CN106568879A - 用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱及其制备方法及目标组分的识别鉴定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱及其制备方法及目标组分的识别鉴定方法，其中用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱(简称识别柱)中填充有表达特定受体的细胞膜色谱固定相，可以提高复杂样品中“目标组分”筛选的特异性，对提高筛选效率、阐明作用机理具有重要的意义。该识别鉴定方法通过识别柱对复杂样品中“目标组分”进行特异性识别，并通过富集柱对微量“目标组分”进行在线富集，进一步由高效液相色谱质谱进行分离鉴定。该方法具有高效识别、在线富集复杂样品中微量“目标组分”的特性，能够提升分析效率，提高分析灵敏度，实现对复杂样品中“目标组分”的高效率筛选。

Description

用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱及其制备 方法及目标组分的识别鉴定方法

技术领域

本发明属于细胞膜色谱技术领域，涉及一种用于识别、鉴定复杂样品中微量“目标组分”的细胞膜色谱柱及利用该细胞膜色谱柱识别、鉴定复杂样品中微量“目标组分”的方法。

背景技术

复杂样品(如中药提取物及其制剂)中组分复杂(上百种)，高通量筛选是发现复杂体系中目标组分的重要方法，已报道有许多的高通量筛选方法，例如直接基于受体或酶的筛选，计算机辅助药物设计的虚拟筛选等。传统的利用高效液相色谱分析方法对复杂样品进行指纹图谱分析，很难对其中的所有组分进行指认。且有以下局限性：

(1)效率低下，无法有效判定“目标组分”；

(2)分析时间长，复杂样品组分众多，色谱分析时间普遍在60min以上，有机溶剂消耗量较大；

(3)分离度差，复杂样品中各组分难以达到基线分离，微量“目标组分”容易被常量组分所“掩埋”，而无法测得。

细胞膜色谱(cell membrane chromatography,CMC)是一种仿生亲和色谱技术。细胞膜色谱不仅具有色谱的分离能力，同时兼具有生物活性，已经证明细胞膜色谱技术是一种有效的从复杂体系中筛选目标组分的新方法。20世纪90年代以来，高效液相色谱质谱联用(HPLC/MS)已广泛的应用于识别和鉴定复杂的样品，多级质谱已广泛的应用于中药中目标组分的分离鉴定。二维液相色谱的不断发展进步，通过两个不同分离过程或机理对复杂样品进行分离，能够提高峰容量，降低色谱峰的重叠，显著改善分离分析结果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱及其制备方法及目标组分的识别鉴定方法，该细胞膜色谱柱中填充有表达特定受体的细胞膜色谱固定相，具有高效识别复杂样品中微量“目标组分”的特性，能够实现对复杂样品中微量“目标组分”的高效率筛选。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱，该细胞膜色谱柱中填充有表达特定受体的细胞膜色谱固定相，即吸附有表达特定受体的细胞膜的硅胶，其中特定受体为能够与被筛选的目标组分特异性结合的受体。

用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱的制备方法，包括以下步骤：

1)制备细胞膜混悬液

将培养好的表达特定受体的细胞离心、清洗，然后使用裂解液在冰浴条件下将表达特定受体的细胞破碎，除去细胞器，取上清液，加入生理盐水混匀，制得细胞膜混悬液；其中表达特定受体的细胞为其细胞膜上表达能够与被筛选的目标组分特异性结合的受体的细胞；

2)制备表达特定受体的细胞膜色谱固定相

将硅胶活化后置于具支试管中，冰浴条件下，向具支试管中加入细胞膜混悬液，涡旋振荡，然后静置，使硅胶吸附细胞膜混悬液中的细胞膜，得到表达特定受体的细胞膜色谱固定相；

3)细胞膜色谱固定相湿法装柱

用装柱机将表达特定受体的细胞膜色谱固定相进行湿法装柱，得到用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱。

