CN106480148A - 一种辣椒籽抗菌肽的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了生物活性肽的制备技术领域的一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，该辣椒籽抗菌肽的制备方法包括如下步骤：S1：制备脱脂辣椒籽粉；S2：提取辣椒籽粗蛋白质；S3：辣椒籽粗蛋白酶解液的制备；S4：制备辣椒籽抗菌肽粉末；S5：制备辣椒籽抗菌肽：采用收集器收集，用220nm波长检测，收集各峰冷冻干燥，得到辣椒籽抗菌肽，该发明提出的一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，采用辣椒作为原材料，成本低廉，资源丰富，辣椒籽的蛋白质提取量高，资源利用率高，采用复合蛋白酶对辣椒籽蛋白质进行分解，水解度和肽得率达到最大，辣椒籽抗菌体的制备采用凝胶层析和去离子水洗脱，成本低廉，效率高，制备速度快。

Description

一种辣椒籽抗菌肽的制备方法
技术领域
本发明涉及生物活性肽的制备技术领域，具体为一种辣椒籽抗菌肽的制备方法。
背景技术
抗菌肽也称为宿主防御肽，是机体抵御外来微生物威胁的第一道防线，属于抗生素的家族，它们对细菌、真菌、原生动物、肿瘤细胞、病毒等都具有毒性，抗菌肽在体内最终酶解为氨基酸，无残留毒性。因此，抗菌肽添加到食品中以维护食品的安全性、提高食品质量和改善人类健康方面的作用和潜力逐渐被认识，以抗菌肽为基础的解决食品防腐剂问题具有重要意义，辣椒原产于中美洲和南美洲，现种植遍布全球，随着人们对齐研究的日益深入，辣椒中有价值的成分不断被发现并相继开发利用，占辣椒果实干重30～60％以上的辣椒籽的利用价值常被忽视，造成资源浪费，辣椒籽除了不包含脂肪酸和酚类物质外，还含有约10％～29％的粗蛋白，是一种亟待开发的天然植物蛋白质资源。现有的抗菌肽的制备方法操作流程比较复杂，成本较高，制备效率低，为此，我们提出一种辣椒籽抗菌肽的制备方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，以解决上述背景技术中提出的现有的抗菌肽的制备方法操作流程比较复杂，成本较高，制备效率低的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，该辣椒籽抗菌肽的制备方法包括如下步骤：
S1：制备脱脂辣椒籽粉：以辣椒籽为原材料，将其粉碎过50目筛，将辣椒籽放置于滤纸纸筒内，放入提取器的抽提筒内，加入温度为25-55℃的石油醚，40-50℃加热回流提取6-9小时，取出滤纸纸筒，脱去溶剂后得到脱脂辣椒籽粉，将脱脂辣椒籽粉过50目筛；
S2：提取辣椒籽粗蛋白质：采用加碱溶解加酸沉淀法：控制温度在25-35℃PH值控制在8.0-9.0，混合时间20-30min，料液比为20:1v/w，充分溶解后的提取液采用离心机进行离心，离心机转速控制在4000r/min-4500r/min，离心时间15-25min，收集上清液，上清液用0.1mol/L的HCL和0.1mol/L的NaOH调节PH值至3.5-4.5，使得蛋白质沉淀，再使用离心机进行离心，离心机转速控制在4000r/min-4500r/min，离心时间15-25min，去除清液，收集沉淀，经过水洗、中和、冷冻和干燥得到辣椒籽粗蛋白质；
S3：辣椒籽粗蛋白酶解液的制备：制备质量百分比为8％-12％的辣椒籽粗蛋白水溶液，加入1.5％-2.5％的复合蛋白酶，在温度45-55℃下调节PH值6-7，酶解时间为3-5小时；
