CN106434395A - 产类阿片样活性小肽的胶红酵母菌、其筛选方法及其应用 - Google Patents

产类阿片样活性小肽的胶红酵母菌、其筛选方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106434395A
CN106434395A CN201610659334.9A CN201610659334A CN106434395A CN 106434395 A CN106434395 A CN 106434395A CN 201610659334 A CN201610659334 A CN 201610659334A CN 106434395 A CN106434395 A CN 106434395A
Authority
CN
China
Prior art keywords
rhodotorula mucilaginosa
almond
active small
rhodotorula
small peptide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610659334.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106434395B (zh
Inventor
周业飞
周梅仙
毛善国
扶庆权
王真祯
高心
高一心
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Xiaozhuang University
Original Assignee
Nanjing Xiaozhuang University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Xiaozhuang University filed Critical Nanjing Xiaozhuang University
Priority to CN201610659334.9A priority Critical patent/CN106434395B/zh
Publication of CN106434395A publication Critical patent/CN106434395A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106434395B publication Critical patent/CN106434395B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Fodder In General (AREA)

Abstract

本发明公开了一种产类阿片样活性小肽的胶红酵母、其筛选方法及其应用，该胶红酵母（Rhodotorula mucilaginosa）的保藏编号是：CGMCC No.10969。该菌株用作畜禽饲料添加剂，可增强动物的抗病力，降低发病率和死淘率，分离纯化方法是将杏仁放于霉菌生长的环境中，待产生少量霉菌时，分别于杏仁的外表面、中间和内部取样，混合研磨成粉，加水混匀，取其上清液梯度稀释，取稀释液于YEPD培养基培养出酵母菌，再划线接种于相同培养基得单菌落，易于操作。

Description

产类阿片样活性小肽的胶红酵母菌、其筛选方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种酵母菌的分离筛选、鉴定及其应用，具体地说是涉及一种能产生类阿片样生物活性小肽的胶红酵母XR-1 CGMCC No.10969的分离培养和鉴定，及其作为畜禽饲料添加剂用途。
背景技术
酵母是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。酵母菌是人类文明史中被应用得最早的微生物，可在缺氧环境中生存。目前已知有1000多种酵母，根据酵母菌产生孢子(子囊孢子和担孢子)的能力，可将酵母分成三类：形成孢子的株系属于子囊菌和担子菌。不形成孢子但主要通过出芽生殖来繁殖的称为不完全真菌，或者叫“假酵母”(类酵母)。
红酵母属，属于隐球酵母科，细胞为圆形、卵形或长形，为多边芽殖，多数种类没有假菌丝，其特点是，有明显的红色或黄色色素，很多种因形成荚膜而使菌落呈粘质状，如粘红酵母。红酵母菌没有酒精发酵的能力，少数种类为致病菌，在空气中时常发现。广泛分布于海洋、淡水等环境中，其富蛋白质、不饱和脂肪酸、维生素、消化酶及生长因子等多种营养物质。更为重要的是红酵母能合成生产以虾青素为主的类胡萝卜素，是相当优质的微生物饲料。目前红酵母的应用还不是很普及，但它在许多方面有开发利用的空间。