所述步骤1)具体为：取培养好的表达特定受体的细胞的混悬液，在4℃下离心，离心后倒掉上清液，取底层细胞；将底层细胞用生理盐水清洗并吹打均匀放入EP管中，在4℃下离心；向离心好的细胞中加入Tris-Hcl，在冰浴条件下超声破碎，再用细胞破碎仪破碎，然后离心，除去细胞器，取上清液；将上清液配平，然后离心，离心后细胞膜贴在EP管壁上，加入生理盐水吹散并混合均匀，得到细胞膜混悬液。

所述步骤2)具体为：将经纯化过的硅胶放于烘箱中烘烤活化，将活化好的硅胶装入具支试管中，再将具支试管放在冰中，在涡旋状态下用注射器把细胞膜混悬液加入具支试管中，涡旋振荡；然后将具支试管中的混合物倒入烧杯中，放入经三蒸水洗过的磁子，4℃下磁力搅拌，搅拌完成后取出磁子，在4℃冰箱中放置过夜，使硅胶吸附细胞膜，然后加入生理盐水进行离心，洗去未接合在硅胶上的细胞膜，得到表达特定受体的细胞膜色谱固定相。

所述步骤3)具体为：将装柱机用三蒸水洗干净，装柱的柱套是不锈钢开口柱，把柱芯放入柱套中，不带筛板的一端柱芯朝上，将表达特定受体的细胞膜色谱固定相倒入装柱机中，沿壁加三蒸水至溢出，然后加盖扭紧，开泵向其中注入流动相，流动相的流速为1.0mL/min，从滴第一滴水开始计时，9min后停泵，即得到用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱。

一种利用用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱对复杂样品中微量目标组分进行识别鉴定的方法，包括以下步骤：

1)仪器组装

将用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱装入液相色谱仪中，在液相色谱仪的检测出口处安装一个十通阀，十通阀上连接两个富集柱，十通阀的出口通向高效液相色谱仪和质谱仪；

2)目标组分的识别鉴定

待用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱充分平衡后，对待分析的复杂样品进样分析，若有组分在细胞膜上保留，则该组分即为目标组分，目标组分先在富集柱中进行富集，随后切换到高效液相色谱仪中进行分离，再进入质谱仪中进行鉴定。

相对于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明提供的用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱(简称识别柱)，是在细胞膜色谱柱中填充有表达特定受体的细胞膜色谱固定相，其中表达特定受体的细胞膜色谱固定相即为吸附有表达特定受体的细胞膜的硅胶，特定受体为能够与被筛选的目标组分特异性结合的受体。识别柱中填充的表达特定受体的细胞膜色谱固定相可以提高复杂样品中“目标组分”筛选的特异性，能够针对复杂样品中的“目标组分”进行特异性的识别，提升分析效率，对提高筛选效率、阐明作用机理具有重要的意义。

本发明提供的用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱的制备方法，先将培养的表达特定受体的细胞离心、清洗，使用裂解液在冰浴条件下将细胞破碎，加入生理盐水混匀，制得细胞膜混悬液；然后将硅胶活化后置于具支试管中，冰浴条件下加入细胞膜混悬液，涡旋振荡，静置后湿法装柱，即得到识别柱；该方法步骤简单，操作方便，利用硅胶吸附细胞膜形成细胞膜色谱固定相，再进行湿法装柱即可，能够方便、快捷的制得能够对复杂样品中的“目标组分”进行特异性识别的识别柱。

本发明提供的利用用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱对复杂样品中微量目标组分进行识别鉴定的方法，将识别柱装入液相色谱仪中，在液相色谱仪的检测出口处安装一个十通阀，十通阀上连接两个富集柱，十通阀的出口通向高效液相色谱仪和质谱仪；对待分析的复杂样品进样分析，若有组分在细胞膜上保留，则该组分即为目标组分，目标组分先在富集柱中进行富集，随后切换到高效液相色谱仪中进行分离，再进入质谱仪中进行鉴定。其中识别柱针对复杂样品中的“目标组分”进行特异性的识别，提升分析效率；富集柱对微量的“目标组分”具有富集作用，提高分析灵敏度。该方法比传统高效液相色谱法有明显的优点，该方法通过识别柱对复杂样品中“目标组分”进行特异性识别，并通过富集柱对微量“目标组分”进行在线富集，再进一步由高效液相色谱质谱进行分离鉴定，具有高效识别、在线富集复杂样品中微量“目标组分”的特性，能够提升分析效率，提高分析灵敏度，实现对复杂样品中“目标组分”的高效率筛选，该方法在复杂样品的分析中具有重要意义。

