JP6774943B2 - 極小サポニンアナログ、その合成および使用 - Google Patents
極小サポニンアナログ、その合成および使用 Download PDFInfo
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Description
本出願は、2014年5月30日に出願された仮米国特許出願第62/005,302号の優先権を主張する。
本開示は、全般的にトリテルペングリコシドサポニン由来のアジュバント、その合成、およびその中間体に関する。本発明はまた、本発明の化合物を含む薬剤組成物、および感染症および癌の治療において前記化合物または組成物を使用する方法を提供する。
の構造を有する極小(最小)サポニンアナログ、または医薬として許容されるその塩に関する(式中、
の構造を有する極小サポニンアナログ、または医薬として許容されるその塩に関する(式中、WはC(O)R、CH2ORまたはCH2Rであり、RはH、またはアシル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、脂肪族、ヘテロ脂肪族、脂環式およびヘテロシクリル基から選択される任意選択で置換された基であり、VはHまたはOHであり;XはCH2Rm、C(O)Rm、CH2ORm、CH2Rm、ORm、またはNHRmであり、RmはH、またはアシル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、脂肪族、ヘテロ脂肪族、脂環式およびヘテロシクリル基から選択される任意選択で置換された基であり、かつRnの各存在は独立に水素、単糖、二糖または三糖である)。
の化合物に関する、(式中WはMe、−CHO、または−CH2OHであり、かつVはHまたはOHである)。
本明細書では、別段の指示がない限り、以下の定義を適用するものとする。
S−ベンジル、カルバミン酸p−シアノベンジル、カルバミン酸シクロブチル、カルバミン酸シクロヘキシル、カルバミン酸シクロペンチル、カルバミン酸シクロプロピルメチル、カルバミン酸p−デシルオキシベンジル、カルバミン酸2,2−ジメトキシカルボニルビニル、カルバミン酸o−(N,N−ジメチルカルボキシアミド)ベンジル、カルバミン酸1,1−ジメチル−3−(N,N−ジメチルカルボキシアミド)プロピル、カルバミン酸1,1−ジメチルプロピニル、メチルカルバミン酸ジ(2−ピリジル)、カルバミン酸2−フラニルメチル、カルバミン酸2−ヨードエチル、カルバミン酸イソボルニル(isoborynl)、カルバミン酸イソブチル、カルバミン酸イソニコチニル、カルバミン酸p−(p’−メトキシフェニルアゾ)ベンジル、カルバミン酸1−メチルシクロブチル、カルバミン酸1−メチルシクロヘキシル、カルバミン酸1−メチル−1−シクロプロピルメチル、カルバミン酸1−メチル−1−(3,5−ジメトキシフェネチル)エチル、カルバミン酸塩1−メチル−1−(p−フェニルアゾフェニル)エチル、カルバミン酸1−メチル−1−フェニルエチル、カルバミン酸1−メチル−1−(4−ピリジル)エチル、カルバミン酸塩フェニル、カルバミン酸p−(フェニルアゾ)ベンジル、カルバミン酸2,4,6−トリ−t−ブチルフェニル、カルバミン酸4−(トリメチルアンモニウム)ベンジル、カルバミン酸2,4,6−トリメチルベンジル、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、3−フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、3−ピリジルカルボキサミド、N−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、p−フェニルベンズアミド、o−ニトロフェニルアセトアミド(nitophenylacetamide)、o−ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド、(N’−ジチオベンジルオキシカルボニルアミノ)アセトアミド、3−(p−ヒドロキシフェニル)プロパンアミド、3−(o−ニトロフェニル)プロパンアミド、2−メチル−2−(o−ニトロフェノキシ)プロパンアミド、2−メチル−2−(o−フェニルアゾフェノキシ)プロパンアミド、4−クロロブタンアミド、3−メチル−3−ニトロブタンアミド、o−ニトロシンナミド、N−アセチルメチオニン誘導体、o−ニトロベンズアミド、o−(ベンゾイルオキシメチル)ベンズアミド、4,5−ジフェニル−3−オキサゾリン−2−オン、N−フタルイミド、N−ジチアスクシンイミド(Dts)、N−2,3−ジフェニルマレイミド、N−2,5−ジメチルピロール、N−1,1,4,4−テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加物(STABASE)、5−置換型1,3−ジメチル−1,3,5−トリアザシクロヘキサン−2−オン、5−置換型1,3−ジベンジル−1,3,5−トリアザシクロヘキサン−2−オン、1置換型3,5−ジニトロ−4−ピリドン、N−メチルアミン、N−アリルアミン、N−[2−(トリメチルシリル)エトキシ]メチルアミン(SEM)、N−3−アセトキシプロピルアミン、N−(1−イソプロピル−4−ニトロ−2−オキソ−3−ピロリン(pyroolin)−3−イル)アミン、第四級アンモニウム塩、N−ベンジルアミン、N−ジ(4−メトキシフェニル)メチルアミン、N−5−ジベンゾスベリルアミン、N−トリフェニルメチルアミン(Tr)、N−[(4−メトキシフェニル)ジフェニルメチル]アミン(MMTr)、N−9−フェニルフルオレニルアミン(PhF)、N−2,7−ジクロロ−9−フルオレニルメチレンアミン、N−フェロセニルメチルアミノ(Fcm)、N−2−ピコリルアミノN’−オキシド、N−1,1−ジメチルチオメチレンアミン、N−ベンジリデンアミン、N−p−メトキシベンジリデンアミン、N−ジフェニルメチレンアミン、N−[(2−ピリジル)メシチル]メチレンアミン、N−(N’,N’−ジメチルアミノメチレン)アミン、N,N’−イソプロピリデンジアミン、N−p−ニトロベンジリデンアミン、N−サリチリデンアミン、N−5−クロロサリチリデンアミン、N−(5−クロロ−2−ヒドロキシフェニル)フェニルメチレンアミン、N−シクロヘキシリデンアミン、N−(5,5−ジメチル−3−オキソ−1−シクロヘキセニル)アミン、N−ボラン誘導体、N−ジフェニルボリン酸誘導体、N−[フェニル(ペンタカルボニルクロム―またはタングステン)カルボニル]アミン、N−銅キレート、N−亜鉛キレート、N−ニトロアミン、N−ニトロソアミン、アミンN−オキシド、ジフェニルホスフィンアミド(Dpp)、ジメチルチオホスフィンアミド(Mpt)、ジフェニルチオホスフィンアミド(Ppt)、ホスホルアミド酸ジアルキル、ホスホルアミド酸ジベンジル、ホスホルアミド酸ジフェニル、ベンゼンスルフェンアミド、o−ニトロベンゼンスルフェンアミド(Nps)、2,4−ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、2−ニトロ−4−メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミド、3−ニトロピリジンスルフェンアミド(Npys)、p−トルエンスルホンアミド(Ts)、ベンゼンスルホンアミド、2,3,6−トリメチル−4−メトキシベンゼンスルホンアミド(Mtr)、2,4,6−トリメトキシベンゼンスルホンアミド(Mtb)、2,6−ジメチル−4−メトキシベンゼンスルホンアミド(Pme)、2,3,5,6−テトラメチル−4−メトキシベンゼンスルホンアミド(Mte)、4−メトキシベンゼンスルホンアミド(Mbs)、2,4,6−トリメチルベンゼンスルホンアミド(Mts)、2,6−ジメトキシ−4−メチルベンゼンスルホンアミド(iMds)、2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−6−スルホンアミド(Pmc)、メタンスルホンアミド(Ms)、β−トリメチルシリルエタンスルホンアミド(SES)、9−アンスラセンスルホンアミド、4−(4’,8’−ジメトキシナフチルメチル)ベンゼンスルホンアミド(DNMBS)、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミド、およびフェナシルスルホンアミドが挙げられる。例示的な保護基を、本明細書に詳述するが、本発明は、これらの保護基に限定することを意図せず、むしろ、様々なさらなる同等の保護基を、上の基準を使用して容易に特定することができ、本発明の方法に利用することができることを理解されたい。加えて、様々な保護基は、GreeneおよびWuts(上記)によって記載されている。
