高，从而促进炎性细胞聚集及炎性介质的释放，加重呼吸系统的炎性损伤。本发明补肺活血胶囊组小鼠血清TNF-α明显低于COPD模型组，说明本发明补肺活血胶囊组能够有效降低TNF-α的分泌，降低其炎性诱导作用，减少炎性细胞聚集，从而有效减轻呼吸系统的炎症反应，改善肺损伤。
表4ELISA检测小鼠肺泡灌洗液中sIgA及血清中TNF-α
注：以上相关定量分析用表示，**表示与模型组相比P<0.01，n＝10；#表示与模型组相比P<0.05，n＝10。
5、本发明补肺活血胶囊对COPD模型小鼠肺组织相关因子的PCR检测
模型对照组较空白对照组免疫球蛋白(IgA)显著性升高(P<0.01)；本发明补肺活血胶囊组较模型对照组IgA分泌量显著性降低(P<0.01)；本发明补肺活血胶囊组较对照药组IgA分泌量明显降低(P<0.05)；本发明补肺活血胶囊组IgA高于空白对照组(P<0.01)。表明COPD小鼠气道黏膜IgA含量增高，存在气道炎症，经本发明补肺活血胶囊治疗后可改善气道黏膜IgA分泌量，减轻小鼠气道炎症状态。由于本发明补肺活血胶囊小鼠仍存在COPD炎性损伤，故IgA指标仍高于正常小鼠。
模型组较空白组小鼠肺组织中肺组织角质细胞生长因子(KGF)含量显著上升(P<0.01)；本发明补肺活血胶囊组较模型组小鼠肺组织中KGF含量显著减少(P<0.01)；本发明补肺活血胶囊组较对照药组小鼠肺组织中KGF含量明显减少(P<0.05)；本发明补肺活血胶囊KGF含量显著高于空白组(P<0.01)。在肺组织受损后KGF能刺激上皮细胞在增殖，修复损伤的黏膜组织，因此本发明补肺活血胶囊可减少COPD对肺组织的损害。由于本发明补肺活血胶囊小鼠仍存在肺部炎性损害，故KGF指标仍高于正常小鼠。
表5PCR检测小鼠肺组织中IgA及KGF
注：KGF和IgA在不同组别小鼠肺组织中的表达。KGF和IgA在小鼠中的表达量分析用表示，**表示与模型组相比P<0.01，n＝10，#表示与模型组相比P<0.05，n＝10。
空白对照组与模型组相比KGF和IgA的表达明显降低，本发明补肺活血胶囊干预组炎性介质含量显著低于模型组，且明显低于对照药组。

Claims (7)

1.一种补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物的用途，其特征在于，所述的补肺活血胶囊主要由黄芪、赤芍和补骨脂组成，所述的补肺活血胶囊的制备方法为：
(1)将黄芪切片、赤芍和补骨脂粉碎成粗粉，加入60-70％的乙醇浸润24h，之后以1ml/min速度渗漉速度提取，收集10倍量的渗漉液，减压浓缩至1.30～1.40的流浸膏，并真空干燥得干膏，粉碎；
(2)加1.0～2.0倍重量份的淀粉，混匀，90％乙醇制粒，干燥，加入不超过5％的滑石粉和0.1％-2％的硬脂酸镁，混匀，装入胶囊，即得。
2.如权利要求1所述的补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物的用途，其特征在于，所述的黄芪为50～100份(重量)、赤芍为50～100份(重量)、补骨脂为25～50份(重量)。
3.如权利要求1所述的补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物的用途，其特征在于，所述的黄芪为72份(重量)、赤芍为72份(重量)、补骨脂为36份(重量)。
4.如权利要求1所述的补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物，其特征在于，所述的补肺活血胶囊含有重量百分比的下列活性物质：≥1.8％的黄芪甲苷、≥2％的毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮葡萄糖苷、≥2.5％的芍药苷和≥0.62％的补骨脂素和异补骨脂素。
5.如权利要求1所述的补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物的用途，其特征在于，所述的补肺活血胶囊降低呼吸系统阻力和主气道阻力，升高呼吸系统弹力和呼吸系统顺应性。
6.如权利要求1所述的补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物的用途，其特征在于，所述的补肺活血胶囊降低肺组织分泌型免疫球蛋白和TNF-α的分泌。
7.如权利要求1所述的补肺活血胶囊用于制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺疾病的药物的用途，其特征在于，所述的补肺活血胶囊降低肺组织中免疫球蛋白和肺组织角质细胞生长因子的含量。
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Granted publication date: 20171110

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Pledgor: GUANGDONG LEIYUNSHANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

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