附图说明

图1为用本发明的HMC-1/CMC-HPLC/MS方法分析丹参注射液的色谱行为图；其中(A)为用HMC-1/CMC模型分析丹参注射液,R0为不保留部分，R1，R2为两个保留部分；(B)为混合标准在HPLC/MS上的色谱行为图，其中S1为丹酚酸A，S2为异丹酚酸C，S3为丹酚酸C；(C)为丹参注射液用HPLC/MS直接分析色谱图；(D)为HMC-1/CMC上保留组分R2切换到HPLC/MS系统进行分析，并鉴定为丹酚酸C；(E)为HMC-1/CMC上保留组分R1切换到HPLC/MS系统进行分析，并鉴定为丹酚酸A和异丹酚酸C。

具体实施方式

本发明提供了一种基于识别、鉴定复杂样品中微量组分的二维色谱筛选方法，包括用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱(简称识别柱)与富集柱，识别柱中填充有表达特定受体细胞膜色谱固定相。所述细胞膜色谱固定相通过湿法装入细胞膜色谱柱中。所述的细胞膜色谱固定相为吸附有特定细胞的细胞膜的大孔硅胶，所述的特定细胞为细胞膜上高表达能够与被筛选组分特异性结合受体的细胞。本发明提供的微量“目标组分”的识别、鉴定方法在复杂样品的分析中具有重要意义。

本发明提供的用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱的制备方法，包括以下步骤：

1)取高表达特定受体的细胞混悬液，在1000rpm、4℃条件下用高速离心机离心5min，倒掉上清液，取底层细胞；将离心好的细胞用5mL生理盐水洗2遍，吹打均匀放入10mLEP管中，于1000rpm、4℃条件下离心2遍；再向已经离心好的细胞中加入Tris-Hcl 5mL，在冰浴条件下超声30min破碎，再用细胞破碎仪(400W，8次，每次3s)破碎后，5000rpm条件下离心10min，除去细胞器，取上清液；将上清液配平，在12000g条件下离心20min，离心后，膜贴在EP管壁上，加3mL生理盐水吹散后，加生理盐水至10mL；得细胞膜混悬液；

2)称取相应量的大孔硅胶(已纯化过，颗粒为3μm，一根柱子用量45mg)，放于105℃烘箱活化10min；将装有已活化好的硅胶的具支试管中放在冰中，用10mL注射器，在涡旋状态下(放在涡旋仪上)把细胞膜混悬液加入具支试管中，涡旋5min，把用三蒸水洗过的磁子加入具支试管的混合液中并倒入磁力搅拌器的烧杯中(4℃冰箱中)，搅拌30min后，取出磁子，混合液于4℃冰箱中放置过夜；用5mL生理盐水在800g离心力条件下离心5min，以洗去未接合在硅胶上的细胞膜，洗3遍，得到表达特定受体的细胞膜色谱固定相；

3)用装柱机进行装柱，将装柱机用三蒸水洗干净，装柱的柱套是开口柱，把柱芯放入柱套中，不带筛板的一端柱芯朝上，将表达特定受体的细胞膜色谱固定相倒入装柱机，沿壁加三蒸水至溢出，加盖扭紧，开泵，流速1.0mL/min，从滴第一滴水开始算时间9min后停泵，制得识别柱。

本发明提供的利用上述用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱对复杂样品中微量目标组分进行识别鉴定的方法，包括以下步骤：

1)将用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱装入液相色谱仪中，建立细胞膜色谱二维筛选方法。在细胞膜色谱检测器出口处装有一个自动控制的十通阀，十通阀上连有两个富集柱，阀的另一端通向高效液相色谱质谱检测器。

