CN106554374B - 一种从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法 - Google Patents
一种从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106554374B CN106554374B CN201611072857.XA CN201611072857A CN106554374B CN 106554374 B CN106554374 B CN 106554374B CN 201611072857 A CN201611072857 A CN 201611072857A CN 106554374 B CN106554374 B CN 106554374B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ribostamycin
- fermentation liquid
- liquid
- added
- vistamycin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/22—Cyclohexane rings, substituted by nitrogen atoms
- C07H15/222—Cyclohexane rings substituted by at least two nitrogen atoms
- C07H15/226—Cyclohexane rings substituted by at least two nitrogen atoms with at least two saccharide radicals directly attached to the cyclohexane rings
- C07H15/228—Cyclohexane rings substituted by at least two nitrogen atoms with at least two saccharide radicals directly attached to the cyclohexane rings attached to adjacent ring-carbon atoms of the cyclohexane rings
- C07H15/23—Cyclohexane rings substituted by at least two nitrogen atoms with at least two saccharide radicals directly attached to the cyclohexane rings attached to adjacent ring-carbon atoms of the cyclohexane rings with only two saccharide radicals in the molecule, e.g. ambutyrosin, butyrosin, xylostatin, ribostamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
- C07H1/06—Separation; Purification
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法，包括向核糖霉素发酵液中加入水稀释，缓加酸化剂，调节核糖霉素发酵液pH呈5.0～6.0；向核糖霉素发酵液中投入732阳离子交换树脂进行吸附至饱和状态，并抽入解吸柱，先用纯净水反洗去除杂质，然后用去离子水反洗至无氯根；用稀氨水洗涤，用氨水解吸，收集解吸液；将解吸液在搅拌浓缩，加入亚硫酸氢钠溶液及硫酸溶液，加入医用活性炭进行脱附；碳脱滤液过滤并喷雾干燥。在本发明中，通过对核糖霉素发酵液进行酸化、吸附、解吸、浓缩、成盐、碳脱、干燥，从而制备得到纯度较高的核糖霉素硫酸盐，并具有操作程序简单，重现性好的优点，可以实现工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及一种从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法。
背景技术
核糖霉素是采用核糖苷链霉菌(streptomycesribosidificus)所产生一种氨基糖苷类抗生素，其化学结构式如下所示：
核糖霉素是一种广谱抗生素，其特点是耳、肾毒性甚低,为目前已发现所有的氨糖类抗生素中毒性最低的一个，因此，被用于治疗对本品敏感的链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌属、肺炎球菌、肺炎杆菌所致的呼吸道感染、尿路感染、胆道感染等。核糖霉素通过发酵生产，因核糖霉素生产过程复杂，因此，常规工艺生产收率低，杂质高，很难满足药典要求。尤其是发酵工艺比较复杂，因此，全球能够工业化生产的发酵培养基配方和发酵生产工艺不多，也未见有公开的文献报道。
目前，核糖霉素是以放线菌为产生菌、玉米淀粉、黄豆饼粉为主要原料经过深层发酵培养得到的次级代谢产物。目前核糖霉素提取生产方法主要采用板框压滤机压滤、滤液通过离子交换树脂动态吸附或离子交换树脂直接投入发酵液进行静态吸附、实现核糖霉素的分离提取。上述工艺不足之处在于：动态吸附过程，发酵液板框过滤过程中即使添加助滤剂，发酵液仍较难过滤，过滤速度慢，过滤压力高达0.4～0.6Mpa，滤饼不成形、料液损失、过滤收率偏低，劳动强度大；而静态吸附过程，离子交换树脂在与发酵液中的残渣分离过程中，离子交换树脂流失严重，收率低下且废水污染较严重等情况。
