CN106508685B - “一步三阶段”生产马铃薯试管薯的方法及其培养瓶 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种生产马铃薯试管薯的方法，以脱毒马铃薯试管苗为材料，采用改良的高钾MS培养基，分阶段液体培养马铃薯试管苗，在光暗条件下，诱导马铃薯试管薯。所述改良的高钾MS培养基中N:P:K的比例为10:1:15，采用“一步三阶段”液体培养。同时，提供了一种马铃薯试管薯生产的培养瓶，培养瓶包括瓶盖、瓶体，在瓶盖上设有透气柱，瓶体分为上下两部分，上部瓶体直径略粗于下部瓶体，下部瓶体有黑色涂层；在上部和下部瓶体处放置培养板，培养板上开有培养孔。本发明的生产方法和专用培养瓶，可节省操作时间，节省成本，缩短马铃薯试管薯的生产周期，提高单瓶结薯数(每瓶按25株计算)。

Description

“一步三阶段”生产马铃薯试管薯的方法及其培养瓶
技术领域
本发明与马铃薯脱毒快繁技术有关，属于生物技术细胞工程中的植物组织培养领域。
背景技术
我国自20世纪70年代，就开展了利用脱毒技术和植物组织培养技术快速繁殖马铃薯无毒种苗。该繁殖技术取得了巨大的成功，已成为马铃薯种薯生产的重要环节；但仍存在着繁殖周期较长、操作过程繁琐，生产成本较高等关键问题。部分相关的技术文献报道如下：发明专利申请“大量生产无类病毒病和病毒病马铃薯繁殖材料的方法”(专利申请号：87106041.8)，“活体外-活体内生产马铃薯微瘤的一种有效工艺”(专利申请号：88101458.3)，“马铃薯脱毒微型种薯快繁技术”(专利申请号：90106636.2)，“马铃薯组培苗分化培养方法”(专利申请号：01140273.3)，上述专利中涉及的方法虽具有一定的生产推广价值，但仍需在田间开放条件下繁殖多年，很大程度上会产生病毒再次感染，给生产造成损失，同时其生产用种的成本亦偏高。
马铃薯试管薯的生产可解决上述问题。马铃薯试管薯是指在组织培养的条件下，以经过茎尖分生组织培养脱去主要病毒的马铃薯脱毒苗为材料，通过控制培养基的成分和培养条件，诱导腋芽顶端膨大所形成的块茎。试管薯具有无病原、体积小、运输储运方便，能工厂化周年生产等优势，展现出良好的产业化前景。目前马铃薯试管薯的生产主要有两种方式：其一，是在一般组织培养室中，以玻璃器皿为容器，先培养结薯母苗，然后将其整体转入结薯培养基中诱导试管薯(连勇等，马铃薯杂志，1994，8卷，4期：连勇等，马铃薯杂志，1994，13 卷，1期)；其二，是利用类似于生物反应器的特殊装置，在较大的容器中生产试管薯(Hulscher et al,International symposium an plant production in closedecosystem.Automation,Culture and Environment,August 26-29,1996,Narita,Japan.ActaHorticulture.1996,No.440，533-538；Akita M and Ohta Y,Plant CellReports.1998,vol.18,No.3-4,284-287；Jimenez E,et al.Plant Cell, Tissue andOrgan Culuture.1999,vol.59,No.1,19-23)。前者需经过多次更换培养基和转接，费时、费工、生产周期长、成本较高(约100天左右)；后者采用小型生物反应器生产试管薯，虽在生产效率上有一定的改善，但需要特殊的设备，生产成本高，推广应用困难。中国专利申请“一种高效生产马铃薯试管薯的方法及其培养盒”(专利申请号：02131125.0)，虽在培养技术上做了改进，采用一步培养法，即：将马铃薯基础苗直接接种于试管薯诱导培养基上，省略了结薯母苗的培养过程；但基础苗一般较弱，结薯率较低，且其前期仍需在其他容器培养基础苗，并未实际缩短培养周期。
