CN101416721A - 从香菇干粉中综合提取多种生物活性成分的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从香菇干粉中综合提取多种生物活性成分的方法,本发明的技术方案是,第一步,提取醇溶物,第二步,提取香菇蛋白,第三步,提取香菇水溶性多糖,第四步,提取碱提非水溶性多糖和碱提水溶性多糖,第五步,制备香菇纤维。本发明提取出的成分具有不同的生物活性,如醇溶物具有较强的抗氧化活性,香菇蛋白富含必需氨基酸,香菇多糖具有抗肿瘤活性,香菇纤维具有膳食纤维的生理功能。因此,提取出的各成分能够分别加以利用。
Description
技术领域:
本发明是一种从香菇干粉中综合提取多种生物活性成分的方法。
背景技术:
在香菇所含的生物活性成分中,目前国内外对香菇多糖的研究报道较多,开发利用也比较深入,而对香菇中其他生物活性成分的研究开发则较少。而且,现有的香菇生物活性成分的提取方法,主要为某种单一成分的提取,如香菇多糖、香菇嘌呤等,尚未见对多种生物活性成分进行综合提取的报道。因此,现有技术在提取制备香菇多糖等单一成分时,香菇中的其他有效成分被白白地丢弃,不仅导致提取成本较高,而且浪费了香菇资源。例如,就香菇多糖的提取而言,目前常用的是热水提取法,该法操作简单,但多糖得率较低,仅为3.09~3.64%,香菇原料中超过96%的成分未能加以利用;采用复合酶解结合热水浸提法,能够将得率提高至5~7%,但需使用价格较贵的纤维素酶、蛋白酶等,提取成本增加,而且同为生物大分子的酶容易与多糖混在一起,降低了多糖的纯度;如果采用超声波或微波辅助提取等方法,多糖得率可能还会略有提高,但增加了设备投资和能源消耗。因此,如果仅提取香菇多糖等单一成分,将会使香菇原料中90%以上的成分不能加以利用,必然导致提取成本的提高和香菇资源的浪费。所以,对香菇原料进行充分利用,综合提取香菇中的多种生物活性成分,是解决上述问题的有效方法。
发明内容:
本发明的目的是提供一种从香菇干粉中综合提取多种生物活性成分的方法。
本发明的技术方案是,从香菇干粉中综合提取多种生物活性成分的方法,其特征在于:①将香菇干粉放入回流提取装置,然后加入约5倍干粉重量的乙醇,乙醇浓度为85%-90%,在80-90℃加热回流提取2小时,移出提取液,进行抽滤,滤渣按上述方法再提取1次,移出提取液,进行抽滤,合并两次滤液,于40℃左右进行减压蒸发,回收乙醇和浓缩滤液,浓缩至快干时,转移出浓缩液,在40℃真空条件下干燥,得醇溶物,滤渣用于下一步提取;②提取醇溶物后的残渣,加入10倍干粉重量的pH值为10的氢氧化钠水溶液,在4-20℃下搅拌提取30分钟,移出提取液,进行离心,离心机转数3000转/分钟,离心时间15分钟,以下步骤均采用此离心条件,移出上清液,沉淀的残渣用于下一步提取,上清液在50℃下减压浓缩至原体积的1/5左右,向浓缩液中加入5倍体积的无水乙醇,乙醇预先冷却至4-10℃,边加乙醇边搅拌,4℃条件下放置8-12小时,然后离心,将沉淀的蛋白用95%乙醇洗涤后,于40℃真空条件下干燥,得香菇蛋白;③提取香菇蛋白后的残渣,加入15-20倍干粉重量的蒸馏水,于90-100℃搅拌提取2小时,移出提取液,进行离心,移出上清液,向沉淀物中加入8倍干粉重量的蒸馏水,于90-100℃搅拌提取2小时,移出提取液,进行离心,合并两次离心后的上清液,沉淀的残渣用于下一步提取,上清液在50℃下减压浓缩至原体积的1/6-1/8,向浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇,边加乙醇边搅拌,在4℃条件下放置8-12小时,然后离心,将沉淀的多糖用95%乙醇洗涤后,于40℃真空条件下干燥,得香菇水溶性多糖;