CN106579329A - 一种多肽复合抗氧化剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蛋白肽复合调味料，属于食品添加剂技术领域。包含40‑60份的抗氧化活性肽、20‑30份的茶多酚和10‑20份的Vc；所述抗氧化活性肽是指大豆蛋白肽或者花生蛋白肽的一种或者两种。本发明制备抗氧化剂，抗氧化效果与合成抗氧化剂相当，并能长时间保证对食品的氧化保护作用，同时增加了食品的营养价值，1mg/mL对DPPH自由的清除率最高达80.02％，对羟基自由基的清除率最高达76.69％，可完全替代合成抗氧化剂添加到食品中，同时，由于加入了多肽，提高了食品的营养价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种多肽复合抗氧化剂，属于食品添加剂技术领域。
背景技术
市面上的乳饮料、茶饮料及果汁饮料中都或多或少含有的抗氧化剂，常用的抗氧化剂有BHA、BHT、PG、TBHQ，但这些抗氧化剂都是合成抗氧化剂，随着人们对食品安全性要求的提高和对化学合成抗氧化剂的安全事件疑虑增加，人们期待着开发出安全且高效的天然抗氧化剂，目前天然抗氧化剂有维生素A、C、E、P、多酚、黄酮等，这些抗氧化剂可以帮助人类预防心脏病和癌症等多种疾病，并能增进脑力，延缓衰老，但天然抗氧化剂添加到食品中的研究还不完善，一方面不能达到合成抗氧化剂所具有的抗氧化效果，另一方面，天然抗氧化剂不稳定，不能长时间保证对食品的氧化保护作用，这些缺点限制天然抗氧化剂的使用，使它不能完全替代合成抗氧化剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种多肽复合抗氧化剂，解决现有技术中天然抗氧化剂不能完全替代合成抗氧化剂的技术问题。
一种多肽复合抗氧化剂，包含40-60份的抗氧化活性肽、20-30份的茶多酚和10-20份的Vc。
所述抗氧化活性肽是指大豆蛋白肽或者花生蛋白肽的一种或者两种。
在本发明的一种实施方式中，所述抗氧化活性肽为大豆蛋白肽和花生蛋白肽，大豆蛋白肽和花生蛋白肽的比例为1：(1-5)。
所述大豆蛋白肽或者花生蛋白肽的制备方法是取大豆粕或者花生粕以水浸提蛋白，向提取液中加入Alcalase碱性蛋白酶进行酶解，控制水解度DH为15-20，离心取酶解液，利用DA201-C大孔树脂吸附酶解液，吸附饱和的DA201-C大孔吸附树脂用酒精解吸，解吸液经浓缩干燥得大豆蛋白肽或者花生蛋白肽。
所述Alcalase碱性蛋白酶的酶活为30万U/g。
所述以水浸提蛋白是指大豆粕或者花生粕与水的比例为1:(8-10)，以0.1mol/L的NaOH溶液调节pH至7.5-8.5，浸提4-6h，浸提结束后在4000-5000r条件下离心1-20min，取提取液。
所述向提取液中加入Alcalase碱性蛋白酶进行酶解是指加入Alcalase碱性蛋白酶为底物蛋白含量的2-3％，调节pH为8.5，在55℃条件下水解2-6h，以pH-star法控制水解度为15-20，水解结束后在4000-5000r条件下离心1-20min，取酶解液。
所述利用DA201-C大孔树脂吸附酶解液，加入DA201-C大孔树脂的质量为酶解液中蛋白质含量的5-6倍，静态震荡吸附9-12h，用蒸馏水洗至洗液电导率与纯水相当，加入70-75％的酒精静态震荡解吸12-14h，解析完毕后，过滤取滤液，浓缩，干燥，得大豆蛋白肽或者花生蛋白肽；
所述酒精的加入体积为原酶解液体积的1-2倍。
本发明的有益效果：本发明制备抗氧化剂，抗氧化效果与合成抗氧化剂相当，并能长时间保证对食品的氧化保护作用，同时增加了食品的营养价值，1mg/mL的TBHQ对DPPH自由的清除率为78.12％，对羟基自由基的清除率为75.36％，本发明制备的抗氧化剂，同样浓度时，对DPPH自由的清除率最高达80.02％，对羟基自由基的清除率最高达76.69％，与合成抗氧化剂的抗氧化效果相当，可完全替代合成抗氧化剂添加到食品中，同时，由于加入了多肽，提高了食品的营养价值。