本出願の一態様は、標準的サポニン分子の分枝状三糖ドメインを含まない極小サポニンアナログ(「切断サポニン」とも呼ばれる)に関する。1つの実施形態では、極小サポニンアナログは式(I):
の化学構造を有する化合物、または医薬として許容されるその塩である(式中
Wはメチル、−CHO、−CH2ORx、または−C(O)Ryであり;
Vは水素または−ORxであり;
YはCH2、−O−、−NR−、または−NH−であり;
Rは水素、アシル、アリールアルキル、6〜10員環アリール、C1〜12脂肪族またはC1〜C12ヘテロ脂肪族から選択される任意選択として置換された基であり;
Zは水素、環式または非環式、アシル、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、アルキルアリール、ヘテロシクリル、およびヘテロアリールから選択される任意選択として置換された部分であるか;またはZは糖質を含み;
Rxの各存在は独立に水素またはアルキルエーテル、ベンジルエーテル、シリルエーテル、アセタール、ケタール、エステル、カルバミン酸および炭酸からなる群から選択される酸素保護基であり;
RyはOH、−OR、またはその結合するカルボニル基と合わせるとカルボキシル保護基が、エステル、アミド、またはヒドラジドであるカルボキシル保護基である)。
の構造を有する極小サポニンアナログまたは医薬として許容されるその塩に関する(式中、WはC(O)R、CH2ORまたはCH2Rであり、RはH、またはアシル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、脂肪族、ヘテロ脂肪族、脂環式およびヘテロシクリル基から選択される任意選択として置換された基であり、VはHまたはOHであり;XはCH2Rm、C(O)Rm、CH2ORm、CH2Rm、ORm、またはNHRmであって、RmがH、またはアシル、アリールアルキル、アリール、ヘテロアリール、脂肪族、ヘテロ脂肪族、脂環式およびヘテロシクリル基から選択される任意選択として置換された基であり、かつRnの各存在は独立に水素、単糖、二糖または三糖である)。
の構造を有する前駆体より生成される(式中WはMe、−CHO、または−CH2OHであり、かつVはHまたはOHである)。
本出願の他の態様は、本出願の極小サポニンアナログを調製するためのプロセスに関する。ある実施形態では、プロセスは式(III)の構造を有する前駆体の生成を含む。ある実施形態では、式(III)の前駆体は以下の:
a)式(100)の化合物を保護基と反応させて式(101)の化合物を形成するステップ(式中WはMe、CHO、CH2OH、またはCH2ORpであり;RpはHまたは必要に応じて位置選択性(regioselectivity)保護基であり;VはHまたはORpであり、またTESはトリエチルシリル保護基である);
e)式(106)の化合物を脱保護して式(III)の化合物を形成するステップ;で生成される。
本出願の他の態様は、抗原と、アジュバントとして本出願の極小サポニンアナログを含むワクチン組成物に関する。ある実施形態では、ワクチン組成物は追加的なアジュバントをさらに含む。
本出願の他の態様は、式(I)の極小サポニンアナログまたはその塩によって、抗癌剤などの細胞障害性薬剤の効果を促進するための方法に関する。細胞障害性薬剤の例には、限定はされないが、ベンダムスチン、ブスルファン、カルムスチン、クロラムブシル、シクロフォスファミド、ダカルバジン、イホスファミド、メルファラン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、テモゾロミドなどのアルキル化剤;アクチノマイシンD/ダクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ドキソルビシン(ペグ化リポソーム)、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン、ミトキサントロンなどの抗腫瘍抗生物質;エトポシド、ドセタキセル、イリノテカン、パクリタキセル、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビンなどの植物アルカロイド/微小管阻害剤;アスパラギナーゼ、カペシタビン、シタラビン、5−フルオロウラシル、フルダラビン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ペメトレキセド、ラルチトレキセドなどの抗代謝剤;カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチンなどのDNA架橋剤;クロドロネート、イバンドロン酸、パミドロネート、ゾレンドロン酸などのビスホスホネート;アレムツザマブ、BCG、ベバシズマブ、セツキシマブ、デノスマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、インターフェロン、イピリムマブ、ラパチニブ、パニツムマブ、リツキシマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、テムシロリムス、トラツズマブなどの生物学的製剤;アナストロゾール、アビラテロン、アミホスチン、ベクサロテン、ビカルタミド、ブセレリン、シプロテロン、デガレリクス、エキセメスタン、フルタミド、フォリン酸、フルベストラント、ゴセレリン、ランレオチド、レナリドミド、レトロゾール、リュープロレリン、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メスナ、オクトレオチド、スチルベストロール、タモキシフェン、サリドマイド、トリプトレリンなどのホルモン/その他を含む抗癌剤が含まれる。
本出願の他の態様は、被験体に治療的に有効な量の式(I)の化合物を投与することを含む、被験体の感染症を治療する方法に関する。ある実施形態では、感染症は細菌性である。ある実施形態では、感染症はウイルス性である。ある実施形態では、感染症は原虫性である。ある実施形態では、被験体はヒトである。
本極小サポニンアナログは、医薬組成物を形成するために、医薬として許容される賦形剤と組み合わせることができる。ある種の実施形態では、医薬組成物は、医薬として許容される量の本発明化合物を含む。単一の剤形をもたらすために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、治療される宿主および投与の特定の方式に応じて変動することとなる。単一の剤形をもたらすために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、一般に、治療効果をもたらす化合物の量となる。通常、この量は、約1%から約99%、好ましくは約5%から約70%、最も好ましくは約10%から約30%の活性成分となる。