S4：制备辣椒籽抗菌肽粉末：将步骤S3中所得到的辣椒籽粗蛋白酶解液采用沸水加热分解复合蛋白酶，加热时间为10-15min，冷冻干燥得到辣椒籽抗菌肽粉末；
S5：制备辣椒籽抗菌肽：将步骤S4中得到的辣椒籽抗菌肽粉末溶于去离子水中，过0.22微米铝膜，配置成浓度为15-20mg/ml的溶液，取1ml溶液于凝胶过滤柱，用流速为0.2-0.6ml/min的去离子水洗脱，采用收集器收集，用220nm波长检测，收集各峰冷冻干燥，得到辣椒籽抗菌肽。
优选的，所述步骤S1中的提取器为索氏提取器。
优选的，所述步骤S2中的离心机为TDZ5-WS型离心机。
优选的，所述步骤S4中的冷冻干燥的具体方法为：使用冷冻干燥机温度在-50℃，压强控制在10Pa，冻干时间为12小时。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该发明提出的一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，采用辣椒作为原材料，成本低廉，资源丰富，辣椒籽的蛋白质提取量高，资源利用率高，采用复合蛋白酶对辣椒籽蛋白质进行分解，水解度和肽得率达到最大，辣椒籽抗菌体的制备采用凝胶层析和去离子水洗脱，成本低廉，效率高，制备速度快。
附图说明
图1为本发明工艺流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，该辣椒籽抗菌肽的制备方法包括如下步骤：
S1：制备脱脂辣椒籽粉：以辣椒籽为原材料，将其粉碎过50目筛，将辣椒籽放置于滤纸纸筒内，放入提取器的抽提筒内，加入温度为55℃的石油醚，50℃加热回流提取9小时，取出滤纸纸筒，脱去溶剂后得到脱脂辣椒籽粉，将脱脂辣椒籽粉过50目筛；
S2：提取辣椒籽粗蛋白质：采用加碱溶解加酸沉淀法：控制温度在25-35℃PH值控制在9.0，混合时间30min，料液比为20:1v/w，充分溶解后的提取液采用离心机进行离心，离心机转速控制在4500r/min，离心时间25min，收集上清液，上清液用0.1mol/L的HCL和0.1mol/L的NaOH调节PH值至4.5，使得蛋白质沉淀，再使用离心机进行离心，离心机转速控制在4500r/min，离心时间25min，去除清液，收集沉淀，经过水洗、中和、冷冻和干燥得到辣椒籽粗蛋白质；
S3：辣椒籽粗蛋白酶解液的制备：制备质量百分比为12％的辣椒籽粗蛋白水溶液，加入2.5％的复合蛋白酶，在温度55℃下调节PH值7，酶解时间为5小时；
S4：制备辣椒籽抗菌肽粉末：将步骤S3中所得到的辣椒籽粗蛋白酶解液采用沸水加热分解复合蛋白酶，加热时间为15min，冷冻干燥得到辣椒籽抗菌肽粉末；
S5：制备辣椒籽抗菌肽：将步骤S4中得到的辣椒籽抗菌肽粉末溶于去离子水中，过0.22微米铝膜，配置成浓度为20mg/ml的溶液，取1ml溶液于凝胶过滤柱，用流速为0.6ml/min的去离子水洗脱，采用收集器收集，用220nm波长检测，收集各峰冷冻干燥，得到辣椒籽抗菌肽。
实施例2
一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，该辣椒籽抗菌肽的制备方法包括如下步骤：
S1：制备脱脂辣椒籽粉：以辣椒籽为原材料，将其粉碎过50目筛，将辣椒籽放置于滤纸纸筒内，放入提取器的抽提筒内，加入温度为30℃的石油醚，45℃加热回流提取7.5小时，取出滤纸纸筒，脱去溶剂后得到脱脂辣椒籽粉，将脱脂辣椒籽粉过50目筛；
