CN106565835A - 一类靶向Bcl‑2家族抗凋亡蛋白的新型BH3类似物及其应用 - Google Patents

一类靶向Bcl‑2家族抗凋亡蛋白的新型BH3类似物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一类靶向Bcl‑2家族抗凋亡蛋白的新型BH3类似物及其应用，所述BH3类似物的结构通式如通式A所示：本发明运用模拟肽学的思路和方法，通过对天然BH3肽段的结构简化或修饰得到了一类新型BH3类似物。本发明通过实验证明，通式A所示的化合物与Bcl‑2家族抗凋亡蛋白在分子水平表现出优异的结合活性；体外肿瘤细胞生长抑制实验显示，化合物对人慢性髓原白血病细胞K562、人原髓细胞白血病细胞HL‑60和人组织细胞淋巴瘤细胞U937具有一定的体外生长抑制作用。研究结果提示该类化合物可作为用于预防或治疗因Bcl‑2家族蛋白中抗凋亡蛋白表达异常导致的相关疾病的候选药物。

Description

一类靶向Bcl-2家族抗凋亡蛋白的新型BH3类似物及其应用
技术领域
本发明属于医药化学技术领域，具体涉及一类相比天然BH3结构更简单、靶蛋白结合活性更优异的靶向Bcl-2家族抗凋亡蛋白的新型BH3类似物及其应用。
背景技术
细胞凋亡(Apoptosisis)是由内部和外部刺激引发的程序性细胞自杀死亡过程。正常细胞按照生命的“程序”运行，经过一定时间必须调亡，这种凋亡是细胞为了维持机体平衡和内环境稳定，由一系列凋亡因子所控制的细胞自主性死亡方式。该过程对于多细胞动物的发育至关重要，正常凋亡的失调会引起机体形态异常和多种疾病，如癌症、神经退行性疾病和自身免疫性疾病。肿瘤细胞与正常细胞恰恰相反,它们通过修改正常凋亡“程序”而实现永生,也就是逃避调亡。逃避凋亡是癌细胞的标志之一(Chemical Society Review,2009,38:3289-300.)。
细胞凋亡信号通路包括内源和外源两条通路。其中，线粒体凋亡通路是内源通路。在该通路中位于线粒体上的Bcl-2家族蛋白是重要的调控因子，通过抗凋亡和促凋亡成员之间的相互作用，调控线粒体凋亡通路。肿瘤细胞通过过量表达Bcl-2蛋白，形成Bcl-2/Bax二聚体来制约Bax激活，或者过量表达Mcl-l和/或Bcl-xL蛋白,与Bak形成二聚体,阻止Bak的激活，从而使细胞凋亡无法启动而逃避凋亡，获得永生。BH3-only蛋白是调节BcI-2家族蛋白之间相互作用的枢纽,能够竞争结合Bcl-2-like蛋白，从Bcl-2/Mcl-l中释放Bax和Bak,或者直接激活Bax/Bak，从而促进凋亡发生。
BH3结构域是所有Bcl-2家族蛋白成员共有的区域，介导成员蛋白间相互作用。基于BH3结构域的这一功能，科研工作者提出，通过设计寻找能够模拟BH3结构域功能的类似物(多肽、有机小分子)是进行新型抗肿瘤药物的开发的新途径。这些类似物能够通过竞争性地结合一种或多种促凋亡的Bcl-2-like蛋白释放Bax/Bak或直接激活Bax/Bak，从而促进肿瘤细胞调亡(Oncogene,2007,26:1324-37.)。这类通过模拟BH3肽段,占据BH3沟槽的模拟分子被称为“BH3-mimetics”，尤其是针对那些产生化疗耐药性的肿瘤细胞，这类化合物更显其优势。因传统的抗癌药物杀死肿瘤细胞通常需要通路上游的信号传导蛋白如p53等(Oncogene 2008,27,6207-6215.,Proc.Natl.Acad.Sci.2003；100:15095-100.)，而在50％以上的临床肿瘤患者中p53往往存在突变或缺失，这样就导致了这部分患者对常规的化疗或放疗的耐受现象，而BH3mimetics杀伤肿瘤细胞与p53存在的状态无关，因而可用于临床上对化疗药物耐受的肿瘤患者。BH3类似物可通过绕过这一过程，直接竞争性结合Bcl-2促凋亡蛋白，释放Bax/Bak或直接激活Bax/Bak，激活肿瘤细胞凋亡程序，通过改变线粒体膜通透性，诱导肿瘤细胞凋亡的发生(Cell Death Differ.2015,22(7):1071-1080.)。