1979年，Zioudrou发现酪蛋白和麦谷蛋白的胃蛋白酶酶解产物具 有阿片样活性，由于这些阿片肽均来自外源性食物，其阿片活性同吗啡一样能被纳洛酮(一种阿片拮抗剂)所逆转，所以称为外源性阿片肽，简称外啡肽(exorphine)。目前发现外啡肽具有很广泛的生理功能，主要可以延缓各种动物的胃排空，抑制肠内容物的转移；对内分泌的调节作用，可引起血液中胰岛素的含量显著升高和SS含量显著增加，亦可导致血液中催乳素水平显著升高，另外还可以影响痛觉抑制系统、情感和记忆过程和调节机体的免疫系统功能和促进淋巴细胞增殖。阿片肽作为极有潜力的药物具有高活性，特异性高，毒性低，副作用小等若干优点。
发明内容
本发明的目的在于为了克服现有技术的不足，提供一种能产生类阿片样生物活性小肽的胶红酵母，保藏编号为CGMCC No.10969，保藏日期是2015年6月9日，易于培养，生产安全性高，遗传稳定性好。
本发明的另一个目的在于提供一种能产生类阿片样生物活性小肽的胶红酵母的筛选方法。
本发明的再一个目的在于提供一种能产生类阿片样生物活性小肽的胶红酵母作为畜禽饲料添加剂的用途，添加量低、功能明确，能提高动物对营养素(如蛋白质、矿物质、维生素等)吸收利用率、提高奶、肉、蛋的产量和生产能力，改善肉、蛋、奶的品质和风味，刺激动物免疫器官发育、提高抗病力、减少发病率，并能明显改善水产动物养殖水质，提高水产动物生长速度和存活率，广泛用于禽、牛、 羊、猪、水产和经济动物，可作为抗生素的替代品。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
产类阿片样活性小肽的胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)，保藏编号为CGMCC No.10969,保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
产类阿片样活性小肽的胶红酵母的筛选方法，步骤如下：
(1)杏仁放于霉菌生长的环境中7～14天，待产生少量霉菌时，于生杏仁的外表面、中间或者内部取样，研磨成粉，取1g加入100mL无菌水，置于摇床上150r/min、30min，静止，取其上清液10倍、100倍、1000倍的梯度稀释，得到稀释液，备用；
(2)菌种的分离与纯化：分别取上述三份稀释液0.2mL于YEPD培养基，在28℃划线或涂布培养，2d后从平板上挑取酵母菌，再划线接种于新配置的相同YEPD培养基，相同培养条件下，培养得单菌落；
(3)酵母菌种的PCR鉴定：将纯化的酵母菌制成菌悬液，采用特异性上游引物1：5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’和下游引物：5’-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3’，常规PCR体系条件反应，将PCR产物进行测序，根据测序结果，在NCBI BLAST系统中进行比对，完成菌种鉴定。
(4)胶红酵母的大规模液体培养方法，步骤如下：
母菌种→斜面活化菌种→种子的扩大培养、培养基的配制与灭菌→无菌空气的制备→液体发酵→离心→烘干→添加载体预混成品。
有益效果：
一、类阿片样生物活性小肽的检测
1-1、胶红酵母XR-1 CGMCC No.10969产生了具有类阿片样生物活性小肽
实验方法
(1)将胶红酵母CGMCC No.10969通过机械破碎法(研磨)，再结合盐酸-热处理结合破碎法获得细胞内容物。然后4000r/min低温离心20min，取上清液于-20℃冰箱保存备用。
(2)选用中华大蟾蜍心脏离体建立体外循环系统，方法是，分别从蛙心主动脉和腔静脉插管构成体外循环。心尖端接上一量程为0.1kgf/cm2的张力换能器，连接二道生理记录仪，记录仪的各项参数分别为滤波：100HZ；时间常数：0.2s；灵敏度：0.5～1.0mv/cm；纸速：2.5mm/s。在体外循环液中，取上述步骤中取得酵母菌培养物1ml，室温，10000rpm离心5min，收集菌体，加入酵母裂解液(2％triton100，1％SDS，0.1M NaCl，10mM tris-HCl ph8，1mM EDTA)和酸洗玻璃珠，剧烈振荡5min，室温，12000rmp，离心5min，取上清液,即为胶红酵母裂解上清液。加入胶红酵母裂解上清液80ul，检测对心肌活动的影响；在此基础上加入阿片肽拮抗剂-纳洛酮80ul，以检测类阿片样生物活性，结果见表1。
