CN106573951A - 微小皂苷类似物、合成及其用途 - Google Patents

Abstract

公开的是含有三糖酯或四糖酯的截短型三萜皂苷类似物。还公开的是包含截短型皂苷类似物的药物组合物和制备所述截短型皂苷类似物的合成方法。本申请的另一方面涉及使受试者免疫的方法，其包含向所述受试者施用含有微小皂苷类似物和抗原的药物组合物。

Description

微小皂苷类似物、合成及其用途

在先申请的交叉引用

本申请要求于2014年5月30日提交的美国临时申请第62/005,302号的优先权。

技术领域

本公开总体上涉及三萜糖苷皂苷衍生佐剂，其合成及其中间体。本发明还提供了包含本发明化合物的药物组合物以及在传染病和癌症的治疗中使用该化合物或组合物的方法。

背景技术

抗癌疫苗和抗微生物疫苗的临床成功关键取决于具有减毒毒性的新型有效佐剂的鉴定和获取。由亚单位抗原组成的分子疫苗常常比整个病原体的免疫原性少，并且不单独诱发充分的免疫应答，需要包含免疫佐剂来增加免疫原性。遗憾地，很少有佐剂在临床使用时是足够有效并无毒的。关于这点，已经证实来自皂树(Quillaja saponaria(QS))树皮提取物的特定级分在免疫疗法中是极其有效的佐剂。QS-21，来自皂树的皂苷天然产物，是目前正在研究的最有前途的佐剂之一(图1a)。它由在直链四糖结构域中的末端糖不同的两个异构组分QS-21-芹菜糖(1a)和QS-21-木糖(1b)组成。QS-21已经在近来许多的临床试验中作为选择的免疫增强剂出现，并且正在开发含有QS-21的疫苗用于一些癌症以及传染病和神经变性疾病(疟疾、HIV、肝炎、肺结核、阿尔茨海默氏病)。虽然其很有前景，QS-21也有一些缺点，包括其天然来源的有限获取、毒副作用和由于酰基链的自发水解造成的化学不稳定性。此外，对其分子作用机制的理解不足阻碍了具有改善效力和减小毒性的类似物的合理开发。

发明内容

本申请的一个方面涉及具有式(I)的结构的微小皂苷类似物，

或其药学上可接受的盐，其中，是单键或双键；W是C(O)R、CH₂OR或CH₂R，其中，R是H，或任选被取代的选自酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族基、杂脂族基、脂环族基和杂环基的基团；V是H或OH；Y是O；Z是线性低聚糖或任选被取代的选自胺基、酰胺基、酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族基、杂脂族基、脂环族基和杂环基的基团。

本申请的另一个方面涉及具有式(II)的结构的微小皂苷类似物，

或其药学上可接受的盐，其中，W是C(O)R、CH₂OR或CH₂R；其中，R是H，或任选被取代的选自酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族基、杂脂族基、脂环族基和杂环基的基团；V是H或OH，X是CH₂R_m、C(O)R_m、CH₂OR_m、CH₂R_m、OR_m或NHR_m，其中，R_m是H，或任选被取代的选自酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族基、杂脂族基、脂环族基和杂环基的基团，并且每次出现的Rn独立地是氢、单糖、二糖或三糖。

本申请的另一个方面涉及一种药物组合物，其包含本申请的微小皂苷类似物或其药学上可接受的盐；以及免疫学上有效量的抗原。

本申请的另一个方面涉及一种用于使受试者免疫的方法，其包含向所述受试者施用包含微小皂苷类似物和抗原的药物组合物。

本申请的另一个方面涉及一种用抗原使受试者免疫的方法，其包含：向所述受试者施用疫苗，所述疫苗包含：有效量的抗原；和有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方式中，口服施用所述疫苗。在另一些实施方式中，肌内施用所述疫苗。在其他实施方式中，皮下施用所述疫苗。在某些实施方式中，施用的式(I)的化合物的量是10-1000μg、500-1000μg、100-500μg、50-250μg、50-500μg或250-500μg。

本申请的另一个方面涉及一种药物组合物，其包含本申请的微小皂苷类似物或其药学上可接受的盐和有效量的细胞毒性药物。

本申请的另一个方面涉及一种用于在受试者中增强细胞毒性药物的作用的方法，其包含向所述受试者施用包含本申请的微小皂苷类似物和细胞毒性药物的药物组合物。

本申请的另一个方面涉及一种用于在受试者中增强细胞毒性药物的作用的方法，其包含：向所述受试者施用一种药物组合物，所述药物组合物包含所述细胞毒性药物；和有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

本申请的另一个方面涉及一种试剂盒，其包含本申请所述的微小皂苷类似物。在一些实施方式中，所述试剂盒包含处方信息。在一些实施方式中，该试剂盒包含发明的佐剂化合物和另一种免疫治疗药剂的组合。所述药剂可以单独包装或一同包装。所述试剂盒任选地包含用于开处方药物的说明。在某些实施方式中，所述试剂盒包含各个药剂的多种剂量。所述试剂盒可包含足够量的各个成分以治疗受试者一周、两周、三周、四周或数月。在某些实施方式中，所述试剂盒包含免疫疗法的一个周期。在某些实施方式中，所述试剂盒包含足够量的药物组合物以长期免疫受试者对抗抗原。

本申请的另一个方面涉及一种式(III)的化合物，

其中，W是Me、-CHO或-CH₂OH，并且V是H或OH。

本申请的另一个方面涉及一种制备式(III)的化合物的方法。

附图说明了本公开的一种或多种实施方式并与文字描述一同用于解释本公开的示例性实施方式的原理。

附图说明

附图说明了本公开的一种或多种实施方式并与文字描述一同用于解释本公开的示例性实施方式的原理。

图1说明了芳基碘化皂苷6在临床前小鼠接种模型中显示出有效的佐剂活性和低毒性。(图1a)QS-21的结构及其四个关键的结构域。(图1b)芳基碘化皂苷6(SQS-0-0-5-18)和[¹³¹I]-6的合成：(i)FITC,Et₃N,DMF,21℃,2h,75％；(ii)4,Et₃N,DMF,21℃,1h,52％；(iii)5,Et₃N,DMF,21℃,1h,75％；(iv)[¹³¹I]-NaI,氯胺-T,MeOH,21℃,1min,>50％。(图1c)佐剂-减毒的阴性对照皂苷8(SQS-0-3-7-18)的结构和[¹³¹I]8的合成：(v)[¹³¹I]-NaI,氯胺-T,MeOH,21℃,1min,>50％。对于(图1d)抗-KLH效价(IgG)、(图1e)抗-MUC1效价(IgG)和(图1f)抗-OVA效价(IgG)的具有三组分疫苗的芳基碘化皂苷6(SQS-0-0-5-18)的生物学评价，表明与天然和合成QS-21类似的有效的佐剂活性(比较20g的剂量)；水平线表示平均效价；与无佐剂对照相比的统计学显著性：*＝p≤0.05,**＝p<0.01,***＝p<0.001。(图g)基于平均百分比重量损失的毒性评估，表明6(SQS-0-0-5-18)的低毒性；误差线指示对于五只小鼠的最大和最小值。

图2说明了各种放射性碘化皂苷[¹³¹I]-6和荧光皂苷3集中于小鼠的淋巴结和注射部位。(图2a)带有OVA抗原的活性佐剂[¹³¹I]-6([¹³¹I]-SQS-0-0-5-18)和减毒佐剂[¹³¹I]-8([¹³¹I]-SQS-0-3-7-18)在注射部位和淋巴结处的生物分布，指示[¹³¹I]6而非[¹³¹I]-8的积累；误差线指示对于五只小鼠的平均值的标准差；为了清楚，仅通过图表为淋巴结和注射部位显示统计学显著性：*＝p≤0.05:肝脏、肌肉、淋巴结、皮肤、甲状腺；**＝p<0.01:血液、肺、脾、肾脏、骨骼、注射部位；***＝p<0.001:心脏。(图2b)用荧光黄标记的活性佐剂3(SQS-0-0-5-12)或未标记的非活性佐剂2(SQS-0-0-5-11)和Alexa-647-标记的OVA(OVA-A647)在注射部位(黄色箭头表示墨水圈)成像，表明3和OVA-A647在注射部位的保留；对于小鼠2在荧光黄图像中的绿色新月形是由于软件迭影效应造成的。(图2c)使用活性佐剂3(SQS-0-0-5-12)或非活性佐剂2(SQS-0-0-5-11)和OVA-A647的解剖淋巴结的成像，表明OVA-A647和3而非2的积累增加。在每只动物中，小鼠在左胁腹部位上注射并且右淋巴结作为阴性对照。

图3说明了截短型皂苷16缺乏QS-21的整个支链三糖结构域，但在临床前小鼠接种模型中保持了有效的佐剂活性和低毒性。(图3a)芳基碘化皂苷16(SQS-1-0-5-18)和[¹³¹I]^-16的合成。(i)TESOTf,2,6-卢剔啶,CH₂Cl₂,0℃,1h,80％；(ii)1.12,BF₃·OEt₂,M.S.,CH₂Cl₂,-35℃,30min；2.PhSeH,Et₃N,38℃,8h,58％(2步)；(iii)1.HO₂C(CH₂)₅NHBoc(14),EtOCOCl,Et₃N,THF,0℃,2.5h,(酸预活化),然后加到13中,0℃,1.5h；2.H₂(50psi),Pd/C(德固赛(Degussa)),THF/EtOH(1:1),21℃,24h；3.TFA/H₂O(4:1),0℃,2h,65％(3步)；(iv)4,Et₃N,DMF,21℃,2h,67％；(v)5,Et₃N,DMF,21℃,1.5h,75％；(vi)[¹³¹I]-NaI,氯胺-T,MeOH,21℃,1min,55％。对(图3b)抗-KLH(IgG)、(图3c)抗MUC1(IgG)和(图3d)抗-OVA(IgG)效价的使用三组分疫苗的截短型皂苷16的生物学评价，表明有效的佐剂活性；水平线指示平均效价；与无佐剂对照相比的统计学显著性：*＝p≤0.05,**＝p<0.01,***＝p<0.001。(图3e)基于平均百分比重量损失的毒性评估，表明16(SQS-1-0-5-18)的低毒性；误差线指示对于五只小鼠的最大和最小值。

图4说明了在QS-21的三萜结构域中同时缺乏C4-醛取代基和C16-醇的齐墩果酸衍生物18在临床前小鼠接种模型中显示出不好的佐剂活性。对(图4a)抗-KLH效价(IgG)、(图4b)抗MUC1效价(IgG)和(图4c)抗-OVA效价(IgG)的使用三组分疫苗的齐墩果酸衍生物18(SQS-1-7-5-18)的生物学评价，表明减毒佐剂活性；水平线指示平均效价；与无佐剂对照相比的统计学显著性：*＝p≤0.05,**＝p<0.01,***＝p<0.001。(图4d)基于平均百分比重量的毒性评估，表明18(SQS-1-7-5-18)的低毒性；误差线指示对于五只小鼠的最大和最小值。

图5说明了在QS-21的三萜结构域中缺乏C4-醛取代基但保留了C16-醇的葳严仙皂苷元(caulophyllogenin)衍生物19和刺囊酸(echinocystic acid)衍生物20在临床前小鼠接种模型中显示出有效的佐剂活性并且无毒性。(图5a)在QS-21的三萜结构域的C4-醛取代基和C16-醇处具有修饰的皂苷佐剂19-22的结构。图5a中的结构显示为具有6-(4-碘苯甲酰基氨基)-己酰基作为酰基链。对(图5b)抗-KLH(IgG)、(图5c)抗MUC1(IgG)、(图5d)抗-OVA(IgG)、(图5e)抗-GD3(IgM)和(图5f)抗-GD3(IgG)效价的使用四组分疫苗(MUC1-KLH,OVA,GD3KLH)的三萜变体19-22的生物学评价，表明C16-醇的去除减弱了活性(21,22)，而佐剂活性不需要C4-醛取代基(19,20)；水平线指示平均效价；与无佐剂对照相比的统计学显著性：*＝p≤0.05,**＝p<0.01,***＝p<0.001。(图5g)基于平均百分比重量损失的毒性评估，表明19-22缺乏毒性；误差线指示对于五只小鼠的最大和最小值。

图6说明了佐剂激活的皂皮酸衍生物16集中于小鼠的注射部位和淋巴结，而佐剂减毒的齐墩果酸衍生物18没有集中于小鼠的注射部位和淋巴结。在24h注射后在20μg的OVA的存在下，活性佐剂[¹³¹I]^-16([¹³¹I]-SQS-1-0-5-18)和减毒佐剂[¹³¹I]^-18([¹³¹I]-SQS-1-7-5-18)的小鼠的体内生物分布；误差线指示对于五只小鼠的平均值的标准差；为了清楚，仅通过图表为淋巴结和注射部位显示统计学显著性：*＝p≤0.05:淋巴结、注射部位、皮肤；**＝p<0.01:肺、脾、胃、肌肉、骨骼；***＝p<0.001:血液、心脏。

图7说明了缺乏直链四糖结构域的芳基碘化皂苷8在临床前小鼠接种模型中显示出不好的佐剂活性。(a)阴性对照皂苷8(SQS-0-3-7-18)的合成：(i)SOCl₂,吡啶,CH₂Cl₂/DMF,21℃,2h,91％；(ii)1.H₂(50psi),Pd/C(德固赛),THF/EtOH(1:1),21℃,24h；2.TFA/H₂O(4:1),0℃,3.3h,RP-HPLC,50％(2步)；(iii)4,Et₃N,DMF,21℃,3h,RP-HPLC,68％；(iv)5,Et₃N,DMF,21℃,2.5h,RP-HPLC,53％。(b)使用OVA抗原的芳基碘化皂苷8的生物学评价。根据在此讨论的一般方法使用OVA(20μg)接种小鼠。平均效价表示为红色水平线。与SQS21相比的统计学显著性使用具有CI＝95％的双尾非配对学生t检验(two-tailed unpairedStudent's t-test)进行评估：*＝0.01≤p≤0.05(显著)。

图8说明了放射性碘化皂苷[¹³¹I]-6集中于并保留在小鼠的淋巴结和注射部位处。在施用后24、72和96h使用OVA抗原的(a)活性放射性碘化皂苷[¹³¹I]-6和(b)非活性放射性皂苷[¹³¹I]-8的长期生物分布。横跨全部三个时间点，使用[¹³¹I]-6在淋巴结中和注射部位处回收了显著更高的放射性，同时，最初观察到大倍数差异的其他器官(肌肉、骨骼、皮肤)的放射性在较晚的时间点快速减小；由于标记物的脱碘作用，对于所有放射性碘标记物通常都观察到在较晚的时间点从甲状腺的回收的增加。使用CI＝95％的双尾非配对学生t检验评估在各个时间点的各个器官中[¹³¹I]-6相对于[¹³¹I]-8的统计学显著性。在24h时:*＝0.01≤p≤0.05(显著):肝脏、肌肉、淋巴结、皮肤、甲状腺；**＝0.001<p<0.01(非常显著):血液、肺、脾、肾脏、骨骼、注射部位；***＝p<0.001(极其显著):心脏。在72h时:*＝0.01≤p≤0.05(显著):脾、胸腺、淋巴结、皮肤、骨骼；**＝0.001<p<0.01(非常显著):心脏、肺、肝脏、肾脏、卵巢、甲状腺；***＝p<0.001(极其显著):血液、注射部位。在96h时:*＝0.01≤p≤0.05(显著):骨骼、卵巢、胸腺、皮肤、甲状腺；**＝0.001<p<0.01(非常显著):肺、脾、胃、肾脏、淋巴结、注射部位；***＝p<0.001(极其显著):血液、心脏、肝脏。

图9说明了放射性碘化皂苷[¹³¹I]-6和[¹³¹I]-8的生物分布不因OVA抗原的缺乏而被扰乱。(a)活性佐剂[¹³¹I]-6([¹³¹I]-SQS-0-0-5-18)和(b)减毒佐剂[¹³¹I]-8([¹³¹I]-SQS-0-3-7-18)的生物分布。比较在(c)淋巴结中和(d)在注射部位处回收的放射性，其中，横跨全部三个时间点，用[¹³¹I]-6回收了显著更高的放射性，同时，在最初观察到大倍数差异的其他器官(肌肉，骨骼，皮肤)中的放射性在较晚的时间点减小。使用CI＝95％的双尾非配对学生t检验评估在各个时间点的各个器官中[¹³¹I]-6相对于[¹³¹I]-8的统计学显著性，为了清楚，在(a)和(b)部分未通过图表显示。在24h时:*＝0.01≤p≤0.05(显著):肌肉、骨骼、卵巢、注射部位、皮肤；**＝0.001<p<0.01(非常显著):肺、肝脏、脾、肾脏、胸腺；***＝p<0.001(极其显著):血液、心脏。在72h时:*＝0.01≤p≤0.05(显著):脾、胸腺、淋巴结、注射部位；**＝0.001<p<0.01(非常显著):血液、肺、肝脏、肌肉、骨骼、甲状腺；***＝p<0.001(极其显著):心脏、肾脏、卵巢、皮肤。在96h时:*＝0.01≤p≤0.05(显著):心脏、肺、肝脏、脾、肾脏、胸腺、淋巴结、皮肤；**＝0.001<p<0.01(非常显著):血液、注射部位。

图10说明了放射性碘标记卵白蛋白([¹³¹I]-OVA)的生物分布表明快速脱碘作用。在(a)存在(20μg)和(b)缺乏活性佐剂6(SQS-0-0-5-18)的情况下下在施用后24、72和96h时的生物分布。使用CI＝95％的双尾非配对学生t检验评估在各个时间点的各个器官中使用6的接种疫苗相对于不使用6的接种疫苗的统计学显著性，为了清楚，未通过图表显示。在24h时:*＝0.01≤p≤0.05(显著):心脏、皮肤；**＝0.001<p<0.01(非常显著):胸腺。在72h时:*＝0.01≤p≤0.05(显著):胃、淋巴结、皮肤。在96h时:*＝0.01≤p≤0.05(显著):血液、肺、胃、肾脏、骨骼；**＝0.001<p<0.01(非常显著):脾、卵巢、胸腺。

图11说明了荧光黄标记的活性佐剂3被保留在注射部位处。带有荧光皂苷3(SQS-0-0-5-12)和含有胺的非活性佐剂2(SQS-0-0-5-11)进行整个小鼠成像以在此用于与图2b比较。