2)待用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱充分平衡后，对待分析的复杂样品进样分析，若有组分在细胞膜上保留，则该组分即为目标组分，目标组分先在富集柱中进行富集，随后切换到高效液相色谱仪中进行分离，再进入质谱仪中进行鉴定。

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。

实施例1

1.HMC-1细胞的培养

1)细胞的复苏

从液氮罐中取出预先冻存的装有HMC-1细胞的冻存管，迅速放入已经提前预热至37℃的水浴锅中，并轻轻摇动使冻存的HMC-1细胞尽快融化。待细胞融化后取出冻存管，用75％酒精消毒后于超净台中开启，用吹打管吸取HMC-1细胞悬液至10mL离心管中，并滴加10倍以上的培养液，吹打混匀后，1000rpm低速离心5min，除去上清液，细胞沉淀加少量培养液吹打混匀，转移至细胞培养瓶中，加入适当培养液稀释后，将培养瓶置于细胞培养箱中静置培养，次日更换培养液继续培养。

2)细胞的传代

待复苏后的HMC-1细胞长至70％～80％时，用吹打管吸取培养瓶内的细胞悬液，1000rpm低速离心5min，除去上清液，加入新鲜培养基后利用吹打管反复吸取培养液吹打离心管底的细胞，形成细胞悬液。进行细胞计数，按照细胞数量将悬浮的细胞分装到新的培养瓶内，至于培养箱中进行传代培养，待细胞达到一定数目时(不少于10⁷个)，进行相应的后续实验，制备HMC-1/CMC色谱柱。

3)细胞计数

将细胞计数板与其对应的盖玻片用酒精棉球擦拭后，晾干，将盖玻片盖于细胞计数网格的上方。按照细胞传代的方法处理细胞，得到单个细胞的悬浮液。若细胞密度不满足要求就要进行相应的处理。若细胞数过少，将细胞悬液1000rpm低速离心5min，除去上清液，细胞沉淀加入少量的培养基，吹打混悬使细胞密度提高；若细胞数过多，可吸取少量细胞悬液，用培养基稀释。将待测细胞悬液吹均匀，然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入，要保证盖片下充满悬液，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，避免影响计数结果。用倒置显微镜观察细胞计数板四角大方格中的细胞，若有细胞压线，计数原则为“记上不记下，记左不记右”，数出的细胞数即可计算细胞密度。细胞密度(每毫升细胞原液所含细胞数目)，计算公式如下：

细胞密度(个/mL)＝(四角大方格细胞数目之和/4)×10⁴×稀释倍数

2.制备HMC-1/CMC识别柱

1)HMC-1细胞膜混悬液的制备

取上述HMC-1细胞混悬液，在1000rpm，4℃条件下用高速离心机离心5min，倒掉上清液，取底层细胞；将离心好的细胞用5mL生理盐水洗2遍，吹打均匀放入10mL EP管中，于1000rpm，4℃条件下离心2遍；再将已离心好的细胞加Tris-Hcl 5mL在冰浴条件下超声30min破碎，再用细胞破碎仪(400W，8次，每次3S)破碎后，5000rpm条件离心10min，除去细胞器，取上清液；将上清液配平，在12000g条件下离心20min，离心后，膜贴在EP管壁上，加3mL生理盐水吹散后，加生理盐水至10mL；得细胞膜混悬液，待用。

2)HMC-1细胞膜固定相的制备

称取相应量的大孔硅胶(已纯化过，颗粒为3μm，一根柱子用量45mg)，放于105℃烘箱活化10min；将装有已活化好的硅胶的具支试管中放在冰中，用10mL注射器，在涡旋状态下(放在涡旋仪上)把细胞膜混悬液加入具支试管中，涡旋5min，把用三蒸水洗过的磁子加入具支试管中的混合液中并倒入磁力搅拌器的烧杯中(4℃冰箱中)，搅拌30min后，取出磁子，混合液于4℃冰箱中放置过夜；用5mL生理盐水在800g离心力条件下离心5min，以洗去未接合在硅胶上的细胞膜，洗3遍；