目前，用于植物组织培养的器具或装置也有一些报道。例如：实用新型专利“一种培养瓶结构”(中国实用新型专利号：ZL 95244625.1)，在一个玻璃锥形瓶的瓶底开通形成开口面积较大的瓶口，呈筒状体的承物盘的外径小于瓶口内径，其底侧周缘向外凸起一缘边，缘边的外径大于瓶口内径，并开有至少一个气孔，枢盖余瓶口相连接，枢盖上至少开有一个气孔，其内可存放虑棉块，瓶口外圈的瓶体有一圈遮阴部。实用新型专利“植物组织培养瓶” (专利号：ZL 99252172.6)，该实用新型培养瓶包括瓶体和置于瓶体扣上的瓶盖设有带透气孔的进气孔，进气孔内置有透气片和内部通气孔压紧帽等构成，瓶盖与瓶体之间需要借助一个专门设置的消毒用的中间盖体。“一种高效生产马铃薯试管薯的方法及其培养盒”(专利号：ZL02131125.0)，该培养盒为方形，由下筒体和盒盖构成，盒盖上设计了即有利于通气又有利于无菌培养的透气柱。上述培养瓶或培养盒均存在着设计复杂，不便操作，生产成本较高等问题；且无培养板支撑，试管苗易倒伏或需要另外添加脱脂棉等支持物。实用新型专利“马铃薯脱毒基础苗液体培养用组培瓶”(授权公告号：CN 201947752 U)，其培养瓶包括瓶体和瓶盖，在瓶盖上设有通气滤膜，在瓶体内设有与瓶体轴向垂直的培养板，培养板与瓶底间距为0.3-0.7cm。该培养瓶通过增加培养板解决了试管苗倒伏的问题，但培养板与瓶底的距离过短，容纳的培养液量少，只适用于短时间基础苗的培养，不适用于多阶段试管苗的培养和试管薯的诱导。
综上所述，目前现有马铃薯试管薯生产技术依然存在着技术规程有待优化，繁殖效率有待提高，生产成本有待降低，配套生产装置有待于革新等问题。
发明内容
为解决现有技术费时、费工、生产周期长、成本高的问题，本发明提供一种“一步三阶段”生产马铃薯试管薯的方法，可简化操作程序，缩短生产周期，提高生产效率，降低生产成本。
本发明提供的技术方案如下：
一种生产马铃薯试管薯的方法。以脱毒马铃薯试管苗为材料，采用改良的高钾MS培养基，在光暗条件下，分阶段培养液体马铃薯试管苗，诱导马铃薯试管薯。具体地，所述改良的高钾MS培养基中N:P:K的比例为10:1:15，提高了硝态氮比例，不添加有机物质，采用“一步三阶段”液体培养：第一阶段基础苗培养，向培养瓶中加入“试管苗培养基”，在25-27℃、光强2000-3000lux条件下每天光照14-16小时；第二阶段壮苗培养，无需更换培养基，去顶芽(用于转接)，在23-25℃、光强2000-3000lux条件下每天光照14-16小时；第三阶段试管薯诱导，无需倒出原“试管苗培养基”，直接在培养瓶加入“试管薯诱导培养基”，“试管薯诱导培养基”体积为原“试管苗培养基”体积的2/3，在18-20℃、光强500-1000lux下每天光照6-8小时。
按上述方法培养液体马铃薯试管苗和诱导试管薯，其中所述高钾MS培养基分成为： NH4NO3 1050mg/L、KNO3 2450mg/L、KH2PO4 300mg/L、CaCl2 440mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、Fe·NaEDTA 30mg/L、H3B03 6.0mg/L、MnSO4·H2O 8.6mg/L、ZnS04·7H2O 3.4mg/L、CuS04 5H2O 0.20mg/L。培养基中N:P:K比例为10:1:15，提高了硝态氮的比例，不添加有机物质。试管苗培养基为：高钾MS培养基+白糖30g/L+活性炭1.5g/L，pH值为5.8；试管薯诱导培养基为：高钾MS培养基+香豆素90mg/L+白糖120g/L+活性炭8g/L，pH值为5.8。本发明采用高水平的硝态氮更利于植物吸收，促进植物生长；同时，不添加有机物，能够减轻菌污染。
上述“一步三阶段”的培养方法，即基础苗培养、壮苗培养和试管薯诱导在一个培养瓶中进行，避免多次更换培养基、苗子转接等过程，可节省1/2以上的操作时间。不同阶段设置不同的温度、光强和光照时间，分别适应马铃薯基础苗快速生长(25-27℃，光强2000-3000lux 条件下每天光照14-16小时)、马铃薯匍匐茎的形成(23-25℃，光强2000-3000lux下每天光照14-16小时)和试管薯的诱导(18-20℃，光强500-1000lux下每天光照6-8小时)。
同时，本发明还提供了一种适合于“一步三阶段”生产马铃薯试管薯的培养瓶。所述培养瓶包括瓶盖(2)、瓶体(3，6)，在瓶盖(2)上设有透气柱(1)。瓶体(3，6)分为上下两部分，下部瓶体(6)直径略窄于上部瓶体(3)，下部瓶体(6)有黑色涂层；在上部和下部瓶体交界处放置培养板(4)，培养板上开有培养孔(5)。
