CN112941127B - 一种从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法,涉及植物提取技术领域,本发明以牡丹皮为原料,在提取丹皮酚的同时还联产了牡丹皮多糖,制得高纯度的丹皮酚和牡丹皮多糖,并且提取率分别达到90%和80%以上,实现了牡丹皮的高效利用;制备牡丹皮多糖的操作简便,条件温和,不仅可以有效缩短制备时间,还可以减少废液生成量,增强提取方法的环保性,同时制得高品质的牡丹皮多糖。
Description
技术领域:
本发明涉及植物提取技术领域,具体涉及一种从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法。
背景技术:
六味地黄丸,中成药名,为补益剂,具有滋阴补肾之功效,用于肾阴亏损、头晕耳鸣、腰膝酸软、骨蒸潮热、盗汗遗精、消渴。方中重用熟地黄,滋阴补肾,填精益髓,为君药。山萸肉补养肝肾,并能涩精;山药补益脾阴,亦能固精,共为臣药。三药相配,滋养肝脾肾,称为“三补”。但熟地黄的用量是山萸肉与山药两味之和,故以补肾阴为主,补其不足以治本。配伍泽泻利湿泄浊,并防熟地黄之滋腻恋邪;牡丹皮清泄相火,并制山萸肉之温涩;茯苓淡渗脾湿,并助山药之健运。三药为“三泻”,渗湿浊,清虚热,平其偏胜以治标,均为佐药。六味合用,三补三泻。
其中,牡丹皮,为毛茛科植物牡丹干燥根皮,味苦、辛,性微寒,归心、肝、肾经,具有清热凉血、活血化淤、退虚热等功效。丹皮酚是牡丹皮的重要药效成分,也是六味地黄丸中牡丹皮的主要药效成分,因此提高丹皮酚的提取率和纯度十分关键,不仅可以提高牡丹皮的利用率,还可以影响六味地黄丸的药效。
发明内容:
本发明所要解决的技术问题在于提供一种从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法,在提高丹皮酚提取率和纯度的同时还可以联产高质量的牡丹皮多糖,从而增加牡丹皮提取所产生的经济效益。
本发明所要解决的技术问题采用以下的技术方案来实现:
一种从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法,包括以下步骤:
(1)将牡丹皮经清洗后烘干,破碎,得到粗粉;
(2)将粗粉加温水浸泡,再加入纤维素酶和果胶酶进行酶解,得到酶解液;
(3)采用水蒸气蒸馏法对酶解液进行蒸馏,收集馏分,蒸馏剩余物过滤,收集滤液;
(4)所得馏分经冷却析晶,过滤,取晶体并加乙醇进行溶解,再次过滤,减压浓缩回收乙醇,浓缩剩余物冷却,得到丹皮酚;
(5)所得滤液经减压浓缩制成浓缩液,向浓缩液中加入蛋白变性剂,搅拌后静置,过滤,取滤液并加乙醇至乙醇体积百分比达到75-85%进行沉淀,搅拌后静置,过滤,取沉淀物并采用乙醇洗涤,真空干燥,得到牡丹皮多糖。
所述步骤(1)中粗粉的粒度为20-100目。将牡丹皮破碎成粉,可以促进酶解时牡丹皮与纤维素酶和果胶酶的充分接触,提高酶解效率。
所述步骤(2)中纤维素酶的用量为粗粉重量的0.1-0.5%,果胶酶的用量为粗粉重量的0.1-0.5%。纤维素酶、果胶酶可以破坏牡丹皮的细胞壁,分解纤维素和果胶,促进丹皮酚和牡丹皮多糖的浸出,提高提取率。
所述步骤(2)中酶解的pH值为4-5,温度为45-55℃。选择合适的酶解pH和温度,在保证酶解速度的同时提高提取率。
所述步骤(3)中馏分的重量为酶解液重量的1/3-1/2。通过水蒸气蒸馏法使丹皮酚与水共蒸馏,丹皮酚随水蒸气一并蒸出,得到的馏分除丹皮酚以外还包括其他挥发性成分。
所述步骤(4)中冷却析晶的环境温度为2-5℃。利用丹皮酚不溶于冷水的特性,经冷却得到丹皮酚晶体,再利用丹皮酚易溶于乙醇的特性对晶体进行纯化,提高丹皮酚的纯度。
所述步骤(5)中浓缩液的重量为滤液重量的1/4-1/3。
所述步骤(5)中蛋白变性剂的用量为每100g浓缩液加入5-20g蛋白变性剂。
所述步骤(5)中蛋白变性剂为聚二丙二醇甲基烯丙基醚,分子量为5×104-8×104。
所述聚二丙二醇甲基烯丙基醚是以二丙二醇甲基烯丙基醚作为聚合单体反应制得,以水作为反应溶剂,以过硫酸钾或过硫酸铵作为引发剂,反应温度为70-90℃。