图12说明了衍生自齐墩果酸18([SQS-1-7-5-18])和S9的芳基碘化物和芳基锡变体的合成。(i)1.TESOTf,2,6-卢剔啶,CH₂Cl₂,0℃,1h；2.12,BF₃·OEt₂,M.S.,CH₂Cl₂,-50℃,20min,21℃,2min[两个温度周期],54％(2步)；(ii)1.PhSeH,Et₃N,38℃,8h；2.HO₂C(CH₂)₅NHBoc(14),EtOCOCl,Et₃N,THF,0℃,2.5h,[酸预活化],然后,0℃,1.5h,77％(2步)；(iii)1.H₂(50psi),Pd/C(德固赛),THF/EtOH(1:1),21℃,24h；2.TFA/H2O(4:1),0℃,2h,RP-HPLC,44％(2步)；(iv)4,Et₃N,DMF,21℃,2h,RP-HPLC；63％；(v)5,Et₃N,DMF,21℃,1.5h,RP-HPLC,63％；(vi)[¹³¹I]-NaI,氯胺-T,MeOH,21℃,1min,RP-HPLC,55％。

图13说明了芳基碘化皂苷佐剂19(SQS-1-11-5-18)的合成。(i)NaBH₄,MeOH,21℃,3h,>99％；(ii)1.H₂(1atm),Pd/C(德固赛),EtOH/THF(1:1),21℃,12h；2.TFA/H₂O(3:1),0℃,1.25h,RP-HPLC,70％(2步)；(iii)4,Et₃N,DMF,21℃,3h,RP-HPLC,65％。

图14说明了受保护的三萜结构单元的合成。(i)TESOTf,2,6-卢剔啶,CH₂Cl₂,0℃,1h；S14:94％；S17:65％；S18:81％；(ii)2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基(TEMPO),N-氯代琥珀酰亚胺(NCS),水合氯化四丁铵(TBACl·H₂O),CH₂Cl₂/NaHCO₃ 0.5M/K₂CO₃ 0.05M,21℃,2h,72％。

图15说明了缺乏支链三糖结构域的另外的芳基碘化物变体20(SQS-1-8-5-18)、21(SQS-1-9-5-18)和22(SQS-1-10-5-18)合成。(i)S14或S17或S18,BF₃·OEt₂,M.S.,CH₂Cl₂,-35℃,30min；S19:80％；S20:70％；S21:71％；(ii)1.PhSeH,Et₃N,38℃,8h；2.HO₂C(CH₂)₅NHBoc(14),EtOCOCl,Et₃N,THF,0℃,2.5h,[酸预活化],然后,0℃,1.5h；S22:73％(2步)；S23:62％(2步)；S24:74％；(iii)1.H₂(1atm),Pd/C(德固赛),THF/EtOH(1:1),21℃,12h；2.TFA/H₂O(3:1),0℃,1.25h,RP-HPLC,S25:53％(2步)；S26:82％(2步)；S27:66％；(iv)4,Et₃N,DMF,21℃,3h,RP-HPLC；20:80％；21:56％；22:57％。

图16说明了用于在临床前小鼠疫苗模型中评价三萜变体19–22的完整数据。对(a)抗-KLH(IgG)、(b)抗MUC1(IgG)、(c)抗-OVA(IgG)、(d)抗-GD3(IgM)和(e)抗-GD3(IgG)效价使用四组分疫苗(MUC1-KLH、OVA、GD3、KLH)在20μg和50μg剂量下对19(SQS-1-11-5-18)、20(SQS-1-8-5-18)、21(SQS-1-9-5-18)和22(SQS-1-10-5-18)进行生物评价。平均效价值表示为红色水平线。与非佐剂对照比较并使用CI＝99％的双尾非配对学生t检验评估统计学显著性:*＝0.01≤p≤0.05(显著),**＝0.001<p<0.01(非常显著),***＝p<0.001(极其显著)。(e)在首次疫苗注射后一周基于平均百分比重量损失进行19–22的毒性评估。

具体实施方式

提供以下详细描述以使本领域中的任一技术人员能够使用本发明的方法和试剂盒。为了解释的目的，阐述了具体的命名来提供本发明的方法和试剂盒的彻底理解。然而，对本领域的技术人员来说显而易见的是，不需要这些具体细节来实践所述方法和试剂盒的使用。具体应用的描述仅作为代表性的实施例提供。不意欲将本发明的方法和试剂盒局限于显示的实施方式，而是与在此公开的原理和特征相符的最广的可能范围一致。

在此使用的标题仅用于组织的目的，而不意图用于限制说明书或权利要求的范围。遍及本申请中使用的词语“可”用于容许目的(即，指具有可能性)而非强制目的(即，指必须)。在此的术语“一”和“一个”不为数量的限制，而为存在至少一个指代项。

定义

除非另外指示，将应用以下定义在本文中使用。

如在此使用的术语“脂族的”或“脂族基团”指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元的直链的(即，无支链的)或支链的，取代或未取代的烃链，或完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不是芳族的单环烃或双环烃(在此也称为“碳环”，“脂环族”或“环烷基”)，其与分子的其余部分具有连接的单一点。除非另外规定，脂族基团含有1-12个脂族碳原子。在一些实施方式中，脂族基团含有1-6个脂族碳原子。在一些实施方式中，脂族基团含有1-5个脂族碳原子。在另一些实施方式中，脂族基团含有1-4个脂族碳原子。在又一些实施方式中，脂族基团含有1-3个脂族碳原子，并且在再一些实施方式中，脂族基团含有1-2个脂族碳原子。在一些实施方案中，“脂环族”(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不是芳族的单环C₃-C₆烃，其与分子的其余部分具有连接的单一点。适合的脂族基团包括，但不局限于直链或支链的，取代或未取代的烷基、烯基、炔基及其混成物，如(环烷基)烷基，(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。

术语“低级烷基”指C_1-4直链或支链烷基。示例性的低级烷基是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。

术语“低级卤代烷基”指被一个或多个卤素原子取代的C_1-4直链或支链烷基。

术语“杂原子”指氧、硫、氮、磷或硅中的一种或多种(包括氮、硫、磷或硅的任意氧化形式；任意碱性氮的季铵化形式；或杂环的可取代的氮，例如N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)，NH(如在吡咯烷基中)或NR⁺(如在N-取代的吡咯烷基中))。

在此使用的术语“不饱和”指具有一个或多个不饱和单元的部分。

如在此使用的，术语“二价C_1-12(或C_1-26、C_1-16、C_1-8)或者饱和或不饱和的，直链或支链烃链”指如在此定义的直链或支链二价亚烷基、亚烯基和亚炔基链。

术语“亚烷基”指二价烷基。“亚烷基链”是聚亚甲基，即，–(CH₂)_n–，其中，n是正整数，优选1至6、1至4、1至3、1至2或2至3。取代的亚烷基链是一个或多个亚甲基氢原子被取代基取代的聚亚甲基。适合的取代基包括以下描述用于取代的脂族基团的那些。

术语“亚烯基”指二价烯基。取代的亚烯基链是含有至少一个双键的聚亚甲基，其中，一个或多个氢原子被取代基取代。适合的取代基包括以下所述用于取代的脂族基团的那些。

术语“亚炔基”指二价炔基。取代的亚炔基链是一个或多个氢原子被取代基取代的含有至少一个双键的聚亚甲基。适合的取代基包括以下描述用于取代的脂族基团的那些。

单独使用或作为更大基团的一部分使用的术语“酰基”指通过从羧酸除去羟基形成的基团。

术语“卤素”指F、Cl、Br或I。

将术语“芳烷基”和“芳基烷基”互换使用，并且指其中氢原子已经被芳基取代的烷基。该基团包括但不限于，苯甲基、肉桂基和二氢化肉桂基。

单独使用或作为更大基团如“芳烷基”，“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”的一部分使用的术语“芳基”指具有总共5至14个环成员的单环或双环系统，其中，在该系统中的至少一个环是芳族的，并且其中，在该系统中的每个环含有3至7个环成员。术语“芳基”可与术语“芳环”互换使用。

在本发明的某些实施方式中，“芳基”是指芳族环系统，其包括但不限于苯基、联苯基、萘基、蒽基等，其可带有一个或多个取代基。如在此使用的术语“芳基”的范围内还包括如下一种基团，其中，芳环与一个或多个非芳族环稠合，如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘酰亚胺基、菲啶基或四氢萘基等。

单独使用或作为更大基团例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”的一部分使用的术语“杂芳基”和“杂芳-”指具有5至10个环原子，优选5、6或9个环原子；具有在环排布中共享的6、10或14个π电子；并且还具有除碳原子外的1至5个杂原子的基团。术语“杂原子”指氮、氧或硫，并且包括氮或硫的任意氧化形式，以及碱性氮的任意季铵化形式。杂芳基包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲嗪基、嘌呤基、萘啶基和蝶啶基。如在此使用的术语“杂芳基”和“杂芳-”还包括其中杂芳环与一个或多个芳基、脂环族或杂环基环稠合的基团，其中连接的基团或点在杂芳环上。非限制性例子包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基，4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基可以是单环或双环。术语“杂芳基”可以与术语“杂芳基环”、“杂芳基基团”或“杂芳香环”互换使用，任何这些术语包括任选取代的环。术语“杂芳烷基”和“杂芳基烷基”指由杂芳基部分取代的烷基，其中，烷基和杂芳基部分独立地是任选地被取代。

如在此使用的术语“杂脂族基”指一个或两个碳原子独立地被氧、硫、氮或磷中的一种或多种取代的脂族基团。杂脂族基可以是取代或未取代的，支链或非支链的，环状或非环状的，并且包括“杂环”、“杂环基”、“杂环脂族”或“杂环的”基团。

如在此使用的术语“杂环”，“杂环基”，“杂环基团”和“杂环的环”可互换使用，并且指稳定的5-至7-元单环或7-10-元双环杂环部分，其为饱和或部分不饱和的，并且除碳原子外还具有如上所定义的一个或多个、优选1至4个杂原子。当用于指杂环的环原子时，术语“氮”包括取代的氮。例如，在具有0-3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和的环中，氮可以是N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或⁺NR(如在N-取代的吡咯烷基中)。

杂环可以在产生稳定结构的任意杂原子或碳原子处连接指它的侧基，并且任何环原子可以任选被取代。这种饱和或部分不饱和杂环基团的例子包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑烷基、哌嗪基、二氧杂环己基、二氧戊环基、二氮杂环庚三烯基、氧氮杂环庚三烯基、硫氮杂环庚三烯基、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环”、“杂环基(heterocyclyl)”、“杂环基环”、“杂环基团”、“杂环部分”和“杂环基团(heterocyclic radical)”在此互换使用，并且还包括其中杂环基环与一个或多个芳基、杂芳基或脂环族环稠合的基团，如二氢吲哚基、3H-吲哚基、苯并二氢吡喃基、菲啶基或四氢喹啉基，其中连接的基团或点在杂环基环上。杂环基可以是单环或双环。术语“杂环基烷基”指由杂环基取代的烷基，其中，烷基和杂环基部分独立地是任选地被取代的。

如在此使用的术语“部分不饱和”指包括至少一个双键或三键的环部分。术语“部分不饱和”意欲涵盖具有多个不饱和位点的环，但不意欲包括在本文所定义的芳基或杂芳基部分。

如在此使用的短语“药学上可接受的载体”指参与把主体化合物从一个器官或身体的一部分携带或运输到另一器官或身体的另一部分的药学上可接受的材料、组合物或媒介物，如液体或固体填充剂，稀释剂，赋形剂或溶剂包封材料。每种载体从与制剂的其它成分相容的意义上说必须是“可接受的”，并且对患者无害。可作为药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；黄芪胶粉；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇类，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；pH缓冲溶液；聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐；和药物制剂中使用的其它无毒的相容性物质。

如在此使用的，术语“药学上可接受的盐”指在合理的医学判断范围内适合用于与人和低等动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的利益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐是本领域中熟知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,1977,66,1–19中详细描述了药学上可接受的盐，在此通过引用并入。本发明化合物的药学上可接受的盐包括衍生自适合的无机和有机酸与碱的那些。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是与无机酸(如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或与有机酸(如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)或通过使用本领域中使用的其它方法如离子交换而形成的氨基的盐。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐(bisulfate)、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐(pamoate)、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3–苯基丙酸盐、磷酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。

在其它情况下，本发明的化合物可含有一个或多个酸性官能团，并且因此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。在这些情况下的术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐同样可以在施用载体或剂型制备过程中原位制备，或者通过使纯化的游离酸形式的化合物与适合的碱(如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)，与氨，或者与药学上可接受的有机伯、仲、叔或季胺分别反应。衍生自适当碱的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N⁺(C_1-4烷基)₄盐。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。另外的药学上可接受的盐包括，当适当时，使用抗衡离子如卤素离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。可用于形成碱加成盐的代表性的有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。(见，例如，Berge等人，见上)。

除非另外规定，在此描述的结构还意在包括结构的所有异构(例如，对映异构体、非对映异构体和几何(或构象))形式；例如每个立构中心的R和S构型，Z和E双键异构体，以及Z和E构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体和几何(或构象)混合物在本发明的范围内。除非另外规定，本发明化合物的所有互变异构形式在本发明的范围内。

提供的化合物可包含一个或多个糖部分。除非另外规定，D-和L-构型及其混合物在本发明的范围内。除非另外规定，由本发明可预期α-和β-连接的实施方式及其混合物。

如果，例如需要本发明化合物的特定对映异构体，则其可以通过不对称合成，手性色谱法或通过用手性助剂衍生来制备，其中分离所得非对映异构体混合物，并且将辅助基团裂解以提供纯的所需的对映异构体。或者，用适合的光学活性酸或碱形成非对映异构体盐，其中分子包含碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)，接着通过分步结晶或本领域中熟知的色谱法拆分如此形成的非对映异构体，并且随后回收纯的对映异构体。

或者，除非另外规定，在此描述的结构还意味着包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在方面不同的化合物。例如，具有本发明结构(包括用氘或氚代替氢，或用¹³C-或¹⁴C-富集的碳代替碳)的化合物在本发明的范围内。该化合物例如作为分析工具、生物测定中的探针或根据本发明的治疗剂是有用的。

如在此使用的，术语“还原剂”指适合于进行上下文相关的还原反应的试剂。示例性但非限制性的还原剂是：氢化铝锂(LiAlH₄)、硼氢化钠(NaBH₄)，硼氢化试剂(BH₃，B₂H₆)，碱金属(例如，Li或Na)，过渡金属(例如，Sn、Zn或Fe)，格氏试剂(Grignard reagents)(RMgX)和有机金属化合物(Rli、RNa、R₂CuLi)。所述术语还可以包括还原技术，如催化氢化。本领域中的普通技术人员将能理解的是如在此所述的合成方法使用多种还原剂。