所述培养瓶可采用玻璃或塑料材质。
该培养瓶的设计，改进了原有类似产品的结构。下部瓶体有黑色涂层，能够模拟根部环境，促进壮苗和结薯；培养板(4)宽松搁置于下部瓶体(6)上，便于培养板(4)搁置，不需要额外的支撑物，方便操作。
优选的，培养板(4)与瓶底(7)间距2-3cm，可以容纳足量的培养基，并为根系生长提供充足的空间，能够满足“一步三阶段”长时间培养的需要；培养板(4)上培养孔直径0.3-0.4cm，即可以保证组培苗切段直立于液体培养基上，又不造成操作困难。
更优选的，透气柱孔径为2-3cm。
更优选的，上部瓶体(3)内径为8.0cm，高为12cm，培养板(4)直径为7.8cm，下部瓶体(6)内径为7.5cm。瓶体部分直径和高度为建议尺寸，方便于整个培养瓶的拿取。
所述培养瓶可全程实现液体培养，达到壮苗促薯，降低生产成本。该培养瓶还解决了试管苗液体培养不能直立，而固体生产成本高、生长周期长、长势弱等问题；且黑色下部瓶体模拟马铃薯根部生长所需的黑暗条件，有利于植株的生长和试管薯的诱导。
本发明的有益效果在于：
与现有技术相比，本发明的生产方法和专用培养瓶，可节省操作时间1/2以上，节省成本1/3以上，马铃薯试管薯的生产周期从原来的90-100天左右缩短为70-80天左右，单瓶结薯数(每瓶平均按25株计算)可到35-45粒，较常规方法提高50％以上。
附图说明
图1：是本发明的马铃薯试管薯专用培养瓶的结构示意图。
图中：1—透气柱，2—瓶盖，3—上部瓶体，4—培养板，5—培养孔，6—下部瓶体，7—瓶底。
具体实施方式
一种生产马铃薯试管薯的方法设计思路如下：以脱毒马铃薯试管苗为材料，采用改良的高钾MS培养基，在光暗条件下，分阶段培养液体马铃薯试管苗，诱导马铃薯试管薯。具体地，所述改良的高钾MS培养基中N:P:K的比例为10:1:15，采用“一步三阶段”液体培养：第一阶段基础苗培养，向培养瓶中加入“试管苗培养基”，在25-27℃、光强2000-3000lux 条件下每天光照14-16小时；第二阶段壮苗培养，无需更换培养基，去顶芽(用于转接)，在23-25℃、光强2000-3000lux条件下每天光照14-16小时；第三阶段试管薯诱导，无需倒出原“试管苗培养基”，直接在培养瓶加入“试管薯诱导培养基”，“试管薯诱导培养基体积为原“试管苗培养基”体积的2/3，在18-20℃、光强500-1000lux下每天光照6-8小时。
按上述方法培养液体马铃薯试管苗和诱导试管薯，其中所述高钾MS培养基分成为： NH4NO3 1050mg/L、KNO3 2450mg/L、KH2PO4 300mg/L、CaCl2 440mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、Fe·NaEDTA 30mg/L、H3B03 6.0mg/L、MnSO4·H2O 8.6mg/L、ZnS04·7H2O 3.4mg/L、CuS04 5H2O 0.20mg/L。培养基中N:P:K比例为10:1:15，提高了硝态氮的比例，不添加有机物质。试管苗培养基为：高钾MS培养基+白糖30g/L+活性炭1.5g/L，pH值为5.8；试管薯诱导培养基为：高钾MS培养基+香豆素90mg/L+白糖120g/L+活性炭8g/L，pH值为5.8。
实施例1：
马铃薯品种和试管薯诱导条件设计：改良的高钾MS培养基，配制大量元素、微量元素，添加白糖30g/L、活性炭1.5g/L，配制成液体“试管苗培养基”，调整pH值为5.8，每瓶装培养基约60mL；121℃，高压灭菌备用。在超净工作台上，每瓶接种马铃薯品种“鲁引1号”脱毒试管苗节段25个，分“三阶段”培养。第一阶段为基础苗培养：在25℃，光强2000lux 下每天光照16小时，培养约15天，待苗高长至6-7cm。第二节段为壮苗培养：无需更换培养基，剪取顶芽(用于转接)，在23℃、光强2000lux下每天光照16小时，培养约20天，待苗高长至8-10cm。第三阶段为试管薯诱导：改良的高钾MS培养基，配制成大量元素、微量元素，添加香豆素90mg/L、白糖120g/L、活性炭8g/L，调整pH值为5.8，121℃，高压灭菌；无需倒出原“试管苗培养基”，直接在培养瓶加入“试管薯诱导培养基”，每瓶约40mL (原“试管苗培养基”体积的2/3)；在18℃，光强600lux下每天光照8小时，在第45天，收获试管薯。每瓶收获试管薯40-45粒。
