CN106465788A - 一种水产饲料的生产方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种水产饲料的生产方法及其应用。具体而言，本发明涉及制备二甲基丙酸噻亭的方法、饲料生产方法或改善发酵豆粕的风味的方法，其特征在于，该方法包括使用芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻发酵豆粕的步骤。本发明还提供一种发酵豆粕，所述发酵豆粕是用芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻按本发明的方法发酵获得。本发明还提供一种饲料，其含有本发明的发酵豆粕。根据本发明方法发酵豆粕，除降解豆粕抗营养因子、增加小肽含量外，发酵产生的豆粕还具有特殊风味，能增加水产动物摄食量和增重率，降低饲料系数，提高养殖效益。

Description

一种水产饲料的生产方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种水产饲料的生产方法及其应用。具体地，本发明涉及一种利用枯草芽孢杆菌和裂殖壶藻共培养生产水产饲料的方法及其应用。
背景技术
诱食剂是水产配合饲料的重要组成成分，合适的诱食剂可增强水产动物对人工调配饲料的嗜好性，提高摄食量，促进生长，从而提高养殖效益，并可大大降低养殖水体的污染。
诱食剂的种类众多，根据作用机理，可分为：视觉诱食剂、味觉诱食剂和嗅觉诱食剂；对于水产动物，嗅觉和味觉诱食剂研究较多，水产动物的嗅觉比较灵敏，水体中较低浓度的化学物质即可被感受到，使养殖水体具有某种特定气味，以诱集水产动物摄食。
二甲基丙酸噻亭(dimethyl-β-propiothetin，DMPT)具有特殊的海洋气味，是一种安全、无毒、无残留、绿色高效的水产动物添加剂。
R.G.ackman等人(Proceedings of the Fifth International SeaweedSymposium,1965,August 25-28)对14种不同海洋藻类进行研究，发现6种具有DMPT，但文章中未见裂殖壶藻的相关研究。
Conrad Wagner等人(Archives of Biochemistry and Biophysics,Volume 98,Issue 2,August 1962,Pages 331–336)从泥团中分离到一株能以DMPT为唯一碳源的梭状丙酸菌(Clostridium propionicum)，能将DMPT分解为丙烯酸、乳酸、二甲硫代物等，文中未涉及枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻的共培养相关技术。
刘继业等人(刘继业、张智、王文民，“水产动物诱食剂溴化DMPT的合成研究”，2010，《山东化工》)以二甲硫醚与3-溴丙酸为反应物，在一定条件下进行化学反应，再分离、纯化得到DMPT，反应过程、分离纯化复杂、难以控制。
目前，水产饲料中通过人为添加DMPT，达到诱食的目的，而通过微生物发酵产生DMPT风味物质的研究未见报道。
通过微生物发酵可有效降解或消除原料中的抗营养因子，提高饲料营养价值。枯草芽孢杆菌因其蛋白酶活力高、生长速度快、抗逆性强等特点，是发酵豆粕常用的微生物之一。
上世纪八十年代，从红树林地区分离到了裂殖壶藻(Schizochytrium sp.)，属于真菌中的卵囊菌纲、破囊壶菌属，营养体为单细胞，细胞形态为球形。目前，人们对裂殖壶藻的研究主要集中在DHA的生产上，在其他方面的研究较少。例如，焦建刚，Yuan Kathy等人(上海海洋大学学报，23卷4期)通过在饲料中添加一定量的裂殖壶藻发酵粉，研究其对南美白对虾生长性能和肌肉营养成分的影响，结果表明：在添加量达到基础饲料重量的0.5％时，能提高个体增重和降低饲料系数，但增重率、成活率和饲料系数没有显著影响；由此可见，在高剂量添加情况下，其效果并不明显。Menghe H.Li等人(Aquaculture，2009，Volume 292，232-236)在斑点叉尾鮰的饲料中添加裂殖壶藻干粉，添加量为饲料重量的1.0％、1.5％时，增重效果明显，但未对其风味、诱食性效果做报道。