本领域中的普通技术人员之一将要理解的是如在此所述的合成方法使用多种保护基。如在此所述的术语“保护基”指掩蔽或封闭特定的官能部分，例如，O、S或N，如果需要，允许选择性地在多官能化合物中的另一反应部位进行反应。在优选的实施方式中，保护基以良好产率选择性地反应以产生对预计反应稳定的受保护的反应物；所述保护基优选通过容易获得的、优选为不攻击其它官能团的无毒试剂而选择性地去除；所述保护基形成可分离的衍生物(更优选不产生新的立构中心)；并且所述保护基将优选具有最小的额外官能度以避免另外的反应部位。如在此描述的，可以使用氧、硫、氮和碳保护基。作为非限制性例子，羟基保护基包括甲基、甲氧基甲基(MOM)、甲硫基甲基(MTM)、叔丁硫基甲基、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基(SMOM)、苯甲氧基甲基(BOM)、对甲氧基苯甲氧基甲基(PMBM)、(4-甲氧基苯氧基)甲基(p-AOM)、愈创木酚甲基(GUM)、叔丁氧基甲基、4-戊烯氧基甲基(POM)、甲硅烷氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2,2,2-三氯乙氧基甲基、双(2-氯乙氧基)甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEMOR)、四氢吡喃基(THP)、3-溴四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-甲氧基环己基、4-甲氧基四氢吡喃基(MTHP)、4-甲氧基四氢噻喃基、4-甲氧基四氢噻喃基S,S-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基(CTMP)、1,4-二噁烷-2-基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢-7,8,8-三甲基-4,7-甲烷苯并呋喃-2-基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲氧基-2-氟乙基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-(苯基硒基)乙基(2-(phenylselenyl)ethyl)、叔丁基、烯丙基、对氯苯基、对甲氧基苯基、2,4-二硝基苯基、苯甲基、对甲氧基苯甲基、3,4-二甲氧基苯甲基、邻硝基苯甲基、对硝基苯甲基、对卤苯甲基、2,6-二氯苯甲基、对氰基苯甲基、对苯基苯甲基、2-甲基吡啶基、4-甲基吡啶基、3-甲基-2-甲基吡啶基N-氧化物、二苯基甲基、p,p’-二硝基二苯甲基、5-二苯并环庚基、三苯基甲基、α-萘基二苯基甲基、对甲氧基苯基二苯基甲基、二(对甲氧基苯基)苯基甲基、三(对甲氧基苯基)甲基、4-(4’-溴苯甲酰甲氧基苯基)二苯基甲基，4,4’,4”-三(4,5-二氯苯二酰亚氨基苯基)甲基，4,4’,4”-三(乙酰丙酰氧基苯基)甲基(4,4’,4”-tris(levulinoyloxyphenyl)methyl)，4,4’,4”-三(苯甲酰氧基苯基)甲基、3-(咪唑-1-基)双(4’,4”-二甲氧基苯基)甲基、1,1-双(4-甲氧基苯基)-1’-芘基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)呫吨基、9-(9-苯基-10-氧代)蒽基、1,3-苯并二硫戊环-2-基、苯并异噻唑基S,S-二氧化(benzisothiazolyl S,S-dioxido)、三甲基甲硅烷基(TMS)、三乙基甲硅烷基(TES)、三异丙基甲硅烷基(TIPS)、二甲基异丙基甲硅烷基(IPDMS)、二乙基异丙基甲硅烷基(DEIPS)、二甲基叔己基甲硅烷基(dimethylthexylsilyl)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)、三苯甲基甲硅烷基、三(对-二甲苯基)甲硅烷基、三苯基甲硅烷基、二苯基甲基甲硅烷基(DPMS)，叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基(TBMPS)、甲酸酯、苯甲酰甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯(乙酰丙酸酯)、4,4-(1,2-亚乙基二硫代)戊酸酯(乙酰丙酰基二硫代乙缩醛)、新戊酸酯、金刚烷酸酯(adamantoate)、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、对苯基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯(米酮酸酯(mesitoate))、烷基甲基碳酸酯、9-芴基甲基碳酸酯(Fmoc)、烷基乙基碳酸酯、烷基2,2,2-三氯乙基碳酸酯(Troc)、2-(三甲基甲硅烷基)乙基碳酸酯(TMSEC)、2-(苯磺酰基)乙基碳酸酯(Psec)、2-(三苯基磷鎓基)乙基碳酸酯(Peoc)、烷基异丁基碳酸酯、烷基乙烯基碳酸酯、烷基烯丙基碳酸酯、烷基对硝基苯基碳酸酯、烷基苯甲基碳酸酯、烷基对甲氧基苯甲基碳酸酯、烷基3,4-二甲氧基苯甲基碳酸酯、烷基邻硝基苯甲基碳酸酯、烷基对硝基苯甲基碳酸酯、烷基S-苯甲基硫代碳酸酯、4-乙氧基-1-萘基碳酸酯、甲基二硫代碳酸酯、2-碘苯甲酸酯、4-叠氮基丁酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、邻(二溴甲基)苯甲酸酯、2-甲酰基苯磺酸酯、2-(甲硫基甲氧基)乙基、4-(甲硫基甲氧基)丁酸酯、2-(甲硫基甲氧基甲基)苯甲酸酯、2,6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2,6-二氯-4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2,4-双(1,1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、异丁酸酯、单琥珀酸酯、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯、邻甲氧基羰基苯甲酸酯、α-萘甲酸酯、硝酸酯、烷基N,N,N’,N’-四甲基磷酰二胺基(alkyl N,N,N’,N’-tetramethylphosphorodiamidate)、烷基N-苯基氨基甲酸酯、硼酸酯、二甲基硫膦基、烷基2,4-二硝基苯基亚磺酸酯、硫酸酯、甲烷磺酸酯(甲磺酸酯)、苯甲基磺酸酯和甲苯磺酸酯(Ts)。为了保护1,2-或1,3-二醇，所述保护基包括亚甲基缩醛、亚乙基缩醛、1-叔丁基亚乙基缩酮、1-苯基亚乙基缩酮、(4-甲氧基苯基)亚乙基缩醛、2,2,2-三氯亚乙基缩醛、丙酮化合物、亚环戊基缩酮、亚环己基缩酮、亚环庚基缩酮、苯亚甲基缩醛、对甲氧基苯亚甲基缩醛、2,4-二甲氧基苯亚甲基缩酮、3,4-二甲氧基苯亚甲基缩醛、2-硝基苯亚甲基缩醛、甲氧基亚甲基缩醛、乙氧基亚甲基缩醛、二甲氧基亚甲基原酸酯、1-甲氧基亚乙基原酸酯、1-乙氧基亚乙基原酸酯、1,2-二甲氧基亚乙基原酸酯、α-甲氧基苯亚甲基原酸酯、1-(N,N-二甲基氨基)亚乙基衍生物、α-(N,N’-二甲基氨基)苯亚甲基衍生物、2-氧杂亚环戊基原酸酯、二叔丁基亚甲硅基团(DTBS)、1,3-(1,1,3,3-四异丙基二亚硅氧烷基)衍生物(TIPDS)、四叔丁氧基二硅氧烷-1,3-二亚基衍生物(TBDS)、环状碳酸酯、环状硼酸酯(cyclic boronates)、乙基硼酸酯(ethyl boronate)和苯基硼酸酯(cyclicboronate)。氨基保护基包括氨基甲酸甲酯、氨基甲酸乙酯、9-芴基甲基氨基甲酸酯(Fmoc)、9-(2-磺基)芴基甲基氨基甲酸酯、9-(2,7-二溴)芴基甲基氨基甲酸酯、2,7-二叔丁基-[9-(10,10-二氧代-10,10,10,10-四氢噻吨基)]甲基氨基甲酸酯(DBD-Tmoc)、4-甲氧基苯甲酰甲基氨基甲酸酯(Phenoc)、2,2,2-三氯乙基氨基甲酸酯(Troc)、2-三甲基甲硅烷基乙基氨基甲酸酯(Teoc)、2-苯基乙基氨基甲酸酯(hZ)、1-(1-金刚烷基)-1-甲基乙基氨基甲酸酯(Adpoc)、1,1-二甲基-2-卤代乙基氨基甲酸酯、1,1-二甲基-2,2-二溴乙基氨基甲酸酯(DB-t-BOC)、1,1-二甲基-2,2,2-三氯乙基氨基甲酸酯(TCBOC)、1-甲基-1-(4-联苯基)乙基氨基甲酸酯(Bpoc)、1-(3,5-二叔丁基苯基)-1-甲基乙基氨基甲酸酯(t-Bumeoc)、2-(2’-和4’-吡啶基)乙基氨基甲酸酯(Pyoc)、2-(N,N-二环己基羧酰胺基)乙基氨基甲酸酯、氨基甲酸叔丁酯(BOC)、1-金刚烷基氨基甲酸酯(Adoc)、乙烯基氨基甲酸酯(Voc)、烯丙基氨基甲酸酯(Alloc)、1-异丙基烯丙基氨基甲酸酯(Ipaoc)、肉桂基氨基甲酸酯(Coc)、4-硝基肉桂基氨基甲酸酯(Noc)、8-喹啉基基氨基甲酸酯、N-羟基哌啶基氨基甲酸酯、烷基二硫代氨基甲酸酯、苯甲基氨基甲酸酯(Cbz)、对甲氧基苯甲基氨基甲酸酯(Moz)、对硝基苯甲基氨基甲酸酯、对溴苯甲基氨基甲酸酯、对氯苯甲基氨基甲酸酯、2,4-二氯苯甲基氨基甲酸酯、4-甲基亚磺酰基苯甲基氨基甲酸酯(Msz)，9-蒽基甲基氨基甲酸酯、二苯基甲基氨基甲酸酯、2-甲基硫代乙基氨基甲酸酯、2-甲基磺酰基乙基氨基甲酸酯、2-(对甲苯磺酰基)乙基氨基甲酸酯、[2-(1,3-二噻烷基)]甲基氨基甲酸酯(Dmoc)、4-甲硫基苯基氨基甲酸酯(Mtpc)、2,4-二甲基噻吩基氨基甲酸酯(Bmpc)、2-磷鎓基乙基氨基甲酸酯(Peoc)、2-三苯基磷鎓基异丙基氨基甲酸酯(Ppoc)、1,1-二甲基-2-氰乙基氨基甲酸酯、间-氯-对-酰氧基苯甲基氨基甲酸酯、对-(二羟基硼基)苯甲基氨基甲酸酯、5-苯并异噁唑基甲基氨基甲酸酯、2-(三氟甲基)-6-苯并二氢吡喃酮基甲基氨基甲酸酯(Tcroc)、间硝基苯基氨基甲酸酯、3,5-二甲氧基苯甲基氨基甲酸酯、邻硝基苯甲基氨基甲酸酯、3,4-二甲氧基-6-硝基苯甲基氨基甲酸酯、苯基(邻硝基苯基)甲基氨基甲酸酯、吩噻嗪基-(10)-羰基衍生物、N’-对甲苯磺酰基氨基羰基衍生物、N’-苯基氨基硫代羰基衍生物、氨基甲酸叔戊酯、S-苯甲基硫代氨基甲酸酯、对氰基苯甲基氨基甲酸酯、环丁基氨基甲酸酯、环己基氨基甲酸酯、环戊基氨基甲酸酯、环丙基甲基氨基甲酸酯、对癸氧基苯甲基氨基甲酸酯、2,2-二甲氧基羰基乙烯基氨基甲酸酯、邻(N,N-二甲基羧酰胺基)苯甲基氨基甲酸酯、1,1-二甲基-3-(N,N-二甲基羧酰胺基)丙基氨基甲酸酯、1,1-二甲基丙炔基氨基甲酸酯、二(2-吡啶基)甲基氨基甲酸酯、2-呋喃基甲基氨基甲酸酯、2-碘乙基氨基甲酸酯、异冰片基氨基甲酸酯、异丁基氨基甲酸酯、异烟碱基氨基甲酸酯、p-(p’-甲氧基苯基偶氮)苯甲基氨基甲酸酯、1-甲基环丁基氨基甲酸酯、1-甲基环己基氨基甲酸酯、1-甲基-1-环丙基甲基氨基甲酸酯、1-甲基-1-(3,5-二甲氧基苯基)乙基氨基甲酸酯、1-甲基-1-(对苯偶氮基苯基)乙基氨基甲酸酯、1-甲基-1-苯基乙基氨基甲酸酯、1-甲基-1-(4-吡啶基)乙基氨基甲酸酯、苯基氨基甲酸酯、对(苯偶氮基)苯甲基氨基甲酸酯、2,4,6-三叔丁基苯基氨基甲酸酯、4-(三甲基铵)苯甲基氨基甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲基氨基甲酸酯、甲酰胺、乙酰胺、氯乙酰胺、三氯乙酰胺、三氟乙酰胺、苯乙酰胺、3-苯基丙酰胺、吡啶酰胺、3-吡啶羧酰胺、N-苯甲酰基苯丙氨酰衍生物、苯甲酰胺、对苯基苯甲酰胺、邻硝基苯乙酰胺、邻硝基苯氧基乙酰胺、乙酰乙酰胺、(N’-二硫代苯甲氧基羰基氨基)乙酰胺、3-(对羟苯基)丙酰胺、3-(邻硝基苯基)丙酰胺、2-甲基-2-(邻硝基苯氧基)丙酰胺、2-甲基-2-(邻苯偶氮基苯氧基)丙酰胺、4-氯丁酰胺、3-甲基-3-硝基丁酰胺、邻硝基肉桂酰胺、N-乙酰甲硫氨酸衍生物、邻硝基苯甲酰胺、邻-(苯甲酰氧基甲基)苯甲酰胺、4,5-二苯基-3-噁唑啉-2-酮、N-邻苯二甲酰亚胺，N-二硫代琥珀酰亚胺(Dts)、N-2,3-二苯基马来酰亚胺、N-2,5-二甲基吡咯，N-1,1,4,4-四甲基二甲硅烷基氮杂环戊烷加成物(STABASE)、5-取代的1,3-二甲基-1,3,5-三氮杂环己烷-2-酮、5-取代的1,3-二苄基-1,3,5-三氮杂环己烷-2-酮、1-取代的3,5-二硝基-4-吡啶酮、N-甲胺、N-烯丙胺、N-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲胺(SEM)、N-3-乙酰氧基丙胺、N-(1-异丙基-4-硝基-2-氧代-3-吡咯啉-3-基)胺(N-(1-isopropyl-4-nitro-2-oxo-3-pyroolin-3-yl)amine)、季铵盐、N-苄基胺、N-二(4-甲氧基苯基)甲胺、N-5-二苯并环庚胺、N-三苯甲基胺(Tr)，N-[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]胺(MMTr)、N-9-苯基芴基胺(PhF)、N-2,7-二氯-9-芴基亚甲基胺、N-二茂铁基甲基氨基(Fcm)、N-2-甲基吡啶基氨基N’-氧化物、N-1,1-二甲硫基亚甲基胺、N-苯亚甲基胺、N-对甲氧基苯亚甲基胺、N-二苯基亚甲基胺、N-[(2-吡啶基)均三甲苯基]亚甲基胺、N-(N’,N’-二甲基氨基亚甲基)胺、N,N’-亚异丙基胺、N-对硝基苯亚甲基胺、N-亚水杨基胺、N-5-氯亚水杨基胺、N-(5-氯-2-羟苯基)苯基亚甲基胺、N-亚环己基胺、N-(5,5-二甲基-3-氧代-1-环己烯基)胺、N-硼烷衍生物、N-二苯基硼酸衍生物、N-苯基(五羰基铬或钨)羰基]胺、N-铜螯合物、N-锌螯合物、N-硝基胺、N-亚硝基胺、N-氧化胺、二苯基膦酰胺(Dpp)、二甲基硫基膦酰胺(Mpt)、二苯基硫代膦酰胺(Ppt)、二烷基氨基磷酸酯、二苄基氨基磷酸酯、二苯基氨基磷酸酯、苯亚磺酰胺、邻硝基苯亚磺酰胺(Nps)、2,4-二硝基苯亚磺酰胺、五氯苯亚磺酰胺、2-硝基-4-甲氧基苯亚磺酰胺、三苯基甲基亚磺酰胺、3-硝基吡啶亚磺酰胺(Npys)、对甲苯磺酰胺(Ts)、苯磺酰胺、2,3,6,-三甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Mtr)、2,4,6-三甲氧基苯磺酰胺(Mtb)、2,6-二甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Pme)、2,3,5,6-四甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(Mte)、4-甲氧基苯磺酰胺(Mbs)、2,4,6-三甲基苯磺酰胺(Mts)、2,6-二甲氧基-4-甲基苯磺酰胺(iMds)、2,2,5,7,8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰胺(Pmc)、甲磺酰胺(Ms)、β-三甲基甲硅烷基乙磺酰胺(SES)、9-蒽磺酰胺、4-(4’,8’-二甲氧基萘基甲基)苯磺酰胺(DNMBS)、苄基磺酰胺、三氟甲磺酰胺和苯甲酰甲磺酰胺。在此详细描述了示例性保护基，然而，应当理解的是本发明不意欲局限于这些保护基；而是可以使用上述标准容易地鉴定多种另外的等同保护基，并且在本发明的方法中使用。此外，由Greene和Wuts描述了多种保护基(见上)。

如在此描述的，本发明的化合物可含有“任选取代的”部分。通常，无论之前是否有术语“任选地”，术语“取代的”均指指定部分的一个或多个氢被适合的取代基替代。除非另外指示，“任选取代的”基团可在基团的每个可取代位置上具有适合的取代基，并且当任何给定结构中的多于一个位置可以被选自特定基团的多于一个取代基取代时，所述取代基在每个位置上可以相同或不同。本发明预想的取代基的组合优选为导致形成稳定或化学上可行的化合物的那些。如在此使用的术语“稳定的”指当受到允许其生产，检测的条件时基本上不改变的化合物，并且在某些实施方式中，它们的回收、纯化和一种或多种目的的用途在此公开。

“任选取代的”基团的可取代的碳原子上的适合的单价取代基独立地是卤素；–(CH₂)_0–4R°；–(CH₂)_0–4OR°；-O(CH₂)_0-4R^o；–O–(CH₂)_0–4C(O)OR°；–(CH₂)_0–4CH(OR°)₂；–(CH₂)_{0– 4}SR°；可以用R°取代的–(CH₂)_0–4Ph；可以用R°取代的–(CH₂)_0–4O(CH₂)_0–1Ph；可以用R°取代的–CH＝CHPh；可以用R°取代的–(CH₂)_0–4O(CH₂)_0–1-吡啶基；–NO₂；–CN；–N₃；-(CH₂)_0–4N(R°)₂；–(CH₂)_0–4N(R°)C(O)R°；–N(R°)C(S)R°；–(CH₂)_0–4N(R°)C(O)NR°₂；-N(R°)C(S)NR°₂；–(CH₂)_0–4N(R°)C(O)OR°；–N(R°)N(R°)C(O)R°；-N(R°)N(R°)C(O)NR°₂；-N(R°)N(R°)C(O)OR°；–(CH₂)_0–4C(O)R°；–C(S)R°；–(CH₂)_0–4C(O)OR°；–(CH₂)_0–4C(O)SR°；-(CH₂)_0–4C(O)OSiR°₃；–(CH₂)_0–4OC(O)R°；–OC(O)(CH₂)_0–4SR–；SC(S)SR°；–(CH₂)_0–4SC(O)R°；–(CH₂)_0–4C(O)NR°₂；–C(S)NR°₂；–C(S)SR°；–SC(S)SR°；-(CH₂)_0–4OC(O)NR°₂；-C(O)N(OR°)R°；–C(O)C(O)R°；–C(O)CH₂C(O)R°；–C(NOR°)R°；-(CH₂)_0–4SSR°；–(CH₂)_0–4S(O)₂R°；–(CH₂)_0–4S(O)₂OR°；–(CH₂)_0–4OS(O)₂R°；–S(O)₂NR°₂；-(CH₂)_0–4S(O)R°；-N(R°)S(O)₂NR°₂；–N(R°)S(O)₂R°；–N(OR°)R°；–C(NH)NR°₂；–P(O)₂R°；-P(O)R°₂；-OP(O)R°₂；–OP(O)(OR°)₂；SiR°₃；–(C_1–4直链或支链的亚烷基)O–N(R°)₂；或–(C_1–4直链或支链的亚烷基)C(O)O–N(R°)₂，其中，每个R°可以如下文所定义的被取代并且独立地是氢，C_1–6脂族基，–CH₂Ph，–O(CH₂)_0–1Ph，-CH₂-(5-6-元杂芳基环)或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环，或者，尽管如上述定义，两个独立出现的R°与它们的介入原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环，其可以如下所定义的被取代。

R°上适合的单价取代基(或通过取两次独立出现的R°与介于它们之间的原子一起形成的环)独立地是卤素、–(CH₂)_0–2R^●、–(卤代R^●)、–(CH₂)_0–2OH、–(CH₂)_0–2OR^●、–(CH₂)_0–2CH(OR^●)₂、-O(卤代R^●)、–CN、–N₃、–(CH₂)_0–2C(O)R^·、–(CH₂)_0–2C(O)OH、–(CH₂)_0–2C(O)OR^·、–(CH₂)_0–2SR^·、–(CH₂)_0–2SH、–(CH₂)_0–2NH₂、–(CH₂)_0–2NHR^·、–(CH₂)_0–2NR^· ₂、–NO₂、–SiR^· ₃、–OSiR^· ₃、-C(O)SR^·、–(C_1–4直链或支链的亚烷基)C(O)OR^·或–SSR^·，其中每个R^·是未取代的，或者，其之前出现“卤代”时仅用一个或多个卤素取代，并且独立地选自C_1–4脂族基，–CH₂Ph，–O(CH₂)_0–1Ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。R°的饱和碳原子上的适合的二价取代基包括＝O和＝S。

“任选取代的”基团的饱和碳原子上的适合的二价取代基包括以下基团：＝O、＝S、＝NNR^* ₂、＝NNHC(O)R^*、＝NNHC(O)OR^*、＝NNHS(O)₂R^*、＝NR^*、＝NOR^*、–O(C(R^* ₂))_2–3O–或–S(C(R^* ₂))_2–3S–，其中，每个独立出现的R^*选自氢，可以如下定义被取代的C_1–6脂族基或具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的未取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。与“任选取代的”基团的邻位可取代的碳连接的合适的二价取代基包括：–O(CR^* ₂)_2–3O–，其中，每个独立出现的R^*选自氢，可以如下定义被取代的C_1–6脂族基或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。

R^*的脂族基团上适合的取代基包括卤素、–R^·、-(卤代R^·)、-OH、–OR^·、–O(卤代R^·)、–CN、–C(O)OH、–C(O)OR^·、–NH₂、–NHR^·、–NR^· ₂或–NO₂，其中，每个R^·是未取代的，或者，其之前出现“卤代”时仅用一个或多个卤素取代，并且独立地是C_1–4脂族基，–CH₂Ph，–O(CH₂)_{0– 1}Ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。