Bcl-xL蛋白的晶体衍射和NMR研究结果揭示了BH3结构域的结构特征：表面分布疏水残基，呈沟槽状，为设计结合模拟分子提供了重要的结构信息。模拟分子占据Bcl-2-like蛋白的BH3疏水沟槽后，Bcl-2-like蛋白与促凋亡蛋白的二聚体发生解聚，凋亡被启动。仅通过占据BH3沟槽发挥活性,不存在其它结合蛋白的模拟分子被称为高特异BH3类似物，BH3模拟分子的多BH3模拟性和高特异性是该类药物分子开发的重要因素,决定其能否以单剂、低毒方式诱导肿瘤细胞调亡。随着BH3沟槽结构研究的日益深入，几个成功进入μM级亲和力的有机小分子显示出优异的药学活性。然而，分子非特异性导致的细胞毒性是这些小分子正在面临的严重问题。例如，在AT-101临床试验中，出现了心脏毒性的不良反应。目前，ABT-737是唯一高特异BH3类似物，凋亡诱导作用完全依赖Bcl-2通路，也就是除了几个Bcl-2-like蛋白的BH3沟槽,它没有其它结合靶点。研究表明，ABT-737能够结合Bcl-2、Bcl-xL、和Bcl-w，但是不能结合Bcl-B、Mcl-l和A1，由于其对Mcl-l结合能力的缺失,导致部分肿瘤细胞对其产生抗性。ABT-263是ABT-737为了改善口服给药性质发展的分子衍生物,具有与ABT-737相似的结构，在多种肿瘤细胞系中表现抗肿瘤活性。临床研究显示，ABT-263和ABT-737—样，无法拮抗Mcl-l蛋白，单剂有效性局附于急性淋巴瘤白血病细胞系,对于实体瘤无效。类似物ABT-263目前已处于II期临床试验阶段。(Cancer Cell 2006；10:389–399.,Cancer Res 2008；68:3421–3428.,Blood 2012；119:5807–5816.)。
此外，有几份研究工作也表明针对BH3肽段进行修饰的模拟肽分子同样具有很好的抗肿瘤活性，由于其结构更接近于天然，因而与小分子药物相比，具有相对低的毒性作用，因此BH3mimetics将是研发靶向Bcl2家族蛋白抗肿瘤药物的新途径。Kroemer等人发现可穿透细胞膜的BH3-peptide能够克服细胞对Bcl-2和Bcl-xL蛋白的保护作用，进入线粒体与其结合而诱导肿瘤细胞凋亡(Oncogene 2002；21,1963-1977)。研究人员采用“hydrocarbon stapling”技术修饰BH3结构域肽段后得到的模拟肽分子具有更强的细胞穿透能力和抗酶解能力，同时保持了其活性构象，与Bcl-2蛋白口袋的亲和力得到很大提高。其中，BID蛋白的BH3结构域模拟肽分子特异性激活凋亡通路而杀死白血病癌细胞(Science.2004；305(5689):1466–1470.)。采用基于残基修饰的氨基酸预组装衍生得到的BH3α/β模拟肽能够提高天然蛋白配体的亲和力、抗代谢能力及选择性(ACS ChemBiol.2015；10(7):1667-75.)。最新的研究表明：含有α/β氨基酸并采用“hydrocarbonstapling”技术修饰的BH3多肽类似物能够显著的诱导细胞凋亡，对一些肿瘤细胞具有明显的体外生长抑制活性，在10μM化合物处理人组织细胞淋巴瘤细胞U93724小时后，细胞的存活率不足40％(J.Am.Chem.Soc.137.35(2015):11365-11375.)，这些研究成果又一次表明：BH3模拟肽分子是新型BH3类抗肿瘤靶向药物研发的新方向。
上述研究中获得的BH3类似物，具有较稳定的活性构象、较好的生物稳定性和生物学活性，可作为候选药物分子应用于抗肿瘤药物的研发中。
发明内容
本发明的目的是提供了一类靶向Bcl-2家族抗凋亡蛋白的新型BH3类似物及其应用，本发明提供的所述BH3类似物结构更简单、蛋白结合活性更优异。本发明将包含BH3类似物和靶蛋白构效关系中四个关键的疏水性残基的片段作为该类化合物的最短活性片段，运用模拟肽学的思路和方法，通过天然BH3的结构简化或修饰，设计、合成了一类新型靶向Bcl-2家族抗凋亡蛋白的BH3多肽类似物，并通过实验确定了其应用范围。
为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一类靶向Bcl-2家族抗凋亡蛋白的新型BH3类似物，所述BH3类似物的结构通式如通式A所示：
Ri-lle-Ala-Gln-Glu-Leu-Arg-Arg-lle-Gly-Asp-Glu-Phe-R2
通式A