④提取水溶性多糖后的残渣,加入10倍干粉重量的4%氢氧化钠水溶液,于60℃提取30分钟,移出提取液,进行离心,移出上清液,向沉淀物中加入5倍干粉重量的4%氢氧化钠水溶液,于60℃提取30分钟,移出提取液,进行离心,合并两次离心后的上清液,沉淀的残渣用于制备香菇纤维,加入浓盐酸进行中和,然后离心,移出上清液,沉淀的多糖用蒸馏水洗涤至少3次,以除去沉淀中残留的氯化钠,然后进行真空冷冻干燥,得碱提非水溶性多糖;中和、离心后的上清液,在50℃下减压浓缩至原体积的1/6-1/8,向浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇,边加乙醇边搅拌,在4℃条件放置8-12小时,然后离心,将沉淀的多糖用95%乙醇洗涤后,于40℃真空条件下干燥,得碱提水溶性多糖;⑤提取碱溶性多糖后的残渣,用蒸馏水洗涤至少3次,以除去残渣中残留的氢氧化钠,然后进行真空冷冻干燥,得香菇纤维。
香菇干粉按本发明的技术路线进行制备,可依次将香菇中的六种生物活性成分提取出来,而且提取率较高,各成分得率为:醇溶物为21.16%,香菇蛋白为8.49%,香菇水溶性多糖为3.84%,碱提非水溶性多糖为7.36%,碱提水溶性多糖为18.68%,香菇纤维为27.51%;生物活性成分的得率合计为87.04%。
由于香菇干粉先用乙醇回流提取,破坏了香菇细胞膜的脂质结构,因此有利于细胞内容物的溶出,从而提高了香菇多糖、蛋白的得率。例如,香菇水溶性多糖的提取率为3.84%,略高于文献报道的3.09~3.64%的提取率;碱提多糖的得率也显著提高。
此外,提取出的成分具有不同的生物活性,如醇溶物具有较强的抗氧化活性,香菇蛋白富含必需氨基酸,香菇多糖具有抗肿瘤活性,香菇纤维具有膳食纤维的生理功能。因此,提取出的各成分能够分别加以利用。
具体实施方式:
实施例
第一步,提取醇溶物
将1公斤香菇干粉放入回流提取装置,然后加入约5公斤乙醇,乙醇浓度为85%-90%,80-90℃加热回流提取2小时,移出提取液,进行抽滤,滤渣按上述方法再提取1次,移出提取液,进行抽滤,合并两次滤液,于40℃左右进行减压蒸发,回收乙醇和浓缩滤液,浓缩至快干时,转移出浓缩液,在40℃真空条件下干燥,得醇溶物211.6克,滤渣用于下一步提取;
第二步,提取香菇蛋白
提取醇溶物后的残渣,加入10公斤pH值为10的氢氧化钠水溶液,在4-20℃下搅拌提取30分钟,移出提取液,进行离心,离心机转数3000转/分钟,离心时间15分钟,以下步骤均采用此离心条件,移出上清液,沉淀的残渣用于下一步提取,上清液在50℃下减压浓缩至原体积的1/5左右,向浓缩液中加入5倍体积的无水乙醇,乙醇预先冷却至4-10℃,边加乙醇边搅拌,4℃条件下放置8-12小时,然后离心,将沉淀的蛋白用95%乙醇洗涤后,于40℃真空条件下干燥,得香菇蛋白84.9克;
第三步,提取香菇水溶性多糖
提取香菇蛋白后的残渣,加入15-20公斤的蒸馏水,于90-100℃搅拌提取2小时,移出浸提液,进行离心,移出上清液,向沉淀物中加入8公斤蒸馏水,于90-100℃搅拌提取2小时,移出提取液,进行离心,合并两次离心后的上清液,沉淀的残渣用于下一步提取,上清液在50℃下减压浓缩至原体积的1/6-1/8,向浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇,边加乙醇边搅拌,在4℃条件下放置8-12小时,然后离心,将沉淀的多糖用95%乙醇洗涤后,于40℃真空条件下干燥,得香菇水溶性多糖38.4克;
第四步,提取香菇碱溶性多糖
