CN104651246A - 一株枯草芽孢杆菌及发酵豆粕前处理工艺 - Google Patents

一株枯草芽孢杆菌及发酵豆粕前处理工艺 Download PDF

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CN104651246A CN201310590402.7A CN201310590402A CN104651246A CN 104651246 A CN104651246 A CN 104651246A CN 201310590402 A CN201310590402 A CN 201310590402A CN 104651246 A CN104651246 A CN 104651246A
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吴学智
宋鹏
张敏
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Abstract

本发明提供了一株枯草芽孢杆菌CGMCC NO.7641，该菌株可在24h内将低聚糖、抗原蛋白、TI等抗营养因子降解殆尽，还能显著提高酸溶蛋白含量，使发酵豆粕品质明显改善。使用本发明提供的方法预处理豆粕在进行发酵，所获得的发酵豆粕，其粗蛋白含量、酸溶蛋白含量提高明显，胰蛋白酶抑制剂降低显著。本发明提供的发酵豆粕，用于制备饲料浓缩料、宠物饲料、水产、畜禽等多种动物饲料中，由于大分子蛋白经低分子化降解、酸溶蛋白含量显著提高，利于动物吸收利用，促进动物生长，提高消化利用率及转化率，降低饲料成本易于工业化实施。

Description

一株枯草芽孢杆菌及发酵豆粕前处理工艺
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体说涉及一株枯草芽孢杆菌及发酵豆粕前处理工艺。
背景技术
豆粕是饲料工业中应用最广泛的植物性蛋白原料，营养丰富，但由于存在多种抗营养因子，影响动物对豆粕营养的吸收率。采用微生物发酵处理后，不仅可以去除或降低豆粕中抗营养因子，还可以大大提高豆粕的营养价值。
发酵豆粕品质的优劣、营养价值的高低，除粗蛋白指标外，小肽含量也是业内人士普遍关注的指标，肽含量与酸溶蛋白含量存在显著的正相关，所以使用酸溶蛋白含量指标评价发酵豆粕品质时，既可以反映豆粕中抗原蛋白和其它抗营养因子蛋白被水解的程度，同时又可一定程度上反映肽含量，所以酸溶蛋白含量是评价发酵豆粕品质较好且重要的指标。
固态发酵由于成本低，工艺简单，国内外豆粕发酵多采用固态发酵模式，但在短时间内获得高酸溶蛋白存在一定难度。皮祖坤、梁运祥等人曾提出“正常发酵豆粕产品小肽含量一般在5%-8%之间，固态发酵生产发酵豆粕小肽含量一般不会超过10%，过高的小肽含量只有通过液态酶解的方式才可以做到，但其成本远远高于固态发酵产品”。由此可见，在固态发酵豆粕工业化生产过程中，生产高酸溶蛋白指标的豆粕存在一定难度。本发明针对该问题，通过筛选优良菌株及优化发酵豆粕前处理方式，实现显著提高酸溶蛋白含量的目的。
目前，关于发酵豆粕前处理方式主要有：
1、原料豆粕中加入一定量的水，搅拌均匀，进行热处理；
2、原料豆粕加入一定的水，搅拌均匀，不经热处理，直接接种发酵；
但采用上述处理方式，豆粕经发酵后，酸溶蛋白含量较低，或者酸溶蛋白含量增加了，但发酵时间却大大延长。
此外，近年来，国内外大量研究表明，经微生物发酵可使豆粕变成一种具有多种功能的优质蛋白质饲料。但目前，发酵豆粕采用的菌株往往不能在较短时间内、全面、彻底地降解抗营养因子，提高小肽含量。
因此，有必要对提供更优异的发酵菌株，以及对现有的生产方法加以改进，以缩短发酵时间，获得良好的发酵豆粕。
发明内容
本发明的第一个目的在于，提供一种用于豆粕发酵的菌株。
本发明提供的菌株为枯草芽孢杆菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC NO.7641。
本发明的第二个目的在于，提供一种发酵豆粕的预处理方法。
本发明提供的发酵豆粕的预处理方法，包括以下步骤：
a、将豆粕于70-120℃灭菌；
b、调节灭菌后豆粕的水分。