此外，公开号：CN102532213A的中国发明专利申请公开了“一种采用膜分离技术制备核糖霉素粗品的方法”。该方法包括：微滤膜去除菌丝体、发酵液残基，超滤膜除杂、脱色和纳滤膜脱盐、富集，浓缩、干燥的步骤：含有核糖霉素的料液经过微滤膜处理，去除菌丝体、发酵液残基；微滤透过液经过超滤膜去除蛋白质、色素和多糖等大分子杂质；收集的超滤透过液经过纳滤膜进行常温脱盐、富集，脱盐液经浓缩、干燥制得核糖霉素粗品。上述现有技术仅仅公开了如何从粗品中提纯的技术方案，并未揭示如何制备核糖霉素硫酸盐，存在一定的缺陷；且上述技术方案中需要使用大量的过滤膜，因此耗材消耗量大，从而导致生产成本较高。
发明内容
本发明的目的在于公开一种从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法，以实现从核糖霉素发酵液中高效制备核糖霉素硫酸盐，降低制备成本，提高在再现性，以适用于工业化生产。
为实现上述发明目的，本发明提供了一种从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法，包括以下步骤：
步骤(1)、向核糖霉素发酵液中加入0.5～1.5倍体积的水稀释，缓加酸化剂，调节核糖霉素发酵液pH呈5.0～6.0，搅拌20～40分钟；
步骤(2)、按吸附量50000～200000u/ml的比例向核糖霉素发酵液中投入732阳离子交换树脂进行吸附至饱和状态；
步骤(3)、将呈饱和状态的732阳离子交换树脂抽入解吸柱，先用纯净水反洗去除杂质，然后用去离子水反洗至无氯根；用2～6倍体积且浓度为0.1～0.2wt％的稀氨水洗涤732阳离子交换树脂；用1～3倍体积且浓度为2～4.0wt％的氨水解吸；收集732阳离子交换树脂出口解脱单位为1000000u/ml-高峰-10000u/ml的解吸液；
步骤(4)、将步骤(3)所得的解吸液在60℃真空度为0.05～0.15MPa的条件中搅拌浓缩，待解吸液冷却至20℃，加入0.05～0.20w/v％的亚硫酸氢钠溶液及浓度为12mol/L的硫酸溶液，调节解吸液的pH呈7.0～7.5，继续搅拌，得浓缩液；
步骤(5)、将步骤(4)中的浓缩液抽入配料罐，加入0.01w/v％的亚硫酸氢钠充分搅拌，加入0.3～1.5w/v％的医用活性炭进行脱附，搅拌30分钟后加入适量EDTA，得碳脱滤液；
步骤(6)、将步骤(5)中的碳脱滤液经过板框过滤后，使用微孔滤膜进行过滤，得含有核糖霉素硫酸盐的无菌浓缩液；
步骤(7)、将步骤(6)中的含有核糖霉素硫酸盐的无菌浓缩液进行喷雾干燥，制得核糖霉素硫酸盐。
作为本发明的进一步改进，所述步骤(1)中稀释后的核糖霉素发酵液的效价不低于2000u/ml。
作为本发明的进一步改进，所述步骤(1)中的酸化剂为硫酸、盐酸或者草酸中的一种或者两种以上任意比例的混合物。
作为本发明的进一步改进，所述步骤(2)中还包括向核糖霉素发酵液中投入pH调节剂以调节核糖霉素发酵液pH呈5.0～6.0的步骤。
作为本发明的进一步改进，所述步骤(3)中的解吸液的平均效价大于80000u/ml，透光度≥95％。
作为本发明的进一步改进，所述步骤(6)中的微孔滤膜的过滤孔径为0.22～0.30μm。
作为本发明的进一步改进，所述步骤(7)中的喷雾干燥时的进塔温度为110～135℃，出塔温度100～115℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：在本发明中，通过对核糖霉素发酵液进行酸化、吸附、解吸、浓缩、成盐、碳脱、干燥，从而制备得到纯度较高的核糖霉素硫酸盐，并具有操作程序简单，重现性好的优点，可以实现工业化生产。
具体实施方式
下面结合各实施方式对本发明进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本发明的保护范围之内。
除非说明书中有特殊说明，本发明中的各个实施例中的组分、原料均采用分析纯级别。另外，各实施例中的“g”为重量单位“克”；“h”为时间单位“小时”；“ml”为体积单位“毫升”；“室温”为23℃；“u/ml”为浓度单位“单位/毫升”；“wt％”为浓度单位，即质量百分比。
从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法，包括以下步骤。
步骤(1)、向核糖霉素发酵液中加入0.5～1.5倍体积的水稀释，缓加酸化剂，调节核糖霉素发酵液pH呈5.0～6.0，搅拌20～40分钟。其中，步骤(1)中稀释后的核糖霉素发酵液的效价不低于2000u/ml。酸化剂为硫酸、盐酸或者草酸中的一种或者两种以上任意比例的混合物，并最优选为硫酸，从而避免后期使用732阳离子交换树脂中吸附多余的氯离子(氯根的一种)。
步骤(2)、按吸附量50000～200000u/ml的比例向核糖霉素发酵液中投入732阳离子交换树脂进行吸附至饱和状态。同时，优选的，在步骤(2)中还包括向核糖霉素发酵液中投入pH调节剂以调节核糖霉素发酵液pH呈5.0～6.0的步骤。该pH调节剂可为浓度为0.5mol/L的稀硫酸水溶液或者浓度为0.5mol/L的氢氧化钠水溶液。
步骤(3)、将呈饱和状态的732阳离子交换树脂抽入解吸柱，先用纯净水反洗去除杂质，然后用去离子水反洗至无氯根；用2～6倍体积且浓度为0.1～0.2wt％的稀氨水洗涤732阳离子交换树脂；用1～3倍体积且浓度为2～4.0wt％的氨水解吸；收集732阳离子交换树脂出口解脱单位为1000000u/ml-高峰-10000u/ml的解吸液。从而提高后续步骤中所得到的浓缩液中的核糖霉素的浓度，以避免带入过多的杂质。该步骤(3)中的解吸液的平均效价大于80000u/ml，透光度≥95％。