本领域仍然需要一种利用发酵技术生产水产饲料的方法，采用该方法制备得到的饲料具有特殊风味、其不良气味被掩盖，投食后能增加水产动物摄食量和增重率、降低饲料系数，提高养殖效益。
发明内容
本发明公开了一种通过发酵技术来生产水产饲料的方法。具体地，本发明利用枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻(Schizochytrium sp.)共培养来发酵豆粕，豆粕经发酵处理后，除降解豆粕抗营养因子、增加小肽含量外，还可赋予发酵豆粕特殊风味，掩盖其不良气味，增加水产动物摄食量和增重率，降低饲料系数，提高养殖效益。
在本发明的方法中，采用的是发酵豆粕固态发酵常见的枯草芽孢杆菌，除此之外，地衣芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和侧孢芽孢杆菌等均为饲料生产中可用的芽孢杆菌属微生物，其生理生化特性与枯草芽孢杆菌相似，因此，也可采用芽孢杆菌属的这些微生物来实施本发明。
因此，本发明第一方面提供一种二甲基丙酸噻亭(DMPT)的制备方法，所述方法包括使用芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻发酵豆粕。
本发明第二方面提供一种饲料生产方法，该方法包括使用芽孢杆菌属微生物与裂殖壶藻发酵豆粕，从而制备得到所述饲料。
本发明第三方面提供一种改善发酵豆粕的风味的方法，该方法包括使用芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻发酵豆粕。
在一个具体实施例中，所述芽孢杆菌属微生物选自枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和侧孢芽孢杆菌。
在一个具体实施例中，豆粕的初始含水量在40％～70％之间。
在一个具体实施例中，基于含水豆粕总重量，以5％～30％的体积重量比的总接种量接入芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻。
在一个具体实施例中，以培养液的形式接入芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻。在一个更具体的实施例中，芽孢杆菌属微生物培养液和/或裂殖壶藻培养液经十倍稀释后OD600nm在0.5～1.5的范围内，优选在0.5～1.2的范围内，更优选在0.5～1.0的范围内，更优选在0.6～0.8的范围内。
在一个具体实施例中，芽孢杆菌属微生物培养液与裂殖壶藻培养液的接入比例为8:1至1:3，优选5:1至1:1。
本发明第四方面提供一种发酵豆粕，所述发酵豆粕使用芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻按本发明所述方法发酵获得。
在一个具体实施例中，所述发酵豆粕中，酸溶蛋白占豆粕总蛋白的比例在6％以上，优选7％以上，更优选8％以上。
在一个具体实施例中，所述发酵豆粕中，胰蛋白酶抑制剂的含量低于1.5mg胰蛋白酶抑制剂/g发酵豆粕，优选低于1.0mg胰蛋白酶抑制剂/g发酵豆粕。
在一个具体实施例中，所述发酵豆粕含有占发酵豆粕总挥发物重量5％～50％、优选占15％～40％、更优选占20％～30％的二甲基丙酸噻亭。
本发明第五方面提供一种饲料，该饲料含有本发明的发酵豆粕。
在一个具体实施例中，所述饲料为水产饲料，含5％～10％的所述发酵豆粕和10～15％的鱼粉。
在一个具体实施例中，所述饲料为家畜或家禽幼龄动物饲料。
本发明还提供芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻在制备二甲基丙酸噻亭、饲料或改善发酵豆粕的风味中的应用。
