CN1064805A - 化妆品 - Google Patents

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下田浩子
吉井隆
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Abstract

一种化妆品材料，含有从Pleurotus Sajorcaju的 菌丝体培养液中提取的精制液。Pleurotus Sajircaju 的培养精制液具有良好的抑制紫外线损伤、抑制黑色 素生成以及抗氧化的作用，因此，掺有这种精制液的 化妆品，在施用到皮肤上时可以有效地预防因紫外线 而引起的皱纹、色素沉积等皮肤老化现象，在施用于 头皮上时，可有效地抑制头皮屑和搔痒症。

Description

本发明是关于防止皮肤老化及防止皮脂氧化的化妆品，这种化妆品的特征是含有Pleurotus  Sajorcaju  菌丝体培养液的精制液（下文中简称为培养精制液）。
众所周知，皮肤与其他的内脏器官不同，它容易受外界因素例如阳光、温度、湿度等物理因素或洗涤剂等化学因素的影响，其中尤以阳光中所含的紫外线对皮肤的影响最甚，往往导致产生皱纹、色素沉积、干燥肌等皮肤老化现象。以往，为了预防上述现象发生，人们使用掺有紫外线吸收剂、保湿剂、细胞活化剂、防氧化剂等的化妆品，可是效果并不理想，此外还具有光敏性等对皮肤不良的副作用，因此在使用上存在一些问题。
鉴于上述情况，本发明人对于不会由于紫外线而引起皮肤老化的化妆品进了研究，经反复研究的结果，发现Pleurotus  Sajorcaju的培养精制液具有良好的抑制紫外线损伤、抑制黑色素生成以及抗氧化等作用，而且对皮肤具有高度的安全性，进一步研究的结果还发现，掺入这种培养精制液的化妆品在用于皮肤时，具有防止因紫外线而引起的皱纹、色素沉积等皮肤老化现象的效果，在用于头皮时，具有防止皮脂氧化、消除头皮屑和搔痒的效果，从而完成了本发明。
也就是说，本发明是一种具有高度安全性的用于皮肤或头皮的化妆品，其特征是，在外用剂基料中掺入Pleurotus  Sajorcaju菌丝体的培养精制液。
本发明的有效成分是由Pleurotus  Sajorcaju的培养液中提取的，它是对Pleurotus  Sajorcaju的菌丝体进行液体培养，然后除去菌丝体，最后精制而得到的水溶性液体，它是采用常规的实施方法精制而得到的。所谓Pleurotus  Sajorcaju是一种名叫Plerotus  Sajorcaju的印度产的担子菌类，在此之前还没有人将它用作化妆品的配料，尤其是完全不知道它具有抑制紫外线损伤的作用、抑制黑色素生成的作用及抗氧化作用。
本发明的培养精制液，由于具有良好的抑制紫外线损伤的作用和抑制黑色素生成的作用，因此在将含有这种培养精制液的化妆品施用于皮肤上时，对于由有害的紫外线所引起的，表示皮肤老化现象的皱纹和色素沉积症非常有效，此外，在施用于头皮时还具有抗氧化作用，因此可有效地防止产生头皮屑和搔痒症。
本发明的化妆品的剂型没有特别的限制，只要能施用到皮肤或头皮上，任何剂型都是可以的，例如，可以按常规的调制方法把起有效成分作用的Pleurotus  Sajorcaju培养精制液作为基剂、助剂、添加剂用于制造化妆水、乳脂、乳液、生发水等化妆品。
本发明中使用的培养精制液的配入量为化妆品总量的0.01～50%（重量），最好是0.1～30%（重量）。
下面叙述作为本发明的有效成分的Pleurotus  Sajorcaju培养精制液的制造例。
制造例  1
将30克葡萄糖、2克酶母提取物、2克胨、1克磷酸二氢钾、0.5克硫酸镁、0.1克氯化钠、0.1克氯化钙及1000毫升蒸馏水置于发酵罐中加温溶解，在高压釜中于12.1℃下灭菌15分钟，冷却到室温。在其上面接种Pleuroutus  Sajorcaju的菌丝，然后在30℃下通气振荡培养一星期。培养结束后，以2500rpm转速进行离心分离以除去菌丝，再用氟镁石等助滤剂过滤，得到500克清澈的Pleurotus  Sajorcaju培养精制液。
制造例  2
将30克葡萄糖、2克酵母提取物、100克豆浆、2克胨、1克磷酸二氢钾、0.5克硫酸镁、0.1克氯化钠、0.1克氯化钙、以及800毫升蒸馏水在发酵罐中加温溶解，在高压釜中于121℃下灭菌15分钟，冷却至室温。在其上面接种Pleurotus  Sajorcaju的菌丝，然后在30℃通气振荡培养1周。培养结束后，以2000rpm转速进行离心分离以除去菌丝，再用氟镁石等助滤剂过滤，得到500克清澈的Pleurotus  Sajorcaju培养精制液。