放射ヨウ素(131I)をQS−21サポニン骨格に導入してインビボ生体分布研究を可能とした。アミン2(SQS−0−0−5−11)のアシル化により非放射能標識ヨウ化アリール6(SQS−0−0−5−18)を合成した(図1b)。アジュバント活性を評価するインビトロモデルが存在しないので、ヨウ化アリール6の生物学的評価は、高免疫原性KHL担体タンパク質とコンジュゲートした免疫原性ペプチドMUC1(前立腺癌および乳癌抗原、非グリコシル化縦列反復配列)(MUC1−KLH)と、マウスの抗体およびT細胞応答の双方を誘導する信頼性の高い免疫原であるOVAから構成される多抗原製剤を包含する前臨床マウス接種モデルで遂行した。目的のアジュバントと同時投与した3つの抗原のそれぞれに対する抗体応答を、ELISAで測定した。
生体内分布試験用に、放射標識ヨウ化アリールサポニン[131I]−6([131I]−SQS−0−0−5−18)を、トリメチルスタンナン7のアリールスズ−ハロゲン化物交換を介して合成した(図1b)。同様に、ネガティブコントロールとして9から放射ヨウ素化[131I]−8([131I]−SQS−0−3−7−18)を合成した(図1c)。
必須トリテルペン核をヒドロキシル基で選択的にシリル化して(TESOTf、2,6−ルチジン)遊離C28カルボン酸を有する保護トリテルペンを提供した。三糖トリクロロアセトイミド酸ドナー12によるβ選択的シュミットグリコシル化(BF3・OEt2)(Chea,E.K.他、簡素化ワクチンアジュバントおよび機構的プローブをもたらすQS−21変異体の合成および前臨床評価.J.Am.Chem.Soc.134,13448‐13457(2012))の後、アジドを還元して(PhSeH)対応するグリコシルエステルを得た。6−((t−ブトキシカルボニル)−アミノ)ヘキサン酸(14)によるアミンのアシル化(EtOCOCl、Et3N)およびその後の水素分解(H2、Pd/C)および酸加水分解(TFA/H2O)による全体的脱保護によって、完全に脱保護されてアシル鎖ドメインの末端に遊離アミン基を担持するサポニンが得られた。後半の、スクシンイミジルエステル4または5によるアミンのアシル化によって、対応するヨウ化アリール16、18〜22または対応するアリールスズ同族体がそれぞれ得られた(図3a)。
5匹のマウス群(C57BL/6J、雌性、6〜8週齢)に、MUC1−KLH(2.5mg)およびOVA(20mg)からなる3成分ワクチン、またはGD3−KLH(5mg)をさらに含む4成分ワクチンを接種した。抗原は、0、7、14日目に、リン酸緩衝化生理食塩水(PBS、100mL)中で目的のアジュバント(5、20、または50mg)と同時投与、またはアジュバントなしで投与し(非アジュバント対照)、その後65日目に追加免疫した。72日目にマウス血清を採取し、各抗原に対する抗体価をELISAで測定した。非アジュバント対照と比較した各抗体応答の統計的有意性を、対応のない両側Student t−検定でCI=95%として評価した。初期一般毒性評価として、マウスの体重減少を初回接種より0、1、2、3、および7日後にモニタリングした。これらの動物実験は、MSKCC動物実験委員会(IACUC)プロトコル#97−11−051の記載にしたがって実施した。
5匹のマウス群(未接種、C57BL/6J雌性、8〜10週齢)に、PBS(150μL)中の目的の放射ヨウ素化サポニンアジュバント(約25mCi)、対応する非放射標識サポニン(20mg)、およびOVA(20mg)を皮下注射した。注射より24時間、72時間、および96時間後にマウスを屠殺した。組織および臓器を回収し、臓器重量に対して正規化した放射能分布を分析した(%ID/g、1g毎の注射用量百分率)。活性アジュバントと減弱化アジュバントの回収量(%ID/g)の差の統計的有意性を、対応のない両側Student t−検定を用い、組織または臓器毎にCI=95%で評価した。実験開始時には、注射後24時間から96時間の間で生体内分布プロフィールに相当な変化はなく、その後の実験では24時間後の測定点を用いた。
出発変異体6(SQS−0−0−5−18)および8(SQS−0−3−7−18)の合成
(EC−V−056)アミン2(Chea,E.K.他、簡素化ワクチンアジュバントおよび機構的プローブをもたらすQS−21変異体の合成および前臨床評価.J.Am.Chem.Soc.134,13448−13457(2012)を参照)(9.0mg、6.0μmol、1.0当量)のN,N’−ジメチルホルムアミド(2.0mL)溶液に、トリエチルアミン(50μL、0.36mmol、60当量)を投入し、混合物を21℃で50分間攪拌した。次に、ヨウ化アリール4((a)Zhi,Y.−G.他、オリゴ(アリーレン−エチニレン)の光ルミネッセンスに関する体系的研究:励起状態の同調性およびタンパク質に対する発光標識プローブとしての誘導体化.Eur.J.Org.Chem.3125−3139(2006);(b)Shell,T.A.,Mohler,D.L.スペルミン−[CpW(CO)3Ph]2コンジュゲートによるDNA−ヒストンアセンブリ内の回裂を目的としたDNAの選択的ターゲティング.Org.Biomol.Chem.3,3091−3093(2005)を参照)(20mg、60μmol、10当量)のN,N’−ジメチルホルムアミド(0.6mL)溶液を一滴ずつ添加し、反応物を21℃で1時間攪拌した。内容物を20%アセトニトリル/水(10mL)で希釈し、XBridgePrep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、20−70%アセトニトリル/水リニアグラジエントを用いたRP−HPCLにより、流速5mL/分で30分間直接的に精製した。凍結乾燥後にSQS−0−0−5−18(6)(5.4mg、収率52%)を白色粉末として得た。
(EC−V−052)アミン2(2.0mg、1.3μmol、1.0当量)のN,N’−ジメチルホルムアミド(0.9mL)溶液に、トリエチルアミン(10μL、72μmol、55当量)を投入し、混合物を21℃で50分間攪拌した。次に、N,N’−ジメチルホルムアミド(0.2mL)中のアリールスズ5(Koziorowski,J.,Henssen,C.,Weinreich,R.タンパク質の放射ヨウ素化用の2種類の試薬である放射ヨウ素化3−および4−ヨード安息香酸N−スクシンイミジルへの新たな簡便な経路.Appl.Radiat.Isot.49,955‐959(1998))(2.0mg,5.2μmol、4.0当量)のを1滴ずつ添加し、反応物を21℃で1時間攪拌した。この時より後、内容物を20%アセトニトリル/水(10mL)で希釈し、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、20−70%アセトニトリル/水リニアグラジエントを用いたRP−HPCLにより、流速5mL/分で30分間直接的に精製した。凍結乾燥後、サポニン7(1.8mg、収率78%)を白色粉末として得た。