为了避免对多糖结构造成破坏,本领域通常采用Sevage法进行脱蛋白,如氯仿-正丁醇混合溶液,但效率较低,往往需要重复数次才能取得较为理想的效果,而氯仿和正丁醇都属于有机溶剂,处理成本较高,并且正丁醇具有刺激性,氯仿具有毒性,虽然可以经蒸馏回收,但蒸馏会增加相应的能耗投入成本。而本发明利用所述蛋白变性剂对浓缩液进行脱蛋白处理,一方面可以降低蛋白质的溶解度,另一方面可以吸附析出的蛋白质形成不溶性物质,经过滤除去,操作简便,条件温和,并且经一次处理后即可有效脱除蛋白质,无需多次处理,因此相对于Sevage法来说,大大降低了处理成本以及缩短了处理时间。
基于通过提高酶解效率以加速丹皮酚和牡丹皮多糖的浸出量的目的,本发明在步骤(2)中还加入了乳酸铝作为酶激活剂,利用该物质可以显著加快纤维素酶和果胶酶的酶解速率,从而在相同酶解条件下提高丹皮酚和牡丹皮多糖的提取率。
将上述技术方案中的步骤(2)替换为“将粗粉加温水浸泡,并加入乳酸铝,再加入纤维素酶和果胶酶进行酶解,得到酶解液”,其余步骤同上述技术方案。
所述乳酸铝的用量为纤维素酶和果胶酶总重量的0.5-5倍。
本发明的有益效果是:
(1)本发明以牡丹皮为原料,在提取丹皮酚的同时还联产了牡丹皮多糖,制得高纯度的丹皮酚和牡丹皮多糖,并且提取率分别达到90%和80%以上,实现了牡丹皮的高效利用。
(2)本发明制备牡丹皮多糖的操作简便,条件温和,不仅可以有效缩短制备时间,还可以减少废液生成量,增强提取方法的环保性,同时制得高品质的牡丹皮多糖。
具体实施方式:
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解,下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。
以下实施例和对比例中的纤维素酶和果胶酶购自南宁东恒华道生物科技有限责任公司。
以下实施例中的蛋白变性剂采用聚二丙二醇甲基烯丙基醚,制备方法为:向水中加入20g二丙二醇甲基烯丙基醚和0.5g过硫酸钾,搅拌15min后开始升温,待温度达到80℃后保温反应3h,减压浓缩除水,得到聚二丙二醇甲基烯丙基醚,分子量为6.8×104。
实施例1
(1)将牡丹皮经清洗后烘干,破碎,得到50目的粗粉;
(2)将25g粗粉加5倍重量的45℃温水浸泡3h,再加入120mg纤维素酶和80mg果胶酶进行酶解5h,pH值为4.5,温度为50℃,得到酶解液;
(3)采用水蒸气蒸馏法对酶解液进行蒸馏,收集酶解液重量1/3的馏分,蒸馏剩余物过滤,收集滤液;
(4)所得馏分经3℃冷却析晶,过滤,取晶体并加乙醇进行溶解,再次过滤,减压浓缩回收乙醇,浓缩剩余物冷却,得到丹皮酚;
(5)所得滤液经减压浓缩制成浓缩液,浓缩液的重量为滤液重量的1/3,向浓缩液中加入蛋白变性剂,每100g浓缩液加入10g蛋白变性剂,搅拌后静置,过滤,取滤液并加乙醇至乙醇体积百分比达到75%进行沉淀,搅拌后静置,过滤,取沉淀物并采用乙醇洗涤,真空干燥,得到牡丹皮多糖。
实施例2
(1)将牡丹皮经清洗后烘干,破碎,得到50目的粗粉;
(2)将25g粗粉加5倍重量的45℃温水浸泡3h,再加入100mg纤维素酶和100mg果胶酶进行酶解5h,pH值为4.5,温度为50℃,得到酶解液;
(3)采用水蒸气蒸馏法对酶解液进行蒸馏,收集酶解液重量1/3的馏分,蒸馏剩余物过滤,收集滤液;
(4)所得馏分经3℃冷却析晶,过滤,取晶体并加乙醇进行溶解,再次过滤,减压浓缩回收乙醇,浓缩剩余物冷却,得到丹皮酚;
(5)所得滤液经减压浓缩制成浓缩液,浓缩液的重量为滤液重量的1/3,向浓缩液中加入蛋白变性剂,每100g浓缩液加入12g蛋白变性剂,搅拌后静置,过滤,取滤液并加乙醇至乙醇体积百分比达到80%进行沉淀,搅拌后静置,过滤,取沉淀物并采用乙醇洗涤,真空干燥,得到牡丹皮多糖。
实施例3
在实施例2的基础上添加乳酸铝,酶解时间调整为4h,其余制备步骤同实施例2。
(1)将牡丹皮经清洗后烘干,破碎,得到50目的粗粉;
(2)将25g粗粉加5倍重量的45℃温水浸泡3h,并加入0.5g乳酸铝,再加入100mg纤维素酶和100mg果胶酶进行酶解4h,pH值为4.5,温度为50℃,得到酶解液;
(3)采用水蒸气蒸馏法对酶解液进行蒸馏,收集酶解液重量1/3的馏分,蒸馏剩余物过滤,收集滤液;