在本发明的一个实施方案中，所述灭菌时间为10-30min。
在本发明的一个实施方案中，所述调节灭菌后豆粕水分为调节至水分含量为45%-55%。
本发明提供的发酵豆粕的预处理方法，包括以下步骤：
a、调节豆粕水分为65-70%；
b、将经步骤a处理后的豆粕于70-120℃灭菌。
在本发明的一个实施方案中，所述调节豆粕水分的方法为：添加过量水浸泡完全后，去除多余水分。
在本发明的一个实施方案中，所述灭菌时间为10-30min。
本发明还提供了使用上述方法预处理的豆粕。
本发明还提供了一种发酵豆粕的方法，所述方法为在经上述方法预处理的豆粕中加入豆粕发酵菌株，以发酵豆粕。
在本发明的一个实施方案中，所述豆粕发酵菌株包括：枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、乳酸菌、地衣芽孢杆菌、产朊假丝酵母中的一种或多种。
在本发明的一个实施方案中，所述豆粕发酵菌株为枯草芽孢杆菌CGMCCNO.7641。
在本发明的一个实施方案中，所述发酵为于28-37℃发酵24-48h。
本发明还有一个目的在于，提供一种使用前述的方法制备获得的发酵豆粕。
本发明提供的枯草芽孢杆菌CGMCC NO.7641在24h内，不仅将低聚糖、抗原蛋白、TI等抗营养因子降解殆尽，还能显著提高酸溶蛋白含量，使发酵豆粕品质明显改善。使用本发明提供的方法预处理豆粕在进行发酵，所获得的发酵豆粕，其粗蛋白含量、酸溶蛋白含量提高明显，胰蛋白酶抑制剂降低显著。本发明提供的发酵豆粕，用于制备饲料浓缩料、宠物饲料、水产、畜禽等多种动物饲料中，由于大分子蛋白经低分子化降解、酸溶蛋白含量显著提高，利于动物吸收利用，促进动物生长，提高消化利用率及转化率，降低饲料成本易于工业化实施。
附图说明
图1显示了实施例1中使用菌株WBRD00470-B3发酵豆粕前后的抗原蛋白的降解情况，其中，泳道1为发酵前豆粕的电泳结果，泳道2为发酵后豆粕的电泳结果。
图2为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）WBRD00470-B3菌落形态照片。
图3为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）WBRD00470-B3的系统发育树。
本发明的菌株WBRD00470-B3已于2013年05月24日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）”(北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号是CGMCC No.7641，分类命名为：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
在本发明中，如果没有特别的说明，百分数（％）或者份都指相对于组合物的重量百分数或者重量份。
在本发明中，如果没有特别的说明，所涉及的各组分或其优选组分可以相互组合形成新的技术方案。
在本发明中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有实施方式以及优选实施方式可以相互组合形成新的技术方案。
在本发明中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有技术特征以及优选特征可以相互组合形成新的技术方案。
在本发明中，如果没有相反的说明，组合物中各组分的含量之和为100％。
在本发明中，如果没有相反的说明，组合物中各组分的份数之和可以为100重量份。
在本发明中，除非有其他说明，数值范围“a-b”表示a到b之间的任意实数组合的缩略表示，其中a和b都是实数。例如数值范围“0-5”表示本文中已经全部列出了“0-5”之间的全部实数，“0-5”只是这些数值组合的缩略表示。
在本发明中，除非有其他说明，整数数值范围“a-b”表示a到b之间的任意整数组合的缩略表示，其中a和b都是整数。例如整数数值范围“1-N”表示1、2……N，其中N是整数。
在本发明中，除非有其他说明，“其组合”表示所述各元件的多组分混合物，例如两种、三种、四种以及直到最大可能的多组分混合物。
如果没有特别指出，本说明书所用的术语“一种”指“至少一种”。
如果没有特别指出，本发明所述的百分数（包括重量百分数）的基准都是所述组合物的总重量。
本文所公开的“范围”以下限和上限的形式。可以分别为一个或多个下限，和一个或多个上限。给定范围是通过选定一个下限和一个上限进行限定的。选定的下限和上限限定了特别范围的边界。所有可以这种方式进行限定的范围是包含和可组合的，即任何下限可以与任何上限组合形成一个范围。例如，针对特定参数列出了60－120和80－110的范围，理解为60－110和80－120的范围也是预料到的。此外，如果列出的最小范围值1和2，和如果列出了最大范围值3，4和5，则下面的范围可全部预料到：1－3、1－4、1－5、2－3、2－4、和2－5。
在本文中，除非另有说明，各组分的比例或者重量都指干重。
在本文中，除非另有说明，各反应都在常温常压下进行。
在本文中，除非另有说明，各个反应步骤可以顺序进行，也可以不按顺序进行。例如，各个反应步骤之间可以包含其他步骤，而且反应步骤之间也可以调换顺序。优选地，本文中的反应方法是顺序进行的。
菌株
本发明的发明人从新疆古尔班通古特沙漠的梭梭树的植物根系土壤中筛选获得了一种枯草芽孢杆菌，将该枯草芽孢杆菌用于豆粕发酵24h内，其不仅将豆粕中的低聚糖、抗原蛋白、TI等抗营养因子降解殆尽，还能显著提高豆粕中酸溶蛋白含量，使发酵豆粕品质明显改善。因此，本发明提供了一株可用于豆粕发酵的菌株。本发明提供的枯草芽孢杆菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC NO.7641。
豆粕的预处理方法及预处理豆粕
本发明提供的发酵豆粕的预处理方法，包括以下步骤：
a、将豆粕于70-120℃灭菌；
b、调节灭菌后豆粕的水分。
在本发明的一个实施方案中，所述灭菌温度为75-115℃，75-110℃，80-110℃，80-105℃，85-105℃，85-100℃，90-100℃，或90-95℃。
在本发明的一个实施方案中，所述灭菌温度为70℃，75℃，80℃，85℃，90℃，95℃，100℃，105℃，110℃，115℃或120℃。
在本发明的一个实施方案中，所述灭菌时间为10-30min。
在本方法中，灭菌后豆粕的水分含量为发酵豆粕的常规含量。具体而言，在本发明的一个实施方案中，灭菌后豆粕水分调节至水分含量为45%-55%。
本发明提供的发酵豆粕的预处理方法，包括以下步骤：
a、调节豆粕水分为65-70%；
b、将经步骤a处理后的豆粕于70-120℃灭菌。
在本发明的一个实施方案中，所述调节豆粕水分的方法为：添加过量水浸泡完全后，去除多余水分。
在本发明的一个实施方案中，所述灭菌时间为10-30min。
在本发明的一个实施方案中，所述灭菌温度为75-115℃，75-110℃，80-110℃，80-105℃，85-105℃，85-100℃，90-100℃，或90-95℃。
在本发明的一个实施方案中，所述灭菌温度为70℃，75℃，80℃，85℃，90℃，95℃，100℃，105℃，110℃，115℃或120℃。
本发明还提供了使用上述方法预处理的豆粕。
发酵豆粕的方法及发酵豆粕
本发明提供的发酵豆粕的方法为在经上述方法预处理的豆粕中加入豆粕发酵菌株，以发酵豆粕。
在本发明中，术语“豆粕发酵菌株”指的是，可用于豆粕发酵的菌株，这对于本领域的技术人员而言，是熟知的。例如，在本发明的一个实施方案中，所述豆粕发酵菌株包括：枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、乳酸菌、地衣芽孢杆菌、产朊假丝酵母中的一种或多种。在本发明的一个实施方案中，所述豆粕发酵菌株为枯草芽孢杆菌CGMCC NO.7641。
在本发明中，发酵豆粕的方法采用本领域的常规方法，具体方法及方法的各参数为本领域的技术人员所熟知。在本发明的一个实施方案中，所述发酵为于28-37℃发酵24-48h。
本发明还提供了一种使用上述的方法制备获得的发酵豆粕。
优点
本发明提供的枯草芽孢杆菌CGMCC NO.7641在24h内，不仅将低聚糖、抗原蛋白、TI等抗营养因子降解殆尽，还能显著提高酸溶蛋白含量，使发酵豆粕品质明显改善。使用本发明提供的方法预处理豆粕在进行发酵，所获得的发酵豆粕，其粗蛋白含量、酸溶蛋白含量提高明显，胰蛋白酶抑制剂降低显著。本发明提供的发酵豆粕，用于制备饲料浓缩料、宠物饲料、水产、畜禽等多种动物饲料中，由于大分子蛋白经低分子化降解、酸溶蛋白含量显著提高，利于动物吸收利用，促进动物生长，提高消化利用率及转化率，降低饲料成本易于工业化实施。
在本发明的下述实施例中，菌株生理生化检测项目及方法参照《常见细菌鉴定手册》。
革兰氏染色具体操作步骤如下：
1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）自来水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。
在本发明的下述实施例中，
豆粕中水分含量：采用105℃恒重法检测；
粗蛋白质含量：采用微量凯氏定氮法（GB/T 5511-2008）检测；
酸溶蛋白含量：采用三氯乙酸（TCA）法（GB/T 22492-2008）检测；
胰蛋白酶抑制剂含量：采用紫外分光光度法（AACC 71-10）检测；
低聚糖含量：参考GBT 22221-2008食品中果糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖高效液相色谱法。
抗原蛋白的降解程度：采用聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳分析。
实施例1：菌株制备
1、分离  取梭梭树的植物根系土壤（新疆古尔班通古特沙漠）1g，溶于10ml无菌水中，80℃水浴15min，然后用无菌水10倍梯度稀释，取4个稀释梯度（10-3、10-4、10-5、10-6）菌悬液在LB平板上涂布，每个稀释度至少5个平板，37℃培养24h左右获得单菌落。
2、初筛  挑取单菌落点在牛奶平板（5wt%脱脂牛奶、0.5wt%酵母提取物、1wt%胰蛋白胨、1wt%葡萄糖、琼脂1.5wt%）上，37℃培养16h，挑选水解圈大的菌株，镜检，采用划线分离的方法纯化，获得初筛菌株。
3、复筛  以酸溶蛋白增加、胰蛋白酶抑制剂降解、低聚糖（水苏糖、棉籽糖）降解、抗原蛋白降解等4个指标进行菌株复筛，具体过程如下：将初筛获得的菌株接入LB液体培养基中，在37℃、200rpm条件下培养16h，将获得的发酵液以10%接种量接种于含水量50wt%豆粕（购自益海泰州粮油工业有限公司），37℃条件下发酵24h，测定发酵样品的酸溶蛋白含量、胰蛋白酶抑制剂（TI）、低聚糖及抗原蛋白等的降解程度，从而筛选获得一株低聚糖、抗原蛋白、抗营养因子（TI）降解能力强、提高酸溶蛋白含量的菌株，结果如表1和图1所示，命名为WBRD00470-B3。
表1菌株WBRD00470-B3降解能力分析
发酵前 分析结果 发酵后 分析结果
水苏糖 5.42% 水苏糖 N.D.
棉籽糖 1.06% 棉籽糖 N.D.
粗蛋白（干基） 50.89% 粗蛋白（干基） 56.09%
TI 6.82mg/g TI 0.51mg/g
酸溶蛋白（占总蛋白） 2.04% 酸溶蛋白（占总蛋白） 28.61%
抗原蛋白 清晰可见 抗原蛋白 不可见
如表1和图1所示，菌株WBRD00470-B3在24h内，不仅将低聚糖、抗原蛋白、TI等抗营养因子降解殆尽，还能显著提高酸溶蛋白含量，使发酵豆粕品质明显改善。
实施例2：菌株的特性
1、形态特征：
将菌株WBRD00470-B3于37℃在LB培养基上划线培养24h，观察菌株生长形态，结果如图2所示。
根据图2结果，菌落圆形、表面湿润、粗糙不透明，边缘不规则，白色或微黄色。
挑取其中的单菌落，进行革兰氏染色，染色后呈紫色，革兰氏阳性菌，短杆状，产单胞。
2、生理生化特征：
挑取其中的单菌落，参照《常见细菌鉴定手册》，进行生理生化特征检测，检测项目及结果如表2所示。
表2菌株WBRD00470-B3生理生化特征实验结果
生理生化反应 结果 生理生化反应 结果
D-葡萄糖 + 丙二酸盐 —
L-阿拉伯糖 + 硝酸盐 +
D-木糖 + 吲哚 _
D-甘露醇 + V.P.试验 +
明胶 + 12.5%NaCl +
淀粉 + 柠檬酸盐 +
注：“+”表示生长或阳性反应；“-”表示不生长或阴性反应。
3、菌株的16SrDNA鉴定及系统发育树的构建
用细菌基因组DNA快速抽提试剂盒（生工生物）提取菌株WBRD00470-B3基因组DNA，作为PCR扩增模板，利用16S rDNA引物对（引物F和引物R），进行PCR扩增：其中，引物F如SEQ ID NO.1所示，引物R如SEQ ID NO.2所示。
PCR反应过程如下：95℃变性5min；95℃/30s，55℃/30s，72℃/2min，35个循环；72℃保持5min。
将PCR产物经电泳分析得到约1500bp处较亮的条带，用Q-quick Gel ExtractionKit（Promega公司）进行切胶回收纯化，PCR纯化产物送生工生物公司测序。菌株WBRD00470-B3的16S rDNA序列如SEQ ID No.3所示。
在Genbank数据库中做序列同源性比对，得出本发明菌株与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis subsp.subtilis strainRRLKE36的16S rDNA的序列同源性为99%。用BioEdit软件比对同源序列并构建系统发育树，如图3所示。
根据上述结果，可知菌株WBRD00470-B3为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。
菌株WBRD00470-B3已于2013-05-24保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）”(北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号是CGMCC No.7641，分类命名为：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。
实施例3：豆粕几种前处理工艺发酵效果对比
3.1豆粕（益海泰州粮油工业有限公司提供）预处理
方式1.豆粕（含水量12.89wt%）加水混匀，调节含水量至55wt%，于90℃灭菌30min，获得预处理豆粕-1；
方式2.豆粕（含水量12.89wt%）加水混匀，调节含水量至55wt%，不做灭菌处理，获得预处理豆粕-2；
方式3.豆粕（含水量12.89wt%），于90℃灭菌30min，再调节水分至55wt%，搅拌均匀，获得预处理豆粕-3。
方式4.豆粕（含水量12.89wt%），添加过量水，浸泡一段时间，待完全吸水溶胀后，真空抽滤，除去多余水分，豆粕含水量为65wt%，于90℃灭菌30min，获得预处理豆粕-4。
3.2预处理豆粕发酵
取枯草芽孢杆菌WBRD00470-B3，接于LB液体培养基中，在37℃200rpm，培养16h，获得枯草芽孢杆菌WBRD00470-B3种子液；
以物料重量10wt%，分别向预处理豆粕-1、豆粕-2、豆粕-3和豆粕-4中加入枯草芽孢杆菌WBRD00470-B3种子液，并混合均匀；
将混合接种好的物料转至恒温恒湿箱中，发酵温度控制在37℃，在发酵过程中每隔4小时对发酵物料进行通气、搅拌，使物料发酵均匀，整批物料发酵24h后停止发酵，分别获得发酵豆粕-1、发酵豆粕-2、发酵豆粕-3和发酵豆粕-4。
3.3、发酵豆粕制备及检测
对发酵前后豆粕品质进行检测分析，结果如表3所示。
表3豆粕发酵前后品质变化
粗蛋白（干基，wt%） 酸溶蛋白（占总蛋白，wt%） 胰蛋白酶抑制剂(mg/g)
豆粕 51.17 1.94 6.12
发酵豆粕-1 55.12 16.25 1.38
发酵豆粕-2 54.03 12.89 1.53
发酵豆粕-3 56.87 28.55 1.02
发酵豆粕-4 60.79 41.01 0.74
如表3所示，发酵前豆粕热处理、加水方式及依次顺序对发酵豆粕品质有显著影响。当豆粕吸水溶胀处理后，粗蛋白含量可达60.79wt%，酸溶蛋白含量较发酵前提高40倍左右；当豆粕先进行热处理，再加一定量水时，粗蛋白含量较方式1和2有所增加，但酸溶蛋白含量是方式2的2倍多，比方式1提高了75%，且方式3预处理程序简单，易于工业化实施。
实施例4：不同热处理温度对发酵效果的影响
4.1豆粕（益海泰州粮油工业有限公司提供）预处理