制造例  3
在1000克上述制造例2中制备的Pleurotus  Sajorcaju培养精制液中添加50毫克蛋白酶（Actinase，科研制药株式会社制），在室温下搅拌18小时。使用分子量1000的超滤膜除去分子量在1000以上的物质，经减压蒸馏后，得到200克Pleurotus  Sajorcaju培养精制液。
下面说明本发明中使用的培养精制液及掺入该培养精制液的制剂的试验结果（效果数据）。
实施例
以下，通过实施例详细地说明本发明。
试验例
（1）对紫外线损伤的抑制作用
a）试验方法
在4毫升含10%（体积）牛胎儿血清的Eagle′s MEM培养基中加入培养的小鼠成纤维细胞（3T3-LI Swiss Albino）1×105个细胞/0.1毫升，在37℃和5%CO2气氛条件下培养。培养开始后的第三天对其照射30mJ、60mJ剂量的紫外线（uVB），紫外线照射后立即分别用一份新的介质来置换旧的介质，所说的新介质分别含有4毫升的1/5、3/20、1/10、1/20的Pleurotus Sajorcaju培养精制液（制造例3中制备的）。
紫外线照射2天后，用结晶胰蛋白酶和EDTA的混合液剥离细胞，计算出活细胞的数目。
另一方面，加入未经紫外线照射的各种不同浓度的Pleurotus  Sajorcaju培养精制液，按同样的方法培养，然后计算活细胞的数目并据此求出在同一浓度的试料中的细胞存活率。
对照组的存活率（%）＝（经紫外线照射后的活细胞数）/（未
照射紫外线时的活细胞数）×100
另外，以未添加Pleurotus  Sajorcaju培养精制液的情况下的存活率作为对照组来评价其抑制紫外线损伤的效果。
试样细胞存活率（%）＝（经紫外线照射后的活细胞数）/（未照射紫外线时的活细胞数）×100
b）试验结果
如表1所示，在紫外线30mJ、60mJ照射的情况下，与对照组相比，证实了添加1/5、3/20、1/10、1/20Pleurotus  Sajorcaju培养精制液确有抑制紫外线损伤的效果。
表 1
照射细胞的紫外线剂    量 细  胞  存  活  率          （％）
对照组 试验组（P l e u r o t u s  S a j o r c a j u 培养精制液）
1 / 20 1 / 10 3 / 20 1 / 5
30 m J 75 80 85 91 94
60 m J 63 68 76 85 90
（2）B16细胞的抑制黑色素生成的作用
a）试验方法
在10毫升含10%（体积）牛胎儿血清的Eagle′s  MEM培养基中分别加入上述制造例中制备的Pleurotus  Sajorcaju培养提取液，其加入量为10毫升的1/2、1/4、1/8，以加入上述培养提取液的一组作为试验组A、B、C，以未加入试样的一组作为对照组。
在上述制备好的试验组和对照组中，每个组分别接种1.0×105个培养精制液B16细胞，然后在37℃下并于5%CO2气氛中培养5天。在这一期间换一次培养基。培养基剥离细胞并进行离心分离（约700G），然后用肉眼观察并比较试验组与对照组细胞的离心小球的黑色度。
b）试验结果
试验结果如下：
表 2
Pleurotus   Sajorcaju培  养  精  制  液 A组 B组 C组 对照组
制造例  1 ＋＋＋ ＋＋ ＋ －
制造例  2 ＋＋＋ ＋＋ ＋ －
制造例  3 ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ －
（判定基准）+表示白色度
+++：白色;++：白色-灰色;+：灰色;-：黑色
（3）抗氧化作用
a）试验方法
试验样品：
1）蒸馏水（对照物）
2）维生素E（40μm）
3）Pleurotus  Sajorcaju的精制培养液（制造例1中制备的）0.80%
4）Pleurotus  Sajorcaju的精制培养液（制造例2中制备的）0.8%
5）Pleurotus  Sajorcaju的精制培养液（制造例3中制备的）0.8%
将5.0毫升上述试验样品加到1.0毫升500mM亚油酸乙醇溶液（pH7.0）的10.0毫升1M磷酸缓冲液和9.0毫升乙醇中，以调制成试验样品溶液。将各试样溶液在37℃的暗处放置9日，然后用硫氰酸铁法测定过氧化值随时间的变化情况，也就是说，在0.1毫升试验样品溶液中加入4.7毫升75%的乙醇、0.1毫升30%的硫氰化铁铵（硫氰酸铵）、0.1毫升2×10-2M氯化亚铁的3.5%盐酸盐溶液，在刚好3分钟后测定在500nm波长处的吸光度。