其中，R1为Ac-Ile-Trp-、Ac-Trp-、Ac-、CH3(CH2)14CO-、CH3(OCH2CH2)4OCH2CO-、Ac-Aib-、Ac-D-Ile-、Ac-Nle-、Ac-Abu-、丁酰基或戊酰基；R2为-Asn-Ala-NH2、-Asn-NH2或-NH2。
进一步的：所述BH3类似物为：
进一步的：所述化合物SM-1、SM-2、SM-3、SM-4、SM-5、SM-7在缓冲溶液中呈无规则卷曲构象，化合物SM-6在缓冲溶液中形成了类α-螺旋构象。
本发明还提供了所述的BH3类似物在制备用于预防或治疗因Bcl-2家族蛋白中抗凋亡蛋白表达异常导致的相关疾病的药物中的应用。
进一步的：所述的因Bcl-2家族蛋白中抗凋亡蛋白表达异常导致的相关疾病包括癌症、恶性血液肿瘤疾病和自身免疫性疾病。
本发明还提供了以所述的BH3类似物为活性成分的药物或药物组合物，包含所述BH3类似物和一种或多种药学上可接受的载体或赋型剂。
进一步的：所述药物或药物组合物优选为治疗白血病的药物或药物组合物。
本发明还提供了一种用于预防或治疗因Bcl-2家族蛋白中抗凋亡蛋白表达异常导致的相关疾病的适于口服给药的药物或药物组合物，包含所述BH3类似物和一种或多种药学上可接受的载体或赋型剂。
本发明还提供了一种用于预防或治疗因Bcl-2家族蛋白中抗凋亡蛋白表达异常导致的相关疾病的适于胃肠外给药的药物或药物组合物，包含所述BH3类似物和一种或多种药学上可接受的载体或赋型剂。
本发明的创新性和有益效果：本发明采用模拟肽学的策略和方法，发明了一类靶向Bcl-2抗凋亡蛋白的BH3类似物。本发明提供的BH3类似物以包含BH3结构域和靶蛋白构效关系中四个关键的疏水性残基片段为核心(SM-5，12肽)，并进行进一步的末端修饰和衍生(其中，SM-1为16肽，SM-2～SM-4为14肽，SM-6、SM-7位修饰12肽)，链长最短(SM-5，12肽)，结构更简单，合成成本更低且为首次发现。本发明采用靶蛋白结合活性和细胞活性测试评价所述BH3类似物的体外生物活性。靶蛋白结合活性采用 HT生物分子相互作用分析系统，基于表面等离子共振技术(Surface Plasmon Resonance technology,SPR)测定了所述化合物与靶蛋白的亲和力，该系统可以构建蛋白质芯片，小分子化合物芯片和糖、多肽芯片等多种芯片，从而测定多种物质之间的相互作用。通过PLEXERA SPR Date AnalysisModule(DAM)分析软件进行数据分析与拟合，可以得到结合曲线，结合，解离，平衡解离常数等动力学数据。体外肿瘤细胞生长抑制活性采用MTT法测定，肿瘤细胞分别接种于96孔板，每孔中加入含有一定浓度化合物的培养基，孵育后用MTT染色，继续孵育后，用酶标仪测定570nm处每孔的吸光度OD值，计算出细胞生长抑制率，从而初步评价化合物的活性。
实验结果证明：图1所示化合物能够与靶蛋白Bcl-2和Bcl-Xl紧密结合(kD值达到pM)。体外肿瘤细胞生长抑制实验显示，化合物对人慢性髓原白血病细胞K562、人原髓细胞白血病细胞HL-60和人组织细胞淋巴瘤细胞U937具有一定的体外生长抑制作用。因此，该类化合物可用于预防或治疗因抗凋亡Bcl-2家族蛋白异常表达相关的疾病(包括癌症、恶性血液肿瘤疾病和自身免疫性疾病等)的药物研究和开发。
附图说明
图1是本发明中7种BH3类似物的圆二色谱谱图。
具体实施方式
本发明可用以下实施例作进一步说明，但本发明并不仅限于这些实施例，下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。
本发明所述BH3类似物，均按照多肽固相合成方法得到(参考文献：Chan WG,WhitePD.Fmoc solid phase peptide synthesis A Practical Approach,Oxford UniversityPress,2000；pp.9-74.)。
实施例1：化合物SM-1的制备