S2：提取辣椒籽粗蛋白质：采用加碱溶解加酸沉淀法：控制温度在30℃PH值控制在8.5，混合时间25min，料液比为20:1v/w，充分溶解后的提取液采用离心机进行离心，离心机转速控制在4250r/min，离心时间20min，收集上清液，上清液用0.1mol/L的HCL和0.1mol/L的NaOH调节PH值至4，使得蛋白质沉淀，再使用离心机进行离心，离心机转速控制在4250r/min，离心时间20min，去除清液，收集沉淀，经过水洗、中和、冷冻和干燥得到辣椒籽粗蛋白质；
S3：辣椒籽粗蛋白酶解液的制备：制备质量百分比为10％的辣椒籽粗蛋白水溶液，加入2％的复合蛋白酶，在温度50℃下调节PH值6.5，酶解时间为4小时；
S4：制备辣椒籽抗菌肽粉末：将步骤S3中所得到的辣椒籽粗蛋白酶解液采用沸水加热分解复合蛋白酶，加热时间为12min，冷冻干燥得到辣椒籽抗菌肽粉末；
S5：制备辣椒籽抗菌肽：将步骤S4中得到的辣椒籽抗菌肽粉末溶于去离子水中，过0.22微米铝膜，配置成浓度为18mg/ml的溶液，取1ml溶液于凝胶过滤柱，用流速为0.4ml/min的去离子水洗脱，采用收集器收集，用220nm波长检测，收集各峰冷冻干燥，得到辣椒籽抗菌肽。
实施例3
一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，该辣椒籽抗菌肽的制备方法包括如下步骤：
S1：制备脱脂辣椒籽粉：以辣椒籽为原材料，将其粉碎过50目筛，将辣椒籽放置于滤纸纸筒内，放入提取器的抽提筒内，加入温度为25℃的石油醚，40℃加热回流提取6小时，取出滤纸纸筒，脱去溶剂后得到脱脂辣椒籽粉，将脱脂辣椒籽粉过50目筛；
S2：提取辣椒籽粗蛋白质：采用加碱溶解加酸沉淀法：控制温度在25-35℃PH值控制在8.0，混合时间20min，料液比为20:1v/w，充分溶解后的提取液采用离心机进行离心，离心机转速控制在4000r/min，离心时间15min，收集上清液，上清液用0.1mol/L的HCL和0.1mol/L的NaOH调节PH值至3.5，使得蛋白质沉淀，再使用离心机进行离心，离心机转速控制在4000r/min，离心时间15min，去除清液，收集沉淀，经过水洗、中和、冷冻和干燥得到辣椒籽粗蛋白质；
S3：辣椒籽粗蛋白酶解液的制备：制备质量百分比为8％的辣椒籽粗蛋白水溶液，加入1.5％的复合蛋白酶，在温度45℃下调节PH值6，酶解时间为3小时；
S4：制备辣椒籽抗菌肽粉末：将步骤S3中所得到的辣椒籽粗蛋白酶解液采用沸水加热分解复合蛋白酶，加热时间为10min，冷冻干燥得到辣椒籽抗菌肽粉末；
S5：制备辣椒籽抗菌肽：将步骤S4中得到的辣椒籽抗菌肽粉末溶于去离子水中，过0.22微米铝膜，配置成浓度为15mg/ml的溶液，取1ml溶液于凝胶过滤柱，用流速为0.2ml/min的去离子水洗脱，采用收集器收集，用220nm波长检测，收集各峰冷冻干燥，得到辣椒籽抗菌肽。
综合以上所述，该辣椒籽抗菌肽的制备方法的最佳实施例为：
一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，该辣椒籽抗菌肽的制备方法包括如下步骤：
S1：制备脱脂辣椒籽粉：以辣椒籽为原材料，将其粉碎过50目筛，将辣椒籽放置于滤纸纸筒内，放入提取器的抽提筒内，加入温度为30℃的石油醚，45℃加热回流提取7.5小时，取出滤纸纸筒，脱去溶剂后得到脱脂辣椒籽粉，将脱脂辣椒籽粉过50目筛；
S2：提取辣椒籽粗蛋白质：采用加碱溶解加酸沉淀法：控制温度在30℃PH值控制在8.5，混合时间25min，料液比为20:1v/w，充分溶解后的提取液采用离心机进行离心，离心机转速控制在4250r/min，离心时间20min，收集上清液，上清液用0.1mol/L的HCL和0.1mol/L的NaOH调节PH值至4，使得蛋白质沉淀，再使用离心机进行离心，离心机转速控制在4250r/min，离心时间20min，去除清液，收集沉淀，经过水洗、中和、冷冻和干燥得到辣椒籽粗蛋白质；