表1胶红酵母细胞裂解液中类阿片样生物活性小肽的检测
说明：*：P＜0.05，n＝6，平均数±标准差。
从表1中可以看出：加入胶红酵母细胞裂解液对心肌收缩力产生显著性加强作用，加入纳洛酮后均能显著性减弱心肌收缩力。
1-2、心脏体外循环系统检测胶红酵母细胞裂解液类阿片样生物活性小肽效应
从图7可见：加入裂解液后心肌收缩力增强，待心脏收缩活动相对稳定，再加入阻断剂-纳洛酮，可见心肌收缩力明显减弱，心率基本没有变化。
二、作为畜禽饲料添加剂的用途
(1)使用方法：(1)与饲料混合或拌料、直接口服或加入水中饮用；(2)畜禽种类：仔猪、肉仔鸡、母猪、育肥猪、产蛋鸡、肉鸭；(3)用量：106～108(含活性菌有效成分CFU/吨饲料)。
(2)猪饲养中的应用
选取健康的30日龄断奶仔猪(公母各半)144头，分为4个处理组，每个处理组36头，每个处理组设置6个重复组，每个重复组6头猪，均为3公3母，试验期8周，实验设计见表2，试验结果列于表3。
表2.仔猪试验设计
组别 处理组(含活性菌有效成分CFU/吨饲料)
试验1组 106
试验2组 107
试验3组 108
对照组 空白对照
表3.在养猪生产中的使用效果
组别 30～90日龄平均日增重 30～90日龄料重比
试验1组 0.396±0.01 1.86±0.07
试验2组 0.468±0.03* 1.68±0.05*
试验3组 0.385±0.02 1.79±0.08
对照组 0.270±0.03 2.34±0.08
注：*，p<0.05
从表3中可以看出，添加了胶红酵母菌的3个不同剂量组的平均日增重和饲料转化效率均优于空白对照组，可明显提高猪的生产性能，即日增重和饲料转化效率。
(3)对肉仔鸡生产性能(增重速度和耗料)影响实验
为检测本发明的活菌制剂对肉鸡生产性能的影响，将肉仔鸡分为4组，每个组分成3个重复，每个重复10只鸡，试验期7周。试验设计见表4，基础日粮配比及营养水平见表5。在7日龄试验开始时、28和42日龄分别以重复为单位称重，并统计耗料量，计算7～28日龄和28～42日龄的死亡只数、增重、采食量以及料肉比，实验结果见表6。
表4肉鸡试验设计
组别 处理组(含活性菌有效成分CFU/吨饲料)
试验1组 106
试验2组 107
试验3组 108
对照组 空白对照
表5试验基础日粮组成及营养水平
注：*每千克日粮添加量，铜8mg，铁80mg，锰100mg，碘0.35mg，硒0.25mg，钴0.4mg，维生素A 8800U，维生素D33000U，维生素E 30mg，维生素K31.6mg，硫胺素6.6mg，核黄素6.6mg，吡哆醇4.4mg，维生素B120.02mg，泛酸11mg，烟酸66mg，叶酸1mg，生物素0.2mg；**计算值。
表6：在肉仔鸡生产性能中的使用效果
组别 增重 料肉比
试验1组 1.635±0.009 2.25±0.011
试验2组 1.847±0.021** 2.03±0.029*
试验3组 1.720±0.023* 2.19±0.024
对照组 1.511±0.013 2.31±0.031
由表6可知，添加本发明的胶红酵母活菌可以提高肉仔鸡的体增重，降低饲料转化率，节约饲料开支，提高经济效益。
(4)在蛋鸡饲养中的应用
为检验胶红酵母活菌在蛋鸡上的使用效果，选用褐壳蛋鸡2400羽，分4组，每组600只，分3个重复，每个重复200只鸡，喂以4种不同的日粮，对照组为基础蛋鸡日粮，试验1～3组分别在蛋鸡基础日龄中添加胶红酵母菌106、107和108CFU/吨饲料。试验期为2个月，结果列于表7。检测指标为破蛋率(％)、产蛋率(％)、蛋重(克/个蛋)、死淘率(％)、饲料转化效率(耗料g/Kg蛋)。
表7：在蛋鸡中使用效果
组别 产蛋率(％) 料蛋比(F/E) 破蛋率(％) 死淘率(％) 蛋重(克)
试验1组 82.4±2.1 2.45±0.5 2.5±0.1 0.7±0.2 66.1±0.5
试验2组 85.7±2.4* 2.41±0.2* 2.1±0.3 0.2±0.1 68.9±0.7
试验3组 84.9±3.6 2.43±0.4* 2.2±0.1 0.4±0.5 67.8±0.2
对照组 81.5±2.3 2.59±0.3 3.1±0.5 1.4±0.1 65.1±0.5