“任选取代的”基团的可取代的氮上的适合的取代基包括 或其中，每个独立地是氢，可以如下定义被取代的C_1–6脂族基团，未取代的-OPh或具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的未取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环，或者尽管如上述定义，两个独立出现的与介于它们之间的原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环。的脂族基团上适合的取代基独立地是卤素、–R^·、-(卤代R^·)、–OH、–OR^·、–O(卤代R^·)、–CN、–C(O)OH、–C(O)OR^·、–NH₂、–NHR^·、–NR^· ₂或-NO₂，其中，每个R^·是未取代的，或者，其之前出现“卤代”时仅用一个或多个卤素取代，并且独立地是C_1–4脂族基，–CH₂Ph，–O(CH₂)_0–1Ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。

如在此使用的短语“肠胃外施用”和“经肠胃外地施用”是指通常通过注射而不是肠内施用和局部施用的施用模式，包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注。

如在此使用的短语“全身性施用”，“全身性地施用”，“外周施用”和“外周地施用”指除直接进入中枢神经系统之外的施用化合物、药物或其它物质，使得其进入患者的身体，并且因此，经过代谢和其他类似过程，例如皮下给药。

如在此使用的术语“富集的”指具有增加比例的一种或多种物质的混合物。在一些实施方式中，在增加混合物中一种或多种所需物质的比例的方法后，混合物是“富集的”。在一些实施方式中，所需物质包含大于混合物的10％。在一些实施方式中，所需物质包含大于混合物的25％。在一些实施方式中，所需物质包含大于混合物的40％。在一些实施方式中，所需物质包含大于混合物的60％。在一些实施方式中，所需物质包含大于混合物的75％。在一些实施方式中，所需物质包含大于混合物的85％。在一些实施方式中，所需物质包含大于90％的混合物。在一些实施方式中，所需物质包含大于95％的混合物。该比例可以以任何数量的方式测量，例如作为摩尔比，体积比体积或重量比重量。

术语“纯”指(当化学合成时)基本上没有相关非目标结构或化学前体的化合物的化合物。该特性可以测量或表示为“纯度”。在一些实施方式中，目标化合物具有小于大约30％、20％、10％、5％、2％、1％、0.5％和0.1％的非目标结构或化学前体。在某些实施方案中，本发明的纯化合物仅是一种次皂甙元化合物(即，将目标次皂甙元与其它次皂甙元分离)。

术语“碳水化合物”指糖或糖的聚合物。术语“糖”、“多糖”、“碳水化合物”和“低聚糖”可以互换使用。大多数碳水化合物是具有许多羟基的醛或酮，通常在分子的每个碳原子上有一个羟基。碳水化合物通常具有分子式C_nH_2nO_n。碳水化合物可以是单糖、二糖、三糖、低聚糖或多糖。最基本的碳水化合物是单糖，如葡萄糖、蔗糖、半乳糖、甘露糖、核糖、阿拉伯糖、木糖和果糖。二糖是两个连接的单糖。示例性的二糖包括蔗糖、麦芽糖、纤维二糖和乳糖。通常，低聚糖包括三至六个单糖单元(例如，棉子糖，水苏糖)，并且多糖包括六个以上单糖单元。示例性的多糖包括淀粉、糖原和纤维素。碳水化合物可以含有改性的糖单元，如其中除去羟基的2′-脱氧核糖，其中羟基被氟取代的2′-氟核糖或葡萄糖的含氮形式的N-乙酰氨基葡萄糖。(例如，2'-氟核糖、脱氧核糖和己糖)。碳水化合物可以以许多不同形式存在，例如，构象异构体、环状形式、无环形式、立体异构体、互变异构体，端基异构体和同分异构体。

微小皂苷类似物

本发明的一个方面涉及微小皂苷类似物(还称为“截短型皂苷”)，其不含有标准皂苷分子的支链三糖结构域。在一个实施方式中，所述微小皂苷类似物是具有式(I)的化学结构的化合物，

或其药学上可接受的盐，其中，

是单键或双键；

W是甲基、-CHO、-CH₂OR^x或-C(O)R^y；

V是氢或-OR^x；

Y是CH₂、-O-、-NR-或-NH-；

其中，R是氢，任选被取代的选自酰基、芳烷基、6-10元芳基、C1-12脂族基、C1-12杂脂族基的基团；

Z是氢，任选被取代的选自酰基、脂族基、杂脂族基、芳基、芳烷基、杂环基和杂芳基的环状或非环状的部分；或Z包含碳水化合物；

每次出现的R^x独立地是氢或选自烷基醚、苯甲基醚、甲硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯的氧保护基；

R^y是-OH、-OR或羧基保护基，其中，羧基保护基与其连接的羰基一起是酯、酰胺或酰肼。

在一些实施方式中，W是甲基、-CHO或-CH₂OH。在另一些实施方式中，V是H或OH。在另一些实施方式中，W是甲基、-CHO或-CH₂OH并且V是H或OH。在另一些实施方式中，W是甲基并且V是OH。在另一些实施方式中，W是CH₂OH并且V是OH。W是CHO并且V是OH。

在一些实施方式中，具有式(I)的结构的微小皂苷类似物，其中，是单键或双键；W是C(O)R、CH₂OR或CH₂R，其中，R是H，或任选被取代的选自酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族基、杂脂族基、脂环族基和杂环基的基团；V是H或OH；Y是O；Z是线性低聚糖或任选被取代的选自胺、酰胺、酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族基、杂脂族基、脂环族基和杂环基的基团。

本申请的另一方面涉及具有式(II)的结构的微小皂苷类似物，

或其药学上可接受的盐，其中，W是C(O)R、CH₂OR或CH₂R，其中，R是H，或任选被取代的选自酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族基、杂脂族基、脂环族基和杂环基的基团；V是H或OH，X是CH₂R_m、C(O)R_m、CH₂OR_m、CH₂R_m,OR_m或NHR_m，其中，R_m是H，或任选被取代的选自酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族基、杂脂族基、脂环族基和杂环基的基团，并且每次出现的Rn独立地是氢、单糖、二糖或三糖。

在一些实施方式中，本申请所述的微小皂苷类似物由具有式(III)的结构的前体制备

其中：W是Me、-CHO或-CH₂OH，并且V是H或OH。

合成方法

本申请的另一个方面涉及制备本申请所述的微小皂苷类似物的方法。在一些实施方式中，所述方法包括制备具有式(III)的结构的前体。在一些实施方式中，所述式(III)的前体用以下步骤制备：

a)使式(100)的化合物与保护基反应以形成式(101)的化合物，其中，W是Me、CHO、CH₂OH或CH₂OR_p；其中，R_p是H或为实现区域选择性所必需的适当的保护基；V是H或OR_p，并且TES是三乙基甲硅烷基保护基；

b)使式(101)的化合物与式(102)的化合物反应以形成式(103)的化合物，其中，Bn是苯甲基保护基；

c)使式(103)的化合物与还原剂反应以形成式(104)的化合物；

d)在活化剂的存在下，使式(104)的化合物与式(105)的化合物偶联以形成式(106)的化合物，其中，Boc是叔丁氧羰基保护基；

e)将式(106)的化合物去保护以形成所述式(III)的化合物。

在一些实施方式中，所述保护基选自甲基、甲氧基甲基(MOM)、甲硫基甲基(MTM)、叔丁硫基甲基、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基(SMOM)、苯甲氧基甲基(BOM)、对甲氧基苯甲氧基甲基(PMBM)、(4-甲氧基苯氧基)甲基(p-AOM)、愈创木酚甲基(GUM)、叔丁氧基甲基、4-戊烯氧基甲基(POM)、甲硅烷氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2,2,2-三氯乙氧基甲基、双(2-氯乙氧基)甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEMOR)、四氢吡喃基(THP)、3-溴四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-甲氧基环己基、4-甲氧基四氢吡喃基(MTHP)、4-甲氧基四氢噻喃基、4-甲氧基四氢噻喃基S,S-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基(CTMP)、1,4-二噁烷-2-基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢-7,8,8-三甲基-4,7-甲烷苯并呋喃-2-基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲氧基-2-氟乙基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2-(苯基硒基)乙基(2-(phenylselenyl)ethyl)、叔丁基、烯丙基、对氯苯基、对甲氧基苯基、2,4-二硝基苯基、苯甲基、对甲氧基苯甲基、3,4-二甲氧基苯甲基、邻硝基苯甲基、对硝基苯甲基、对卤苯甲基、2,6-二氯苯甲基、对氰基苯甲基、对苯基苯甲基、2-甲基吡啶基、4-甲基吡啶基、3-甲基-2-甲基吡啶基N-氧化物、二苯基甲基、p,p’-二硝基二苯甲基、5-二苯并环庚基、三苯基甲基、α-萘基二苯基甲基、对甲氧基苯基二苯基甲基、二(对甲氧基苯基)苯基甲基、三(对甲氧基苯基)甲基、4-(4’-溴苯甲酰甲氧基苯基)二苯基甲基，4,4’,4”-三(4,5-二氯苯二酰亚氨基苯基)甲基，4,4’,4”-三(乙酰丙酰氧基苯基)甲基(4,4’,4”-tris(levulinoyloxyphenyl)methyl)，4,4’,4”-三(苯甲酰氧基苯基)甲基、3-(咪唑-1-基)双(4’,4”-二甲氧基苯基)甲基、1,1-双(4-甲氧基苯基)-1’-芘基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)呫吨基、9-(9-苯基-10-氧代)蒽基、1,3-苯并二硫戊环-2-基、苯并异噻唑基S,S-二氧化物、三甲基甲硅烷基(TMS)、三乙基甲硅烷基(TES)、三异丙基甲硅烷基(TIPS)、二甲基异丙基甲硅烷基(IPDMS)、二乙基异丙基甲硅烷基(DEIPS)、二甲基叔己基甲硅烷基(dimethylthexylsilyl)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)、三苯甲基甲硅烷基、三对二甲苯基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基、二苯基甲基甲硅烷基(DPMS)，叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基(TBMPS)、甲酸酯、苯甲酰甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯(乙酰丙酸酯)、4,4-(1,2-亚乙基二硫代)戊酸酯(乙酰丙酰基二硫代乙缩醛)、新戊酸酯、金刚烷酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、对苯基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯(米酮酸酯)、烷基甲基碳酸酯、9-芴基甲基碳酸酯(Fmoc)、烷基乙基碳酸酯、烷基2,2,2-三氯乙基碳酸酯(Troc)、2-(三甲基甲硅烷基)乙基碳酸酯(TMSEC)、2-(苯磺酰基)乙基碳酸酯(Psec)、2-(三苯基磷鎓基)乙基碳酸酯(Peoc)、烷基异丁基碳酸酯、烷基乙烯基碳酸酯、烷基烯丙基碳酸酯、烷基对硝基苯基碳酸酯、烷基苯甲基碳酸酯、烷基对甲氧基苯甲基碳酸酯、烷基3,4-二甲氧基苯甲基碳酸酯、烷基邻硝基苯甲基碳酸酯、烷基对硝基苯甲基碳酸酯、烷基S-苯甲基硫代碳酸酯、4-乙氧基-1-萘基碳酸酯、甲基二硫代碳酸酯、2-碘苯甲酸酯、4-叠氮基丁酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、邻(二溴甲基)苯甲酸酯、2-甲酰基苯磺酸酯、2-(甲硫基甲氧基)乙基、4-(甲硫基甲氧基)丁酸酯、2-(甲硫基甲氧基甲基)苯甲酸酯、2,6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2,6-二氯-4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2,4-双(1,1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、异丁酸酯、单琥珀酸酯、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯、邻甲氧基羰基苯甲酸酯、α-萘甲酸酯、硝酸酯、烷基N,N,N’,N’-四甲基磷酰二胺基(alkyl N,N,N’,N’-tetramethylphosphorodiamidate)、烷基N-苯基氨基甲酸酯、硼酸酯、二甲基硫膦基、烷基2,4-二硝基苯基亚磺酸酯、硫酸酯、甲烷磺酸酯(甲磺酸酯)、苯甲基磺酸酯和甲苯磺酸酯(Ts)。在另一个实施方式中，所述方法，其中，所述氧保护基是三乙基甲硅烷基(TES)。在另一个实施方式中，所述方法，其中所述还原剂是苯基硒醇。

在某些实施方式中，所述微小皂苷类似物具有大于80％、大于85％、大于90％、大于95％、大于96％、大于97％、大于98％、大于99％的纯度。

疫苗组合物

本申请的另一个方面涉及一种疫苗组合物，其包含抗原和本申请所述的微小皂苷类似物作为佐剂。在一些实施方式中，所述疫苗组合物进一步包含另外的佐剂。

本申请所述的疫苗组合物用作诱导受试者对于抗原的主动免疫的疫苗。可经历本发明所述的组合物的有益效果的任意动物都在可以治疗的受试者的范围内。在一些实施方式中，所述受试者是哺乳动物。在一些实施方式中，所述受试者是人。

当单独施用时，大部分蛋白质和糖蛋白抗原致免疫性差或无致免疫性。对该抗原的强适应性免疫应答通常需要使用佐剂。免疫佐剂是当向受试者施用时增加对抗原的免疫应答或增强来自免疫系统细胞的一定活性的物质。佐剂还可允许使用较低剂量的抗原以在受试者中获得有用的免疫反应。

常规佐剂包括明矾、弗氏(Freund’s)佐剂(具有死分枝杆菌的水包油乳液)、具有MDP的弗氏佐剂(具有胞壁酰二肽、MDP、分枝杆菌成分的水包油乳液)、明矾加百日咳博德特菌(Bordetella pertussis)(具有杀死的百日咳博德特菌的氢氧化铝凝胶)。认为该佐剂通过延迟抗原的释放并由巨噬细胞增强吸收而起作用。免疫刺激复合物(ISCOMs)，如Quil-A(皂树皂苷提取物)，是一般具有大约40nm的直径的开放的笼状复合物，其由胆固醇、脂质、免疫原和皂苷构成。ISCOMs将抗原递送到细胞溶质，并且已经证明在多种实验动物模型中促进抗体应答和T辅助细胞的诱导以及细胞毒性T淋巴细胞反应。

本发明所述的疫苗可以通过被动免疫或主动免疫用来对感染或癌症赋予抗性。当本发明所述的疫苗用来通过主动免疫赋予抗性时，将本发明所述的疫苗向动物施用以诱出预防或减弱增生疾病或感染疾病的保护性免疫反应。当本发明所述的疫苗用来通过被动免疫对感染赋予抗性时，向宿主动物(例如，人、狗或小鼠)提供所述疫苗，并且回收通过该疫苗诱出的抗血清并直接向怀疑具有感染或疾病或暴露于病原微生物的接受者提供。

本发明因此涉及并提供预防或减弱由微生物或肿瘤细胞导致的增生疾病的装置，其具有通过对在对本发明的疫苗中包含的免疫原性多肽的反应中产生的抗血清来识别并结合的抗原。如果对动物的施用导致疾病的症状或病症的全部或部分减弱(即，抑制)，或者动物对疾病的全部或部分免疫，则在此使用的疫苗被称为预防或减弱疾病。

所述施用的疫苗(或其诱出的抗血清)可以用于“预防的”或“治疗的”目的。当预防性地提供时，在增生疾病的任意症状之前提供所述疫苗。所述疫苗的预防性施用用来预防或减弱疾病的任一后续表现。当治疗性地提供时，在发现显示出动物可能被病原体感染或具有某癌症的症状时或之后提供所述疫苗。所述疫苗的治疗性施用用来减弱任一实际的疾病表现。因此，所述疫苗可以在开始疾病扩散之前提供(以便预防或减弱预期的感染或癌症)或在实际开始扩散之后提供。

因此，在本发明的一个方面提供了包含一种或多种与细菌、病毒、原生动物、肿瘤相关的抗原与一种或多种发明化合物组合的疫苗。在一些实施方式中，所述疫苗包含单一与细菌、病毒、原生动物、肿瘤相关的抗原与一种发明化合物组合。在一些实施方式中，所述疫苗包含两种或多种与细菌、病毒、原生动物、肿瘤相关的抗原与单一发明化合物组合。在一些实施方式中，所述疫苗包含两种或多种与细菌、病毒、原生动物、肿瘤相关的抗原与两种或多种发明化合物组合。在一些实施方式中，所述疫苗包含单一与细菌、病毒、原生动物、肿瘤相关的抗原与两种或多种发明化合物组合。

在一些实施方式中，提供的疫苗的一种或多种抗原是细菌抗原。在另一些实施方式中，所述细菌抗原是与选自幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、肺炎衣原体(Chlamydiapneumoniae)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、解脲支原体(Ureaplasmaurealyticum)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、葡萄球菌属(Staphylococcusspp.)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、链球菌属(Streptococcus spp.)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、绿色链球菌(Streptococcus viridans)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)、炭疽杆菌(Bacillusanthracis)、沙门氏菌属(Salmonella spp.)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、霍乱弧菌(Vibrio cholera)、鼠疫巴斯德菌(Pasteurella pestis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、弯曲杆菌属(Campylobacter spp.)、空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni)、梭菌属(Clostridium spp.)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、分枝杆菌属(Mycobacterium spp.)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、密螺旋体属(Treponema spp.)、疏螺旋体属(Borrelia spp.)、伯氏疏螺旋体菌(Borreliaburgdorferi)、钩端螺旋体属(Leptospria spp.)、杜克雷嗜血杆菌(Hemophilusducreyi)、白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheria)、百日咳博德特菌(Bordetellapertussis)、副百日咳博德特菌(Bordetella parapertussis)、支气管炎博德特菌(Bordetella bronchiseptica)、流感嗜血杆菌(hemophilus influenza)、大肠杆菌(Escherichia coli)、志贺氏菌属(Shigella spp.)、埃里希氏菌属(Erlichia spp.)、立克次氏体属(Rickettsia spp.)及它们的组合的细菌相关的抗原。

在某些实施方式中，提供的疫苗的一种或多种抗原是与病毒相关的抗原。在某些实施方式中，所述与病毒相关的抗原是与选自流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、埃-巴病毒(Epstein-Barr virus)、鼻病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒(echo viruse)、麻疹病毒、风疹病毒、水痘带状疱疹病毒、疱疹病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒、巨细胞病毒、肝炎病毒、人乳头瘤病毒、甲病毒、黄病毒、布尼亚病毒、狂犬病病毒、沙粒病毒、丝状病毒、HIV 1、HIV 2、HTLV-1、HTLV-II、FeLV、牛LV、FeIV、犬瘟热病毒、犬传染性肝炎病毒、猫杯样病毒(feline calicivirus)、猫鼻气管炎病毒(felinerhinotracheitis virus)、TGE病毒、口蹄疫病毒和它们的组合的病毒相关的抗原。