实施例2：
马铃薯品种和试管薯诱导条件设计：改良的高钾MS培养基，配制大量元素、微量元素，添加白糖30g/L、活性炭1.5g/L，配制成液体“试管苗培养基”，调整pH值为5.8，每瓶装培养基约60mL；121℃，高压灭菌备用。在超净工作台上，每瓶接种马铃薯品种“荷兰15”脱毒试管苗节段25个，分“三阶段”培养。第一阶段为基础苗培养：在25℃，光强2000lux 下每天光照16小时，培养约15天，待苗高长至6-7cm。第二节段为壮苗培养：无需更换培养基，剪取顶芽(用于转接)，在23℃、光强2000lux下每天光照16小时，培养约20天，待苗高长至8-10cm。第三阶段为试管薯诱导：改良的高钾MS培养基，配制成大量元素、微量元素，添加香豆素90mg/L、白糖120g/L、活性炭8g/L，调整pH值为5.8，121℃，高压灭菌；无需倒出原“试管苗培养基”，直接在培养瓶加入“试管薯诱导培养基”，每瓶约40mL (原“试管苗培养基”体积的2/3)；在18℃，光强500lux下每天光照8小时，在第45天，收获试管薯。每瓶收获试管薯35-40粒。
实施例3：
马铃薯品种和试管薯诱导条件设计：改良的高钾MS培养基，配制大量元素、微量元素，添加白糖30g/L、活性炭1.5g/L，配制成液体“试管苗培养基”，调整pH值为5.8，每瓶装培养基约60mL；121℃，高压灭菌备用。在超净工作台上，每瓶接种马铃薯品种“荷兰15”脱毒试管苗节段25个，分“三阶段”培养。第一阶段为基础苗培养：在26℃，光强2500lux 下每天光照15小时，培养约15天，待苗高长至6-7cm。第二节段为壮苗培养：无需更换培养基，剪取顶芽(用于转接)，在24℃、光强2500lux下每天光照15小时，培养约20天，待苗高长至8-10cm。第三阶段为试管薯诱导：改良的高钾MS培养基，配制成大量元素、微量元素，添加香豆素90mg/L、白糖120g/L、活性炭8g/L，调整pH值为5.8，121℃，高压灭菌；无需倒出原“试管苗培养基”，直接在培养瓶加入“试管薯诱导培养基”，每瓶约40mL (原“试管苗培养基”体积的2/3)；在19℃，光强800lux下每天光照7小时，在第45天，收获试管薯。每瓶收获试管薯35-40粒。
实施例4：
马铃薯品种和试管薯诱导条件设计：改良的高钾MS培养基，配制大量元素、微量元素，添加白糖30g/L、活性炭1.5g/L，配制成液体“试管苗培养基”，调整pH值为5.8，每瓶装培养基约60mL；121℃，高压灭菌备用。在超净工作台上，每瓶接种马铃薯品种“荷兰15”脱毒试管苗节段25个，分“三阶段”培养。第一阶段为基础苗培养：在27℃，光强3000lux 下每天光照14小时，培养约15天，待苗高长至6-7cm。第二节段为壮苗培养：无需更换培养基，剪取顶芽(用于转接)，在25℃、光强3000lux下每天光照14小时，培养约20天，待苗高长至8-10cm。第三阶段为试管薯诱导：改良的高钾MS培养基，配制成大量元素、微量元素，添加香豆素90mg/L、白糖120g/L、活性炭8g/L，调整pH值为5.8，121℃，高压灭菌；无需倒出原“试管苗培养基”，直接在培养瓶加入“试管薯诱导培养基”，每瓶约40mL (原“试管苗培养基”体积的2/3)；在20℃，光强1000lux下每天光照6小时，在第45天，收获试管薯。每瓶收获试管薯35-40粒。
对比例1：
马铃薯品种和试管薯诱导条件设计：常规MS培养基，配制大量元素、微量元素，添加白糖30g/L、琼脂粉6g/L，配制成固体培养基，调整pH值为5.8，每瓶装培养基约40mL；121℃，高压灭菌备用。在超净工作台上，每瓶接种马铃薯品种“鲁引1号”脱毒试管苗节段25个，在25-27℃，光强2000-3000lux下每天光照16小时，培养20-25天，待苗高长至6-7cm。将带有4-5个茎节的苗，去掉顶芽，打破顶端优势，接种在液体培养基(常规 MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，另外加入活性炭0.15％、白糖3％，pH值为5.8)上，每瓶接种4-5个茎段，进行浅层静止培养；昼夜温度分别为25℃和16℃，每天光照16h，光强2000Lux；培养10天左右，每个茎段由时腋处生出多个小苗。20-25天后，每个腋芽发育成具有5-7个茎节的健壮苗时，倒出原有液体培养基换成诱导培养基(常规MS+BA5.0mg/L+CCC500mg/L，白糖8％，活性炭0.5％，pH值为5.8)或将壮苗转入含有诱导培养基的新培养瓶，每瓶装培养基约60mL，在25℃条件下全黑暗培养；约40-45天，收获试管薯。每瓶收获试管薯25-30 粒。