3)HMC-1/CMC柱的制备

用装柱机进行装柱，将装柱机用三蒸水洗干净，装柱的柱套是开口柱，把柱芯放其中，不带筛板的一端柱芯朝上，将已吸附了细胞膜的硅胶倒入装柱机，沿壁加三蒸水至溢出，加盖扭紧，开泵，流速1.0mL/min，从滴第一滴水开始算时间9min后停泵，得到HMC-1/CMC柱(识别柱)，取下识别柱放4℃冰箱中待用。

3.HMC-1微量“目标组分”识别、鉴定方法的建立

将已装好的HMC-1/CMC柱芯放入柱套中，装入液相色谱仪中，建立细胞膜色谱分析系统。在HMC-1/CMC液相色谱仪检测器出口处装有一个自动控制的十通阀，十通阀上连有两个富集柱，十通阀的另一端通向二维高效液相色谱仪。

HMC-1/CMC微量“目标组分”的识别、鉴定方法的运行：待HMC-1/CMC细胞膜色谱柱充分平衡后进注射液，若有组分在细胞膜上保留，将在富集柱中进行富集，随后切换到高效液相色谱进行分离，再通过质谱鉴定目标组分。

4.HMC-1微量“目标组分”识别、鉴定方法的验证

用槲皮素来验证本发明所构建方法的适用性，首先通过上述方法所建立的HMC-1/CMC色谱模型，制备一根HMC-1/CMC色谱柱，之后将其置于液相色谱内，充分平衡，进样5μL0.1mg/mL的槲皮素，经过富集，切换，分析，鉴定来验证HMC-1微量“目标组分”的识别、鉴定方法。结果表明该方法适用性良好，可以用于筛选中药注射剂中的潜在致敏目标成分。

5.运用HMC-1微量“目标组分”识别、鉴定方法筛选丹参注射液中潜在致敏目标组分

1)色谱条件

细胞膜色谱条件：超纯水为流动相，流速0.2mL/min，色谱柱为HMC-1细胞膜色谱柱(10mm-2mm I.D.)，DAD检测器检测，提取去检测波长为286nm。富集柱：Merck RP-18e(10mm-4.6mm I.D.)。

反相色谱条件：流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱程序如表所示；流速1.5mL/min；色谱柱为Merck RP-18e(100mm-4.6mm I.D.)，DAD检测，梯度洗脱程序如下：

梯度洗脱程序

2)质谱条件：电喷雾离子源，载气为高纯氮气(N₂，纯度>99.999％)，载气流速为3L/min，干燥气流速为15L/min，接口温度250℃，加热块温度400℃，曲线脱溶剂温度250℃，接口到离子源的电压为4.5kV，正负离子扫描模式，扫面范围m/z 50～1000，CID气体氩气(纯度>99.999％)压力在230kPa。

3)致敏目标组分分析

将丹参注射液样品进入HMC-1/CMC-Online-HPLC/MS二维系统中，经过识别，富集，鉴定，HMC-1/CMC识别的成分为丹酚酸A、异丹酚酸C、丹酚酸C，分析结果如图1所示。

图1为用本发明的HMC-1/CMC-HPLC/MS方法分析丹参注射液的色谱行为图；其中(A)为用HMC-1/CMC模型分析丹参注射液,R0为不保留部分，R1，R2为两个保留部分；(B)为混合标准在HPLC/MS上的色谱行为图，其中S1为丹酚酸A，S2为异丹酚酸C，S3为丹酚酸C；(C)为丹参注射液用HPLC/MS直接分析色谱图；(D)为HMC-1/CMC上保留组分R2切换到HPLC/MS系统进行分析，并鉴定为丹酚酸C；(E)为HMC-1/CMC上保留组分R1切换到HPLC/MS系统进行分析，并鉴定为丹酚酸A和异丹酚酸C。