S3：辣椒籽粗蛋白酶解液的制备：制备质量百分比为10％的辣椒籽粗蛋白水溶液，加入2％的复合蛋白酶，在温度50℃下调节PH值6.5，酶解时间为4小时；
S4：制备辣椒籽抗菌肽粉末：将步骤S3中所得到的辣椒籽粗蛋白酶解液采用沸水加热分解复合蛋白酶，加热时间为12min，冷冻干燥得到辣椒籽抗菌肽粉末；
S5：制备辣椒籽抗菌肽：将步骤S4中得到的辣椒籽抗菌肽粉末溶于去离子水中，过0.22微米铝膜，配置成浓度为18mg/ml的溶液，取1ml溶液于凝胶过滤柱，用流速为0.4ml/min的去离子水洗脱，采用收集器收集，用220nm波长检测，收集各峰冷冻干燥，得到辣椒籽抗菌肽。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (4)

1.一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，其特征在于：该辣椒籽抗菌肽的制备方法包括如下步骤：
S1：制备脱脂辣椒籽粉：以辣椒籽为原材料，将其粉碎过50目筛，将辣椒籽放置于滤纸纸筒内，放入提取器的抽提筒内，加入温度为25-55℃的石油醚，40-50℃加热回流提取6-9小时，取出滤纸纸筒，脱去溶剂后得到脱脂辣椒籽粉，将脱脂辣椒籽粉过50目筛；
S2：提取辣椒籽粗蛋白质：采用加碱溶解加酸沉淀法：控制温度在25-35℃PH值控制在8.0-9.0，混合时间20-30min，料液比为20:1v/w，充分溶解后的提取液采用离心机进行离心，离心机转速控制在4000r/min-4500r/min，离心时间15-25min，收集上清液，上清液用0.1mol/L的HCL和0.1mol/L的NaOH调节PH值至3.5-4.5，使得蛋白质沉淀，再使用离心机进行离心，离心机转速控制在4000r/min-4500r/min，离心时间15-25min，去除清液，收集沉淀，经过水洗、中和、冷冻和干燥得到辣椒籽粗蛋白质；
S3：辣椒籽粗蛋白酶解液的制备：制备质量百分比为8％-12％的辣椒籽粗蛋白水溶液，加入1.5％-2.5％的复合蛋白酶，在温度45-55℃下调节PH值6-7，酶解时间为3-5小时；
S4：制备辣椒籽抗菌肽粉末：将步骤S3中所得到的辣椒籽粗蛋白酶解液采用沸水加热分解复合蛋白酶，加热时间为10-15min，冷冻干燥得到辣椒籽抗菌肽粉末；
S5：制备辣椒籽抗菌肽：将步骤S4中得到的辣椒籽抗菌肽粉末溶于去离子水中，过0.22微米铝膜，配置成浓度为15-20mg/ml的溶液，取1ml溶液于凝胶过滤柱，用流速为0.2-0.6ml/min的去离子水洗脱，采用收集器收集，用220nm波长检测，收集各峰冷冻干燥，得到辣椒籽抗菌肽。
2.根据权利要求1所述的一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的提取器为索氏提取器。
3.根据权利要求1所述的一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中的离心机为TDZ5-WS型离心机。
4.根据权利要求1所述的一种辣椒籽抗菌肽的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中的冷冻干燥的具体方法为：使用冷冻干燥机温度在-50℃，压强控制在10Pa，冻干时间为12小时。
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