对比例2：
马铃薯品种和试管薯诱导条件设计：常规MS培养基，配制大量元素、微量元素，添加白糖30g/L、琼脂粉6g/L，配制成固体培养基，调整pH值为5.8，每瓶装培养基约40mL；121℃，高压灭菌备用。在超净工作台上，每瓶接种马铃薯品种“荷兰15”脱毒试管苗节段25个，在25-27℃，光强2000-3000lux下每天光照16小时，培养20-25天，待苗高长至6-7cm。将带有4-5个茎节的苗，去掉顶芽，打破顶端优势，接种在液体培养基(常规 MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，另外加入活性炭0.15％、白糖3％，pH值为5.8)上，每瓶接种4-5个茎段，进行浅层静止培养；昼夜温度分别为25℃和16℃，每天光照16h，光强2000Lux；培养10天左右，每个茎段由时腋处生出多个小苗。20-25天后，每个腋芽发育成具有5-7个茎节的健壮苗时，倒出原有液体培养基换成诱导培养基(常规MS+BA5.0mg/L+CCC500mg/L，白糖8％，活性炭0.5％，pH值为5.8)或将壮苗转入含有诱导培养基的新培养瓶，每瓶装培养基约60mL，在25℃条件下全黑暗培养；约40-45天，收获试管薯。每瓶收获试管薯20-25 粒。
将本发明的技术方案与传统方法培养的马铃薯试管薯对比生产效率，汇总结果如表1所示。
表1不同培养技术马铃薯试管薯的生产效率比较
注：传统方法见对比例1和2(原霁虹，等.马铃薯生产技术[M].武汉大学出版社,2015)
最后应该说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分进行等同替换。实施例中所列出的尺寸，仅为优选尺寸，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。

Claims (7)

1.一种生产马铃薯试管薯的方法，以脱毒马铃薯试管苗为材料，采用改良的高钾MS培养基，在光暗条件下，分阶段培养液体马铃薯试管苗，诱导马铃薯试管薯，其特征在于：所述改良的高钾MS培养基中N:P:K的比例为10:1:15，采用“一步三阶段”液体培养：第一阶段基础苗培养，向培养瓶中加入“试管苗培养基”培养；第二阶段壮苗培养，无需更换培养基，去顶芽培养；第三阶段试管薯诱导，无需倒出原“试管苗培养基”，直接在培养瓶加入“试管薯诱导培养基”培养，“试管薯诱导培养基”体积为原“试管苗培养基”体积的2/3；
所述培养瓶包括瓶盖(2)、瓶体(3，6)，在瓶盖(2)上设有透气柱(1)，瓶体(3，6)分为上下两部分，下部瓶体(6)直径略窄于上部瓶体(3)，下部瓶体(6)有黑色涂层；在上部和下部瓶体交界处放置培养板(4)，培养板上开有培养孔(5)；
所述改良的高钾MS培养基分成为：NH4NO3 1050mg/L、KNO3 2450mg/L、KH2PO4 300mg/L、CaCl2 440mg/L、MgSO4˙7H2O 370mg/L、Fe˙NaEDTA 30mg/L、H3B03 6.0mg/L、MnSO4˙H2O8.6mg/L、ZnS04·7H2O 3.4mg/L、CuS04 5H2O 0.20mg/L；
所述“试管苗培养基”，其组分为：改良的高钾MS培养基+白糖30g/L+活性炭1.5g/L；