(EC−V−191)酸S1(Deng,K.,Adams,M.M.,Gin,D.Y.ワクチンアジュバントQS−7−Apiの合成および構造確認.均一なQuillaja saponaria免疫賦活物質への合成アクセス.J.Am.Chem.Soc.130,5860−5861(2008))(50mg、24μmol、1.0当量)のジクロロメタン(1.56mL)溶液およびピリジン(40μL、0.50mmol、20.5当量)を氷浴で冷却した。5分間攪拌後、塩化チオニル(20μL、0.28mmol、11.5当量)を投入した後、N,N’−ジメチルホルムアミド(6.25μL、0.081mmol、3.4当量)を添加し、21℃で1.5時間攪拌した。生成した透明黄色溶液を濃縮して非晶質白色固形物を得、次にこれをピリジン(40μL、0.50mmol、20.5当量)を含有するジクロロメタン(1.6mL)に再溶解した。溶液にS2(0.1mL、0.62 mmol、25.8当量)を投入すると、橙色が生じた。30分後、反応物をCH2Cl2(30mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム(30mL)で洗浄した。水相をCH2Cl2(2×30mL)で抽出し、有機相を合わせてNa2SO4で乾燥し、濾過し、蒸発乾燥して淡黄色の油状物質を得た。シリカゲルクロマトグラフィ(4:1ヘキサン/EtOAc)で精製してS3(48mg、収率91%)をガラス状固形物として得た。
(EC−IV−187)10mL丸底フラスコ内で、S3(24mg、10.8μmol、1.0当量)をテトラヒドロフラン/エタノール(5mL、1:1)に溶解し、さらに10%(乾燥時)炭素担持パラジウム(wet)、水湿潤、DegussaタイプE101 NE/W(63mg、29.6μmol、2.7当量)を添加した。反応物を、水素加圧(50psi)下、21℃で24時間攪拌した。生成した部分脱シリル化生成物の粗混合物を0.45μmナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノール(20mL)、CH2Cl2(10mL)、および再度メタノール(5mL)ですすぎ、澄明な濾液を蒸発乾固した。脱ベンジル化の成功は、CD3OD中での1H NMRによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、生成した混合物を氷浴中でトリフルオロ酢酸/水(2mL、4:1)に3.3時間付し、次に蒸発乾固してピンク色の固形物を得た。得られた粗生成物を、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、20−95%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたRP−HPCLにより、流量5mL/分で20分間精製した。サポニンS4(5.4mg、収率50%)が幅広い単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末として存在した。
(EC−IV−194)S4(7.1mg、7.1μmol、1.0当量)のN,N’−ジメチルホルムアミド(0.4mL)溶液に、トリエチルアミン(20μL、0.14mmol、20当量)を投入した後、N,N’−ジメチルホルムアミド(0.4mL)中の4(14mg、40.6μmol、5.7当量)のを一滴ずつ添加した。3時間攪拌した後、内容物を水10mL(TFA0.05%)で希釈し、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、30−80%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたRP−HPCLにより、流量5mL/分で30分間精製した。SQS−0−3−7−18(8)(5.9mg、収率68%)が単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末として存在した。
(EC−IV−193)トリエチルアミン(20μL、0.14mmol、40当量)を含有するN,N’−ジメチルホルムアミド(0.2mL)に溶解したS4(3.6mg、3.6μmol、1.0当量)溶液に、5(5mg、13.1μmol、3.6当量)のN,N’−ジメチルホルムアミド(0.1mL)溶液を一滴ずつ添加した。2.5時間攪拌した後、内容物を水(4mL)で希釈し、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、20−95%アセトニトリル/水リニアグラジエントを用いたRP−HPLCを介して、流量5mL/分で30分間精製した。サポニン9(2.4mg、収率53%)が単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末として得られた。
(AFT−II−040)キラ酸10(200mg、0.41mmol、1.0当量)のCH2Cl2(20mL)懸濁液を氷浴で冷却し、2,6−ルチジン(0.48mL、4.1mmol、10当量)およびトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル(0.46mL、2.06mmol、5.0当量)を投入した。1時間攪拌した後、内容物を飽和NaHCO3(10mL)で洗浄し、水相をCH2Cl2(2×15mL)で抽出し、合わせた有機相をNa2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィ(ヘキサン−4:1ヘキサン/EtOAc)で精製して11を得た(235mg、収率80%)。
(AFT−I−165)11(38mg、49μmol、1.05当量)およびイミデート12(52mg、47μmol、1.0当量)のCH2Cl2(7mL)溶液に、粉末化4Å分子ふるい80mgを添加し、混合物を21℃で30分間攪拌した。次に反応シュレンクを−35℃に冷却し、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート(1.2μL、9.0μmol、0.2当量)を投入した。混合物をこの温度で0.5時間攪拌し、トリエチルアミン0.2mLでクエンチングし、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ(0.2%トリエチルアミンベンゼン溶液−97:3ベンゼン/EtOAc)で精製して無色の油状物質を得、さらにクロマトグラフィを実施して所望の生成物S28(56mg、収率72%)を白色固形物として得た。
(AFT−I−167)トリエチルアミン(28mL)に溶解したS28(62mg、37μmol、1.0当量)に、用時調製したフェニルセレノール(1.1mmol、30当量)溶液を、カニューレを介して添加した。フェニルセレノールの添加後に白色の沈殿が形成され、溶液は明るい黄色となった。反応物を38℃で8時間攪拌し、その後溶液を濃縮して黄白色固形物を得た。粗混合物をシリカゲルクロマトグラフィ(90:10−85:15ベンゼン/EtOAcで精製してアミン13をガラス状固形物として得た(49mg、収率80%)。
(AFT−I−169)0℃の透明で無色な6−((t−ブトキシカルボニル)−アミノ)ヘキサン酸(14)(45mg、0.20mmol、11.5当量)のテトラヒドロフラン(2.5mL)溶液に、トリエチルアミン(213μL、1.53mmol、90当量)、続いてクロロホルム酸エチル(16.0μL、0.17mmol、10.0当量)を添加した。濁った白色の溶液を0℃で2.5時間攪拌した後、カニューレを介して0℃のアミン13(28mg、17.0μmol、1.0当量)に添加した。反応混合物をこの温度で1.5時間攪拌した後、水(0.2mL)でクエンチングして透明な溶液を得た。内容物を飽和NaHCO3(30mL)で希釈し、水相をCH2Cl2で抽出した(3×25mL)。合わせた有機相を乾燥し(Na2SO4)、濾過し、蒸発乾固した。シリカゲルクロマトグラフィ(2:1ヘキサン/トリエチルアミン0.2%含有EtOAc)で精製してS10(28mg、収率88%)を白色ガラス状固形物として得た。