在某些实施方式中，提供的疫苗的一种或多种抗原是与肿瘤相关的抗原。在一些实施方式中，所述与肿瘤相关的抗原是选自杀死的肿瘤细胞及其裂解物、MAGE-1、MAGE-3及其肽片段；人绒毛膜促性腺激素及其肽片段；癌胚抗原及其肽片段、甲胎蛋白及其肽片段；胰腺瘤胎抗原及其肽片段；MUC-1及其肽片段、CA 125、CA15-3、CA 19-9、CA 549、CA 195及其肽片段；前列腺特异性抗原及其肽片段；前列腺特异性膜抗原及其肽片段；鳞状细胞癌抗原及其肽片段；卵巢癌抗原及其肽片段；胰腺癌相关抗原及其肽片段；Her1/neu及其肽片段；gp-100及其肽片段；突变体K-ras蛋白及其肽片段；突变体p53及其肽片段；截短的表皮生长因子受体、嵌合蛋白p210^BCR-ABL、KH-1、N3、GM1、GM2、GD2、GD3、Gb3、Globo-H、STn、Tn、Lewis^x、Lewis^y、TF和它们的混合物的抗原。

在某些实施方式中，抗原与式(I)的化合物共价结合。在一些实施方式中，抗原与式(I)的化合物非共价地结合。

本领域中的普通技术人员将理解，疫苗可任选地包含药学上可接受的赋形剂或载体。因此，根据另一个方面，提供的疫苗包含任选与药学上可接受的赋形剂或载体结合的一种或多种抗原。在一些实施方式中，所述一种或多种抗原与药学上可接受的赋形剂共价地结合。在另一些实施方式中，该一种或多种抗原与药学上可接受的赋形剂非共价的结合。

如上所述，佐剂可以用于增加对抗原的免疫反应。根据本发明，当向受试者施用时，提供的疫苗可以用来引起免疫反应。在某些实施方式中，对抗原的免疫反应可以通过向受试者施用有效量的提供的疫苗来增强该受试者对该抗原的免疫反应而得到增强。

如上所述，提供的化合物可以作为佐剂与肿瘤相关的抗原组合用于癌症疫苗。在某些实施方式中，该疫苗可以用于肿瘤的治疗或预防。在某些实施方式中，所述肿瘤是良性肿瘤。在另一些实施方式中，所述肿瘤是恶性肿瘤。可以使用本发明的化合物和抗原来治疗任一癌症。

在某些实施方式中，恶性肿瘤是血液恶性肿瘤。血液恶性肿瘤是影响血液、骨髓和/或淋巴结的癌症类型。可以使用式(I)的化合物治疗的血液恶性肿瘤的实例包括，但是不局限于，急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、多毛细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤(CTCL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、套细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、急性淋巴母细胞性T细胞白血病(T-ALL)、急性早幼粒细胞白血病和多发性骨髓瘤。

除血液恶性肿瘤之外的其他癌症也可以使用式(I)的化合物治疗。在某些实施方式中，所述癌症是实体瘤。可以使用式(I)的化合物治疗的示例性的癌症包括，仅举几例，结肠癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、胃癌、食道癌、皮肤癌、脑癌、肝癌、卵巢癌、子宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、前列腺癌、膀胱癌、肾癌、神经内分泌癌、乳腺癌、胃癌、眼癌、胆囊癌、喉癌、口腔癌、阴茎癌、腺体肿瘤、直肠癌、小肠癌、肉瘤、癌、黑色素瘤、尿道癌、阴道癌。

在某些实施方式中，本发明的化合物和药物组合物可以用于联合治疗，即，所述化合物和药物组合物可以在一种或多种其他所需的疗法或医疗程序的同时、之前或之后施用。在组合规则中使用的疗法(疗法或程序)的特定组合将考虑所需疗法和/或程序的相容性和要达到的所需治疗效果。还将理解的是使用的疗法可以实现对相同病症(例如，本发明化合物可以与另一种抗增殖剂同时施用)的期望效果，或者它们可实现不同的效果(例如，控制任何不良反应)

例如，可以与本发明所述的发明抗癌剂组合使用的其他疗法或抗癌剂包括手术，放射疗法(γ辐射、中子束放射疗法、电子束放射疗法、质子疗法、近程放射治疗和全身放射性同位素等，仅举几例)，内分泌疗法，生物反应调节剂(干扰素、白细胞介素和肿瘤坏死因子，仅举几例)，高温治疗和冷冻疗法，减弱任何不良作用的药剂(例如，止吐药)和其它批准的化学治疗药，包括但不局限于烷化药物(氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、美法仑、异环磷酰胺)、抗代谢物(甲氨蝶呤)、嘌呤拮抗剂和嘧啶拮抗剂(6-巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷(Cytarabile)、吉西他滨)、纺锤体毒剂(长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇)、鬼臼毒素(依托泊苷、伊立替康、托泊替坎)、抗生素(多柔比星、博来霉素、丝裂霉素)、亚硝基脲(卡莫司汀、洛莫司汀)、无机离子(顺铂、卡铂)、酶(天冬酰胺酶)和激素(他莫昔芬、亮丙瑞林、氟他胺和甲地孕酮)，仅举几例。此外，本发明还包括目前临床试验中的某些细胞毒性或抗癌剂的用途，并且其最终可由FDA批准(包括但不限于，埃博霉素(epothilones)及其类似物和格尔德霉素及其类似物)。关于更新的癌症治疗的更全面的讨论见www.nci.nih.gov，在www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm上的FDA批准的肿瘤药物的列表，和TheMerck Manual,Seventeenth Ed.1999，其全部内容在此通过引用并入。

本申请的另一个方面涉及一种使用本申请所述的疫苗组合物使受试者免疫的方法。

用于增强其他药物的效果的方法

本申请的另一个方面涉及使用式(I)的微小皂苷类似物或其盐增强细胞毒性药物(如抗癌药物)的效果的方法。所述细胞毒性药物的实例包括，但是不局限于，抗癌剂可包括烷化剂，如苯达莫司汀、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、达卡巴嗪、异环磷酰胺、美法仑、丙卡巴肼、链佐星、替莫唑胺；抗肿瘤抗生素，如放线菌素D/更生霉素、博来霉素、柔红霉素、多柔比星、多柔比星(聚乙二醇化的脂质体)、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素、米托蒽醌；植物碱/微管抑制因子，如依托泊苷、多西他赛、伊立替康、紫杉醇、托泊替坎、长春碱、长春新碱、长春瑞滨；抗代谢物质，如天冬酰胺酶、卡培他滨、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氟达拉滨、吉西他滨，甲氨蝶呤、培美曲塞、雷替曲塞；DNA连接剂，如卡铂、顺铂、奥沙利铂；双磷酸盐类，如氯屈膦酸盐、伊班膦酸、帕米膦酸盐、唑来膦酸；生物制剂，如阿仑珠单抗(alemtuzamab)、BCG、贝伐珠单抗、西妥昔单抗、地舒单抗(denosumab)、厄洛替尼、吉非替尼、伊马替尼、干扰素、伊匹木单抗(ipilimumab)、拉帕替尼(lapatinib)、帕木单抗(panitumumab)、利妥昔单抗、舒尼替尼、索拉非尼、坦西莫司(temsirolimus)、曲妥珠单抗；激素/其他，如阿那曲唑、阿比特龙、氨磷汀、贝沙罗汀、比卡鲁胺、布舍瑞林、环丙孕酮、地加瑞克(degarelix)、依西美坦、氟他胺、亚叶酸、氟维司群、戈舍瑞林、兰瑞肽、来那度胺(lenalidomide)、来曲唑、亮丙瑞林、甲羟孕酮、甲地孕酮、美司钠、奥曲肽、己烯雌酚、他莫昔芬、沙利度胺、曲普瑞林。

本申请的另一个方面涉及包含有效量的式(I)的微小皂苷类似物或其盐的药物组合物，以及细胞毒性药物。

治疗的方法

本申请的另一个方面涉及一种治疗受试者的感染疾病的方法，其包含向所述受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物。在一些实施方式中，所述感染是细菌。在一些实施方式中，所述感染是病毒。在一些实施方式中，所述感染是原生动物感染。在一些实施方式中，所述受试者是人。

本申请的另一个方面涉及药物组合物，其包含有效量的式(I)微小皂苷类似物或其盐，以及药学上可接受的载体。

制剂

本申请所述的微小皂苷类似物可以与药学上可接受的赋形剂组合形成药物组合物。在某些实施方式中，所述药物组合物包括药学上可接受量的发明化合物。可以与载体材料组合制备单个剂型的活性成分的量将依据被治疗的宿主和施药的具体方式变化。可以与载体材料组合制备单个剂型的活性成分的量通常是产生治疗效果的化合物的量。通常，该量在大约1％至大约99％，优选大约5％至大约70％，最优选大约10％至大约30％的活性成分的范围内。

润湿剂、乳化剂和润滑剂，如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。

药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；以及金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇，酒石酸、磷酸等。

本申请的制剂包括适合于口服、鼻腔、局部(包括颊和舌下)、直肠、阴道和/或肠胃外施用的那些。所述制剂可以方便地用单位剂型表示，并且可以通过药学领域中任意熟知的方法来制备。在某些实施方式中，本发明的制剂包含选自环糊精、脂质体、胶束形成剂(例如胆汁酸)和聚合物载体(例如聚酯和聚酐)的赋形剂；以及本发明的化合物。在某些实施方式中，上述制剂提供口服的生物可利用的本发明的化合物。

适合于口服施用的本发明的制剂可以是胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用调味基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)、粉剂、颗粒剂、或者为溶液或在水性的或非水性液体中的悬浮液、或者为水包油或油包水液体乳液、或者为酏剂或糖浆剂、或者为软锭剂(使用惰性基质，如凝胶和甘油，或蔗糖或阿拉伯胶)和/或漱口剂等的形式，每种剂型都含有预定量的本发明的化合物作为活性成分。本发明的化合物还可以作为大丸剂、药糖剂或糊剂施用。

在口服施用的本发明的固体剂型(胶囊、片剂、丸剂、糖衣丸、粉剂、颗粒剂等)中，所述活性成分与一种或多种药学上可接受的载体(如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下任意一种混合：填充剂或膨胀剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；粘合剂，如，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；稀释剂，如甘油；崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉，藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；溶液阻滞剂，如石蜡；吸收促进剂，如季铵化合物；润湿剂，如，例如鲸蜡醇，单硬脂酸甘油酯和非离子表面活性剂；吸收剂，如高岭土和皂粘土；润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及它们的混合物；和着色剂。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，所述药物组合物还可包含缓冲剂。使用如乳糖或牛奶糖、以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂。相似类型的固体组合物还可以在软和硬壳明胶胶囊中用作填充剂。

本发明的化合物的口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳液、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆剂和酏剂。除所述活性成分之外，所述液体剂型可含有本领域中常用的惰性稀释剂，如，例如，水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇、和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，以及它们的混合物。

除惰性稀释剂之外，所述口服组合物还可包括佐剂，如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。

除所述活性化合物之外，悬浮液可含有悬浮剂，例如，乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、皂粘土、琼脂和黄蓍胶和它们的混合物。

可以用于本发明所述的药物组合物的适合的水性和非水性载体的例子包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)和它们适合的混合物、植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯(如油酸乙酯)。例如，通过使用包衣材料(如卵磷脂)，通过在分散的情况下保持所需粒径，以及通过使用表面活性剂可以保持适当的流动性。

这些组合物还可含有佐剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯，氯丁醇，苯酚山梨酸等)可以确保防止微生物对主体化合物的作用。还可能需要在所述组合物中包括等渗剂，如糖、氯化钠等。此外，可以通过包含延迟吸收的试剂(如单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射药物形式的持续吸收。

可注射的缓释剂型通过在可生物降解的聚合物(如聚交酯-聚乙交酯)中形成主体化合物的微囊基质来制备。根据药物与聚合物的比和所用具体聚合物的性质，可以控制药物释放的速率。其它可生物降解的聚合物的例子包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还可通过将药物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备缓释可注射制剂。

在某些实施方式中，口服施用化合物或药物制剂。在另一些实施方式中，静脉施用所述化合物或药物制剂。另外的施用的途径包括舌下、肌内和经皮施用。

本申请所述的制剂可以口服、肠胃外、局部或直肠给药。它们当然以适合于每种施用途径的形式给药。例如，它们以片剂或胶囊形式，通过注射、吸入、洗眼剂、软膏剂、栓剂等通过注射、输注或吸入施用；通过洗剂或软膏局部施用；以及通过栓剂直肠施用。优选的是口服施用。

本申请所述的微小皂苷类似物可以为了治疗通过任意适合的施用途径，包括口服、鼻腔(如通过喷雾)；直肠、阴道内、胃肠外、脑池内和局部(如通过粉末、软膏或滴剂)；包括口腔和舌下，向人和其它动物施用。

不考虑选择的施用途径，本申请所述的微小皂苷类似物(可以以适当的水合形式使用)和/或本发明的药物组合物通过本领域中的技术人员已知的常规方法配制成药学上可接受的剂型。

可以改变本发明所述的药物组合物中的活性物质的实际剂量水平以便获得对实现对具体患者所需的治疗反应有效的活性成分的量、组合物、施用模式，而对患者无毒。

所选择的剂量水平将取决于各种因素，其包括使用的本发明所述的具体化合物或者他们的酯、盐或酰胺的活性，施用的途径，施用的时间，被使用的具体化合物的排泄或新陈代谢的速率，治疗的时间，与使用的具体化合物组合的其他药物、化合物和/或材料，所治疗的患者的年龄、性别、体重、条件、一般健康状况和先前的病史，以及医学领域中熟知的类似因素。

具有本领域的普通技术的医师或兽医可以容易地确定和开出所需的药物组合物的有效量。例如，医师或兽医可以以低于实现所需治疗效果的水平开始在药物组合物中的本发明所述的化合物的剂量，然后逐渐增加剂量直至实现所需效果。

在一些实施方式中，本申请的化合物或药物组合物长期地向受试者提供。长期治疗包括任意形式的长时间的重复施用，如重复施用一个多或多个月、在一个月和一年之间、一年或多年、或者更久。在许多实施方式中，长期治疗涉及在受试者的一生中重复地施用本发明的化合物或药物组合物。优选的长期治疗包括有规律的施用，例如每天一次或多次，每周一次或多次，或者每月一次或多次。通常，适合的剂量，如本发明的化合物的每日剂量将是产生治疗效果的有效的最低剂量的化合物的量。该有效剂量通常将取决于上述因素。当用于指示效果时，用于受试者的本发明的化合物的一般剂量将在大约0.0001至大约100mg/kg体重/天的范围内。优选地，每日剂量将在将为每kg体重0.001至50mg化合物的范围内，并且甚至更优选在每kg体重0.01至10mg化合物的范围内。然而，可以使用更低或更高的剂量。在一些实施方式中，当受试者的生理学由于年龄、疾病进展、体重或其它因素而改变时，可以更改向受试者施用的剂量。

在一些实施方式中，提供的佐剂化合物作为药物组合物或疫苗施用。在某些实施方式中，施用的佐剂化合物的量是1-2000μg。在某些实施方式中，施用的佐剂化合物的量是1-1000μg。在某些实施方式中，施用的佐剂化合物的量是1-500μg。在某些实施方式中，施用的佐剂化合物的量是1-250μg。在某些实施方式中，施用的佐剂化合物的量是100-1000μg。在某些实施方式中，施用的佐剂化合物的量是100-500μg。在某些实施方式中，施用的佐剂化合物的量是100-200μg。在某些实施方式中，施用的佐剂化合物的量是250-500μg。在某些实施方式中，施用的佐剂化合物的量是10-1000μg。在某些实施方式中，施用的佐剂化合物的量是500-1000μg。在某些实施方式中，施用的佐剂化合物的量是50-250μg。在某些实施方式中，施用的佐剂化合物的量是50-500μg。

如需要，活性化合物的有效日剂量可以在一天内作为以适当间隔分别施用的两个、三个、四个、五个、六个或更多的亚剂量施用，任选地以单位剂型施用。

虽然本发明的化合物可以单独施用，但在某些实施方式中，所述化合物作为如上所述的药物制剂(组合物)施用。

根据本发明所述的化合物可以通过与其它药物类似的方法配制，以以任何方便的方式施用用于人或兽医药品。

本发明提供包含发明化合物的药物组合物的试剂盒。在某些实施方式中，该试剂盒包含式(I)的化合物和抗原的组合。所述试剂可以分别或一同包装。所述试剂盒任选地包含开药的说明。在某些实施方式中，所述试剂盒包含每个试剂的多个剂量。所述试剂盒可包含治疗受试者一周、两周、三周、四周或多月的各每个组分的有效量。所述试剂盒可包含免疫疗法的完整周期。在一些实施方式中，所述试剂盒包含含有一种或多种细菌、病毒、原生动物或肿瘤相关抗原的疫苗，以及一种或多种提供的化合物。

以上和在此引用的所有参考文献的全部内容在此通过引用并入。

在此的描述是用于教导本领域中的普通技术人员如何实践本公开的目的，并且不意欲详述当阅读所述说明时将对所述技术人员来说显而易见的所有那些明显的修改和改变。为了说明和描述的目的已经呈现了本申请所述的具体实施方式。它们将不意欲是详尽的或将应用和使用方法限于所公开的精确形式。显然地，根据上述教导，许多修改和改变是可能的。应当理解的是在不脱离本申请的权利要求的精神或范围的情况下，由于可以因情况而提出或提供便利，会考虑等价的各种省略或替代，但是意欲也覆盖应用或实施。

实施例

实施例1：碘化皂苷6和8的初步评价

将放射性碘(¹³¹I)引入到QS-21皂苷骨架中以实现体内生物分布研究。通过胺2(SQS-0-0-5-11)的酰化合成非放射性标记的芳基碘化物6(SQS-0-0-5-18)(图1b)。因为不存在评估佐剂活性的体外模型，所以在涉及多抗原制剂的临床前小鼠接种模型中进行芳基碘化物6的生物学评价，所述多抗原制剂包含免疫原性肽MUC1(前列腺和乳腺癌抗原，非糖基化串联重复)，其与高度免疫原性KLH载体蛋白(MUC1-KLH)和OVA(一种在小鼠中诱导抗体和T细胞反应的可靠免疫原)结合。通过ELISA测定针对与目标佐剂共同施用的三种抗原中的每一种的抗体反应。

芳基碘化皂苷6(SQS-0-0-5-18)诱导的抗体效价与NQS-21(天然QS-21)和SQS-21(合成的QS-21，65％1a：35％1b))相当(图1d-f)，并且当通过小鼠重量减轻评估时还显示出与QS21相比降低的毒性(图1g)。作为阴性对照，合成了的碘化皂苷变体8(SQS-0-3-7-18)，其缺少线性四糖结构域(图1c和图7)并且显示差的佐剂活性(图7)。