(4)所得馏分经3℃冷却析晶,过滤,取晶体并加乙醇进行溶解,再次过滤,减压浓缩回收乙醇,浓缩剩余物冷却,得到丹皮酚;
(5)所得滤液经减压浓缩制成浓缩液,浓缩液的重量为滤液重量的1/3,向浓缩液中加入蛋白变性剂,每100g浓缩液加入12g蛋白变性剂,搅拌后静置,过滤,取滤液并加乙醇至乙醇体积百分比达到80%进行沉淀,搅拌后静置,过滤,取沉淀物并采用乙醇洗涤,真空干燥,得到牡丹皮多糖。
对比例1
将实施例2中的蛋白变性剂替换为等量的尿素,其余制备步骤同实施例2。
对比例2
将实施例2中的蛋白变性剂替换为等量的十二烷基硫酸钠,其余制备步骤同实施例2。
利用HPLC法测定实施例和对比例制备的丹皮酚、牡丹皮多糖的提取率和纯度,以丹皮酚、牡丹皮多糖的标准品作为对照。
表1丹皮酚、牡丹皮多糖的提取率和纯度
表1中的“-”指未测定,因为对比例中蛋白变性剂的改变不影响丹皮酚的提取。
结合上述实施例、对比例和表1可以看出,乳酸铝的添加可以缩短酶解时间并保证丹皮酚、牡丹皮多糖的提取率;自制蛋白变性剂的添加可以提高牡丹皮多糖的提取率和纯度,处理效果优于本领域常用的尿素以及十二烷基硫酸钠。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (9)
1.一种从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)将牡丹皮经清洗后烘干,破碎,得到粗粉;
(2)将粗粉加温水浸泡,再加入纤维素酶和果胶酶进行酶解,得到酶解液;
(3)采用水蒸气蒸馏法对酶解液进行蒸馏,收集馏分,蒸馏剩余物过滤,收集滤液;
(4)所得馏分经冷却析晶,过滤,取晶体并加乙醇进行溶解,再次过滤,减压浓缩回收乙醇,浓缩剩余物冷却,得到丹皮酚;
(5)所得滤液经减压浓缩制成浓缩液,向浓缩液中加入蛋白变性剂,搅拌后静置,过滤,取滤液并加乙醇至乙醇体积百分比达到75-85%进行沉淀,搅拌后静置,过滤,取沉淀物并采用乙醇洗涤,真空干燥,得到牡丹皮多糖;
所述步骤(5)中蛋白变性剂为聚二丙二醇甲基烯丙基醚,分子量为5×104-8×104。
2.根据权利要求1所述的从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法,其特征在于:所述步骤(1)中粗粉的粒度为20-100目。
3.根据权利要求1所述的从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法,其特征在于:所述步骤(2)中纤维素酶的用量为粗粉重量的0.1-0.5%,果胶酶的用量为粗粉重量的0.1-0.5%。
4.根据权利要求1所述的从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法,其特征在于:所述步骤(2)中酶解的pH值为4-5,温度为45-55℃。
5.根据权利要求1所述的从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法,其特征在于:所述步骤(3)中馏分的重量为酶解液重量的1/3-1/2。
6.根据权利要求1所述的从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法,其特征在于:所述步骤(4)中冷却析晶的环境温度为2-5℃。
7.根据权利要求1所述的从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法,其特征在于:所述步骤(5)中浓缩液的重量为滤液重量的1/4-1/3。
8.根据权利要求1所述的从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法,其特征在于:所述步骤(5)中蛋白变性剂的用量为每100g浓缩液加入5-20g蛋白变性剂。
9.根据权利要求1所述的从牡丹皮中提取丹皮酚并联产牡丹皮多糖的方法,其特征在于:所述聚二丙二醇甲基烯丙基醚是以二丙二醇甲基烯丙基醚作为聚合单体反应制得,以水作为反应溶剂,以过硫酸钾或过硫酸铵作为引发剂,反应温度为70-90℃。
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