提取水溶性多糖后的残渣,加入10公斤4%氢氧化钠水溶液,于60℃提取30分钟,移出提取液,进行离心,移出上清液,向沉淀物中加入5公斤4%氢氧化钠水溶液,于60℃提取30分钟,移出提取液,进行离心,合并两次离心后的上清液,沉淀的残渣用于制备香菇纤维,加入浓盐酸进行中和,然后离心,移出上清液,沉淀的多糖用蒸馏水洗涤至少3次,以除去沉淀中残留的氯化钠,然后进行真空冷冻干燥,得碱提非水溶性多糖73.6克;中和、离心后的上清液,在50℃下减压浓缩至原体积的1/6-1/8,向浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇,边加乙醇边搅拌,在4℃条件放置8-12小时,然后离心,将沉淀的多糖用95%乙醇洗涤后,于40℃真空条件下干燥,得碱提水溶性多糖186.8克;
第五步,制备香菇纤维
提取碱溶性多糖后的残渣,用蒸馏水洗涤至少3次,以除去残渣中残留的氢氧化钠,然后进行真空冷冻干燥,得香菇纤维275.1克。
1公斤香菇干粉,按本发明所述的工艺进行提取后,制备得到的生物活性成分合计为870.4克。
Claims (1)
1、从香菇干粉中综合提取多种生物活性成分的方法,其特征在于:①将香菇干粉放入回流提取装置,然后加入约5倍干粉重量的乙醇,乙醇浓度为85%-90%,在80-90℃加热回流提取2小时,移出提取液,进行抽滤,滤渣按上述方法再提取1次,移出提取液,进行抽滤,合并两次滤液,于40℃左右进行减压蒸发,回收乙醇和浓缩滤液,浓缩至快干时,转移出浓缩液,在40℃真空条件下干燥,得醇溶物,滤渣用于下一步提取;②提取醇溶物后的残渣,加入10倍干粉重量的pH值为10的氢氧化钠水溶液,在4-20℃下搅拌提取30分钟,移出提取液,进行离心,离心机转数3000转/分钟,离心时间15分钟,以下步骤均采用此离心条件,移出上清液,沉淀的残渣用于下一步提取,上清液在50℃下减压浓缩至原体积的1/5左右,向浓缩液中加入5倍体积的无水乙醇,乙醇预先冷却至4-10℃,边加乙醇边搅拌,4℃条件下放置8-12小时,然后离心,将沉淀的蛋白用95%乙醇洗涤后,于40℃真空条件下干燥,得香菇蛋白;③提取香菇蛋白后的残渣,加入15-20倍干粉重量的蒸馏水,于90-100℃搅拌提取2小时,移出提取液,进行离心,移出上清液,向沉淀物中加入8倍干粉重量的蒸馏水,于90-100℃搅拌提取2小时,移出提取液,进行离心,合并两次离心后的上清液,沉淀的残渣用于下一步提取,上清液在50℃下减压浓缩至原体积的1/6-1/8,向浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇,边加乙醇边搅拌,在4℃条件下放置8-12小时,然后离心,将沉淀的多糖用95%乙醇洗涤后,于40℃真空条件下干燥,得香菇水溶性多糖;④提取水溶性多糖后的残渣,加入10倍干粉重量的4%氢氧化钠水溶液,于60℃提取30分钟,移出提取液,进行离心,移出上清液,向沉淀物中加入5倍干粉重量的4%氢氧化钠水溶液,于60℃提取30分钟,移出提取液,进行离心,合并两次离心后的上清液,沉淀的残渣用于制备香菇纤维,加入浓盐酸进行中和,然后离心,移出上清液,沉淀的多糖用蒸馏水洗涤至少3次,以除去沉淀中残留的氯化钠,然后进行真空冷冻干燥,得碱提非水溶性多糖;中和、离心后的上清液,在50℃下减压浓缩至原体积的1/6-1/8,向浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇,边加乙醇边搅拌,在4℃条件放置8-12小时,然后离心,将沉淀的多糖用95%乙醇洗涤后,于40℃真空条件下干燥,得碱提水溶性多糖;⑤提取碱溶性多糖后的残渣,用蒸馏水洗涤至少3次,以除去残渣中残留的氢氧化钠,然后进行真空冷冻干燥,得香菇纤维。
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