CN103251049A - 一种抗氧化组合物及其制备方法和抗氧化食品 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种抗氧化组合物及其制备方法和抗氧化食品，所述抗氧化组合物的基础组成成分为乳清肽、茶多酚以及维生素A、C、E；其中，所述乳清肽为通过蛋白酶对质量浓度为1-5%乳清蛋白溶液的催化水解得到；每千克乳清蛋白水解液含有200至2000mg茶多酚、200至1000mg维生素C、5至20mg维生素A和5mg至40mg维生素E。通过特定工艺激活后的抗氧化活性乳清肽和茶多酚、维生素A、C、E有机结合，在抗氧化、去清除自由基，保护、恢复细胞功能的基础上，使营养物达到人体最需要部位而使机体迅速得到恢复。

Description

一种抗氧化组合物及其制备方法和抗氧化食品

技术领域

本发明涉及保健食品领域，尤其涉及一种抗氧化组合物及其制备方法和抗氧化食品。

背景技术

抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。人体在不可避免地产生自由基的同时，自身也有一套抗氧化体系，TOREN F等发现机体具有防御活性氧进攻的机制，包括抗氧化酶(如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等)和内源性抗氧化剂(如谷胱甘肽等)，可维持体内自由基处于不断产生与清除的动态平衡之中(TOREN F，NIKKI J．Holbrook Oxidants, (2000) Oxidative Stress and the Biology of Ageing．Nature, 408：239—247)。当摄入过量氧化物，机体平衡被破坏而倾向于氧化状态，导致中性粒细胞炎性浸润，蛋白酶分泌增加，产生大量氧化中间产物，造成氧化应激，氧化应激很大程度上是疾病的诱因，主要表现为氧化损伤，导致脂质、蛋白质、DNA等生物大分子的损伤，破坏机体正常的生理过程，导致心脑血管疾病、肿瘤、糖尿病慢性疾病和衰老现象的产生。研究证明，人体的抗氧化系统是一个可与免疫系统相比拟的、具有完善和复杂功能的系统，机体抗氧化的能力越强，就越健康，生命也越长。

抗氧化营养素对抗自由基的重要生理作用包括防止细胞膜中不饱和脂肪酸被氧化及帮助体内抗氧化酶的生成，从而达到强化人体组织功能、提高人体免疫力及增强新陈代谢的目的。机体在特殊的阶段如疲惫、病后恢复、环境改变等等因素条件下，通过摄入抗氧化营养素所取得的抗氧化主动防御尤其重要，如宇航员食品就包含抗氧化的成分。

抗氧化剂的强弱体现在它的被氧化的难易上，抗氧化剂抗氧化过程实际上是跟被保护物争夺自由基的过程，蛋白质成分可以通过物理及化学因素使蛋白质空间结构发生改变或由于肽键的分裂而形成多肽，激活成分中抗氧化性强的氨基酸的反应活性部位，从而激活成分的抗氧化特性。从氨基酸结构上看，易成为供氢体的氨基酸具有较好的抗氧化性，这些氨基酸是半胱氨酸（Cys）、蛋氨酸（Met）、苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）、酪氨酸（Tyr）及组氨酸（His），从乳清蛋白三维的空间结构上看，这些供氢体很难克服空间的局限而到达并俘获自由基，酶的作用就是破坏乳清蛋白的规则结构，使这些易成为供氢体的氨基酸充分暴露出来，使其易到达自由基并且捕获它，酶处理不仅激活乳清蛋白的抗氧化活性，而且水解物能更好地被人体吸收，它的优秀营养特性能为不同人群在特定的生理阶段提供有效的调养与补给，从而使机体在提高免疫力的基础上达到有机的平衡提供有力的保障。