附图说明
图1发酵前豆粕风味成分的总离子色谱图。
图2共培养发酵后豆粕风味成分的总离子色谱。
图3共培养发酵前后风味成分对比分析。
图4枯草芽孢杆菌发酵豆粕风味成分的总离子色谱图。
图5裂殖壶藻发酵豆粕风味成分的总离子色谱图。
图6枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻发酵豆粕风味成分的对比分析。
图7枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻共培养平板图。
具体实施方式
本发明使用芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻发酵豆粕。
适用于本发明的芽孢杆菌属微生物包括但不限于枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和侧孢芽孢杆菌。
适用于本发明的裂殖壶藻包括本领域已知的各种株系。
芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻都可采用它们各自的本领域已知的发酵培养基和培养条件进行培养，制备含有芽孢杆菌属微生物或裂殖壶藻的发酵液(培养液)。
作为一个芽孢杆菌属微生物的发酵培养基的例子，该发酵培养基可含有蛋白胨、酵母抽提物和氯化钠。蛋白胨的浓度可以是5～15g/L，酵母抽提物的浓度可以是3～8g/L，氯化钠的浓度可以是8～12g/L。
作为一个裂殖壶藻的发酵培养基的例子，该发酵培养基葡萄糖、酵母抽提物、(NH4)2SO4、KH2PO4、Na2SO4、MgSO4、K2SO4、KCl和微量元素。微量元素包括CaCl2、MnCl2、ZnSO4、CuSO4、Na2MoO4、NiSO4、FeSO4、CoCl2、硫胺素和维生素B12。例如，裂殖壶藻的发酵培养基含有：葡萄糖80～120g/L、酵母抽提物12～20g/L、(NH4)2SO40.5～1.5g/L、KH2PO41～5g/L、Na2SO410～15g/L、MgSO43～8g/L、K2SO45～10g/L、KCl 1～4g/L，和微量元素(mg/L)：CaCl230～80、MnCl24～6、ZnSO44～6、CuSO40.5～1.0、Na2MoO40.01～0.025、NiSO40.5～1.0、FeSO40.005～0.015、CoCl20.050～0.080、硫胺素0.50～1.0和维生素B121.0～1.5。
然后，可将含芽孢杆菌属微生物的发酵液与含裂殖壶藻的发酵液混合，并用于发酵豆粕。
应理解，并不需要先将两种发酵液混合。可分别将两种发酵液按所需的接种密度加到豆粕中。
基于含水豆粕总重量，接种量一般是5％～30％的体积重量比，分别接入或混合接入的方式加入芽孢杆菌属微生物与裂殖壶藻的发酵液或培养液。优选地，该芽孢杆菌属微生物或裂殖壶藻发酵液或培养液的浓度分别是经十倍稀释后OD600nm在0.5～1.5的范围内，更优选在0.5～1.2的范围内，更优选在0.5～1.0的范围内，更优选在0.6～0.8的范围内。
对接入含水豆粕中的芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻发酵液或培养液的体积比并无特殊限制，当芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻发酵液或培养液的浓度分别是经十倍稀释后OD600nm如上文所述在0.5～1.5的范围内时，优选地芽孢杆菌属微生物与裂殖壶藻发酵液或培养液的接入比例为8:1至1:3，优选5:1至1:1。
豆粕是大豆提取豆油后得到的一种副产品，按照提取的方法不同，可以分为一浸豆粕和二浸豆粕。其中以浸提法提取豆油后的副产品为一浸豆粕，而先以压榨取油，再经过浸提取油后所得的副产品称为二浸豆粕。本发明可使用一浸豆粕和/或二浸豆粕。可从市场上购得豆粕。例如，本申请使用来自益海(泰州)粮油食品工业有限公司的豆粕产品。