具体实施方式
DPPH自由基清除率的测定方法
DPPH自由基清除活性的测定向试管中加入样品溶液和0.1mmol/L DPPH溶液各2mL，漩涡振荡混匀，在暗室中反应30min，测517nm波长处的吸光度值并计算清除率。
空白：无水乙醇代替DPPH，水代替样品溶液；A1为样品的吸光值；A0为以水代替样品溶液的对照实验的吸光值；A2为以无水乙醇代替DPPH溶液的样品干扰实验的吸光值。
羟自由基(·OH)清除率的测定
H2O2与Fe2+发生芬顿反应生成·OH，从而把邻二氮菲-Fe2+氧化成邻二氮菲-Fe3 +[98]，当体系中存在抗氧化剂时，可使此氧化反应受抑制，在10mL试管中依次加入邻二氮菲(5mmol/L)1.0mL，PBS缓冲液(0.2mol/L pH7.4)2.0mL，样品溶液1.0mL，H2O2(0.1％v/v)1.0mL，37℃水浴1h。
A0：双蒸水代替样品为空白对照；A1：样品的吸光值；A2：双蒸水代替除样品以外的物质；紫外-可见分光光度计波长为536nm。
实施例1：
一种多肽复合抗氧化剂，包含40份的大豆蛋白肽、20份的茶多酚和10份的Vc。
所述大豆蛋白肽或者花生蛋白肽的制备方法是取大豆粕或者花生粕以水浸提蛋白，向提取液中加入Alcalase碱性蛋白酶进行酶解，控制水解度DH为15，离心取酶解液，利用DA201-C大孔树脂吸附酶解液，吸附饱和的DA201-C大孔吸附树脂用酒精解吸，解吸液经浓缩干燥得大豆蛋白肽或者花生蛋白肽。
所述以水浸提蛋白是指大豆粕或者花生粕与水的比例为1:8，以0.1mol/L的NaOH溶液调节pH至8，浸提4h，浸提结束后在4000r条件下离心20min，取提取液。
所述向提取液中加入Alcalase碱性蛋白酶进行酶解是指加入Alcalase碱性蛋白酶为底物蛋白含量的2％，调节pH为8.5，在55℃条件下水解，以pH-star法控制水解度为15，水解结束后在4000r条件下离心20min，取酶解液。
所述利用DA201-C大孔树脂吸附酶解液，加入DA201-C大孔树脂的质量为酶解液中蛋白质含量的5倍，静态震荡吸附9h，用蒸馏水洗至洗液电导率与纯水相当，加入75％的酒精静态震荡解吸12h，解析完毕后，过滤取滤液，浓缩，干燥，得大豆蛋白肽或者花生蛋白肽；所述酒精的加入体积为原酶解液体积的2倍。
实施例2：
一种多肽复合抗氧化剂，包含60份的花生蛋白肽、20份的茶多酚和20份的Vc。
所述大豆蛋白肽或者花生蛋白肽的制备方法是取大豆粕或者花生粕以水浸提蛋白，向提取液中加入Alcalase碱性蛋白酶进行酶解，控制水解度DH为20，离心取酶解液，利用DA201-C大孔树脂吸附酶解液，吸附饱和的DA201-C大孔吸附树脂用酒精解吸，解吸液经浓缩干燥得大豆蛋白肽或者花生蛋白肽。
所述以水浸提蛋白是指大豆粕或者花生粕与水的比例为1:10，以0.1mol/L的NaOH溶液调节pH至8.5，浸提6h，浸提结束后在5000r条件下离心10min，取提取液。
所述向提取液中加入Alcalase碱性蛋白酶进行酶解是指加入Alcalase碱性蛋白酶为底物蛋白含量的3％，调节pH为8.5，在55℃条件下水解4h，以pH-star法控制水解度为20，水解结束后在5000r条件下离心10min，取酶解液。
所述利用DA201-C大孔树脂吸附酶解液，加入DA201-C大孔树脂的质量为酶解液中蛋白质含量的6倍，静态震荡吸附12h，用蒸馏水洗至洗液电导率与纯水相当，加入75％的酒精静态震荡解吸14h，解析完毕后，过滤取滤液，浓缩，干燥，得大豆蛋白肽或者花生蛋白肽；所述酒精的加入体积为原酶解液体积的2倍。
实施例3：
一种多肽复合抗氧化剂，包含20份的大豆蛋白肽、30份的花生蛋白肽、30份的茶多酚和10份的Vc。
所述大豆蛋白肽或者花生蛋白肽的制备方法是取大豆粕或者花生粕以水浸提蛋白，向提取液中加入Alcalase碱性蛋白酶进行酶解，控制水解度DH为18，离心取酶解液，利用DA201-C大孔树脂吸附酶解液，吸附饱和的DA201-C大孔吸附树脂用酒精解吸，解吸液经浓缩干燥得大豆蛋白肽或者花生蛋白肽。