随着抗氧化共生理论的确立，复合抗氧化剂的研究也在不断地推进。复合抗氧化剂是指将几种功能互补的抗氧化剂复配使用，与单一抗氧化剂相比，不但能增强抗氧化功能，而且对机体免疫与功能维持有更为明显的促进作用。研究发现，在抗氧化的过程中维生素C、维生素E和谷胱甘肽形成一个可通过相互作用再生和再循环的网络（Naziroglu, M.; Butterworth, P. (2005) Protective effects of moderate exercise with dietary vitamin C and E on blood antioxidative defense mechanism in rats with Streptozotocin）。以此同时，乳清蛋白肽作为一种营养性抗氧化肽，它与维生素A、C、E的相互作用可以促进营养素在肠道的吸收。在乳清抗氧化肽的作用下，机体肠道上皮细胞的更新速度显著加快，对营养物质的吸收也更为有效和充分。动物实验证明了组合物的协同作用，营养性抗氧化剂能保证动物体内维生素A和维生素E的正常含量，在此类抗氧化剂的作用下,动物体内这两种维生素含量都有相应的提高，同时也有实验表明，茶多酚作为一种高效的抗氧化剂，它跟维生素C、E有协同增效作用。

目前，国际国内市场上已经有利用优秀抗氧化剂制成健康食品或药品，但大多数是单一成分的产品或功效单一，各自有自己的局限性，而且，某些抗氧化剂本身具有轻微的毒性，长期服用会对机体产生不利影响。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种抗氧化组合物及其制备方法和抗氧化食品，旨在解决现有抗氧化保健食品存在的问题。

本发明的技术方案如下：

一种抗氧化组合物，其中，所述抗氧化组合物的基础组成成分为乳清肽、茶多酚以及维生素A、C、E；

其中，所述乳清肽为通过蛋白酶对乳清蛋白溶液的催化水解得到；

每千克乳清蛋白水解液含有200至2000mg茶多酚、200至1000mg维生素C、5至20mg维生素A和5mg至40mg维生素E。

所述的抗氧化组合物，其中，所述蛋白酶为胰蛋白酶；胰蛋白酶和乳清蛋白溶液的质量比为0.5-1.5:100。

所述的抗氧化组合物，其中，所述胰蛋白酶的活性为20至100U/mg，所述乳清蛋白溶液的质量浓度为1-5%

所述的抗氧化组合物，其中，所述水解过程为在温度36-38℃、PH值6.8-7.5中孵育2至4小时后，高温中断反应，得到含有乳清肽的乳清蛋白水解液。

一种如上所述的抗氧化组合物的制备方法，其中，包括以下步骤：

将乳清蛋白溶解于水中，制成质量浓度为1%-5%的乳清蛋白溶液；将所述乳清蛋白溶液进行膜过滤脱盐；加入蛋白酶进行水解；加热使蛋白酶钝化；降温至30-45℃；加入定量的茶多酚和维生素A、C、E。

所述的抗氧化组合物的制备方法，其中，所述蛋白酶为胰蛋白酶，活性为20至100U/mg；胰蛋白酶和乳清蛋白溶液的质量比为0.5-1.5:100。

所述的抗氧化组合物的制备方法，其中，所述水解的过程为在温度36-38℃、PH值6.8-7.5中孵育2至4小时后，高温中断反应，得到含有乳清肽的乳清蛋白水解液。

一种抗氧化食品，其中，所述抗氧化食品中包含如上所述的抗氧化组合物。

有益效果：本发明所提供的抗氧化组合物，通过特定工艺激活后的抗氧化活性肽段和茶多酚、维生素A、C、E有机结合，在抗氧化、去清除自由基，保护、恢复细胞功能的基础上，使营养物达到人体最需要部位而使机体迅速得到恢复。还在可所述抗氧化组合物的基础上，选择性地加入维生素、矿物质、果汁、茶及其他植物提取物的一种或多种原料，制成抗氧化食品。

附图说明

图1为胰蛋白酶催化反应机理示意图。

图2为胰蛋白酶分解ß-乳球蛋白的RP-HPLC图谱（条件：E/S 1：100在37℃处理2.5小时）。

具体实施方式

本发明提供一种抗氧化组合物及其制备方法和抗氧化食品，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明所提供的抗氧化组合物，其基础组成为具有抗氧化活性的乳清肽、茶多酚、维生素A、C、E组成，本发明所述抗氧化组合物中的各组分不仅起到抗氧化作用，而且含有人体中必不可少的营养素。通过特定工艺激活后的抗氧化活性肽段和茶多酚、维生素A、C、E有机结合，在抗氧化、去清除自由基，保护、恢复细胞功能的基础上，使营养物达到人体最需要部位而使机体迅速得到恢复。在配方工艺方面，针对不同人群的营养功能配方通常会应用一些脂类物质，而抗氧化组合物的抗氧化性可以很好地保护了以本抗氧化组合物为基础的配方中的其它脂类物质。