除非另外指明，反应在火焰干燥的密封管或在氩气正压下带有玻璃塞的改进的Schlenk(Kjeldahl形)烧瓶中进行。空气和湿气敏感的液体和溶液通过注射器转移。通过用甲苯共沸除去水来干燥适当的碳水化合物试剂。分子筛在350℃下活化，并在使用前立即压碎，然后在真空下火焰干燥。在低于30℃下通过旋转蒸发来浓缩有机溶液。使用230-400目硅胶进行快速柱色谱法。使用预涂布至0.25mm深度的玻璃板和浸渍有荧光指示剂(254nm)的230-400目硅胶进行薄层色谱法。

实施例2：放射性碘化皂苷[¹³¹I]^-6和[¹³¹I]^-8的生物分布

对于生物分布研究，通过三甲基锡烷7的芳基锡-卤化物交换合成放射性标记的芳基碘化皂苷[¹³¹I]^-6([¹³¹I]-SQS-0-0-5-18)(图1b)。类似地从9合成放射性碘化的[¹³¹I]^-8([¹³¹I]-SQS-0-3-7-18)作为阴性对照(图1c)。

为了鉴定能够在皂苷作用机制中起作用的组织和器官，将活性佐剂[¹³¹I]^-6的急性体内生物分布与在用OVA共同施用的小鼠中的减毒佐剂[¹³¹I]^-8进行比较。与[¹³¹I]^-8相比，用[¹³¹I]^-6处理导致注射后24小时在注射部位上(17倍高，78％ID/g[每克的注射剂量])和最近的引流淋巴结(24倍高，27％ID/g)中(图2a)显著较高的放射性回收，其在注射后72小时和96小时保留(图8)。相反地，最初观察到大倍数差异(肌肉，骨骼，皮肤)的其他组织中的放射性在较晚的时间点快速降低。在24h(图2a)时观察到由低甲状腺摄取(0.21％ID/g)证实的[¹³¹I]^-6的最小脱碘，尽管在较晚的时间点脱碘增加(图8)。相反地，在注射后24小时的注射部位(4.5％ID/g)和最近的引流淋巴结(1.1％ID/g)上(图2a)，以显著较低的水平回收减毒佐剂[¹³¹I]-8，并在较晚的时间点从两个部位进一步清除(图8)。总之，这些数据表明只有活性佐剂6(SQS-0-0-5-18)位于并保留在注射部位和淋巴结，而减毒佐剂8(SQS-0-3-7-18)不是。

QS-21及其变体的佐剂活性的分子机制仍然知之甚少。已经报道，QS-21分别刺激对应于细胞和体液免疫的混合的Th1/Th2辅助T细胞应答，包括抗原特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞。有一些证据提出QS-21不结合Toll样受体2和4，并且其不通过缓释效应来运转，其中所述佐剂增加抗原的寿命，延长其对免疫系统的呈递。还已经提出皂树皂苷(通过类比妥卡雷琐)可以通过在C4-醛取代基处的亚胺形成而共价结合到T细胞表面受体上的氨基上，提供对T细胞活化的协同刺激。

先前已报道了含有皂树皂苷混合物的其它佐剂影响抗原的生物分布，尽管不知道佐剂的生物分布是否受抗原的存在或缺乏的影响。为了研究这些结构上定义的QS-21变体的这些作用，评估了活性佐剂[¹³¹I]^-6和非活性佐剂[¹³¹I]^-8在OVA缺乏的情况下的生物分布(图9)。在两种情况下，生物分布图与在上述OVA存在下观察到的那些相当(图8)，表明抗原OVA的存在不影响这些皂苷佐剂的生物分布。

在互补实验中，检验在活性佐剂6存在和缺乏的情况下的[¹³¹I]-OVA的生物分布(图10)。虽然所得到生物分布图相当，但是甲状腺摄取也很高，表明[¹³¹I]-OVA的快速脱碘，这种现象通常对放射性碘标记的蛋白质观察到。因此，6对OVA抗原生物分布的影响不能有效评估，并且需要替代的实验方法。

为了处理这个问题，进行具有荧光素标记的活性佐剂3(SQS-0-0-5-12)和Alexa-647-结合的OVA(OVA-A647)的体内荧光成像实验。在注射后24小时，我们观察到注射部位处的荧光皂苷的保留(图2b)和在引流淋巴结内的累积(图2c中的左侧淋巴结)，与上述生物分布结果一致。解剖节点的免疫组织化学分析表明佐剂3的节下部位到引流淋巴结的皮层。流式细胞术分析说明在淋巴结内3的树突状细胞特异性内化。此外，虽然在用活性佐剂3和未标记的非活性佐剂2(SQS-0-0-5-11)处理的小鼠中在注射部位观察到OVA-A647(图2b和图11)，但是当与活性佐剂3共注射时，其仅位于最接近的引流淋巴结(图2c)。总的来说，这些数据提出活性皂苷3在通过抗原呈递细胞到引流淋巴结的OVA抗原的转运中的作用，其中抗原被呈递给适应性免疫系统。

实施例3：缺乏支链三糖结构域的截短型皂苷(16)

使必需的三萜母核在羟基处选择性地甲硅烷基化(TESOTf，2,6-二甲基吡啶)以提供具有游离C28-羧酸的被保护的三萜。与三糖三氯乙酰亚胺供体12的β-选择性施密特(Schmidt)糖基化反应(BF₃·OEt₂)(Chea,E.K.等人.Synthesis and preclinicalevaluation of QS-21variants leading to simplified vaccine adjuvants andmechanistic probes.J.Am.Chem.Soc.134,13448-13457(2012))，然后还原叠氮化物(PhSeH)，得到相应的葡糖基酯。该胺和6-((叔丁氧基羰基)-氨基)己酸(14)(EtOCOCl，Et₃N)的酰化反应，以及随后通过氢解(H₂,Pd/C)和酸水解(TFA/H₂O)整体脱保护，得到在酰基链结构域的末端带有游离胺的完全脱保护的皂苷。该胺与琥珀酰亚胺酯4或5的后期酰化分别得到相应的芳基碘化物16、18-22或相关的芳基锡同源物(图3a)。

已经确定皂苷变体6(SQS-0-0-5-18)作为具有低毒性的有效佐剂，研究了支链三糖结构域在佐剂活性中的作用。缺乏该完整域的截短型皂苷16(SQS-1-0-5-18)，由皂皮酸1)和被保护的三糖12合成(图3a)。值得注意的是，截短型皂苷16引起与母体芳基碘化物6、NQS-21和SQS-21相当的KLH和MUC1抗体应答，并且除了在较低剂量(20μg)处的抗MUC1效价之外，显著高于非佐剂对照的那些(图3b、3c)。抗OVA的抗体效价也类似于由母体芳基碘化物皂苷6引起的那些，并且显著高于无佐剂对照的那些(图3d)。此外，截短型皂苷16表现出比NQS-21和SQS-21低得多的毒性，略低于母体芳基碘化物6的毒性(图3e)。因此，整个支链三糖结构域在截短型皂苷变体16中的佐剂活性不是必需的。这表示皂苷结构的主要简化，并且提供比QS-21本身更有利的活性/毒性曲线。

实施例4：具有目标三萜结构域修饰的皂苷(18-22)

用由MUC1-KLH(2.5mg)和OVA(20mg)组成的三组分疫苗或还包括GD3-KLH(5mg)的四组分疫苗接种五只小鼠(C57BL/6J，雌性，6-8周龄)的组。在第0、7和14天通过皮下注射将抗原与目的佐剂(5、20或50mg)或不含佐剂(无佐剂对照)在磷酸盐缓冲盐水(PBS，100mL)中共同施用，随后在第65天加强。在第72天收集小鼠血清，并且通过ELISA测定针对每种抗原的抗体效价。使用CI＝95％的双尾不配对学生t检验评估与无佐剂对照相比的每个抗体应答的统计学显著性。作为初始，毒性、小鼠体重减轻的一般评估在第一次接种后第0、1、2、3和7天监测。这些动物实验如MSKCC机构动物照顾与使用委员会(Institutional AnimalCare and Use Committee)(IACUC)方案#97-11-051中所述进行。

通过用N-琥珀酰亚胺基-4-(三甲基甲锡烷基)苯甲酸酯4(Et₃N,DMF,21℃,1-2.5h)酰化，由相应的胺前体(2、S4、15、S8)合成芳基锡皂苷(7、9、17、S9)。通过用[¹³¹I]-NaI和氯胺-T碘化该芳基锡皂苷(20μg)(甲醇，21℃，1min)，然后立即进行HPLC纯化来实现放射性标记。在35℃下通过旋转蒸发除去溶剂，并将放射性碘标记的探针配制在0.9％盐水中用于生物分布研究。将放射性碘标记探针与相应的冷皂苷共洗脱用于质量控制分析。

通过在甲醇中用[¹³¹I]-NaI和氯胺-T处理20μg卵清蛋白来合成放射性标记的卵清蛋白。将反应混合物用2mL磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释，随后使用30kDa分子量截滤膜以2800rpm离心过滤12分钟。将该过程重复两次，然后将浓缩的化合物配制在1mL 0.9％盐水中用于生物分布研究。

类似于从皂皮酸到16(SQS-1-0-5-18)的合成，对于佐剂活性无需整个支链三糖结构域的发现通过由其他的三萜前体半合成新的变体而促进了QS-21的三萜结构域的研究(图3a)。C4-醛取代基和C16-醇在皂皮酸母核结构中的作用特别重要。之前，已经提出C4-醛取代基对于QS-21的佐剂活性是重要的。然而，最近已经证实缺少三萜醛取代基但是是活性佐剂的其他皂苷。因此，由齐墩果酸合成了初始变体18(SQS-1-7-5-18)(图12)，齐墩果酸与皂皮酸共享相同的碳骨架，仅在C4取代基(Me与CHO)和C16(H与OH)处的氧化态不同。

与母体皂皮酸衍生物16相比，齐墩果酸衍生物18(C16-Me、C16-H)导致针对所有三种抗原的较低的抗体效价(图4a-d)。此外，具有齐墩果酸衍生物18的OVA抗体效价与非佐剂对照的那些相似。因此，在齐墩果酸衍生物18中同时除去C4-醛取代基和C16-醇导致在该临床前疫苗接种模型中显著减弱的抗体应答。

为了分别研究这些官能团中的每一个的重要性，合成三萜变体19-22，其中C4-醛取代基和C16-醇的氧化态独立地变化(图5a)。从16(SQS-1-0-5-18)的合成中的高级中间体得到C4-醛取代基被还原成羟甲基而C16醇被保留的葳严仙皂苷元(Caulophyllogenin)变体19(SQS-1-11-5-18)(图13)。其中C4-醛取代基被甲基取代而C16-醇再次保留的刺囊酸变体20(SQS-1-8-5-18)，和其中C4-醛取代基被羟甲基取代并且C16-醇被质子代替的常春藤皂苷元变体22(SQS-1-10-5-18)，由相应的市售三萜制备(图14和图15)。具有C4醛取代基但缺乏C16-醇的丝石竹皂苷元变体21(SQS-1-9-5-18)通过初始TEMPO氧化常春藤皂苷元中的C4-羟甲基取代基来获得丝石竹皂苷元。

用由MUC1-KLH、OVA和与KLH结合的低免疫原性糖脂GD3(黑色素瘤、神经母细胞瘤、肉瘤抗原)(GD3-KLH)组成的四组分疫苗评价这些皂苷变体(图5b-e，对于具有20和50μg剂量的全部数据见图16)。刺囊酸衍生物20(C4-Me、C16-OH)诱导对所有四种抗原的最高抗体应答，与含完全支链三糖的皂苷6和SQS-21的那些相当或更高。尽管在升高的剂量(50μg)下，葳严仙皂苷元衍生物19(C4-CH₂OH、C16-OH)提供的抗体效价也略低于刺囊酸衍生物20、含支链三糖的皂苷6和SQS-21的那些。相反地，在除了抗GD3IgG应答以外的所有情况下，丝石竹皂苷元衍生物21(C4-CHO、C16-H)和常春藤皂苷元衍生物22(C4-CH₂OH、C16-H)都产生较低的抗体应答，并且类似于KLH和OVA的非佐剂处理的对照。

抗MUC1和抗OVA IgG同型的抗体亚型分型揭示了用该组中的两种佐剂活性皂苷(19、20)对小鼠IgG1和IgG2b亚型的显著偏差。用SQS-21和母体皂皮酸衍生物16获得类似的结果。如通过分类特异性ELISA所指示出的，其它小鼠IgG亚型(包括IgG2a和IgG3)的产生是低的或可忽略的。与NQS-21和SQS-21相比，所有四种变体的毒性保持大幅度地降低(图5f)。

因此，刺囊酸衍生物20提供了通常与SQS-21相当的免疫刺激活性，但没有相关的毒性。葳严仙皂苷元衍生物19虽然需要更高的剂量，但是也提供类似于完全的、含支链三糖的皂苷6的抗体应答。重要的是，刺囊酸衍生物20和葳严仙皂苷元衍生物19都缺乏C4-醛取代基，但保留C16醇。相反地，丝石竹皂苷元衍生物21和常春藤皂苷元衍生物22都缺乏C16醇，并且对所试验的所有抗原都诱导较低的抗体应答。总之，这些数据表明C4-醛取代基不是这些新型皂苷中的有效免疫佐剂活性所必需的，并且显示出C16醇在增强活性方面在先前未被了解的作用。

实施例5：截短型皂苷[¹³¹I]^-16和[¹³¹I]^-18的生物分布

用目标放射性碘化皂苷佐剂(～25mCi)、相应的非放射性标记的皂苷(20mg)和OVA(20mg)的PBS(150□L)溶液皮下注射5只小鼠(首次用于实验的，C57BL/6J雌性，8-10周龄)的组。在注射后24h、72h和96h处死小鼠。收获组织和器官并且分析归一化为器官重量的放射性分布(％ID/g，每克注射剂量的百分比)。使用CI＝95％的双尾未配对学生t-检验评估各组织或器官的活性和减毒佐剂的回收率差异(％ID/g)的统计学显著性。在初始实验中，生物分布图在注射后24h和96h之间没有显著变化，并且24h时间点用于随后的实验。

剃刮三只小鼠，并在左侧腹腔中用在PBS(100μL)中的10μg的活性佐剂3(SQS-0-0-5-12)或非活性佐剂2(SQS-0-0-5-11)和20μg的Alexa-647-结合的OVA(OVA-A647)免疫。使用Maestro成像系统在注射后24h进行全身成像。在注射后24小时，处死小鼠，并且分别解剖左和右淋巴结并成像。

使用放射性碘标记同源物[¹³¹I]^-16(图3a)和[¹³¹I]^-18(图12)比较佐剂有活性的截短型皂皮酸变体16(SQS-1-0-5-18)和佐剂减毒的齐墩果酸衍生物18(SQS-1-7-5-18)的体内生物分布模式，以使得能够与活性/减毒佐剂对6(SQS-0-0-5-18)和8(SQS-0-3-7-18)(图2a)的早期研究相关。与[¹³¹I]-¹⁸相比，活性佐剂[¹³¹I]-¹⁶在注射部位(136％ID/g)和淋巴结内(3.55％ID/g)显示出显著较高的集中(分别11.5％和0.50％ID/g)(图6)。因此，在两种生物分布研究中，更有活性的佐剂优先保留在注射部位并积累在淋巴结中，提供了该生物分布模式和佐剂活性之间的正相关性。

实施例7：碘化和放射性标记的皂苷佐剂的合成

初始变体6(SQS-0-0-5-18)和8(SQS-0-3-7-18)的合成

SQS-0-0-5-18(6)。(EC-V-056)向N,N’-二甲基甲酰胺(2.0mL)中的胺2(见Chea,E.K.et al.Synthesis and preclinical evaluation of QS-21variants leading tosimplified vaccine adjuvants and mechanistic probes.J.Am.Chem.Soc.134,13448-13457(2012))(9.0mg,6.0μmol,1.0当量)的溶液中注入三乙胺(50μL,0.36mmol,60当量)，并且将混合物在21℃下搅拌50min。然后滴加在N,N’-二甲基甲酰胺(0.6mL)中的芳基碘化物4(见(a)Zhi,Y.-G.et al.Systematic studies on photoluminescence of oligo(arylene-ethynylene)s:tunability of excited states and derivatization asluminescent labeling probes for proteins.Eur.J.Org.Chem.3125-3139(2006)；(b)Shell,T.A.,Mohler,D.L.Selective targeting of DNA for cleavage within DNA-histone assemblies by a spermine-[CpW(CO)₃Ph]₂conjugate.Org.Biomol.Chem.3,3091-3093(2005))(20mg,60μmol,10当量)，并且将反应在21℃下搅拌1h。将内含物用20％的乙腈/水(10mL)稀释，并且通过RP-HPLC在XBridge Prep BEH300C18柱(5μm,10×250mm)上使用线性梯度的20-70％的线性梯度的乙腈/水以5mL/min的流速直接纯化超过30min。冻干后得到SQS-0-0-5-18(6)(5.4mg,52％产率)为白色粉末。

[¹³¹I]-SQS-0-0-5-18的芳基锡前体(7)。(EC-V-052)向N,N’-二甲基甲酰胺(2.0mL)中的胺2(2.0mg,1.3μmol,1.0当量)的溶液中注入三乙胺(10μL,72μmol,55当量)并且将混合物在21℃下搅拌50min。然后滴加N,N’-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的芳基锡5(Koziorowski,J.,Henssen,C.,Weinreich,R.A new convenient route toradioiodinated N-succinimidyl 3-and4-iodobenzoate,two reagents forradioiodination of proteins.Appl.Radiat.Isot.49,955-959(1998))(2.0mg,5.2μmol,4.0当量)，并且将反应在21℃下搅拌1h。此后，将内含物用20％的乙腈/水(10mL)稀释，并通过RP HPLC在XBridge Prep BEH300C18柱(5μm,10×250mm)上使用20-70％的线性梯度的乙腈/水以5mL/min的流速直接纯化超过30min。冻干后获得皂苷7(1.8mg,78％产率)为白色粉末。