b）试验结果
试验结果如图1中所示。
（4）使用试验
（A）改善皱纹的效果
a）试验方法
在20名妇女（35～55岁）的脸上每日早晚二次连续涂抹下述实施例的香精（处方例7），3个月后检查小皱纹的改善程度。涂抹分左半边脸和右半边脸进行，在一侧脸上涂抹本发明的香精，在另一侧脸上涂抹不含Pleurotus  Sajorcaju培养精制液的香精（对照物），然后进行评定。
b）试验结果
评定相对于使用香精之前的小皱纹改善程度，结果证实本发明的香精具有明显的对小皱纹改善的效果。试验结果示于表3中。
表 3
试验样品 显著改善 较大改善 稍有改善 没有变化 恶化 总数 副作用
处方例7 2 8 6 4 0 20 0
对照物 0 1 4 15 0 20 0
（B）改善色素沉积的效果
a）试验方法
试验样品
调制下述实施例的处方例2-4以及用蒸馏水代替其中的培养精制液而得到同一处方的作为对照物的乳液，用来作为试验样品。
1）处方例2（掺入制造例1的培养精制液的乳液）
2）处方例3（掺入制造例2的培养精制液的乳液）
3）处方例4（掺入制造例3的培养精制液的乳液）
4）对照物（掺入蒸馏水来取代培养精制液而得到的乳液）
在50名被试验人员的上臂内侧设定4个1.5×1.5cm的区域，作为A、B、C和D区。然后，从10厘米距离的地方用2支FL20S·BLB灯和2支FL20S·E-30灯照射上述各区域5分钟。
照射之后，立即在A区上涂抹处方例2，在B区上涂抹处方例3，在C区上涂抹处方例4，在D区上涂抹对照物，按每日3次连续涂7天，7天后检查色素沉积的改善程度。
b）试验结果
将A、B和C区的情况与D区进行比较，评价色素沉积的改善程度。其结果示于表4中。
表 4
区域 显著改善 较大改善 稍有改善 无变化 恶化 总数 副作用
A 9 28 7 6 0 50 0
B 8 26 8 8 0 50 0
C 9 25 8 8 0 50 0
如上所述，本发明的化妆品显示出良好的改善色素沉积的效果。
（C）防止头皮屑及搔痒症的效果
a）试验方法
经事先调查，选择10名有头皮屑、搔痒症等烦恼的男子（年令25～35岁），使用下述处方例的滋补药（处方例8）和不含Pleurotus  Sajorcaju培养精制液的滋补药（作为对照物）进行试验。
每周3次用洗发液洗头，用毛巾擦干后在头皮上一边按摩一边涂抹上4毫升作为对照物的试验样品。三星期后由熟练的评判人员分4个等级对头皮屑和搔痒的程度进行评定及问诊调查。然后按照与上述对照试验同样的方式，每周3次连续3周使用滋补药（处方例8），评定头皮屑和搔痒的程度。
评定的结果以10名被试验人员的平均值表示。
头皮屑程度的评判标准
0：几乎看不到
1：看到少量
2：看到一些
3：看到相当数量
搔痒程度的评判标准
0：几乎没有感觉
1：稍有感觉
2：感觉到
3：感觉明显
b）试验结果
评定滋补药（处方例8）和滋补药（对照物）使用者的头皮屑和搔痒程度的结果表明，本发明的Pleurotus  Sajorcaju培养精制液具有明显的防止头皮屑和搔痒症的效果。试验结果示于表5中。
表 5
头皮屑的程度 搔痒的程度
滋补药（处方例8） 0.4 0.5
滋补药（对照物） 2.4 2.1
外用剂的调制
本发明的化妆品可以按各种已知的剂型使用，例如乳膏、乳液、化妆水、发膏、生发药水等。最好是将作为有效成分的培养精制液掺合到水相中。某些种类的化妆品是由水相和油相组合而成的，在这种情况下最好预先将作为有效成分的培养精制液掺合到水相中。
外用剂的调制例
调制例1  乳膏
将甘油、山梨糖醇等保湿剂与蒸馏水混合，然后掺入培养精制液，从而制成水相。
另一方面，将蜂蜡、石蜡、微晶蜡、精制地蜡、高级脂肪酸、硬化油等固体油组分以及三十碳烷、液体石蜡、各种酯油等液体油组分与防腐剂、表面活性剂等油性组分掺混起来，从而制成油相。
然后，缓缓地加热水相，当加热到约80℃时，一点一点地添加已加热到大体与其相同温度的油相，使之乳化，从而制成乳膏。
调制例2  乳液
将甘油等保湿剂、酸或碱等pH调节剂以及培养精制液与蒸馏水混合，然后加入乙醇，从而制成水相。
另一方面，将蜂蜡、石蜡等固体油组分以及三十碳烷、液体石蜡、各种酯油等液体油组分与防腐剂、表面活性剂等油性成分加热混合，从而制成油相。