所述乳清肽是通过胰蛋白酶对乳清蛋白的催化得到，乳清蛋白的营养保健功能，富含人体需要的所有必需氨基酸，它具有纯度高、氨基酸配比恰当、易被人体消化吸收等特点。另一方面，乳清蛋白价格比较适中，使得本发明抗氧化组合物具有高性价比。同时具有抗氧化活性的乳清肽为蛋白水解物，很好地克服了蛋白质在酸性条件下的变性而产生紊状沉淀，提高了饮剂的品质。本发明为以抗氧化为基础的功能食品提供一个新的契机，这个抗氧化组合物可以为不同人群的配方制定提供有力的抗氧化及补给的保证。

具体地，所述抗氧化组合物的基础组成成分为乳清肽、茶多酚以及维生素A、C、E；

其中，所述乳清肽为通过蛋白酶对质量浓度为1-5%乳清蛋白溶液的催化水解得到；

每千克乳清蛋白水解液含有200至2000mg茶多酚、200至1000mg维生素C、5至20mg维生素A和5mg至40mg维生素E。

本发明中还提供所述抗氧化组合物的制备方法，具体包括以下步骤：

将乳清蛋白原料溶解，制成1%-5%溶液；进行膜过滤脱盐；加胰蛋白酶水解；加热使酶钝化；降温至30-45℃；加入定量的茶多酚和维生素A、C、E。

蛋白酶的选择和酶催化条件均影响到所述抗氧化组合物的抗氧化性。因此，在设计水解步骤中最为关键的因素是蛋白酶的选择和催化条件的优化，这关系到最终抗氧化组合物的特性。同时，从消化吸收的角度出发，肽段的大小应该适中，研究表明，大小在1000道尔顿左右的肽段能迅速被机体吸收并协同其它组分发挥功效。

本发明中为了取得制备所述抗氧化组合物的最佳反应条件，经过多次的实验验证，最终确定了胰蛋白酶作为分解酶，酶催化反应的条件为：酶活性为20至100U/mg的胰蛋白酶，按酶/底物（质量浓度为1%-5%的乳清蛋白液）0.5-1.5:100的配比关系，在温度36-38℃、PH值6.8-7.5中孵育2至4小时，然后反应混合物高温中断反应（70-100℃加热5分钟，高温灭活），最终得到含有乳清肽的乳清蛋白水解液。

本发明中还提供一种抗氧化食品，所述抗氧化食品是在所述抗氧化组合物选择性地加入维生素、矿物质、果汁、茶及其他植物提取物的一种或多种原料，混合溶解并利用酸液调PH值，并根据需要加入辅料如风味剂、色素后定容即可制成具备抗氧化功能的营养饮剂。

为了验证乳清蛋白胰蛋白酶分解物的抗氧化性及肽段大小，本发明中对乳清蛋白的重要组成部分--ß-乳球蛋白，结合优化催化条件对其进行胰蛋白酶分解。

ß-乳球蛋白分子具有三维空间的结构。它的一级结构由162个氨基酸组成，分子量为18.3kDa。通过结构分析的方法得知它含有10-30% α-螺旋结构，20-30% ß-箭板结构， 50-60% ß-转角结构及其他不规则结构，极性、非极性残基均匀分布，憎水基团分布在分子平面上，并通过结合或相互作用力和其它蛋白分子相互影响而固定，两个双硫桥（介于位置106和119及66和160之间）和一个硫羟基提供了稳定的空间结构。如表1所示，为ß-乳球蛋白的一级结构。

表1 ß-乳球蛋白分子氨基酸顺序表

1 L I V T Q T M K G L D I Q K V A G T W Y S L A M A A S D I S

31 L L D A Q S A P L R V Y V E E L K P T P E G D L E I L L Q K

61 W E N G E C A Q K K I I A E K T K I P A V F K I D A L N E N

91 K V L V L D T D Y K K Y L L F C M E N S A E P E Q S L A C Q

121 C L V R T P E V D D E A L E K F D K A L K A L P M H I R L S

151 F N P T Q L E E Q C H I

胰蛋白酶属于肽酶，它催化分解蛋白质或肽链中含有赖氨酸（Lys）或精氨酸（Arg）连接的肽键。如图1所示，图1中描述了胰蛋白酶活性中心跟蛋白质中精氨酸（Arg）基团结合的反应机理。