(AFT−I−204)50mL丸底フラスコ内で、S10(68mg、36.6μmol、1.0当量)をテトラヒドロフラン/エタノール(20mL、1:1)に溶解し、さらに10%(乾燥時)炭素担持パラジウム(wet)、DegussaタイプE101 NE/W(390mg、0.18μmol、5.0当量)を添加した。反応物を水素加圧下(50psi)、21℃で24時間攪拌し、懸濁液を0.45μmナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノールで洗浄し(3×30mL)濃縮した。脱ベンジル化の成功は、CD3OD中での1H NMRによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、粗混合物をトリフルオロ酢酸(8mL、TFA/H2O 3:1)の溶液に溶解し、氷浴中で2時間攪拌した。反応物を蒸発乾固して白色固形物を得、これを20%アセトニトリル/水(20mL)に溶解し、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、30−70%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたRP−HPLCを介して、流速5mL/分で15分間精製した。アミノアシルキラ酸サポニン15が単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末(28mg、収率74%)として得られた。
(AFT−I−300)15(2.1mg、2.0μmol、1.0当量)のN,N’−ジメチルホルムアミド(0.4mL)溶液に、トリエチルアミン(11μL、0.08mmol、40当量)を添加した後、4(4.0mg、10μmol、5.8当量)のN,N’−ジメチルホルムアミド(0.2mL)溶液を一滴ずつ添加した。2時間攪拌した後、内容物を30%アセトニトリル/水(2.3mL)で希釈し、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、30−70%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたRP−HPLCにより、流量5mL/分で15分間精製した。凍結乾燥後にSQS−1−10−5−18(16)(1.7mg、収率67%)を白色粉末として得た。
(EC−IV−227)N,N’−ジメチルホルムアミド(0.2mL)に溶解した15(0.65mg、0.63μmol、1.0当量)に、トリエチルアミン(10μL、72mmol、114当量)および5(1.0mg、2.6μmol、4.1当量)を添加した。1.5時間攪拌した後、反応物を水(4mL)で希釈し、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、35−95%アセトニトリル/水リニアグラジエントを用いたRP−HPLCを介して、流量5mL/分で30分間精製した。サポニン17(0.6mg、収率75%)が単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末として得られた。
(AFT−I−137)0℃のオレアノール酸S5(250mg、0.55mmol、1.0当量)のCH2Cl2(10mL)溶液に、2,6−ルチジン(0.38mL、3.28mmol、6.0当量)、およびトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル(0.37mL、1.64mmol、3.0当量)を添加し、混合物を1時間攪拌した。内容物を0.5N HCl(10mL)でクエンチングし、水相をCH2Cl2で抽出した(2×15mL)。合わせた有機相をNa2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮し、最後にシリカゲルクロマトグラフィ(ヘキサン−4:1ヘキサン/EtOAc)で精製してS29を得た(250mg、収率80%)。
(EC−V−215)S29(50mg、87μmol、1.0当量)およびイミデート12(97mg、87μmol、1.0当量)のCH2Cl2(8.0mL)溶液に、粉末化4Å分子ふるい120mgを添加し、混合物を21℃で1時間攪拌した。次に反応シュレンクを−78℃の浴槽に移し、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート(8.8μL、70μmol、0.8当量)を投入した。反応物を−50℃で20分間、21℃で1分間攪拌し、再度−50℃に冷却し、20分間攪拌し、最後に再度21℃で1分間攪拌した。次に−50℃で混合物をトリエチルアミン(0.1mL)でクエンチングし、シリカゲル栓を通過させた。生成した濾液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィ(ヘキサン−5:1ヘキサン/EtOAc)で精製し、S6をガラス状固形物として得た(89mg、収率68%)。
(EC−V−216)トリエチルアミン(12mL)に溶解したS6(44mg、29μmol、1.0当量)に、用時調製したフェニルセレノール(0.44mmol、15当量)溶液を、カニューレを介して添加した。フェニルセレノールの添加後に白色の沈殿が形成され、混合物は明るい黄色となった。38℃で8時間攪拌後、溶液を濃縮して黄白色の固形物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィ(5:1ヘキサン/EtOAc−2%トリエチルアミンEtOAc溶液)で精製してS30(41mg、収率95%)を白色固形物として得た。
(EC−IV−217)14(63mg、0.27mmol、10当量)のテトラヒドロフラン(2.6mL)溶液に、トリエチルアミン(365μL、2.6mmol、96当量)を0℃で添加した。透明無色の溶液に、クロロホルム酸エチル(23μL、0.25mmol、9.0当量)を投入すると、溶液は白濁した。酸活性化を0℃で2.5時間進行させた後、溶液全体を、アミンS30(41mg、27μmol、1.0当量)を収容するシュレンクにカニューレを介して移した。反応混合物を0℃で1.5時間攪拌した後、水(90μL)でクエンチングし、この時点で溶液は白濁から透明に変化した。次に、内容物を蒸発乾固してシリカゲルクロマトグラフィ(5:1ヘキサン/EtOAc)で精製し、S7を白色ガラス状固形物として得た(40mg、収率81%)。
(EC−IV−218)S7(10mg、5.8μmol、1.0当量)を収容する25mL丸底フラスコ内に、テトラヒドロフラン/エタノール(2mL、1:1)、続いて10%(乾燥時)炭素担持パラジウム(wet)、DegussaタイプE101 NE/W(14.0mg、6.5μmol、1.1当量)を添加した。反応物を水素加圧下(50psi)、21℃で24時間攪拌した後、0.45mmナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノール(20mL)、CH2Cl2(10mL)、および再度メタノール(5mL)でパラジウムを完全に洗った。透明な濾液を蒸発乾固した。脱ベンジル化の成功は、CD3OD中での1H NMRによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、混合物をトリフルオロ酢酸/水溶液(2mL、4:1)に溶解し、氷浴中で2時間攪拌した。この時より後、反応物を蒸発乾固して白色固形物を得、30−80%アセトニトリル/水(TFA0.1%)リニアグラジエントを用いたRP−HPLCにより、流量5mL/分で20分間精製した。凍結乾燥後、所望の生成物S8(2.6mg、収率44%)を白色粉末として得た。