对豆粕发酵条件并无特殊限制。通常，将豆粕与无菌水混合后，将含芽孢杆菌属微生物的发酵液、含寇氏隐甲藻或裂殖壶藻的发酵液依次或同时或将其混合液加到豆粕中。将豆粕与无菌水混合后，通常使豆粕的初始含水量在40％～70％之间。该含水量可根据豆粕的品质、用量、发酵设备等条件予以调节。接种后，可在常规条件下进行发酵。作为例子，本发明的发酵条件为：发酵温度37±3℃，湿度为90％±10％，发酵时间可根据发酵的生物量通常设置为24～72小时。
采用上述方法发酵获得的发酵豆粕中原先的大分子量蛋白被有效降解，酸溶蛋白含量显著增加，胰蛋白酶抑制剂(TI)同时也被大量降解，同时产生了二甲基丙酸噻亭(DMPT)。通常，本发明发酵豆粕中，酸溶蛋白占豆粕总蛋白的比例在6％以上，优选7％以上，更优选8％以上。胰蛋白酶抑制剂的含量通常低于1.5mg胰蛋白酶抑制剂/g发酵豆粕，更优选低于1.0mg胰蛋白酶抑制剂/g发酵豆粕。优选的，本发明的发酵豆粕中含有占挥发物重量5％-50％的二甲基丙酸噻亭，优选地，本发明的发酵豆粕中含有占挥发物重量15％-40％的二甲基丙酸噻亭，更优选地，本发明的发酵豆粕中含有占挥发物重量20％-30％的二甲基丙酸噻亭。
通常，本发明的发酵豆粕中还含有所述芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻。
本发明的发酵豆粕可用作饲料组分，替换饲料中原有的鱼粉。常规的含鱼粉的饲料中，鱼粉一般占饲料比重15～25％左右。高档水产饲料对鱼粉要求更高，为20～25％。使用本发明的发酵豆粕，可替换饲料中的鱼粉，从而减少饲料中的鱼粉，使其重量百分比降低至10～15％。因此，本发明提供一种饲料，所述饲料含有占该饲料重量大约5～10％的本发明发酵豆粕，所述豆粕替代了该饲料重量5～10％的鱼粉。饲料中还含有的其它成分及含量与常规的饲料相同或稍有变动，但这都在本领域技术人员所能掌握的范围之内。
除水产饲料外，本发明的发酵豆粕还可用于例如家畜及家禽等幼龄动物饲料中。
如未特别说明，以下实验所用化学品分析纯(AR)级，商购自国药集团化学试剂有限公司。豆粕来源：益海(泰州)粮油食品工业有限公司。
分析与检测方法：
粗蛋白质含量：采用微量凯氏定氮法(GB/T 5511-2008)检测。
酸溶蛋白含量：采用三氯乙酸(TCA)法(GB/T 22492-2008)检测。
胰蛋白酶抑制剂(TI)含量：采用紫外分光光度法(AACC 71-10)检测。
实施例1：菌种活化
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的活化：挑取枯草芽孢杆菌B3甘油管(保藏号：CGMCC No.7641)一环，在LB平板上划线，37℃培养箱中过夜培养；
裂殖壶藻(Schizochytrium.ATCC20888)(ATCC20888，购自广州微生物研究所)的活化：挑取裂殖壶藻甘油管一环，在种子基础培养基平板上划线，28℃培养箱中培养2天。
种子基础培养基：葡萄糖100g/L、酵母抽提物15g/L、(NH4)2SO41g/L、KH2PO43g/L、Na2SO412g/L、MgSO45g/L、K2SO47g/L、KCl 2g/L。
实施例2：种子液制备及平板共培养
枯草芽孢杆菌B3种子液的制备：从活化好的平板上挑取单菌落，接种于50ml培养基中进行摇瓶培养，发酵温度为37℃，PH值为6.8，转速为200rpm，发酵时间为18h；枯草芽孢杆菌种子液浓度为：经10倍稀释后OD600nm＝0.8。摇瓶发酵培养基为：胰蛋白胨10g/L、酵母抽提物5g/L、氯化钠10g/L。
裂殖壶藻(Schizochytrium sp.)种子液的制备：从活化好的平板上挑取单菌落，接种于50ml培养基中进行摇瓶培养，发酵温度为28℃，PH值为6.8，转速为200rpm，发酵时间为72h；裂殖壶藻种子液浓度为：经10倍稀释后菌浓达到OD600nm＝0.8。摇瓶发酵培养基为：葡萄糖100g/L、酵母抽提物15g/L、(NH4)2SO41g/L、KH2PO43g/L、Na2SO412g/L、MgSO45g/L、K2SO47g/L、KCl 2g/L，微量元素(mg/L)：CaCl250、MnCl25.2、ZnSO45.2、CuSO40.8、Na2MoO40.016、NiSO40.8、FeSO40.01、CoCl20.066、硫胺素0.76、维生素B121.2。