步骤(4)、将步骤(3)所得的解吸液在转配有搅拌装置的浓缩罐中，在60℃真空度为0.05～0.15MPa的条件中搅拌浓缩，待解吸液冷却至20℃，加入0.05～0.20w/v％的亚硫酸氢钠溶液及浓度为12mol/L的硫酸水溶液，调节解吸液的pH呈7.0～7.5，继续搅拌，得浓缩液。该浓缩罐对解吸液进行浓缩的速度为500～700L/h。该浓缩速度对最终制备得到的核糖霉素硫酸盐具有重要影响。浓缩速度太慢浪费时间，浓缩速度太快会导致杂质上升。
经过长期实验证明该浓缩罐对解吸液进行浓缩的速度为500～700L/h是一个最合理且效果最好的范围。在本实施例中，亚硫酸氢钠溶液中的亚硫酸氢钠及12mol/L的硫酸水溶液中的硫酸是硫酸根离子与核糖霉素成盐的有效试剂。
步骤(5)、将步骤(4)中的浓缩液抽入配料罐，加入0.01w/v％的亚硫酸氢钠充分搅拌，加入0.3～1.5w/v％的医用活性炭进行脱附，搅拌30分钟后加入适量EDTA，作为螯合剂，使加入的亚硫酸氢钠的硫酸根离子能够与更好的与核糖霉素配位形成核糖霉素硫酸盐，最后得碳脱滤液。
核糖霉素硫酸盐的化学结构式如下所示：
步骤(6)、将步骤(5)中的碳脱滤液经过板框过滤后，使用微孔滤膜进行过滤，得含有核糖霉素硫酸盐的无菌浓缩液。该步骤(6)中的微孔滤膜的过滤孔径为0.22～0.30μm，并进一步优选为过滤孔径为0.22μm的微孔滤膜。
步骤(7)、将步骤(6)中的含有核糖霉素硫酸盐的无菌浓缩液进行喷雾干燥，制得核糖霉素硫酸盐。该步骤(7)中的喷雾干燥时的进塔温度为110～135℃，出塔温度100～115℃。
上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (7)
1.一种从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤(1)、向核糖霉素发酵液中加入0.5～1.5倍体积的水稀释，缓加酸化剂，调节核糖霉素发酵液pH呈5.0～6.0，搅拌20～40分钟；
步骤(2)、按吸附量50000～200000u/ml的比例向核糖霉素发酵液中投入732阳离子交换树脂进行吸附至饱和状态；
步骤(3)、将呈饱和状态的732阳离子交换树脂抽入解吸柱，先用纯净水反洗去除杂质，然后用去离子水反洗至无氯根；用2～6倍体积且浓度为0.1～0.2wt％的稀氨水洗涤732阳离子交换树脂；用1～3倍体积且浓度为2～4.0wt％的氨水解吸；收集732阳离子交换树脂出口解脱单位为1000000u/ml-高峰-10000u/ml的解吸液；
步骤(4)、将步骤(3)所得的解吸液在60℃真空度为0.05～0.15MPa的条件中搅拌浓缩，待解吸液冷却至20℃，加入0.05～0.20w/v％的亚硫酸氢钠溶液及浓度为12mol/L的硫酸溶液，调节解吸液的pH呈7.0～7.5，继续搅拌，得浓缩液；
步骤(5)、将步骤(4)中的浓缩液抽入配料罐，加入0.01w/v％的亚硫酸氢钠充分搅拌，加入0.3～1.5w/v％的医用活性炭进行脱附，搅拌30分钟后加入适量EDTA，得碳脱滤液；
步骤(6)、将步骤(5)中的碳脱滤液经过板框过滤后，使用微孔滤膜进行过滤，得含有核糖霉素硫酸盐的无菌浓缩液；
步骤(7)、将步骤(6)中的含有核糖霉素硫酸盐的无菌浓缩液进行喷雾干燥，制得核糖霉素硫酸盐。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中稀释后的核糖霉素发酵液的效价不低于2000u/ml。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的酸化剂为硫酸、盐酸或者草酸中的一种或者两种以上任意比例的混合物。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中还包括向核糖霉素发酵液中投入pH调节剂以调节核糖霉素发酵液pH呈5.0～6.0的步骤。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的解吸液的平均效价大于80000u/ml，透光度≥95％。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)中的微孔滤膜的过滤孔径为0.22～0.30μm。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(7)中的喷雾干燥时的进塔温度为110～135℃，出塔温度100～115℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201611072857.XA CN106554374B (zh) | 2016-11-29 | 2016-11-29 | 一种从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201611072857.XA CN106554374B (zh) | 2016-11-29 | 2016-11-29 | 一种从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106554374A CN106554374A (zh) | 2017-04-05 |
| CN106554374B true CN106554374B (zh) | 2018-11-27 |
Family
ID=58445909
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201611072857.XA Active CN106554374B (zh) | 2016-11-29 | 2016-11-29 | 一种从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106554374B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111004298A (zh) * | 2019-12-20 | 2020-04-14 | 无锡福祈制药有限公司 | 一种高纯度硫酸核糖霉素的制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101012246A (zh) * | 2006-12-20 | 2007-08-08 | 福州大学 | 氨基糖苷类抗生素的离子交换提纯方法 |