(EC−IV−221)アミンS8(1.3mg、1.3μmol、1.0当量)をN,N’−ジメチルホルムアミド(0.2mL)に溶解し、トリエチルアミン(3.6μL、25.6μmol、20当量)を投入した。この溶液に、4(2.5mg、7.3μmol、5.7当量)を添加し、反応混合物を21℃で2時間攪拌した。この時より後、内容物を水3mL(TFA0.05%)で希釈し、30−80%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたHPLCにより、流量5mL/分で20分間直接的に精製し、凍結乾燥後にSQS−1−7−5−18(18)(1.0mg、収率63%)を白色粉末として得た。
(EC−V−222)アミンS8(1.3mg、1.3μmol、1.0当量)のN,N’−ジメチルホルムアミド(0.2mL)溶液に、トリエチルアミン(3.6μL、25.6μmol、20当量)、その後5(2.6mg、6.8μmol、5.2当量)を添加した。21℃で1.5時間攪拌した後、反応物を水3mLで希釈し、30−90%アセトニトリル/水リニアグラジエントを用いたRP−HPLCにより、流量5mL/分で30分間直接的に精製し、凍結乾燥後にS9(1.0mg、収率62%)を白色粉末として得た。
(AFT−I−243)S10(10mg、5.4μmol)のメタノール(1.0mL)溶液にNaBH4を添加し、反応物を21℃で3時間攪拌した。次に、混合物をアセトン(2mL)で希釈し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィ(85:15ベンゼン/EtOAc)で精製してS11を得た(10mg、収率>99%)。
(AFT−I−244)25mL丸底フラスコ内で、S11(15mg、8.1μmol、1.0当量)をテトラヒドロフラン/エタノール(1:1)4.0mLに溶解し、さらに10%(乾燥時)炭素担持パラジウム(wet)、DegussaタイプE101 NE/W(85mg、0.04mmol、5.0当量)を添加した。反応物を水素雰囲気下(バルーン)、21℃で12時間攪拌し、懸濁液を0.45μmナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノールで完全に洗浄し(4×20mL)、濃縮した。脱ベンジル化の成功は、CD3OD中での1H NMRによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、粗混合物をあらかじめ冷却(0℃)したトリフルオロ酢酸(3.2mL、TFA/H2O 3:1)に溶解し、0℃で1.25時間攪拌した。反応物を蒸発乾固し、粗生成物を20%アセトニトリル/水(8mL)に溶解し、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、20−70%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたRP−HPLCを介して、流量5mL/分で20分間精製した。凍結乾燥後、所望の生成物S12(5.8mg、収率70%)を白色粉末として得た。
(AFT−I−245)S12(7.0mg、6.7μmol、1.0当量)のN,N’−ジメチルホルムアミド(1.3mL)溶液に、トリエチルアミン(20μL、0.13mmol、20当量)を投入した後、N,N’−ジメチルホルムアミド(0.7mL)中の4(11.6mg、33.6μmol、5.0当量)を1滴ずつ添加した。3時間攪拌した後、内容物を25%アセトニトリル/水(10mL)で希釈し、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、30−70%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたRP−HPLCにより、流量5mL/分で15分間精製した。凍結乾燥後にSQS−1−11−5−18(19)(5.5mg、収率65%)を白色粉末として得た。
(AFT−I−206)エキノシスト酸S13(18mg、38μmol、1.0当量)をCH2Cl2(10mL)に懸濁し、氷浴で冷却した。次に2,6−ルチジン(71μL、0.61mmol、16当量)、続いてトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル(69μL、0.31mmol、8.0当量)を添加し、反応混合物を0℃で1時間攪拌した。この時より後、内容物を飽和NaHCO3(5mL)で洗浄し、水相をCH2Cl2で抽出した(2×10mL)。合わせた有機相をNa2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィ(ヘキサン−9:1ヘキサン/EtOAc)で精製してS14を得た(25mg、収率94%)。
(AFT−I−212)S14(25mg、36μmol、1.0当量)およびイミデート12(50mg、45μmol、1.25当量)のCH2Cl2(5mL)溶液を、粉末化4Å分子ふるい40mgと共に−45℃に冷却した後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート(0.9μL、7μmol、0.2当量)を添加した。混合物をこの温度で0.5時間分攪拌し、トリエチルアミン0.2mLでクエンチングし、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ(0.2%トリエチルアミンベンゼン溶液−97:3ベンゼン/EtOAc)で精製してS19を(48mg、収率80%)を白色固形物として得た。
(AFT−I−214)トリエチルアミン(25mL)に溶解したS19(52mg、31μmol、1.0当量)に、用時調製したフェニルセレノール(0.94mmol、30当量)溶液を、カニューレを介して添加した。反応物を38℃で8時間攪拌し、その後溶液を濃縮して黄白色固形物を得た。粗混合物をシリカゲルクロマトグラフィ(9:1−4:1トルエン/EtOAc)で精製してアミンS31をガラス状固形物として得た(42mg、収率83%)。
(AFT−I−215)0℃の透明で無色な6−((t−ブトキシカルボニル)−アミノ)ヘキサン酸(14)(44mg、0.19mmol、11.5当量)のテトラヒドロフラン(2mL)溶液に、トリエチルアミン(208μL、1.49mmol、90当量)、続いてクロロホルム酸エチル(16.0μL、0.17mmol、10.0当量)を添加した。濁った白色の溶液を0℃で2.5時間攪拌した後、0℃でカニューレを介してアミンS31(27mg、16.6μmol、1.0当量)に添加した。反応混合物をこの温度で1.5時間攪拌した後、水(0.2mL)でクエンチングして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ(9:1−5:1ヘキサン/0.2%トリエチルアミン含有EtOAc)で精製してS22(27mg、収率88%)を白色ガラス状固形物として得た。