此外，在脱脂豆粕粉琼脂平板上观察枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻共培养的生长情况，发现：如图7所示，两种菌均可以脱脂豆粕为唯一营养源进行生长、繁殖；两者未出现拮抗或彼此抑制，可以在同一基质中共同培养。
实施例3：固态共培养—I
豆粕经90℃灭菌30min后，与无菌水进行混匀，使豆粕的初始含水量为50％，以含水豆粕总重量为基础，以10％的体积重量比的接种量接入实施例2制备得到的枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻种子液的混合液(1:1)，4层纱布密封，在37℃、湿度为90％恒温恒湿箱中，发酵48h。发酵结果列在下表1中。
实施例4：固态共培养—II
豆粕经90℃灭菌30min后，与无菌水进行混匀，使豆粕的初始含水量为50％，以含水豆粕总重量为基础，以10％的体积重量比的接种量接入实施例2制备得到的枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻种子液的混合液(3:1)，4层纱布密封，在37℃、湿度为90％恒温恒湿箱中，发酵48h。发酵结果列在下表1中。
实施例5：固态共培养—III
豆粕经90℃灭菌30min后，与无菌水进行混匀，使豆粕的初始含水量为50％，以含水豆粕总重量为基础，以10％的体积重量比的接种量接入实施例2制备得到的枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻种子液的混合液(5:1)，4层纱布密封，在37℃、湿度为90％恒温恒湿箱中，发酵48h。发酵结果列在下表1中。
实施例6：固态共培养—IV
豆粕经90℃灭菌30min后，与无菌水进行混匀，拌匀后的豆粕初始含水量为60％，以含水豆粕总重量为基础，以10％的体积重量比的接种量接入实施例2制备得到的枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻种子液的混合液(1:1)，4层纱布密封，在37℃、湿度为90％恒温恒湿箱中，发酵48h。发酵结果列在下表1中。
表1：豆粕进行枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻共培养发酵前后品质变化
粗蛋白(干基)/％ 酸溶蛋白(占蛋白)/％ TI/(mg/g)
发酵前 53.03 1.42 6.12
I发酵后 59.27 8.69 0.97
II发酵后 59.67 9.34 0.87
III发酵后 59.82 9.68 0.82
IV发酵后 59.88 9.75 0.78
从上表可以看出，经枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻共培养后，豆粕中的大分子量蛋白得到有效降解，酸溶蛋白含量显著增加，胰蛋白酶抑制剂(TI)同时也被大量降解，表明枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻在以不同比例菌浓及不同初始含水量条件下，在以脱脂豆粕单一营养物质中共培养，未出现拮抗，并不影响降解效果。
实施例7：固态枯草芽孢杆菌单菌种发酵
豆粕经90℃灭菌30min后，与无菌水进行混匀，使豆粕的初始含水量为50％，以含水豆粕总重量为基础，以10％的体积重量比的接种量接入枯草芽孢杆菌种子液(经过夜培养，10倍稀释后OD600nm＝0.8)，搅拌均匀，4层纱布密封，在37℃、湿度为90％恒温恒湿箱中，发酵48h。
实施例8：固态裂殖壶藻单菌种发酵