方式1.豆粕（含水量12.89wt%），于70℃灭菌30min，再调节水分至55wt%，搅拌均匀，获得预处理豆粕-5。
方式2.豆粕（含水量12.89wt%），添加过量水，浸泡一段时间，待完全吸水溶胀后，真空抽滤，除去多余水分，豆粕含水量为67wt%，于70℃灭菌30min，获得预处理豆粕-6。
方式3.豆粕（含水量12.89wt%），于120℃灭菌15min，再调节水分至55wt%，搅拌均匀，获得预处理豆粕-7。
方式4.豆粕（含水量12.89wt%），添加过量水，浸泡一段时间，待完全吸水溶胀后，真空抽滤，除去多余水分，豆粕含水量为70wt%，于120℃灭菌15min，获得预处理豆粕-8。
4.2预处理豆粕发酵
挑取枯草芽孢杆菌WBRD00470-B3，接于LB液体培养基中，在37℃200rpm，培养16h，获得枯草芽孢杆菌WBRD00470-B3种子液；
以物料重量10wt%，分别向预处理豆粕-5、豆粕-6、豆粕-7和豆粕-8中加入种子液，并混合均匀；
发酵控制：将混合接种好的物料转至恒温恒湿箱中，发酵温度控制在37℃，在发酵过程中每隔4小时对发酵物料进行通气、搅拌，使物料发酵均匀，整批物料发酵24h后停止发酵，分别获得发酵豆粕-5、发酵豆粕-6、发酵豆粕-7和发酵豆粕-8。
4.3、发酵豆粕制备及检测
对发酵前后豆粕品质进行检测分析，结果如表4所示。
表4豆粕发酵前后品质变化
粗蛋白（干基，wt%） 酸溶蛋白（占总蛋白，wt%） 胰蛋白酶抑制剂(mg/g)
豆粕 51.17 1.94 6.12
发酵豆粕-5 55.83 26.78 1.05
发酵豆粕-6 59.65 32.74 0.76
发酵豆粕-7 56.31 28.20 0.87
发酵豆粕-8 59.34 38.32 0.68
如表4所示，为避免发酵过程中豆粕染菌及豆粕熟化以利于微生物利用，就不同程度热处理做了对比，发现70℃时，发酵24h未染菌，且发酵豆粕的粗蛋白含量和酸溶蛋白含量略有下降，当处理温度为120℃时，酸溶蛋白含量为38.32wt%，但豆粕颜色由淡黄色变为红褐色。
本发明提供的发酵豆粕，可用于制备饲料浓缩料、宠物饲料、水产、畜禽等多种动物饲料中，由于大分子蛋白经低分子化降解、酸溶蛋白含量显著提高，利于动物吸收利用，促进动物生长，提高消化利用率及转化率，降低饲料成本，因此，具有巨大的经济价值和社会意义。

Claims (10)

1.一种枯草芽孢杆菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC NO.7641。
2.一种发酵豆粕的预处理方法，包括以下步骤：
a、将豆粕于70-120℃灭菌；
b、调节灭菌后豆粕的水分。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述灭菌时间为10-30min。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述调节灭菌后豆粕水分为调节至水分含量为45%-55%。
5.一种发酵豆粕的预处理方法，包括以下步骤：
a、调节豆粕水分为65-70%；
b、将经步骤a处理后的豆粕于70-120℃灭菌。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述调节豆粕水分的方法为：添加过量水浸泡完全后，去除多余水分，和/或
所述灭菌时间为10-30min。
7.经权利要求2-6中任一项方法预处理的豆粕。
8.一种发酵豆粕的方法，在经权利要求2-6中任一项方法预处理的豆粕中加入豆粕发酵菌株，以发酵豆粕，优选的，所述豆粕发酵菌株包括：枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、乳酸菌、地衣芽孢杆菌、产朊假丝酵母中的一种或多种，优选为权利要求1所述的枯草芽孢杆菌。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述发酵为于28-37℃发酵24-48h。
10.使用权利要求8或9所述的方法制备获得的发酵豆粕。
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