| CN102532213A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-07-04 | 福建和泉生物科技有限公司 | 一种采用膜分离技术制备核糖霉素粗品的方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013191550A1 (en) * | 2012-06-20 | 2013-12-27 | Rijksuniversiteit Groningen | Regioselective diazotation of aminoglycosides |
-
2016
- 2016-11-29 CN CN201611072857.XA patent/CN106554374B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101012246A (zh) * | 2006-12-20 | 2007-08-08 | 福州大学 | 氨基糖苷类抗生素的离子交换提纯方法 |
| CN102532213A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-07-04 | 福建和泉生物科技有限公司 | 一种采用膜分离技术制备核糖霉素粗品的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106554374A (zh) | 2017-04-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103044508B (zh) | 从发酵液中提取结晶硫氰酸红霉素的方法 | |
| CN102040531B (zh) | 一种提取l-异亮氨酸的方法 | |
| CN101948494B (zh) | 一种腺苷钴胺提取方法 | |
| CN103922953B (zh) | 一种鸟氨酸的生产工艺 | |
| CN109081844B (zh) | 一种从发酵培养物中提取大观霉素的方法 | |
| CN101654413A (zh) | 三级膜串联提取分离l-异亮氨酸的方法 | |
| CN109678743B (zh) | 一种l-缬氨酸的分离纯化方法 | |
| CN106554374B (zh) | 一种从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法 | |
| CN109553650B (zh) | 红霉素发酵液的水相提取方法 | |
| CN103420826A (zh) | 从发酵液中提取丁二酸的方法 | |
| CN104119241A (zh) | 一种l-亮氨酸的提取方法 | |
| CN111056941B (zh) | 一种利用银杏叶提取物层析废液制备高纯度莽草酸的方法 | |
| CN110698472B (zh) | 一种吡咯喹啉醌的纯化方法 | |
| CN105238841B (zh) | 头孢菌素c吸附废液中dcpc的回收与转化方法 | |
| CN108570079B (zh) | 一种弱酸性阳离子树脂漏吸提纯阿米卡星的方法 | |
| CN102964213B (zh) | 一种从赤藓糖醇结晶母液中回收赤藓糖醇的方法 | |
| CN109851520A (zh) | 一种l-茶氨酸的分离纯化方法 | |
| CN104152508A (zh) | 直接从生产栀子黄色素的废液中提取京尼平的方法 | |
| CN102391329B (zh) | 一种采用膜分离技术制备巴龙霉素粗品的方法 | |
| CN112679526B (zh) | 一种从d-7-aca结晶母液中回收d-7-aca的方法 | |
| CN109956967A (zh) | 一种植酸提取精制的方法 | |
| CN112409426B (zh) | 一种硫酸西索米星的制备方法 | |
| CN107641149A (zh) | 一种利用离子交换树脂提高盐酸万古霉素纯度的方法 | |
| CN106349305A (zh) | 一种硫酸链霉素提取制备方法 | |
| CN112390806A (zh) | 一种提高大观霉素提取收率的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220729 Address after: No. 219, furongzhong 4th Road, Xishan Economic Development Zone, Wuxi City, Jiangsu Province, 214000 Patentee after: Zhuohe Pharmaceutical Group Co.,Ltd. Address before: 214000 Wuxi City, Jiangsu Province No.2 Rongyang 1st Road, Xishan District, Wuxi City, Jiangsu Province Patentee before: WUXI FORTUNE PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. |