豆粕经90℃灭菌30min后，与无菌水进行混匀，使豆粕的初始含水量为50％，以含水豆粕总重量为基础，以10％的体积重量比的接种量接入裂殖壶藻种子液(经过4d培养，10倍稀释后菌浓达到OD600nm＝0.8)，与豆粕混匀，4层纱布密封，在37℃、湿度为90％恒温恒湿箱中，发酵48h。
实施例9：风味分析
采用固相微萃取和GC-MS联用技术分析发酵液的主要挥发性化合物成分。
具体方法如下：
固相微萃取(SPME)法：取5g发酵豆粕置于20ml钳口瓶中，用聚四氟乙烯隔垫密封，于磁力搅拌器上在60℃加热平衡15min后，通过隔垫插入已活化好的SPME萃取头(270℃活化30min)，推出纤维头，顶空吸附40min后，插入GC进样口解析5min。
色谱条件：色谱柱为DB-5MS，30m×0.25mm ID×0.25um；载气：氦气；柱流量：1ml/min；进样口温度：250℃，不分流进样；起始温度40℃保持3min，以5℃/min圣旨150℃，再以10℃/min升至250℃，保持10min。
质谱条件：接口温度280℃，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，离子化方式：EI，电子能量70eV，质量范围35-350AMU/s。
结果显示在图3－6中。从图3可以看出，发酵前的脱脂豆粕经热处理后，主要的挥发性风味物质有15种，酮类物质较多，其中十一烷酮占总挥发物质近40％，未见DMPT产生；经枯草芽孢杆菌和裂殖壶藻共培养发酵后，在菌浓比例为5:1、3:1、1:1等不同接种方案中，发酵豆粕都具有特殊的海洋腥味，挥发性物质的种类发生了较大变化，吡嗪类物质明显增加，赋予发酵豆粕一定的烤香气，同时，大量生产DMPT，占总挥发物的25％左右，且DMPT的挥发阈值较低，使得发酵豆粕的海洋腥味显著。
从图4-6可以看出，分别以单一菌种裂殖壶藻或枯草芽孢杆菌在豆粕上发酵后，分析其挥发性风味组分，共产生17种风味化合物；其中裂殖壶藻发酵豆粕具有一定的腥臭味，同时伴有烤糊味，关键性挥发性物质如乙酸乙酯、3-甲基吡嗪及萘等，都具有特征风味；枯草芽孢杆菌发酵豆粕具有一定的菌臭味外，还伴有一定的焙烤食物的甜香气息，主要挥发性物质为麦芽酚、二叔丁基对苯酚、己醛等；当以单一菌种发酵时，挥发性呈味物质中未见DMPT生成。
实施例10：饲养实验
1)饲料中豆粕组分的营养成分分析(表2的数据采用实施例6所述的发酵方法发酵豆粕)。
表2：营养成分分析/％
2)实验方案与饲料配方
表3：试验饲料配方及主要营养指标
a：每千克多维成分分析保证值：维生素A 12500000IU、维生素D33000000IU、维生素E 100000IU、维生素K 36870mg、维生素B120000mg、维生素B230000mg、维生素B630000mg、维生素B1240mg、D-生物素800mg、烟酰胺60000mg、D-泛酸钙50000mg；
b：每千克多矿成分分析保证值：Ca(IO3)210g、CoCl2·6H2O 10g、CuSO4·5H2O 8g、FeSO4·H2O 16.7g、ZnSO4·H2O22.9g、MnSO4·H2O 6.3g、Na2SeO3·5H2O 2g、MgSO4·7H2O 66.7g、KCl 500g、NaCl 200g、Ca(H2PO4)2157.5g；
c：配方中添加的蛋氨酸、赖氨酸和苏氨酸均为微囊型，其有效含量分别为50％、39％和50％；
d：其他中含豆粕15％、花生粕15％、肉骨粉5％、鱿鱼膏5％、啤酒酵母5％、大豆磷脂1.5％、鱼油2％、磷酸二氢钙2％、60％氯化胆碱0.5％、35％VC0.1％、98％肌醇0.04％。
3)实验用虾及饲养管理
养殖试验于上海海洋大学滨海特种养殖场进行。从市场上购得凡纳滨对虾，选取规格一致、体格健壮的凡纳滨对虾(平均体质量为3.96g)960尾，随机分配于16口网箱(网箱规格为2.0m×1.0m×1.2m)中，每个网箱60尾，试验共4个处理组，每处理组4个重复。试验前驯养一周，待虾稳定且正常摄食后正式开始试验。养殖期间，每日投喂4次(7:00、12:00、17:00和22:00)，日投喂量为虾体重的4％～7％，并根据天气及摄食情况作适当调整，使每网箱的投饲量保持在基本一致的水平，昼夜充气，每周换水1/5。试验期间水温28.2℃～30.4℃，溶氧>5.6mg/L，pH7.8～8.5，氨氮≤0.2mg/L，亚硝酸盐≤0.1mg/L。饲养试验共进行6周。