从表7中可以看出，在蛋鸡饲料中添加该胶红酵母活菌能显著提高蛋禽产蛋率，增加蛋重，降低料蛋比、破蛋率，降低死淘率，提高饲料利用率、生产性能和降低生产成本。
(5)对鸡IBV抗体效价的影响
为检测本发明的胶红酵母菌对肉鸡对IBV特异性抗体效价的影响，将肉仔鸡分为4组，每个组分成3个重复，每个重复10只鸡，试验期7周。试验设计见表8，分别于7日龄和14日龄给肉鸡滴鼻、滴眼IBVH120疫苗0.5ml。
表8：肉鸡免疫试验设计
组别 处理组(含活性菌有效成分CFU/吨饲料)
试验1组 106
试验2组 107
试验3组 108
对照组 空白对照
分别于7、28、35和42日龄每组取8只鸡翅静脉采血，然后4000rpm离心10min分离血清，于-20℃冰箱冷冻保存，用HA和HI试验检测IBV抗体效价，结果以Log2的对数值表示，见表9。
表9：肉鸡血清中IBV HI抗体滴度(log2)
从表9中可看出，添加胶红酵母菌组的肉仔鸡的IBV抗体效价明显高于空白对照组，说明胶红酵母菌可显著提高肉仔鸡的抗体效价，抗体效价是衡量机体抵抗病原能力的重要指标，抗体效价高即表明机 体的抗病力强。
综上所述：
(1)本发明提供的胶红酵母菌能产生类阿片类生物活性小肽成分。
(2)该胶红酵母菌作为饲料添加剂的功能明确，具有如下的功能：①可提高动物对营养素，如蛋白质、矿物质、维生素等重要营养素的吸收利用率，提高饲料利用率。②可提高肉、蛋产量和生产能力，改善肉、蛋的品质和风味；③具有刺激动物免疫器官发育和提高抗病力和减少发病率等功能，明显提高畜禽成活率，降低死淘率，可作为抗生素的替代品，降低药物残留。
(3)增强免疫作用，通过刺激肠道内免疫系细胞，增加局部抗体的形成，从而增加巨噬细胞活性。同时还能抑制有害菌的繁殖，使肠内菌群保持平衡，使有益菌数量占据优势。
(4)本发明产品成本低，易于在薄利的养殖行业推广。
附图说明
图1：XR1411的菌落状态实物图；
图2：XR1411的光学显微镜图片(×10倍)；
图3：胶红酵母扫描电镜图片(标尺＝20μm)；
图4：胶红酵母透射电镜图片(标尺＝200nm)；
图5：胶红酵母XR1411ITS区PCR电泳图；M：DL2000，1：XR1411；
图6：根据胶红酵母ITS区序列构建的系统发育树；
图7：胶红酵母细胞裂解液对心肌活动的影响图。
具体实施方式
以下将结合实施例具体说明本申请的技术方案：
胶红酵母的大规模液体培养方法，步骤如下：
母菌种→斜面活化菌种→种子的扩大培养、培养基的配制与灭菌→无菌空气的制备→液体发酵→离心→烘干→添加载体预混成品。
实施例1
胶红酵母XR-1 CGMCC No.10969的筛选、分离培养和鉴定
(1)样品的采集
将生杏仁的外表面、中间或者内部取样，研磨成粉，取1g加入100mL无菌水，置于摇床上150r/min、30min，静止，取其上清液进行10倍、100倍、1000倍梯度稀释，备用。
(2)菌种的分离与纯化：分别取上述3种稀释液0.2mL于YEPD培养基进行28℃划线或涂布培养，2d后从平板上挑取酵母菌，再划线接种于相同培养基、相同条件培养得单菌落(见图1)。
(3)菌落显微镜观察
①光学显微镜观察：将菌株在YEPD平板上划线，28℃倒置培养2天，观察平板上菌落的形态；将菌株接种到50mLYEPD液体培养基中，28℃，180r/min振荡培养，取样，用数码显微镜观察然后拍照，(见图2)。
②扫描和透射电子显微镜观察：将培养好的菌液在2000rpm条件下离心5min，弃去上清，用生理盐水洗涤5～6次，加入2.5％戊二 醛，于4℃条件下固定2h。送南京农业大学电镜观察室检测(见图3、图4)。
(4)酵母菌种的PCR鉴定
将纯化的酵母菌制成菌悬液，采用特异性上游引物1：5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’和下游引物：5’-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3’，常规PCR体系条件反应，将PCR产物送至Invitrogen公司测序部，根据测序结果，在NCBI BLAST系统中进行比对，完成菌种鉴定。
SEQUENCE LISTING
<110> 南京晓庄学院
<120> 产类阿片样活性小肽的胶红酵母菌、其筛选方法及其应用
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 618