要确定肽段的抗氧化性，可以首先将ß-乳球蛋白在确定的条件下进行胰蛋白酶分解，然后通过RP-HPLC-MS进行肽段的鉴别。具体实验步骤如下：

1、缓冲液的制备：

HPLC-测试缓冲液：

原料：6M 尿素溶液；0.1M氯化钠溶液；0.1M磷酸盐溶液；0.1% CHAPS；pH=6.8；

制备过程：在微热条件下将360.36克尿素，5.84克氯化钠，17.8克脱水磷酸二钠和1.00克CHAPS加于800ml双蒸馏水中并轻摇至溶解，用浓盐酸将溶液PH值调整至6.8，然后将溶液转加至1000ml容量瓶中并加蒸馏水至刻度线。溶液经醋酸纤维素滤纸（1.2μm）过滤。

ß-乳球蛋白缓冲液：

原料：6M 尿素溶液；0.1M 氯化钠溶液；0.1M 磷酸盐溶液； 1% DTT ；0.1% CHAPS；pH=6.8；

制备过程：样品缓冲液要新鲜制备。需要时将1克DTT加入至100ml HPLC测试缓冲液中。

孵育缓冲液：

原料：0.2M 三醋酸缓冲液；PH =7.5；

制备过程：将2.42克三（羟基甲基）-氨基甲烷加入至约80ml双蒸馏水中溶解，用醋酸调PH值至7.5，加双蒸馏水定容至100ml。

胰蛋白酶溶液：

将1mg酶活性为12.5U的胰蛋白酶（Sigma-Aldrich, USA ）加入到6ml孵育缓冲液中。

2、胰蛋白酶分解：

胰蛋白酶按酶/底物1:100的配比关系反应，就是往1ml浓度为0.1%的蛋白溶液加入10μl胰蛋白酶溶液。反应混合物在37℃的干燥箱中孵育2.5小时，之后放置于85℃的水浴箱5分钟中断反应，反应物通过醋酸纤维素滤纸（0.45μm）过滤，滤液可进行HPLC-MS检测。

3、HPLC-MS检测：

仪器系统与参数：固定相：Zorbax 300 Extend-C18; 2.1×150mm; 3.5 Micron；固定相温度 : 45℃；样品浓度 : 0.1%蛋白质溶液；注入量: 100μl；流动速度: 0.25ml/min；检测器: UV/Vis: λ = 220nm和λ = 280nm；质谱分析仪（MS）：测量范围 100-3500Da。

洗脱缓冲液A：

原料：10mM 醋酸铵缓冲液，PH 5.5；

制备过程：将0.77克醋酸铵溶于800ml双蒸馏水中，用3%醋酸溶液将PH值调至5.5并用双蒸馏水定容至1000ml，溶液用醋酸纤维素滤纸（0.45μm）过滤并除气。

洗脱缓冲液B：

原料：84%乙腈，10mM醋酸铵溶液；

制备过程：将160ml洗脱液A加入至840ml乙腈中，溶液用亲水聚丙烷滤纸（0.45μm）过滤并除气。

HPLC-MS检测的样品准备：

HPLC-MS检测需要0.1%的蛋白质分解物溶液。胰蛋白酶分解物过滤后加入0.1% DTT放置于冰箱中24小时以便反应充分进行，反应物过滤后可进行HPLC-MS检测。

梯度分离程序：如表2所示。

表2： 胰蛋白酶分解物的HPLC梯度分离程序

4、验证结果：胰蛋白酶属于肽酶，它催化分解含有赖氨酸（Lys）或精氨酸（Arg）连接的肽键。胰蛋白酶消化可以破坏乳清蛋白的三维空间结构，理论上可以得到17个肽段和2个氨基酸（见表3），通过质谱数据分析（见图2），所得到的大部分肽段的分子量在500-3000Da之间。经分析测定，确定具有抗氧化活性的肽段分别为：