(AFT−I−216)S22(24mg、13μmol、1.0当量)を収容する25mL丸底フラスコ内で、テトラヒドロフラン/エタノール(6mL、1:1)および10%(乾燥時)炭素担持パラジウム(wet)、DegussaタイプE101 NE/W(138mg、65μmol、5.0当量)を添加した。反応物を水素雰囲気下(バルーン)、21℃で12時間攪拌し、その後0.45μmナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノールで洗浄(3×20mL)して濃縮した。脱ベンジル化の成功は、CD3OD中での1H NMRによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、粗混合物をあらかじめ冷却(0℃)したトリフルオロ酢酸(4mL、TFA/H2O 3:1)の溶液に溶解し、さらに氷浴で1.25時間攪拌した。反応物を蒸発乾固して白色固形物を得、これを25%アセトニトリル/水(12mL)に溶解し、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、30−70%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたRP−HPLCを介して、流速5mL/分で15分間精製した。アミノアシルエキノシスト酸サポニンS25が単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末(7.0mg、収率53%)として得られた。
(AF−I−223)25mL丸底フラスコ中でS25(7.0mg、6.8μmol、1.0当量)をN,N’−ジメチルホルムアミド(0.2mL)に溶解し、トリエチルアミン(20μL、0.14μmol、20当量)を投入した。4(11.8mg、34μmol、5.0当量)のN,N’−ジメチルホルムアミド(1.5mL)溶液をシリンジを介して1滴ずつ添加し、反応物を21℃の暗所で攪拌した。3時間後、内容物を25%アセトニトリル/水(9mL)で希釈し、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、30−70%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたRP−HPLCを介して、流量5mL/分で15分間精製した。SQS1−8−5−18(20)(6.8mg、収率80%)が単一ピークとして溶離し、凍結乾燥後に白色粉末として得られた。
(AFT−I−218)25mL丸底フラスコ内で、ヘデラゲニンS15(45mg、95μmol、1.0当量)をCH2Cl2(3.5mL)に懸濁し、その後0.5M NaHCO3(147mg)水溶液(3.5mL)、0.05M K2CO3(24.2mg)、および塩化テトラブチルアンモニウム水和物(28mg、95μmol、1.0当量)を添加した。激しく攪拌している混合物に、TEMPO(14.8mg、95μmol、1.0当量)、続いてN−クロロスクシンイミド(38.0mg、0.29mmol、3.0当量)を添加し、反応混合物を暗所で2時間攪拌した。内容物を分液漏斗内で分配し、CH2Cl2で抽出した(3×10mL)。合わせた有機抽出物をNa2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して粗生成物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィ(ヘキサン/EtOAc、7:3)で精製して所望のギプソゲニントリテルペンS16を得た(32mg、収率72%)。
(AFT−I−219)ギプソゲニンS16(32mg、68μmol、1.0当量)のCH2Cl2(10mL)懸濁液を氷浴で冷却し、2,6−ルチジン(63μL、0.54mmol、8.0当量)およびトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル(62μL、0.27mmol、4.0当量)を投入した。1時間攪拌後、内容物を飽和NaHCO3(7mL)で洗浄し、水相をCH2Cl2で抽出した(3×10mL)。合わせた有機相を乾燥し(Na2SO4)、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィ(ヘキサン−4:1ヘキサン/EtOAc)で数回精製してS17を得た(26mg、収率65%)。
(AF−I−224)S17(26mg、44μmol、1.0当量)およびイミデート12(55mg、49μmol、1.1当量)のCH2Cl2(6mL)溶液を、粉末化4Å分子ふるい40mgと共に21℃で30分間攪拌した後、−45℃に冷却し、その後三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート(1.1μL、9μmol、0.2当量)を投入した。混合物をこの温度で0.5時間攪拌し、トリエチルアミン(0.2mL)でクエンチングし、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ(ベンゼン−97:3ベンゼン/EtOAc)で精製して所望の生成物+数種類の不純物の混合物を得、これをさらにクロマトグラフィに付してS20(48mg、収率70%)をガラス状固形物として得た。
(AFT−I−225)S20(50mg、32μmol、1.0当量)のトリエチルアミン(27mL)溶液に、用時調製したフェニルセレノール(1.07mmol、32当量)溶液を、カニューレを介して添加した。38℃で8時間攪拌後、溶液を濃縮して黄白色の固形物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィ(9:1−8:2トルエン/EtOAc)で精製してS32(35mg、収率72%)を白色固形物として得た。
(AFT−I−226)0℃の14(61mg、0.27mmol、11.5当量)のテトラヒドロフラン(3mL)溶液に、トリエチルアミン(290μL、2.1mmol、90当量)、続いてクロロホルム酸エチル(22μL、0.23mmol、10当量)を添加したところ、透明な溶液が白濁した。酸活性化を0℃で2.5時間進行させ、溶液全体を、カニューレを介してアミンS32(35mg、27μmol、1.0当量)を収容するシュレンクに移した。反応混合物を0℃で1.5時間攪拌した後、水(90μL)でクエンチングし、この時点で溶液は白濁から透明に変化した。次に、内容物を蒸発乾固してシリカゲルクロマトグラフィ(9:1−5:1ベンゼン/0.2%トリエチルアミン含有EtOAc)で精製し、S23を白色ガラス状固形物として得た(収量34mg、86%)。
(AFT−I−227)25mL丸底フラスコ内で、S23(27mg、15.5μmol、1.0当量)をテトラヒドロフラン/エタノール(1:1)6mLに溶解し、さらに10%(乾燥時)炭素担持パラジウム(wet)、DegussaタイプE101 NE/W(166mg、78μmol、5当量)を添加した。反応物を、水素雰囲気下(バルーン)、21℃で12時間攪拌した。この時より後、混合物を0.45mmナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノールで洗浄し(20mL)、濃縮した。脱ベンジル化の成功は、CD3OD中での1H NMRによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、残渣をあらかじめ冷却(0℃)したトリフルオロ酢酸/水(4mL、3:1)の溶液に溶解し、氷浴で1.25時間攪拌した。この時より後、反応物を蒸発乾固して白色固形物を得、30−80%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたRP−HPLCにより、流量5mL/分で15分間精製した。凍結乾燥後、所望の生成物S26(13mg、収率82%)を白色粉末として得た。