(1)树脂活化：称取500mg Rink Amide-AM resin，DCM洗4次，加入5ml DCM溶涨活化3h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(2)连接Ala：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Ala-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(3)连接Asn：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Asn(Trt)-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(4)连接Phe：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Phe-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(5)连接Glu：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Glu(OtBu)-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(6)连接Asp：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Asp(OtBu)-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(7)连接Gly：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Gly-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(8)连接Ile：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Ile-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(9)连接Arg：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Arg(Mtr)-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(10)连接Arg：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Arg(Mtr)-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(11)连接Leu：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Leu-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(12)连接Glu：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Glu(OtBu)-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(13)连接Gln：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Gln-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(14)连接Ala：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Ala-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(15)连接Ile：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Ile-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(16)连接Trp：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Trp(Boc)-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(17)连接Ile：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的Fmoc-Ile-OH、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(18)连接Ac：DMF洗涤3次，分别加入3倍当量的乙酸酐、HBTU、HOBt和6倍当量的DIEA，溶于10ml DMF中，室温搅拌反应2h，DMF洗4次，加入20％哌啶DMF脱去Fmoc保护基20min，5ml DMF洗4次，5ml DCM洗4次，Kaiser’s试剂检测。
(19)切割，解侧链保护基：产物加入250mg苯酚、0.5ml水、0.5ml苯甲硫醚、9.0ml三氟乙酸，室温搅拌2.5h，过滤，N2吹去三氟乙酸，加入30ml冷的无水乙醚，5000rpm离心5分钟，得到白色沉淀，用冷的无水乙醚重复洗涤3次，真空干燥，得粗产物。
(20)粗肽用C18半制备柱(Daisogel,10μm,20*250mm)HPLC分离纯化。收集的溶液脱去乙腈后，低温冻干制得纯肽，纯度使用分析型C18反相色谱柱(Gemini-NX,5μm,4.6*250mm)分析。
其它目标化合物均按照上述步骤制备得到。所有图1所示化合物的结构、质谱数据及理化性状列于表1中。
表1 7种BH3类似物的结构、纯度、理化性状和质谱数据
实施例2：本发明化合物二级结构的确证
本实施例中采用圆二色谱法研究本发明化合物的二级结构。化合物的圆二色谱谱图如图1所示。圆二色谱是一种特殊的吸收谱，它通过测量生物大分子的圆二色光谱，从而得到生物大分子的二级结构。圆二色谱紫外区段(190-240nm)，主要生色团是肽链，这一波长范围的CD谱包含了生物大分子主链构象的信息。α-螺旋构象的CD谱在222nm、208nm处呈负峰，在190nm附近有一正峰。β-折叠构象的CD谱，在217-218nm处有一负峰，在195-198nm处有一强的正峰。无规则卷曲构象的CD谱在198nm附近有一负峰，在220nm附近有一小而宽的正峰。本实例中采用Chirascan Spectropolarimeter(Applied Photophysics Limited,UK)色谱仪，样品溶解于缓冲溶液(50mM Tris,100mM NaCl,pH 8.0)中配制为10μM溶液，20℃条件下扫描195-245nm范围波长，数据采集步长为1nm。使用Origin9.1软件进行数据分析与拟合。
图1结果表明：化合物SM-1～SM5、SM-7在缓冲溶液中为无规则卷曲构象(无规则卷曲构象的CD谱在198nm处有一负峰，在220nm处有一小而宽的正峰。)，SM-6形成了类α-螺旋(α-helix-like)构象(α-螺旋构象的CD谱在222nm、208nm处呈负峰，在190nm处有一正峰)。
实施例3：本发明化合物与靶蛋白分子相互作用
本发明采用 HT生物分子相互作用分析系统测定了所述BH3类似物与靶蛋白的亲和活性。生物分子相互作用系统是一种基于微阵列技术的表面等离子体共振成像(SPRi)系统，采用二维CCD技术对芯片上的数千个样点进行拍摄，实时分析多种生物分子之间的相互作用，无需标记。从而了解分子结合的特异性，精确计算分子结合的动力学数据，了解生物分子的结合过程。通过PLEXERA SPR Date Analysis Module(DAM)分析软件进行数据分析与拟合，可以得到结合曲线，结合，解离，平衡解离常数等动力学数据。
具体操作方法：
芯片表面用0.4M EDC(N-ethyl-N’-dimethylaminopropylcarbodiimide)和0.1MNHS(N-hydroxysuccinimide)1:1混合，以活化芯片表面。借助PDMS将蛋白置于生物芯片表面，以1M乙醇胺(ethanolamine)(pH＝8.5)进样30分钟，以封闭活化的芯片表面。
蛋白的初始浓度为1mg/ml，用PBST缓冲液按照一定的比例进行稀释，配置好化合物(10mM,根据化合物溶解性不同分别选择BSA或DMSO做溶剂)进样检测。得到的数据根据PLEXERA SPR Date Analysis Module(DAM)分析软件进行数据分析与拟合，获得结合动力学常数。所述7种BH3类似物与靶蛋白结合动力学常数如表2所示。