肽段 1-8：L I V T Q T M K

肽段 15-40：V A G T W Y S L A M A A S D I S L L D A Q S A P L

肽段 61-69：W E N G E C A Q

肽段 92-100：V L V L D T D Y

肽段 102-124：Y L L F C M E N S A E P E Q S L A C Q C L V

肽段 149-162：A L P M H I R L S F N P T Q L E E Q C H I

这些肽段抗氧化性的确定为胰蛋白酶分解乳清蛋白其它成分激活组分的抗氧化能力提供了重要的依据。

表3： 胰蛋白酶催化分解ß-乳球蛋白质谱分析数据

确定所述抗氧化组合物的抗氧化性，其过程如下所述。

实验组分制备：

组合物一

将乳清蛋白原料溶解，制成1%溶液，进行膜过滤脱盐，配制20U/ml的胰蛋白酶催化液，将酶活性为20U的胰蛋白酶按酶/乳清蛋白1:100的配比关系加入溶液中，在37℃和PH7.0中孵育2.5小时，然后反应混合物高温中断反应，分解物冷却到40℃。

组合物二

在100ml的水中加入20mg的茶多酚，10mg的维生素C，摇均，然后加入0.5mg维生素A和1mg维生素E。

组合物三

将乳清蛋白原料溶解，制成1%溶液，进行膜过滤脱盐，配制20U/ml的胰蛋白酶催化液，将酶活性为20U的胰蛋白酶按酶/乳清蛋白1:100的配比关系加入溶液中，在37℃和PH7.0中孵育2.5小时，然后反应混合物高温中断反应，分解物冷却到40℃；按每100g的分解物溶液中加入20mg的茶多酚、10mg的维生素C，摇均，然后加入0.5mg维生素A和1mg维生素E。

选用体重为450±30的SD大鼠40只，分成4组，每组10只，自由摄食和饮水，试用组分别经胃管灌服各组合物（每日一次，清晨灌服），剂量为10ml/kg体重，对照组灌服等体积水。连续灌服和饲养30天。第31天，4组动物摘眼球取血，离心，取血清，测定如下生化指标：血中过氧化脂降解产物丙二醛（MDA）含量，血中超氧化物歧化酶（SOD）活力及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）。具体结果见表4、5、6。

表4：样品对动物体重的影响

组别	动物数(只）	初始体重(g)	中期体重(g)	终期体重(g)
					组合物一	10	458±17	491±11	531±13
组合物二	10	465±12	495±12	534±12
					组合物三	10	460±11	494±14	530±14
空白对照	10	467±15	497±8	536±10

表4的结果表明，与空白对照组相比，各配方组无显著性差异（P<0.05）。

表5：血中过氧化脂降解物丙二醛（MDA）含量

组别	动物数	MDA含量（nmol/ml）
			组合物一	10	1.79±0.13
组合物二	10	1.80±0.16
			组合物三	10	1.75±0.17
空白对照	10	2.58±0.13

MDA（malondiadehycle）是细胞膜脂质过氧化的终产物之一，测其含量可间接估计脂质过氧化的程度。表5的结果表明，，与空白对照组相比，各组分有显著性差异（P<0.05）。

表6：血中超氧化物歧化酶（SOD）活力及谷胱甘肽过氧化物酶含量

组别	动物数	超氧化物歧化酶活力（μ/ml)	谷胱甘肽过氧化物酶（nmol/ml）
				组合物一	10	123.2±12.1	108.5±6.5
组合物二	10	135.7±13.7	115.7±6.3
				组合物三	10	145.5±11.4	117.8±5.8
空白对照	10	110.3±10.6	88.5±6.2

SOD催化超氧阴离子自由基（O₂·^－）生成H₂O₂，再由其它抗氧化酶如谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）和过氧化氢酶作用生成水，这样可以清除O₂·^－对细胞的毒害作用。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是体内存在的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的系统。对防止体内自由基引起膜脂质过氧化特别重要。

SOD、GSH-Px在动物某些器官和人体血红细胞中的含量均有明显的增龄变化，酶活性与生物年龄的增长成反比。消除自由基的能力与酶活性成正比。

表6的结果表明，各组分与空白对照组相比，差别有显著性意义（P<0.05），同时可以看出，组合物三的效果明显，即复合各组分有增效作用。

通过胰蛋白酶对乳清蛋白的催化，所得分解物的热稳定性、水溶性得到了很大提高，而这些特性对成品的工艺加工起到很大促进作用；胰蛋白酶分解物使得组分更好地被机体消化吸收，它可以更迅速地配合其它组分发挥其功效，分解物在营养学上对特定阶段的机体起到很好的调节作用；部分乳清蛋白分子空间结构发生改变，实验证明含有高阶抗氧化特性的氨基酸在肽段中的抗氧化能力被激发出来，混合物中的抗氧化肽和茶多酚、维生素A、C、E抗氧化组合定量配比，起到协同增效的作用，使乳清蛋白营养成分得到优化配合，组合物可进一步应用于针对不同人群在不同阶段的功能营养组合配方中。