(AF−I−230)25mL丸底フラスコ内で、アミンS26(6.6mg、6.5μmol、1.0当量)をN,N’−ジメチルホルムアミド(2.0mL)に溶解し、トリエチルアミン(18μL、0.13mmol、20当量)を投入した。この溶液に、N,N’−ジメチルホルムアミド(1.5mL)に溶解した4(11.1mg、34μmol、5.0当量)を1滴ずつ添加し、反応混合物を21℃の暗所で3時間攪拌した。この時より後、内容物を25%アセトニトリル/水(TFA0.05%)9mLで希釈し、30−70%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたRP−HPLCにより、流量5mL/分で15分間直接的に精製した。凍結乾燥後にSQS−1−9−5−18(21)(4.5mg、収率56%)を白色粉末として得た。
(AFT−I−228)ヘデラゲニンS15(35mg、74μmol、1.0当量)をCH2Cl2(15mL)に懸濁し、氷浴で冷却した。次に2,6−ルチジン(138μL、1.18mmol、16当量)、続いてトリフルオロメタンスルホン酸トリエチルシリル(134μL、0.59mmol、8.0当量)を添加し、反応混合物を0℃で1時間攪拌した。これより後、内容物を飽和NaHCO3(10mL)で洗浄し、水相をCH2Cl2で抽出した(2×15mL)。合わせた有機相を乾燥し(Na2SO4)、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィ(ヘキサン−4:1ヘキサン/EtOAc)で数回精製してS18を得た(45mg、収率81%)。
(AFT−I−232)S18(28mg、40μmol、1.1当量)およびイミデート12(41mg、36.7μmol、1.0当量)のCH2Cl2(5mL)溶液を、粉末化4Å分子ふるい35mgと共に−45℃に冷却した後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート(0.9μL、7μmol、0.2当量)を添加した。混合物をこの温度で0.5時間攪拌し、トリエチルアミン0.2mLでクエンチングし、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ(0.2%トリエチルアミンベンゼン溶液−98:2ベンゼン/EtOAc)で精製してS21を(43mg、収率71%)をガラス状固形物として得た。
(AFT−I−233)トリエチルアミン(24mL)に溶解したS21(44mg、26.5μmol、1.0当量)に、用時調製したフェニルセレノール(0.80mmol、30当量)溶液をカニューレを介して添加した。反応物を38℃で8時間攪拌し、その後溶液を濃縮して黄白色固形物を得た。粗混合物をシリカゲルクロマトグラフィ(9:1−4:1トルエン/EtOAc)で精製してアミンS33をガラス状固形物として得た(34.5mg、収率80%)。
(AFT−I−234)0℃の6−((t−ブトキシカルボニル)−アミノ)ヘキサン酸(14)(56mg、0.24mmol、11.5当量)のテトラヒドロフラン(2.5mL)溶液に、トリエチルアミン(263μL、1.89mmol、90当量)を添加した後、クロロホルム酸エチル(20.0μL、0.21mmol、10.0当量)を添加した。濁った白色の溶液を0℃で2.5時間攪拌した後、0℃でアミンS33(34.5mg、21.0μmol、1.0当量)にカニューレを介して添加した。反応混合物をこの温度で1.5時間攪拌した後、水(0.2mL)でクエンチングして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ(9:1−5:1ベンゼン/0.2%トリエチルアミン含有EtOAc)で精製してS24(収量36.5mg、92%)を白色固形物として得た。
(AFT−I−235)25mL丸底フラスコ内で、S24(30mg、16.3μmol、1.0当量)をテトラヒドロフラン/エタノール(7mL、1:1)に溶解し、さらに10%(乾燥時)炭素担持パラジウム(wet)、DegussaタイプE101 NE/W(173mg、81μmol、5.0当量)を添加した。反応物を水素雰囲気下(バルーン)、21℃で12時間攪拌し、その後0.45μmナイロンシリンジフィルターで濾過し、メタノールで洗浄(3×20mL)して濃縮した。脱ベンジル化の成功は、CD3OD中での1H NMRによる芳香族共鳴の消失によって評価した。次に、粗混合物をあらかじめ冷却(0℃)したトリフルオロ酢酸(4mL、TFA/H2O 3:1)の溶液に溶解し、さらに氷浴中で1.25時間攪拌した。反応物を蒸発乾固し、白色固形物を30%アセトニトリル/水(TFA0.05%)(14mL)に溶解し、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、30−70%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたRP−HPLCを介して、流量5mL/分で15分間精製した。凍結乾燥後、所望の生成物S27(11.0mg、収率66%)を白色粉末として得た。
(AF−I−236)25mL丸底フラスコ中でS27(6.0mg、5.8μmol、1.0当量)をN,N’−ジメチルホルムアミド(2.5mL)に溶解し、トリエチルアミン(16.3μL、0.12μmol、20当量)を投入した。4(10.1mg、29μmol、5.0当量)のN,N’−ジメチルホルムアミド(1.5mL)溶液を、シリンジを介して1滴ずつ添加し、反応物を21℃の暗所で3時間攪拌した。この時より後、内容物を25%アセトニトリル/水(9mL)で希釈し、XBridge Prep BEH300 C18カラム(5μm、10×250mm)上で、30−70%アセトニトリル/水(TFA0.05%)リニアグラジエントを用いたRP−HPLCを介して、流量5mL/分で15分間精製した。凍結乾燥後にSQS−1−10−5−18(22)(4.2mg、収率57%)を白色粉末として得た。
Claims (14)
- 式(III)の化合物、
(式中、WはMe、−CHO、または−CH2OHであり、かつVはHまたはOHである)。 - 請求項1に記載の前記化合物の極小サポニンアナログの合成における中間体としての使用。
- 請求項1に記載の前記化合物を調製するためのプロセスであって:
a)式(100)の化合物を保護基と反応させて式(101)の化合物を形成するステップ(式中WはMe、CHO、CH2OH、またはCH2ORpであり;RpはHまたは位置選択性保護基であり;VはHまたはORpであり、またTESはトリエチルシリル保護基である);
- 以下の式の化合物、
- 以下の式で示される、請求項4に記載の化合物、
- 以下の式で示される、請求項4に記載の化合物、
- 以下の式で示される、請求項4に記載の化合物、
- 以下の式で示される、請求項4に記載の化合物、
- 以下の式で示される、請求項4に記載の化合物、
- 以下の式で示される、請求項4に記載の化合物、
- 薬剤組成物であって:
請求項4〜10のうちいずれか1つに記載の前記化合物または医薬として許容されるその塩;および
免疫学的に有効な量の抗原を含む前記薬剤組成物。 - ヒト以外の被験体を免疫するための方法であって:
前記被験体に請求項11に記載の前記薬剤組成物を投与することを含む前記方法。 - 薬剤組成物であって:
請求項4〜10のうちいずれか1つに記載の前記化合物または医薬として許容されるその塩;および
有効量の細胞障害性薬剤を含む前記薬剤組成物。 - ヒト以外の被験体における細胞障害性薬剤の効果を促進するための方法であって:前記被験体に請求項13に記載の前記薬剤組成物を投与することを含む前記方法。
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