表2 7种BH3类似物与抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的结合活性
“\”表示该化合物在该实验中未发现与靶蛋白发生特异性结合。
实施例4：本发明采用MTT法测定了图1所示化合物的体外肿瘤细胞生长抑制活性
取对数生长的人慢性髓原白血病细胞K562、人原髓细胞白血病细胞HL-60和人组织细胞淋巴瘤细胞U937加入96孔板中，每孔含有约5000个细胞。再加入终浓度为100μM的化合物，并以阿霉素为阳性对照，以未加样品的细胞孔作为对照组，每组设3个平行孔，置于二氧化碳培养箱中37℃培养48小时，实验终止前4小时加入20μL MTT(5mg/mL)溶液，再培养4小时，弃去培养液后加入150μLDMSO，待结晶溶解后在酶联检测仪上检测570nm波长下每孔的OD值。细胞生长抑制率按如下公式计算：
抑制率(％)＝(对照孔平均OD值-处理孔平均OD值)/对照孔平均OD值
实验结果如表3所示。
表3 7种BH3类似物的体外肿瘤细胞生长抑制活性
表中数值为三次重复实验的平均值±标准差。
本发明公开的BH3类似物与已报道同类化合物相比，结构更简单，合成成本更低；化合物的靶蛋白结合活性和体外肿瘤细胞生长抑制活性结果表明：所述BH3类似物不仅与靶蛋白具有很高的亲和力，而且能够抑制体外肿瘤细胞的生长和增殖。特别是化合物SM-5和SM-6具有很高的靶蛋白亲和活性，同时，对三种细胞株，特别是U937细胞株具有较强的抑制活性。圆二色谱结果显示，化合物SM-6在形成了类α-螺旋(α-helix-like)构象，与天然BH3活性构象接近。研究结果提示该类化合物具有良好的开发前景，可进行深入的结构改造和活性研究，开发出活性更优异的化合物，用于预防或治疗因Bcl-2家族蛋白中抗凋亡蛋白表达异常导致的相关疾病的药物。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

Claims (9)

1.一类靶向Bcl-2家族抗凋亡蛋白的新型BH3类似物，其特征在于：所述BH3类似物的结构通式如通式A所示：
其中，R1为Ac-Ile-Trp-、Ac-Trp-、Ac-、CH3(CH2)14CO-、CH3(OCH2CH2)4OCH2CO-、Ac-Aib-、Ac-D-Ile-、Ac-Nle-、Ac-Abu-、丁酰基或戊酰基；R2为-Asn-Ala-NH2、-Asn-NH2或-NH2。
2.根据权利要求1所述的靶向Bcl-2家族抗凋亡蛋白的新型BH3类似物，其特征在于：所述BH3类似物为：
。
3.根据权利要求2所述的靶向Bcl-2家族抗凋亡蛋白的新型BH3类似物，其特征在于：所述化合物SM-1、SM-2、SM-3、SM-4、SM-5、SM-7在缓冲溶液中呈无规则卷曲构象，化合物SM-6在缓冲溶液中形成了类α-螺旋构象。
4.权利要求1-3任一所述的BH3类似物在制备用于预防或治疗因Bcl-2家族蛋白中抗凋亡蛋白表达异常导致的相关疾病的药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的BH3类似物在制备用于预防或治疗因Bcl-2家族蛋白中抗凋亡蛋白表达异常导致的相关疾病的药物中的应用，其特征在于：所述的因Bcl-2家族蛋白中抗凋亡蛋白表达异常导致的相关疾病包括癌症、恶性血液肿瘤疾病和自身免疫性疾病。
6.以权利要求1-3任一项所述的BH3类似物为活性成分的药物或药物组合物，包含权利要求1-3任一所述BH3类似物和一种或多种药学上可接受的载体或赋型剂。
7.根据权利要求6所述的药物或药物组合物，其特征在于：所述药物或药物组合物优选为治疗白血病的药物或药物组合物。
8.一种用于预防或治疗因Bcl-2家族蛋白中抗凋亡蛋白表达异常导致的相关疾病的适于口服给药的药物或药物组合物，包含权利要求1-3任一所述BH3类似物和一种或多种药学上可接受的载体或赋型剂。
9.一种用于预防或治疗因Bcl-2家族蛋白中抗凋亡蛋白表达异常导致的相关疾病的适于胃肠外给药的药物或药物组合物，包含权利要求1-3任一所述BH3类似物和一种或多种药学上可接受的载体或赋型剂。
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