以下通过实施例对本发明做进一步说明，但不限制本发明的应用范围。

实施例1

将乳清蛋白原料溶解，制成1%溶液，进行膜过滤脱盐，配制20U/ml的胰蛋白酶催化液，将酶活性为20U的胰蛋白酶按酶/乳清蛋白0.5:100的配比关系加入溶液中，在36℃和PH7.0中孵育2.5小时，然后反应混合物高温中断反应，分解物冷却到40℃；按每1000g的分解物加入300mg的茶多酚、500mg的维生素C，摇均，然后加入10mg维生素A和20mg维生素E即可制成所述抗氧化组合。选择性地往组合物加入维生素、矿物质、果汁、茶及其他植物提取物的一种或多种原料，混合溶解并利用酸液调PH值，并根据需要加入辅料如风味剂、色素后定容即可制成具备抗氧化功能的营养饮剂。

实施例2

将乳清蛋白原料溶解，制成5%溶液，进行膜过滤脱盐，配制100U/ml的胰蛋白酶催化液，将酶活性为100U的胰蛋白酶按酶/乳清蛋白1.5:100的配比关系加入溶液中，在38℃和PH7.0中孵育3.5小时，然后反应混合物高温中断反应，分解物冷却到40℃，按每1000g的分解物加入300mg的茶多酚、600mg的维生素C，摇均，然后加入15mg维生素A和40mg维生素E即可制成所述抗氧化组合。选择性地往组合物加入维生素、矿物质、果汁、茶及其他植物提取物的一种或多种原料，混合溶解并利用酸液调PH值，并根据需要加入辅料如风味剂、色素后定容即可制成具备抗氧化功能的营养饮剂。

应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (8)

1.一种抗氧化组合物，其特征在于，所述抗氧化组合物的基础组成成分为乳清肽、茶多酚以及维生素A、C、E；

其中，所述乳清肽为通过蛋白酶对乳清蛋白溶液的催化水解得到；

每千克乳清蛋白水解液含有200至2000mg茶多酚、200至1000mg维生素C、5至20mg维生素A和5mg至40mg维生素E。

2.根据权利要求1所述的抗氧化组合物，其特征在于，所述蛋白酶为胰蛋白酶；胰蛋白酶和乳清蛋白溶液的质量比为0.5-1.5:100。

3.根据权利要求2所述的抗氧化组合物，其特征在于，所述胰蛋白酶的活性为20至100U/mg，所述乳清蛋白溶液的质量浓度为1-5%。

4.根据权利要求1所述的抗氧化组合物，其特征在于，所述水解过程为在温度36-38℃、PH值6.8-7.5中孵育2至4小时后，高温中断反应，得到含有乳清肽的乳清蛋白水解液。

5.一种如权利要求1所述的抗氧化组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将乳清蛋白溶解于水中，制成乳清蛋白溶液；将所述乳清蛋白溶液进行膜过滤脱盐；加入蛋白酶进行水解；加热使蛋白酶钝化；降温至30-45℃；加入定量的茶多酚和维生素A、C、E。

6.根据权利要求5所述的抗氧化组合物的制备方法，其特征在于，所述乳清蛋白溶液的质量浓度为1-5%；所述蛋白酶为胰蛋白酶，活性为20至100U/mg；胰蛋白酶和乳清蛋白溶液的质量比为0.5-1.5:100。

7.根据权利要求5所述的抗氧化组合物的制备方法，其特征在于，所述水解的过程为在温度36-38℃、PH值6.8-7.5中孵育2至4小时后，高温中断反应，得到含有乳清肽的乳清蛋白水解液。

8.一种抗氧化食品，其特征在于，所述抗氧化食品中包含如权利要求1~4所述的抗氧化组合物。

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