所述以水浸提蛋白是指大豆粕或者花生粕与水的比例为1:9，以0.1mol/L的NaOH溶液调节pH至8，浸提5h，浸提结束后在5000r条件下离心10min，取提取液。
所述向提取液中加入Alcalase碱性蛋白酶进行酶解是指加入Alcalase碱性蛋白酶为底物蛋白含量的2-3％，调节pH为8.5，在55℃条件下水解5h，以pH-star法控制水解度为18，水解结束后在5000r条件下离心15min，取酶解液。
所述利用DA201-C大孔树脂吸附酶解液，加入DA201-C大孔树脂的质量为酶解液中蛋白质含量的5倍，静态震荡吸附10h，用蒸馏水洗至洗液电导率与纯水相当，加入75％的酒精静态震荡解吸12h，解析完毕后，过滤取滤液，浓缩，干燥，得大豆蛋白肽或者花生蛋白肽；所述酒精的加入体积为原酶解液体积的2倍。
实施例4：抗氧化活性对比
取TBHQ、大豆蛋白肽、花生蛋白肽、Vc、茶多酚以及实施例1、实施例2和实施例3制备的抗氧化剂，都配置成1mg/mL的溶液，测定他们对DPPH、羟基自由基的清除率，来评价其抗氧化活性。结果如下表所示：
从表中可知，本发明所制备的抗氧化剂抗氧化效果与合成抗氧化剂TBHQ抗氧化效果相当，可完全替代合成抗氧化剂添加到饮料中，上述抗氧化剂复配的效果并非简单的叠加，而是发生了协同增效作用。
以上较佳实施例仅用于说明本发明的内容，除此之外，本发明还有其他实施方式，但凡本领域技术人员因本发明所涉及之技术启示，而采用等同替换或等效变形方式形成的技术方案均落在本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种多肽复合抗氧化剂，其特征在于，包含40-60份的抗氧化活性肽、20-30份的茶多酚和10-20份的Vc。
2.根据权利要求1所述的一种多肽复合抗氧化剂，其特征在于，所述抗氧化活性肽是指大豆蛋白肽或者花生蛋白肽的一种或者两种。
3.根据权利要求2所述的一种多肽复合抗氧化剂，其特征在于，所述抗氧化活性肽为大豆蛋白肽和花生蛋白肽，大豆蛋白肽和花生蛋白肽的比例为1：(1-5)。
4.根据权利要求2或3所述的一种多肽复合抗氧化剂，其特征在于，所述大豆蛋白肽或者花生蛋白肽的制备方法是取大豆粕或者花生粕以水浸提蛋白，向提取液中加入Alcalase碱性蛋白酶进行酶解，控制水解度DH为15-20，离心取酶解液，利用DA201-C大孔树脂吸附酶解液，吸附饱和的DA201-C大孔吸附树脂用酒精解吸，解吸液经浓缩干燥得大豆蛋白肽或者花生蛋白肽。
5.根据权利要求4所述的一种多肽复合抗氧化剂，其特征在于，所述以水浸提蛋白是指大豆粕或者花生粕与水的比例为1:(8-10)，以0.1mol/L的NaOH溶液调节pH至7.5-8.5，浸提4-6h，浸提结束后在4000-5000r条件下离心1-20min，取提取液。
6.根据权利要求4所述的一种多肽复合抗氧化剂，其特征在于，所述向提取液中加入Alcalase碱性蛋白酶进行酶解是指加入Alcalase碱性蛋白酶为底物蛋白含量的2-3％，调节pH为8.5，在55℃条件下水解2-6h，以pH-star法控制水解度为15-20，水解结束后在4000-5000r条件下离心1-20min，取酶解液。
7.根据权利要求4所述的一种多肽复合抗氧化剂，其特征在于，利用DA201-C大孔树脂吸附酶解液，加入DA201-C大孔树脂的质量为酶解液中蛋白质含量的5-6倍，静态震荡吸附9-12h，用蒸馏水洗至洗液电导率与纯水相当，加入70-75％的酒精静态震荡解吸12-14h，解析完毕后，过滤取滤液，浓缩，干燥，得大豆蛋白肽或者花生蛋白肽；
所述酒精的加入体积为原酶解液体积的1-2倍。
8.根据权利要求1-7任一所述的多肽复合抗氧化剂在饮料中的应用。
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