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ttgcatatca ataagcggag gaaaagaaac taacaaggat tcccctagta gcggcgagcg 60
aagcgggaag agctcaaatt tataatctgg caccttcggt gtccgagttg taatctctag 120
aaatgttttc cgcgttggac cgcacacaag tctgttggaa tacagcggca tagtggtgag 180
acccccgtat atggtgcgga cgcccagcgc tttgtgatac attttcgaag agtcgagttg 240
tttgggaatg cagctcaaat tgggtggtaa attccatcta aagctaaata ttggcgagag 300
accgatagcg aacaagtacc gtgagggaaa gatgaaaagc actttggaaa gagagttaac 360
agtacgtgaa attgttggaa gggaaacgct tgaagtcaga cttgcttgcc gagcaatcgg 420
tttgcaggcc agcatcagtt ttccgggatg gataatggta gagagaaggt agcagtttcg 480
gctgtgttat agctctctgc tggatacatc ttgggggact gaggaacgca gtgtgccttt 540
ggcgggggtt tcgacctctt cacacttagg atgctggtgg aatggcttta aacgacccgt 600
cttgaaacac ggaccaaa 618

Claims (5)

1.一种产类阿片样活性小肽的胶红酵母，其特征在于保藏编号为 CGMCC No.10969。
2.权利要求1所述的产类阿片样活性小肽的胶红酵母的筛选方法，其特征在于：
（1）生杏仁放于霉菌生长的环境中，待产生少量霉菌时，取样，研磨成粉，取1 g加入100mL无菌水，置于摇床上150 r/min、30 min，取其上清液10倍、100倍、1000倍的梯度稀释，得到稀释液，备用；
（2）菌种的分离与纯化：分别取上述三份稀释液0.2 mL于YEPD培养基，在28℃划线或涂布培养，2d后从平板上挑取酵母菌，再划线接种于新配置的相同YEPD培养基，相同培养条件下，培养得单菌落；
（3）酵母菌种的PCR鉴定：将纯化的酵母菌制成菌悬液，采用特异性上游引物１：5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’和下游引物：5’-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3’，常规PCR体系条件反应，将PCR产物进行测序，根据测序结果，在NCBI BLAST系统中进行比对，完成菌种鉴定。
3.权利要求2所述的产类阿片样活性小肽的胶红酵母的筛选方法，其特征在于，步骤（1）中生杏仁放于霉菌生长的环境中7~14天，取样部位是生杏仁的外表面、中间或者内部。
4.权利要求1所述的产类阿片样活性小肽的胶红酵母作为畜禽饲料添加剂的用途。
5.权利要求4所述的产类阿片样活性小肽的胶红酵母作为畜禽饲料添加剂的用途，其特征在于所述的畜禽为猪、鸡，鸭。
CN201610659334.9A 2016-08-11 2016-08-11 产类阿片样活性小肽的胶红酵母菌、其筛选方法及其应用 Active CN106434395B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610659334.9A CN106434395B (zh) 2016-08-11 2016-08-11 产类阿片样活性小肽的胶红酵母菌、其筛选方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610659334.9A CN106434395B (zh) 2016-08-11 2016-08-11 产类阿片样活性小肽的胶红酵母菌、其筛选方法及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106434395A true CN106434395A (zh) 2017-02-22
CN106434395B CN106434395B (zh) 2019-09-13

Family

ID=58184486