第三阶段所述“试管薯诱导培养基”组分为：高钾MS培养基+香豆素90mg/L+白糖120g/L+活性炭8g/L。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：第一阶段基础苗培养，在25～27℃，光强2000-3000lux下每天光照14-16小时；第二阶段壮苗培养，去顶芽，在23～25℃，光强2000-3000lux下每天光照14-16小时；第三阶段试管薯诱导，在18-20℃，光强500-1000lux下每天光照6-8小时。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：第一阶段基础苗培养中，温度为25℃，光强为2000lux，每天光照16小时；第二阶段壮苗培养中，温度为23℃，光强为2000lux，每天光照16小时；第三阶段试管薯诱导中，温度为18℃，光强500lux，每天光照8小时。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：第一阶段基础苗培养中，温度为27℃，光强为3000lux，每天光照14小时；第二阶段壮苗培养中，温度为25℃，光强为3000lux，每天光照14小时；第三阶段试管薯诱导中，温度为20℃，光强1000lux，每天光照6小时。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：第一阶段基础苗培养中，温度为26℃，光强为2500lux，每天光照15小时；第二阶段壮苗培养中，温度为24℃，光强为2500lux，每天光照15小时；第三阶段试管薯诱导中，温度为19℃，光强800lux，每天光照7小时。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述培养瓶的培养板(4)宽松搁置于下部瓶体(6)上，所述培养板(4)与瓶底(7)间距2-3cm，培养板(4)上培养孔直径0.3-0.4cm，透气柱的孔内径为2-3cm。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述培养瓶，上部瓶体(3)内径为8.0cm，高为12cm，培养板(4)直径为7.8cm，下部瓶体(6)内径为7.5cm。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN108040878A (zh) * 2017-12-25 2018-05-18 上海曼森生物科技有限公司 组织培养瓶以及进行组织培养的操作方法
CN111374050A (zh) * 2018-12-30 2020-07-07 甘肃康勤薯业有限公司 一种马铃薯试管薯的繁育方法
CN110192529B (zh) * 2019-07-10 2020-12-29 延边朝鲜族自治州农业科学院（延边特产研究所） 一种马铃薯种苗的扩繁的方法
CN113455393A (zh) * 2021-07-21 2021-10-01 华中农业大学 一种基于二氧化碳加富诱导马铃薯试管薯的方法
CN116584390A (zh) * 2023-06-08 2023-08-15 江苏三黍生物科技有限公司 一种马铃薯微型薯的无激素液体培养诱导方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102919126A (zh) * 2012-11-12 2013-02-13 达州市农业科学研究所 一种脱毒马铃薯试管薯循环生产工艺
CN104285785A (zh) * 2013-07-19 2015-01-21 四川农业大学 一种适合马铃薯品种“川芋10号”试管薯诱导方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102919126A (zh) * 2012-11-12 2013-02-13 达州市农业科学研究所 一种脱毒马铃薯试管薯循环生产工艺
CN104285785A (zh) * 2013-07-19 2015-01-21 四川农业大学 一种适合马铃薯品种“川芋10号”试管薯诱导方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
脱毒马铃薯试管薯诱导技术探索;宁志珩等;《中国马铃薯》;20071231;第21卷(第1期);第33-38页，尤其是第33页摘要，第34-35页第2.2.1-2.2.4节，第36-37页第2.3节，
马铃薯试管薯生产技术;张健;《吉林蔬菜》;20121231;第8页第1-4节

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