4)对凡纳滨对虾生长性能的影响
表4：发酵豆粕对凡纳滨对虾生长性能的影响
注：同列数据后若标明不同字母则表示两者差异显著(P＜0.05)。
由上表可以看出，采用鱼粉的正对照组具有最高增重率和最低饲料系数，其次为S941、参考组，但与正对照组无显著差异(P＞0.05)；此外，正对照组和S941具有较好的诱食性，通常在投喂后2h内可以摄食完，其他组需要3-4h。枯草芽孢杆菌与裂殖壶藻共培养的发酵豆粕较参考组、负对照组在增重率上效果显著。以上结果说明，共培养获得的发酵豆粕产品可替代6％的鱼粉而不影响对虾生长、成活率及饲料利用，其中S941具有良好的诱食性。

Claims (10)

1.制备二甲基丙酸噻亭的方法、饲料生产方法或改善发酵豆粕的风味的方法，其特征在于，所述方法包括使用芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻发酵豆粕的步骤。
2.如权利要求1所述的制备二甲基丙酸噻亭的方法、饲料生产方法或改善发酵豆粕的风味的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌属微生物选自枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和侧孢芽孢杆菌。
3.如权利要求1或2所述的制备二甲基丙酸噻亭的方法、饲料生产方法或改善发酵豆粕的风味的方法，其特征在于，所述方法包括：
豆粕的初始含水量在40％～70％之间，和
基于含水豆粕总重量，以5％～30％的体积重量比的总接种量接入芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻。
4.如权利要求1－3中任一项所述的制备二甲基丙酸噻亭的方法、饲料生产方法或改善发酵豆粕的风味的方法，其特征在于，以培养液的形式接入芽孢杆菌属微生物和/或裂殖壶藻，优选的芽孢杆菌属微生物培养液和/或裂殖壶藻培养液经十倍稀释后OD600nm在0.5～1.5的范围内，优选在0.5～1.2的范围内，更优选在0.5～1.0的范围内，更优选在0.6～0.8的范围内。
5.如权利要求1－4中任一项所述的制备二甲基丙酸噻亭的方法、饲料生产方法或改善发酵豆粕的风味的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌属微生物培养液与所述裂殖壶藻培养液的接入比例为8:1至1:3，优选5:1至1:1。
6.一种发酵豆粕，其特征在于，所述发酵豆粕是用芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻按权利要求1－5中任一项所述的方法发酵获得。
7.如权利要求6所述的发酵豆粕，其特征在于，所述发酵豆粕中：
(1)酸溶蛋白占豆粕总蛋白的比例在6％以上，优选7％以上，更优选8％以上；和/或
(2)胰蛋白酶抑制剂的含量低于1.5mg胰蛋白酶抑制剂/g发酵豆粕，优选低于1.0mg胰蛋白酶抑制剂/g发酵豆粕；和/或
(3)含有占挥发物重量5％～50％、优选占15％～40％、更优选占20％～30％的二甲基丙酸噻亭。
8.一种饲料，该饲料含有权利要求6－7中任一项所述的发酵豆粕。
9.如权利要求8所述的饲料，其特征在于，
(1)所述饲料为水产饲料，含5％～10％的所述发酵豆粕和10～15％的鱼粉；或
(2)所述饲料为家畜或家禽幼龄动物饲料。
10.芽孢杆菌属微生物和裂殖壶藻在制备二甲基丙酸噻亭、饲料或改善发酵豆粕的风味中的应用。
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