完全保护的氨酰基次皂苷元S3。(EC-V-191)在冰浴中冷却二氯甲烷(1.56mL)和吡啶(40μL,0.50mmol,20.5当量)中的酸S1(Deng,K.,Adams,M.M.,Gin,D.Y.Synthesis andstructure verification of the vaccine adjuvant QS-7-Api.Synthetic access tohomogeneous Quillaja saponaria immunostimulants.J.Am.Chem.Soc.130,5860-5861(2008))(50mg,24μmol,1.0当量)的溶液。搅拌5min后，注入亚硫酰氯(20μL,0.28mmol,11.5当量)随后加入N,N’-二甲基甲酰胺(6.25μL,0.081mmol,3.4当量)并在21℃下搅拌1.5h。将所得透明黄色溶液浓缩以得到无定形的白色固体，其接着再溶解于含有吡啶(40μL,0.50mmol,20.5当量)的二氯甲烷(1.6mL)中。向所述溶液中注入S2(0.1mL,0.62mmol,25.8当量)，其引起橙色色调形成。30min后，将反应用CH₂Cl₂(30mL)稀释并用饱和碳酸氢钠(30mL)洗涤。将水相用CH₂Cl₂(2×30mL)萃取，并且将合并的有机相用Na₂SO₄干燥、过滤并蒸发至干燥以得到亮黄色油状物。通过硅胶色谱法(4:1己烷/EtOAc)纯化得到S3(48mg,91％产率)为玻璃状固体。

氨酰基次皂苷元S4。(EC-IV-187)在10mL圆底烧瓶中，将S3(24mg,10.8μmol,1.0当量)溶解于四氢呋喃/乙醇(5mL,1:1)和10％(干基)钯碳中，加入湿的、德固赛型E101NE/W(63mg,29.6μmol,2.7当量)。将反应在氢气压力(50psi)下在21℃下搅拌24h。将所得部分脱甲硅烷基化产物的粗混合物通过0.45μm尼龙注射器过滤器过滤，用甲醇(20mL)、CH₂Cl₂(10mL)并再次用甲醇(5mL)冲洗，并且将透明滤液蒸发至干燥。在CD₃OD中通过¹H NMR消失的芳香族共振来评估成功的脱苄基作用。然后将所得混合物在冰浴中经过三氟乙酸/水(2mL,4:1)3.3h，然后蒸发至干燥以得到粉红色固体。通过RP-HPLC在XBridge Prep BEH300C18柱(5μm，10×250mm)上使用20-95％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)以5mL/min的流速纯化所得的粗产物超过20min。将皂苷S4(5.4mg,50％产率)洗脱为宽单峰，并且冻干后作为白色粉末存在。

SQS-0-3-7-18(8)。(EC-IV-194)向N,N’-二甲基甲酰胺(0.4mL)中的S4(7.1mg,7.1μmol,1.0当量)的溶液中注入三乙胺(20μL,0.14mmol,20当量)，随后在N,N’-二甲基甲酰胺(0.4mL)中滴加4(14mg,40.6μmol,5.7当量)。搅拌3h后，将内含物用10mL的水(0.05％TFA)稀释并且通过RP-HPLC在XBridge Prep BEH300C18柱(5μm,10x 250mm)上使用30-80％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)以5mL/min的流速纯化超过30min。将SQS-0-3-7-18(8)(5.9mg,68％产率)洗脱为单峰并且冻干后作为白色粉末存在。

[¹³¹I]-SQS-0-3-7-18的芳基锡前体(9)。(EC-IV-193)向溶于N,N’-二甲基甲酰胺(0.2mL)和三乙胺(20μL,0.14mmol,40当量)的S4(3.6mg,3.6μmol,1.0当量)中滴加N,N’-二甲基甲酰胺(0.1mL)中的5(5mg,13.1μmol,3.6当量)的溶液。搅拌2.5h后，将内含物用水(4mL)稀释并且通过RP-HPLC在XBridge Prep BEH300C18柱(5μm,10x 250mm)上使用20-95％的线性梯度的乙腈/水以5mL/min的流速纯化超过30min。将皂苷9(2.4mg,53％产率)洗脱为单峰并且冻干后得到白色粉末。

缺乏支链三糖结构域的变体(16)的合成

皂皮酸的双(甲硅烷基醚)(11)。(AFT-II-040)将CH₂Cl₂(20mL)中的皂皮酸10(200mg,0.41mmol,1.0当量)的悬浮液在冰浴中冷却并且注入2,6-卢剔啶(0.48mL,4.1mmol,10当量)和三乙基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(0.46mL,2.06mmol,5.0当量)。搅拌1h后，将内含物用饱和NaHCO₃(10mL)洗涤，将水相用CH₂Cl₂(2×15mL)萃取，并且将合并的有机相用Na₂SO₄干燥、过滤并浓缩。粗产物通过硅胶色谱法(己烷至4:1的己烷/EtOAc)纯化以得到11(235mg,80％产率)。

保护的皂皮酸皂苷叠氮化物S28。(AFT-I-165)向CH₂Cl₂(7mL)中的11(38mg,49μmol,1.05当量)和亚胺酯(imidate)12(52mg,47μmol,1.0当量)的溶液中加入80mg粉末状的分子筛，并且将混合物在21℃下搅拌30min。然后将反应舒伦克瓶冷却到-35℃，并且注入三氟化硼二乙醚化物(boron trifluoride diethyletherate)(1.2μL,9.0μmol,0.2当量)。将混合物在该温度下搅拌0.5h，用0.2mL的三乙胺淬灭并浓缩。残余物通过硅胶色谱法(苯中的0.2％三乙胺至97:3的苯/EtOAc)纯化得到无色油状物，其被进一步用色谱纯化，得到所需产物S28(56mg,72％产率)为白色固体。

保护的皂皮酸皂苷胺13。(AFT-I-167)向溶解于三乙胺(28mL)的S28(62mg,37μmol,1.0当量)中通过插管加入新鲜制备的苯硒醇(1.11mmol,30当量)的溶液。加入苯硒醇时，形成白色沉淀，并且溶液变成亮黄色。将反应在38℃下搅拌8h，然后将所述溶液浓缩以得到黄白色固体。粗混合物通过硅胶色谱法(90:10至85:15的苯/EtOAc)纯化以得到胺13(49mg,80％产率)为玻璃状固体。

完全保护的氨酰基皂皮酸皂苷S10。(AFT-I-169)向0℃的四氢呋喃(2.5mL)中的6-((叔丁氧基羰基)-氨基)己酸(14)(45mg,0.20mmol,11.5当量)的透明、无色溶液中加入三乙胺(213μL,1.53mmol,90当量)，然后加入氯甲酸乙酯(16.0μL,0.17mmol,10.0当量)。将浑浊的、白色溶液在0℃下搅拌2.5h，然后在0℃下通过插管加入到胺13(28mg,17.0μmol,1.0当量)中。将反应混合物在该温度下搅拌1.5h，然后用水(0.2mL)淬灭以得到透明溶液。将内含物用饱和NaHCO₃(30mL)稀释，并将水相用CH₂Cl₂(3×25mL)萃取。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)、过滤、并蒸发至干燥。通过硅胶色谱法(2:1的己烷/含0.2％的三乙胺的EtOAc)纯化得到S10(28mg,88％产率)为白色玻璃状固体。

氨酰基皂皮酸皂苷15。(AFT-I-204)在50mL圆底烧瓶中，将S10(68mg,36.6μmol,1.0当量)溶解于四氢呋喃/乙醇(20mL,1:1)和10％(干基)钯炭中，加入湿的、德固赛型E101NE/W(390mg,0.18mmol,5.0当量)。将反应在氢气压力(50psi)下在21℃下搅拌24h，并将悬浮液通过0.45μm尼龙注射器过滤器过滤，用甲醇(3×30mL)洗涤并浓缩。在CD₃OD中通过¹H NMR消失的芳香族共振来评估成功的脱苄基作用。然后将粗混合物溶于三氟乙酸(8mL,TFA/H₂O 3:1)的溶液中，并且在冰浴中搅拌2h。将反应物蒸发至干燥以得到白色固体，其被溶解于20％的乙腈/水(20mL)中，并通过RP-HPLC在XBridge Prep BEH300C18柱(5μm,10×250mm)上使用30-70％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)以5mL/min的流速纯化超过15分钟。将氨酰基皂皮酸皂苷15洗脱为单峰，并且冻干后得到白色粉末(28mg,74％产率)。

SQS-1-0-5-18(16)。(AFT-I-300)向N,N’-二甲基甲酰胺(0.4mL)中的15(2.1mg,2.0μmol,1.0当量)的溶液中加入三乙胺(11μL,0.08mmol,40当量)，然后滴加N,N’-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的4(4.0mg,10μmol,5.8当量)。搅拌2h后，将内含物用30％的乙腈/水(2.3mL)稀释，并通过RP-HPLC在XBridge Prep BEH300C18柱(5μm,10x 250mm)上使用30-70％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)以5mL/min的流速纯化超过15分钟。冻干后得到白色粉末SQS-1-0-5-18(16)(1.7mg,67％产率)。

[¹³¹I]-SQS-1-0-5-18的芳基锡前体(17)。(EC-V-227)向溶解于N,N’-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的15(0.65mg,0.63μmol,1.0当量)中加入三乙胺(10μL,72μmol,114当量)和5(1.0mg,2.6μmol,4.1当量)。搅拌1.5h后，将反应用水(4mL)稀释，并通过RP-HPLC在XBridgePrep BEH300C18柱(5μm,10x 250mm)上用35-95％的线性梯度的乙腈/水以5mL/min的流速纯化超过30min。将皂苷17(0.6mg,75％产率)洗脱为单峰，并且冻干后获得白色粉末。

在三萜结构域中具有修饰的变体(18-22)的合成

齐墩果酸的甲硅烷基醚(S29)。(AFT-I-137)向0℃的CH₂Cl₂(10mL)中的齐墩果酸S5(250mg,0.55mmol,1.0当量)的溶液中加入2,6-卢剔啶(0.38mL,3.28mmol,6.0当量)和三乙基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(0.37mL,1.64mmol,3.0当量)，并且将混合物搅拌1h。将内含物用0.5N HCl(10mL)淬灭，并将水相用CH₂Cl₂(2×15mL)萃取。将合并的有机相用Na₂SO₄干燥、过滤、浓缩，并且最终通过硅胶色谱法(己烷至4:1的己烷/EtOAc)纯化以得到S29(250mg,80％产率)。

保护的齐墩果酸皂苷叠氮化物S6。(EC-V-215)向CH₂Cl₂(8.0mL)中的S29(50mg,87μmol,1.0当量)和亚胺酯12(97mg,87μmol,1.0当量)的溶液中加入120mg粉末状的分子筛并将所述混合物在21℃下搅拌1h。然后将反应舒伦克瓶转移至-78℃浴中，并且注入三氟化硼二乙醚化物(boron trifluoride diethyletherate)(8.8μL,70μmol,0.8当量)。将反应在-50℃搅拌20min，在21℃搅拌1min，冷却回到-50℃，搅拌20min，最后在21℃再次搅拌1min。然后将所述混合物在-50℃下用三乙胺(0.1mL)淬灭并通过硅胶塞。将所得滤液浓缩，并通过硅胶色谱法(己烷至5:1的己烷/EtOAc)纯化以得到S6(89mg,68％产率)为玻璃状固体。

保护的齐墩果酸皂苷胺S30。(EC-V-216)向溶解于三乙胺(12mL)中的S6(44mg,29μmol,1.0当量)中通过插管转移加入新鲜制备的苯硒醇(0.44mmol,15当量)的溶液。加入苯基硒醇时，形成白色沉淀，并且所述混合物变为亮黄色。在38℃下搅拌8h后，浓缩所述溶液以得到黄白色固体，将其通过硅胶色谱法(5:1的己烷/EtOAc至EtOAc中的2％的三乙胺)纯化以得到S30(41mg,95％产率)为白色固体。

完全保护的氨酰基齐墩果酸皂苷S7。(EC-V-217)在0℃下向四氢呋喃(2.6mL)中的14(63mg,0.27mmol,10当量)的溶液中加入三乙胺(365μL,2.6mmol,96当量)。向透明、无色的溶液中注入氯甲酸乙酯(23μL,0.25mmol,9.0当量)，其使所述溶液变为浑浊白色。允许酸活化在0℃下进行2.5h，然后将整个溶液插管转移到含有胺S30(41mg,27μmol,1.0当量)的舒伦克瓶中。将反应混合物在0℃下搅拌1.5h，然后用水(90μL)淬灭，此时溶液从浑浊的白色变为透明。然后将内含物蒸发至干燥，并且通过硅胶色谱法(5:1的己烷/EtOAc)纯化以得到S7(40mg,81％产率)为白色玻璃状固体。

氨酰基齐墩果酸皂苷S8。(EC-V-218)在含有S7(10mg,5.8μmol,1.0当量)的25mL圆底烧瓶中加入四氢呋喃/乙醇(2mL,1:1)，随后加入10％(干基)钯碳、湿的德固赛型E101NE/W(14.0mg,6.5μmol,1.1当量)。将反应在氢气压力(50psi)下在21℃下搅拌24h，然后通过0.45mm尼龙注射器过滤器过滤，用甲醇(20mL)、CH₂Cl₂(10mL)并再次用甲醇(5mL)洗涤以彻底洗涤钯。将透明的滤液蒸发至干燥。在CD₃OD中通过¹H NMR由消失的芳香族共振来评估成功的脱苄基作用。然后将所述混合物溶解于三氟乙酸/水(2mL,4:1)的溶液中，并在冰浴中搅拌2h。此后，将反应物蒸发至干燥以得到白色固体，其通过RP-HPLC使用30-80％的线性梯度的乙腈/水(0.1％TFA)以5mL/min的流速纯化超过20min。冻干后得到所需产物S8(2.6mg,44％产率)为白色粉末。

SQS-1-7-5-18(18)。(EC-V-221)将胺S8(1.3mg,1.3μmol,1.0当量)溶解于N,N’-二甲基甲酰胺(0.2mL)中，并注入三乙胺(3.6μL,25.6μmol,20当量)。向该溶液中加入4(2.5mg,7.3μmol,5.7当量)，并且将反应混合物在21℃下搅拌2h。此后，将内含物用3mL水(0.05％TFA)稀释，并使用30-80％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)通过HPLC以5mL/min的流速直接纯化超过20分钟以在冻干后得到SQS-1-7-5-18(18)(1.0mg,63％产率)为白色粉末。

SQS-1-7-5-18的芳基锡前体(S9)。(EC-V-222)向N,N’-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的胺S8(1.3mg,1.3μmol,1.0当量)的溶液中加入三乙胺(3.6μL,25.6μmol,20当量)，然后加入5(2.6mg，6.8μmol，5.2当量)。在21℃下搅拌1.5h后，将所述反应用3mL水稀释，并且使用30-90％的线性梯度的乙腈/水通过RP-HPLC以5mL/min的流速直接纯化超过30分钟以在冻干后得到S9(1.0mg,62％产率)为白色粉末。

完全保护的氨酰基葳严仙皂苷元皂苷S11。(AFT-I-243)。向甲醇(1.0mL)中的S10(10mg,5.4μmol)的溶液中加入NaBH₄，并且将所述反应在21℃下搅拌3h。然后将所述混合物用丙酮(2mL)稀释、浓缩，并通过硅胶色谱法(85:15的苯/EtOAc)纯化以得到S11(10mg,>99％产率)。

氨酰基葳严仙皂苷元皂苷S12。(AFT-I-244)在25mL圆底烧瓶中，将S11(15mg,8.1μmol,1.0当量)溶解于4.0mL的四氢呋喃/乙醇(1:1)和10％(干基)钯碳，加入湿的、德固赛型E101NE/W(85mg,0.04mmol,5.0当量)。将反应在氢气氛(气球)下在21℃下搅拌12h，并将悬浮液通过0.45μm尼龙注射器过滤器过滤，用甲醇(4×20mL)充分洗涤并浓缩。在CD₃OD中通过¹H NMR由消失的芳香族共振来评估成功的脱苄基作用。然后将粗混合物溶于预冷(0℃)的三氟乙酸(3.2mL,TFA/H₂O 3:1)的溶液中，并在0℃下搅拌1.25h。将反应物蒸发至干燥，并且将粗产物溶解于20％的乙腈/水(8mL)中，并通过RP-HPLC在XBridge Prep BEH300C18柱(5μm,10×250mm)上使用20-70％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)以5mL/min的流速纯化超过20分钟。冷冻干燥后得到所需产物S12为白色粉末(5.8mg,70％产率)。

SQS-1-11-5-18(19)。(AFT-I-245)向N,N’-二甲基甲酰胺(1.3mL)中的S12(7.0mg,6.7μmol,1.0当量)的溶液中注入三乙胺(20μL,0.13mmol,20当量)，然后滴加N,N’-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的4(11.6mg,33.6μmol,5.0当量)。搅拌3h后，将内含物用25％的乙腈/水(10mL)稀释，并通过RP-HPLC在XBridge Prep BEH300C18柱(5μm,10x 250mm)上使用30-70％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)以5mL/min的流速纯化超过15分钟。冻干后得到SQS-1-11-5-18(19)(5.5mg,65％产率)为白色粉末。

刺囊酸的双(甲硅烷基醚)(S14)。(AFT-I-206)将刺囊酸S13(18mg,38μmol,1.0当量)悬浮于CH₂Cl₂(10mL)中并在冰浴中冷却。然后加入2,6-卢剔啶(71μL,0.61mmol,16当量)，然后加入三乙基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(69μL,0.31mmol,8.0当量)，并且将所述反应混合物在0℃下搅拌1h。此后，将内含物用饱和NaHCO₃(5mL)洗涤，将水相用CH₂Cl₂(2×10mL)萃取。将合并的有机相用Na₂SO₄干燥、过滤并浓缩。粗产物通过硅胶色谱法(己烷至9:1的己烷/EtOAc)纯化以得到S14(25mg,94％产率)。

保护的刺囊酸皂苷叠氮化物S19。(AFT-I-212)将CH₂Cl₂(5mL)中的S14(25mg,36μmol,1.0当量)和亚胺酯12(50mg,45μmol,1.25当量)的溶液与40mg粉末状的分子筛一起冷却至-45℃，并且加入三氟化硼二乙醚化物(boron trifluoride diethyletherate)(0.9μL,7μmol,0.2当量)。将所述混合物在该温度下搅拌0.5h，用0.2mL的三乙胺淬灭并浓缩。通过硅胶色谱法(苯中的0.2％的三乙胺至97:3的苯/EtOAc)纯化残余物得到S19(48mg,80％产率)为白色固体。

保护的刺囊酸皂苷胺S31。(AFT-I-214)向溶解于三乙胺(25mL)的S19(52mg,31μmol,1.0当量)中通过插管加入新鲜制备的苯硒醇(0.94mmol,30当量)的溶液。将反应在38℃下搅拌8h，然后将溶液浓缩以得到黄白色固体。粗混合物通过硅胶色谱法(9:1至4:1的甲苯/EtOAc)来纯化以得到胺S31(42mg,83％产率)为玻璃状固体。