上述实验结果中，丹酚酸C在复杂样品中药注射液中为微量“目标组分”，如图1(C)所示。在此方法中经由HMC-1/CMC识别，进一步被富集柱富集，进入高效液相色谱分析时，其相对含量显著升高。通过此实例，证实了本专利所述的微量“目标组分”的识别、鉴定新方法能够针对复杂样品中的“目标组分”进行特异性的识别，并对微量的“目标组分”具有显著的富集作用。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (6)

1.一种用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱，其特征在于：该细胞膜色谱柱中填充有表达特定受体的细胞膜色谱固定相，即吸附有表达特定受体的细胞膜的硅胶，其中特定受体为能够与被筛选的目标组分特异性结合的受体。

2.权利要求1所述的用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制备细胞膜混悬液

将培养好的表达特定受体的细胞离心、清洗，然后使用裂解液在冰浴条件下将表达特定受体的细胞破碎，除去细胞器，取上清液，加入生理盐水混匀，制得细胞膜混悬液；其中表达特定受体的细胞为其细胞膜上表达能够与被筛选的目标组分特异性结合的受体的细胞；

2)制备表达特定受体的细胞膜色谱固定相

将硅胶活化后置于具支试管中，冰浴条件下，向具支试管中加入细胞膜混悬液，涡旋振荡，然后静置，使硅胶吸附细胞膜混悬液中的细胞膜，得到表达特定受体的细胞膜色谱固定相；

3)细胞膜色谱固定相湿法装柱

用装柱机将表达特定受体的细胞膜色谱固定相进行湿法装柱，得到用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱。

3.根据权利要求2所述的用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，所述步骤1)具体为：取培养好的表达特定受体的细胞的混悬液，在4℃下离心，离心后倒掉上清液，取底层细胞；将底层细胞用生理盐水清洗并吹打均匀放入EP管中，在4℃下离心；向离心好的细胞中加入Tris-Hcl，在冰浴条件下超声破碎，再用细胞破碎仪破碎，然后离心，除去细胞器，取上清液；将上清液配平，然后离心，离心后细胞膜贴在EP管壁上，加入生理盐水吹散并混合均匀，得到细胞膜混悬液。

4.据权利要求2所述的用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，所述步骤2)具体为：将经纯化过的硅胶放于烘箱中烘烤活化，将活化好的硅胶装入具支试管中，再将具支试管放在冰中，在涡旋状态下用注射器把细胞膜混悬液加入具支试管中，涡旋振荡；然后将具支试管中的混合物倒入烧杯中，放入经三蒸水洗过的磁子，4℃下磁力搅拌，搅拌完成后取出磁子，在4℃冰箱中放置过夜，使硅胶吸附细胞膜，然后加入生理盐水进行离心，洗去未接合在硅胶上的细胞膜，得到表达特定受体的细胞膜色谱固定相。

5.据权利要求2所述的用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，所述步骤3)具体为：将装柱机用三蒸水洗干净，装柱的柱套是不锈钢开口柱，把柱芯放入柱套中，不带筛板的一端柱芯朝上，将表达特定受体的细胞膜色谱固定相倒入装柱机中，沿壁加三蒸水至溢出，然后加盖扭紧，开泵向其中注入流动相，流动相的流速为1.0mL/min，从滴第一滴水开始计时，9min后停泵，即得到用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱。

6.一种利用权利要求1所述的用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱对复杂样品中微量目标组分进行识别鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)仪器组装

将用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱装入液相色谱仪中，在液相色谱仪的检测出口处安装一个十通阀，十通阀上连接两个富集柱，十通阀的出口通向高效液相色谱仪和质谱仪；

2)目标组分的识别鉴定

待用于识别复杂样品中微量目标组分的细胞膜色谱柱充分平衡后，对待分析的复杂样品进样分析，若有组分在细胞膜上保留，则该组分即为目标组分，目标组分先在富集柱中进行富集，随后切换到高效液相色谱仪中进行分离，再进入质谱仪中进行鉴定。