接着，将油相加到水相中进行预乳化，再向其中加入羧甲基纤维素等保护胶体，在高速搅拌机中使之均匀地乳化，从而制成乳液。
调制例3  化妆水
将培养精制液与甘油、丙二醇等保湿剂、皮肤营养剂一起掺合到蒸馏水中。另外使防腐剂、香料等溶解于乙醇中。将这样所得到的两种物质在室温下混合溶解，从而制成化妆水。
调制例4  乳状发膏（Cream  Pack）
将培养精制液与甘油等保湿剂、聚乙烯醇、蜂胶（bee  gum）等成膜剂一起加到蒸馏水中，使之膨胀，必要时可加入高岭土、滑石、氧化锌等的粉末，此外，再向其中加入溶解有香料、防腐剂等的乙醇，将其混炼直至成为糊状，从而制成膏状物。
调制例5  生发药水
将甘油等保湿剂、螯合剂以及培养精制液加到蒸馏水中制成水相，将水相一点一点地加到乙醇中，使之混合均匀，然后将其过滤，从而制成生发药水。
〔处方例〕
下面说明化妆品的具体的处方例，不过，本发明不限于这些处方例。处方例1（乳膏）  （重量%）
聚氧乙烯油基醚（P.O.E.O）  1.60
甘油单硬脂酸酯  3.00
白蜡  2.80
十六烷醇  3.00
硬脂酸  1.75
液体石蜡  7.10
Parsol  1789  0.50
三十碳烷  4.50
甘油  2.50
Carbopol  940  0.08
Clewat  N  0.01
制造例3中制备的培养精制液  0.10
蒸馏水  73.06
此外，添加少量的香料和防腐剂
处方例2（乳液）  （重量%）
三十碳烷  5.00
凡士林  2.00
蜂蜡  0.50
脱水山梨糖醇倍半油酸酯  1.20
丙二醇  5.00
乙醇  5.00
羧基乙烯基聚合物（1%水溶液）  20.00
氢氧化钾  0.10
制造例1中制备的培养精制液  10.00
蒸馏水  51.20
此外，添加少量的香料、防腐剂和抗氧化剂
处方例3（乳液）
使用“制造例2中制造的培养精制液”来取代处方例2中所述“制造例1中制备的培养精制液”，即得到处方例3。
处方例4（乳液）
使用“制造例3中制备的培养精制液”来代替处方例2中所述“制造例1中制备的培养精制液”，即得到处方例4。
处方例5（化妆水）  （重量%）
柠檬酸  0.40
碳酸钙  0.20
乙醇  5.00
丙二醇  9.00
制造例1中制备的培养精制液  30.00
蒸馏水  55.40
另加少量的香料和防腐剂
处方例6（发膏）  （重量%）
蜂胶（bee  gum）  5.00
三十碳烷  2.00
丙二醇  5.00
氯化锌  10.00
乙醇  5.00
制造例2中制备的培养精制液  2.00
蒸馏水  71.00
另加少量的香料和防腐剂
处方例7（香精）  （重量%）
羧基乙烯基聚合物（1%水溶液）  10.00
甘油  20.00
乙醇  1.00
透明质酸钠（0.1%水溶液）  10.00
制造例2中的培养精制液  10.00
蒸馏水  49.00
另加少量香料和防腐剂
处方例8（生发药水）  （重量%）
乙醇（95%）  75.00
甘油  5.00
制造例2中制备的培养精制液  5.00
蒸馏水  15.00
另加少量香料和防腐剂
本发明提供了以上述Pleurotus  Sajorcaju的培养精制液为有效成分的化妆品。这种化妆品如果涂抹在皮肤上，完全没有副作用，并可有效地预防由于紫外线而引起的皱纹、色素沉积等皮肤老化现象。如果用于头皮上，则可有效地防止生成头皮屑和搔痒症。
图1中所示为抗氧化作用试验的试验结果。
○-○  制造例1中的培养精制液
△-△  制造例2中的培养精制液
□-□  制造例2中的培养精制液
●-●  维生素E  10μm
×-×  对照物（蒸馏水）

Claims (4)

1、一种化妆品，含有从Pleurotus Sajorcaju菌丝体的培养液中提取得到的精制液。
2、权利要求1所述的化妆品，其中含有0.1-30%（重量）所述的精制液和70-99.9%（重量）的皮肤可以接受的载体、稀释剂或溶剂。
3、一种制备化妆用的液体的方法，包括在培养基中由于24-35℃温度范围内有氧培养Pleurotus  Sajorcaju的菌丝体，然后将液体部分与其余的发酵肉汤分离。
4、权利要求3所述的方法，其中所述的液体随后用蛋白酶进行处理，并进行超过滤，除去分子量大于1000的物质。
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