完全保护的氨酰基刺囊酸皂苷S22。(AFT-I-215)向0℃的四氢呋喃(2mL)中的6-((叔丁氧基羰基)-氨基)己酸(14)(44mg,0.19mmol,11.5当量)的透明无色溶液中加入三乙胺(208μL,1.49mmol,90当量)，然后加入氯甲酸乙酯(16.0μL,0.17mmol,10.0当量)。将混浊的白色溶液在0℃下搅拌2.5h，然后在0℃下通过插管加入到胺S31(27mg,16.6μmol,1.0当量)。将反应混合物在该温度下搅拌1.5h，然后用水(0.2mL)淬灭并浓缩。通过硅胶色谱法(9:1至5:1的苯/含0.2％的三乙胺的EtOAc)纯化得到S22(27mg,88％产率)为白色玻璃状固体。

氨酰基刺囊酸皂苷S25。(AFT-I-216)在含有S22(24mg,13μmol,1.0当量)的25mL圆底烧瓶中加入四氢呋喃/乙醇(6mL,1:1)和10％(干基)钯/炭、湿的德固赛型E101NE/W(138mg,65μmol,5.0当量)。将反应在氢气氛(气球)下在21℃下搅拌12h，然后通过0.45μm尼龙注射器过滤器过滤，用甲醇(3×10mL)洗涤并浓缩。在CD₃OD中通过¹H NMR由消失的芳香族共振来评估成功的脱苄基作用。然后将粗混合物溶解于预冷(0℃)的三氟乙酸(4mL,TFA/H₂O 3:1)溶液中，并在冰浴中搅拌1.25h。将反应物蒸发至干燥以得到白色固体，其被溶解于25％的乙腈/水(12mL)中，并通过RP-HPLC在XBridge Prep BEH300C18柱(5μm,10×250mm)上使用30-70％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)以5mL/min的流速纯化超过15分钟。将氨酰基刺囊酸皂苷S25洗脱为单峰，并且在冻干后得到白色粉末(7.0mg,53％产率)。

SQS-1-8-5-18(20)。(AF-I-223)将S25(7.0mg,6.8μmol,1.0当量)溶解于25mL圆底烧瓶中的N,N’-二甲基甲酰胺(2mL)中，并注入三乙胺(20μL,0.14mmol,20当量)。通过注射器滴加N,N’-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的4(11.8mg,34μmol,5.0当量)的溶液，并将反应在黑暗中在21℃下搅拌。3小时后，将内含物用25％的乙腈/水(9mL)稀释，并通过RP-HPLC在XBridge Prep BEH300C18柱(5μm,10x 250mm)上使用30-70％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)以5mL/min的流速纯化超过15分钟。将SQS-1-8-5-18(20)(6.8mg,80％产率)洗脱为单峰，并且在冻干后获得白色粉末。

丝石竹皂苷元(S16)。(AFT-I-218)在25mL圆底烧瓶中，将常春藤皂苷元S15(45mg,95μmol,1.0当量)悬浮于CH₂Cl₂(3.5mL)中，然后加入0.5M NaHCO₃(147mg)、0.05M K₂CO₃(24.2mg)、和四丁基氯化铵水合物(28mg,95μmol,1.0当量)的水溶液(3.5mL)。向剧烈搅拌的混合物中加入TEMPO(14.8mg,95μmol,1.0当量)，随后加入N-氯代琥珀酰亚胺(38.0mg,0.29mmol,3.0当量)，并且将反应在黑暗中搅拌2h。将内容物在分液漏斗中分配并用CH₂Cl₂(3×10mL)萃取。将合并的有机萃取物用Na₂SO₄干燥、过滤并浓缩以得到粗产物，将其通过硅胶色谱法(己烷/EtOAc，7:3)来纯化以得到所需的丝石竹皂苷元三萜S16(32mg,72％产率)。

丝石竹皂苷元的甲硅烷基醚(S17)。(AFT-I-219)在冰浴中冷却CH₂Cl₂(10mL)中的丝石竹皂苷元S16(32mg,68μmol,1.0当量)的悬浮液，并且注入2,6-卢剔啶(63μL,0.54mmol,8.0当量)和三乙基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(62μL,0.27mmol,4.0当量)。搅拌1h后，将内含物用饱和NaHCO₃(7mL)洗涤，并且将水相用CH₂Cl₂(3×10mL)萃取。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)、过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(己烷至4:1的己烷/EtOAc)纯化几次以得到S17(26mg,65％产率)。

保护的丝石竹皂苷元皂苷叠氮化物S20。(AF-1-224)将CH₂Cl₂(6mL)中的S17(26mg,44μmol,1.0当量)和亚胺酯12(55mg,49μmol,1.1当量)的溶液与40mg粉末状的分子筛一起在21℃下搅拌30min，冷却至-45℃，然后注入三氟化硼二乙醚化物(boron trifluoridediethyletherate)(1.1μL,9μmol,0.2当量)。将反应在该温度下搅拌0.5h，用三乙胺(0.2mL)淬灭并浓缩。通过硅胶色谱法(苯至97:3的苯/EtOAc)纯化得到所需产物加上一些不纯的混合物，其被进一步色谱纯化以得到S20(48mg,70％产率)为玻璃状固体。

保护的丝石竹皂苷元皂苷胺S32。(AF-I-225)向三乙胺(27mL)中的S20(50mg,32μmol,1.0当量)的溶液中通过插管加入新鲜制备的苯硒醇(1.07mmol,32当量)的溶液。在38℃下搅拌8h后，浓缩所述溶液以得到黄白色固体，将其通过硅胶色谱法(9:1至8:2的甲苯/EtOAc)纯化以得到S32(35mg,72％产率)为白色固体。

完全保护的氨酰基丝石竹皂苷元皂苷S23。(AFT-I-226)向0℃的四氢呋喃(3mL)中的14(61mg,0.27mmol,11.5当量)的溶液中加入三乙胺(290μL,2.1mmol,90当量)，然后加入氯甲酸乙酯(22μL,0.23mmol,10当量)，使透明溶液变为混浊白色。允许酸活化在0℃下进行2.5h，并将整个溶液插管转移至含有胺S32(35mg,23μmol,1.0当量)的舒伦克瓶中。将反应混合物在0℃下搅拌1.5h，然后用水(90μL)淬灭，此时所述溶液从浑浊的白色变为透明。然后将内含物蒸发至干燥，并通过硅胶色谱法(9:1至5:1的苯/含0.2％的三乙胺的EtOAc)纯化以得到S23(34mg,86％产率)为白色玻璃状固体。

氨酰基丝石竹皂苷元皂苷S26。(AF-I-227)在25mL圆底烧瓶中，将S23(27mg,15.5μmol,1.0当量)溶解于6mL四氢呋喃/乙醇(1:1)和10％(干基)钯碳中，加入湿的德固赛型E101NE/W(166mg,78μmol,5当量)。将反应在氢气氛(气球)下在21℃下搅拌12h。此后，将所述混合物通过0.45mm尼龙注射器过滤器过滤，用甲醇(20mL)洗涤并浓缩。在CD₃OD中通过¹HNMR由消失的芳香族共振来评估成功的脱苄基作用。然后将残余物溶解于预冷(0℃)的三氟乙酸/水溶液(4mL,3:1)中并在冰浴中搅拌1.25h。此后，将所述反应物蒸发至干燥以得到白色固体，其通过RP-HPLC使用30-70％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)以5mL/min的流速纯化超过15分钟。在冻干后，得到所需产物S26(13mg,82％产率)为白色粉末。

SQS-1-9-5-18(21)。(AF-I-230)在25mL的圆底烧瓶中，将胺S26(6.6mg,6.5μmol,1.0当量)溶解于N,N’-二甲基甲酰胺(2.0mL)中，并且注入三乙胺(18μL,0.13mmol,20当量)。向该溶液中滴加溶解于N,N’-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的4(11.1mg,32μmol,5.0当量)，并且将反应混合物在黑暗中在21℃下搅拌3h。此后，将内含物用9mL的25％的乙腈/水(0.05％TFA)稀释，并通过RP-HPLC使用30-70％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)以5mL/min的流速直接纯化超过15分钟。冻干后得到SQS-1-9-5-18(21)(4.5mg,56％产率)为白色粉末。

常春藤皂苷元的双(甲硅烷基醚)(S18)。(AFT-I-228)将常春藤皂苷元S15(35mg,74μmol,1.0当量)悬浮于CH₂Cl₂(15mL)中并在冰浴中冷却。然后加入2,6-卢剔啶(138μL,1.18mmol,16当量)，随后加入三乙基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(134μL,0.59mmol,8.0当量)，并且将反应混合物在0℃下搅拌1h。此后，将内含物用饱和NaHCO₃(10mL)洗涤，将水相用CH₂Cl₂(2×15mL)萃取。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)、过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法(己烷至4:1的己烷/EtOAc)纯化几次以得到S18(45mg,81％产率)。

保护的常春藤皂苷元皂苷叠氮化物S21。(AFT-I-232)将CH₂Cl₂(5mL)中的S18(28mg,40μmol,1.1当量)和亚胺酯12(41mg,36.7μmol,1.0当量)的溶液与35mg粉末状的分子筛一起冷却至-45℃，并且加入三氟化硼二乙醚化物(boron trifluoridediethyletherate)(0.9μL,7μmol,0.2当量)。将混合物在该温度下搅拌0.5h，用0.2mL的三乙胺淬灭并浓缩。通过硅胶色谱法(苯中的0.2％的三乙胺至98:2的苯/EtOAc)纯化残余物，得到S21(43mg,71％产率)为玻璃状固体。

保护的常春藤皂苷元皂苷胺S33。(AFT-I-233)向溶解于三乙胺(24mL)的S21(44mg,26.5μmol,1.0当量)中通过插管加入新鲜制备的苯硒醇(0.80mmol,30当量)的溶液。将反应在38℃下搅拌8h，然后将溶液浓缩以得到黄白色固体。粗混合物通过硅胶色谱法(9:1至4:1的甲苯/EtOAc)纯化以得到胺S33(34.5mg,80％产率)为玻璃状固体。

完全保护的氨酰基常春藤皂苷元皂苷S24。(AFT-I-234)向0℃的四氢呋喃(2.5mL)中的6-((叔丁氧基羰基)-氨基)己酸(14)(56mg,0.24mmol,11.5当量)的溶液中加入三乙胺(263μL,1.89mmol,90当量)，随后加入氯甲酸乙酯(20.0μL,0.21mmol,10.0当量)。将混浊的白色溶液在0℃下搅拌2.5h，然后通过插管在0℃下加入到胺S33(34.5mg,21.0μmol,1.0当量)中。将反应混合物在该温度下搅拌1.5h，然后用水(0.2mL)淬灭并浓缩。通过硅胶色谱法(9:1至5:1的苯/含0.2％的三乙胺的EtOAc)纯化得到S24(36.5mg,92％产率)为白色固体。

氨酰基常春藤皂苷元皂苷S27。(AFT-I-235)在25mL圆底烧瓶中，将S24(30mg,16.3μmol,1.0当量)溶解于四氢呋喃/乙醇(7mL,1:1)和10％(干基)钯/炭中，加入湿的、德固赛型E101NE/W(173mg,81μmol,5.0当量)。将反应在氢气氛(气球)下在21℃下搅拌12h，然后通过0.45μm尼龙注射器过滤器过滤，用甲醇(3×10mL)洗涤并浓缩。在CD₃OD中通过¹H NMR由消失的芳香族共振来评估成功的脱苄基作用。然后将粗混合物溶解于预冷(0℃)的三氟乙酸溶液(4mL,TFA/H₂O 3:1)中，并在冰浴中搅拌1.25h。将反应物蒸发至干燥，并且将白色固体溶于30％的乙腈/水(0.05％TFA)(14mL)，并通过RP-HPLC在XBridge Prep BEH300C18柱(5μm,10×250mm)上使用30-70％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)以5mL/min的流速纯化超过15分钟。冻干后得到所需产物S27为白色粉末(11.0mg,66％产率)。

SQS-1-10-5-18(22)。(AF-I-236)将S27(6.0mg,5.8μmol,1.0当量)溶解于25mL圆底烧瓶中的N,N’-二甲基甲酰胺(2.5mL)中，并注入三乙胺(16.3μL,0.12mmol,20当量)。通过注射器滴加N,N’-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的4(10.1mg,29μmol,5.0当量)的溶液，并将反应在21℃下搅拌3h。此后，将内含物用25％的乙腈/水(9mL)稀释，并通过RP-HPLC在XBridgePrep BEH300C18柱(5μm,10x 250mm)上使用30-70％的线性梯度的乙腈/水(0.05％TFA)以5mL/min的流速纯化超过15分钟。冻干后得到SQS-1-10-5-18(22)(4.2mg,57％产率)为白色粉末。

总之，基于QS-21的新型碘化皂苷的深入的结构-功能研究已经鉴定了刺囊酸衍生物20(SQS-1-8-5-18)作为具有有效活性以及与天然产物(图5)相比的显著降低的毒性以及相对于先前报道的变体的改善的合成可及性的微小皂苷免疫佐剂。由刺囊酸衍生物20以及紧密相关的皂皮酸衍生物16(SQS-1-0-5-18)和葳严仙皂苷元衍生物19(SQS-1-11-5-18)引发的IgG抗体的亚型显示出IgG1和IgG2b亚类占优势。小鼠IgG1亚类与Th2细胞应答(体液免疫)相关，而IgG2b与IgG2a一起与Th1应答(细胞免疫)相关，并且已知诱导有效的免疫治疗效应子的功能，包括补体依赖性细胞毒性和抗体依赖性细胞毒性。用SQS-21也获得类似的结果。因此，尽管这些截短型皂苷和QS 21之间存在相当大的结构差异，它们都引发Th1和Th2免疫，是QS 21本身的标志。

迄今为止，QS 21的三萜结构域内的结构要求的研究受到与天然产物的化学选择性修饰相关的挑战以及包含可选三萜的合成类似物的材料生产量限制的阻碍。因此，可以省略整个支链三糖结构域同时保留有效的佐剂活性并减弱毒性的发现已经为通过从可选的、容易得到的三萜前体开始的半合成来研究这种三萜修饰敞开了大门。

这些研究揭示了C4-醛取代基对于有效的佐剂活性是非必需的，而C16-羟基增强这些截短型皂苷的活性。相反地，先前已经提出QS 21的C4醛取代基通过席夫碱形成与T细胞表面受体上的氨基反应，提供T细胞活化和Th1细胞免疫所需的共刺激。该假说基于以下发现：QS 21的C4-醛取代基的还原性胺化提供具有显著减弱的佐剂活性的胺衍生物。然而，该修饰不仅除去C4-醛取代基，而且在该位置上引入带正电荷的氨基，其可能反而损害与推定受体的非共价相互作用或者干扰佐剂的适当生物分布或亚细胞定位。用类似的方法，保留C4-醛取代基但在酰基链结构域中携带带正电荷的氨基官能度的QS-21变体2(SQS-0-0-5-11)同样显示为无活性。尽管仍然可能的是QS 21和这些修饰的合成变体可具有不同的分子靶标，但它们似乎在体内诱导相似的细胞效应。

相反地，在此公开的C16-羟基增强这些截短型皂苷中的佐剂活性的发现表明该功能的先前未被发现的作用，可能是稳定皂苷构象和/或直接与推定的受体相互作用。这些结果与具有C16-羟基但缺乏三萜C4-醛取代基的其它佐剂活性皂苷的报道一致。

Claims (20)

1.式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，

其中，是单键或双键；

W是C(O)R、CH₂OR或CH₂R，其中，R是H，或任选被取代的选自酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族基、杂脂族基、脂环族基和杂环基的基团；

V是H或OH；

Y是O；

Z是线性低聚糖或任选被取代的选自胺基、酰胺基、酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族基、杂脂族基、脂环族基和杂环基的基团。

2.如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，Z是具有连接到线性四糖或线性三糖的一级糖残基的酰基链的线性四糖或线性三糖，其中，所述一级糖残基是直接连接到Y的糖残基。

3.如权利要求2所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，R是H。

4.如权利要求3所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，W是Me并且V是OH。

5.如权利要求3所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，W是CHO并且V是OH。

6.如权利要求3所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，W是CH₂OH并且V是OH。

7.如权利要求2至6中任意一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，所述连接到一级糖残基的酰基链是6-(4-碘苯甲酰基氨基)-己酰基。

8.式(II)的化合物，或其药学上可接受的盐，

或其药学上可接受的盐，其中，

W是C(O)R、CH₂OR或CH₂R；其中，R是H，或任选被取代的选自酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族基、杂脂族基、脂环族基和杂环基的基团；

V是H或OH，

X是CH₂R_m、C(O)R_m、CH₂OR_m、CH₂R_m、OR_m或NHR_m，其中，R_m是H，或任选被取代的选自酰基、芳烷基、芳基、杂芳基、脂族基、杂脂族基、脂环族基和杂环基的基团，并且

每次出现的Rn独立地是氢、单糖、二糖或三糖。

9.如权利要求8所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，R是H。

10.如权利要求9所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，W是Me并且V是OH。

11.如权利要求9所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，W是CHO并且V是OH。

12.如权利要求9所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，W是CH₂OH并且V是OH。

13.如权利要求8至12中任意一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，X是NHR_m，并且其中，R_m是6-(4-碘苯甲酰基氨基)-己酰基。

14.一种药物组合物，其包含：

权利要求1-13中任意一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，和

免疫学有效量的抗原。

15.一种使受试者免疫的方法，其包含：

向所述受试者施用权利要求14所述的药物组合物。

16.一种药物组合物，其包含：

权利要求1-13中任意一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，和

有效量的细胞毒性药物。

17.一种用于在受试者中增强细胞毒性药物的效果的方法，其包含：

向所述受试者施用权利要求16所述的药物组合物。

18.一种式(III)的化合物，

其中，W是Me、-CHO或-CH₂OH，并且V是H或OH。

19.权利要求18所述的化合物作为中间体在微小皂苷类似物的合成中的用途。

20.一种制备权利要求18所述的化合物的方法，包含如下步骤：

a)使式(100)的化合物与保护基反应以形成式(101)的化合物，其中，W是Me、CHO、CH₂OH或CH₂OR_p；其中，R_p是H或为实现区域选择性所必需的适当的保护基；V是H或OR_p，并且TES是三乙基甲硅烷基保护基；

b)使式(101)的化合物与式(102)的化合物反应以形成式(103)的化合物，其中，Bn是苯甲基保护基；

c)使式(103)的化合物与还原剂反应以形成式(104)的化合物；

d)在活化剂的存在下，使式(104)的化合物与式(105)的化合物偶联以形成式(106)的化合物，其中，Boc是叔丁氧羰基保护基；

e)将式(106)的化合物去保护以形成所述式(III)的化合物。