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610659334.9A Active CN106434395B (zh) 2016-08-11 2016-08-11 产类阿片样活性小肽的胶红酵母菌、其筛选方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106434395B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103613643A (zh) * 2013-12-04 2014-03-05 南京晓庄学院 一种生物活性小肽、其合成方法及其作为畜禽饲料添加剂的用途
CN103923178A (zh) * 2014-04-30 2014-07-16 南京晓庄学院 一种小肽、其合成方法及其增强家畜免疫力的用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103613643A (zh) * 2013-12-04 2014-03-05 南京晓庄学院 一种生物活性小肽、其合成方法及其作为畜禽饲料添加剂的用途
CN103923178A (zh) * 2014-04-30 2014-07-16 南京晓庄学院 一种小肽、其合成方法及其增强家畜免疫力的用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
周业飞: "瘤胃细菌发酵产物-植物外啡肽活性与构成的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106434395B (zh) 2019-09-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101580799B (zh) 一种复合微生态制剂及其应用
CN101671638B (zh) 一种双歧杆菌新菌株及其发酵制备方法与应用
CN102907563B (zh) 一种畜牧养殖用高活性益生菌制剂的制备方法
CN101978849B (zh) 一种复合微生态制剂及其应用
CN102028110A (zh) 一种肉鸡饲用的益生菌-黄芪多糖组合物
CN102559539A (zh) 嗜酸乳杆菌及其应用与饲料添加剂和预混料
CN115094012B (zh) 凝结芽孢杆菌bc-hyc株菌剂的制备方法及应用
CN107319129A (zh) 一种富含虾青素的发酵豆粕的制备与饲料
US20100196443A1 (en) Use of cordyceps species or extract thereof in the egg production
CN109161509A (zh) 一株能防治牛羊腹泻病的菌株
CN110218688A (zh) 海内氏芽孢杆菌ly-23、菌剂及其应用和应用其的产品
CN101904411B (zh) 一种复合微生态制剂及其应用
CN101933558B (zh) 一种复合微生态制剂及其应用
CN103266074B (zh) 一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用
CN102925374B (zh) 酿酒酵母新菌株，及含有其的饲料添加剂，配合料
CN105219682B (zh) 一种替代抗生素饲料添加剂的地衣芽孢杆菌及其应用
CN100387704C (zh) 可高产糖肽复合物的灵芝真菌及其诱变选育方法和用途
CN106387314A (zh) 脆弱拟杆菌在动物养殖中的应用
CN107058181B (zh) 一种枯草芽孢杆菌及其分离方法与应用
CN106434395B (zh) 产类阿片样活性小肽的胶红酵母菌、其筛选方法及其应用
CN106562035B (zh) 断奶仔猪中草药微生态复合制剂及其制备方法与饲料
JP2009044971A (ja) 反芻家畜に対するプロバイオティック効果をサイレージ調製用乳酸菌に付加する新規酵母菌およびその利用
CN109423451A (zh) 一种酿酒酵母菌株ksa01及其用途
CN103205377A (zh) 一株用于肉鸡养殖的优良凝结芽孢杆菌及其应用
CN113785904A (zh) 一种益生菌混合饲料及高原畜禽养殖舍内环境调节方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant