CN106380457B - 表儿茶素没食子酸酯的制备方法 - Google Patents

表儿茶素没食子酸酯的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种表儿茶素没食子酸酯的制备方法，包括：(1)取茶多酚粗品，溶解后，制得茶多酚溶液；(2)所述的茶多酚溶液过AB‑8型大孔树脂柱，洗脱后用乙酸乙酯进行萃取，收集有机层；(3)将步骤(2)得到的有机层干燥、溶解后过D101型大孔树脂柱，洗脱后经乙酸乙酯萃取，收集有机层；(4)将步骤(3)得到的有机层干燥、溶解后进行结晶，结晶结束后过滤、干燥得表儿茶素没食子酸酯。本发明采用AB‑8型大孔树脂和D101型大孔树脂两步层析，最终ECG的得率高，同时纯度可达99％以上。

Description

表儿茶素没食子酸酯的制备方法
技术领域
本发明属于化学纯化技术领域，尤其涉及一种表儿茶素没食子酸酯的制备方法。
背景技术
茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，是一类以儿茶素为主体的具生物氧化作用的多酚类化合物。表儿茶素没食子酸酯别名又叫ECG，是儿茶素类化合物中的重要组成部分，其含量仅次于表没食子儿茶素没食子酸酯，是一种重要的茶叶提取物。
表儿茶素没食子酸酯具有抗菌作用，对普通变形杆菌、金葡球菌、表皮葡萄球菌、变形链球菌、肉毒杆菌、乳酸杆菌、霍乱弧菌等许多致病菌，尤其是对肠道致病菌具有不同程度的抑制和杀伤作用。同时表儿茶素没食子酸酯还能有效地防止耐抗生素的葡萄球菌感染，对于溶血素ECG和EGCG也具有抑制活性。除此以外，对能引起人体皮肤病的病原真菌，如头部白癣、斑状水泡白癣、汗状泡白癣和顽癣等寄生性真菌也具有很强的抑制作用。此外，表儿茶素没食子酸酯不仅可抑制多种化学致癌物诱致的突变，还能够抑制一些混合致癌物(烟草雾浓缩药、煤焦油、熏鱼提取物，X射线)的致突变作用。
ECG的作用广泛，市场对高含量ECG的需求在不断增加，而目前现有的工艺存在生产成本高，生产量低，产品质量差等问题。
发明内容
发明目的：为解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种高纯度的表儿茶素没食子酸酯的制备方法。
技术方案：本发明所述的表儿茶素没食子酸酯的制备方法，包括：
(1)取茶多酚粗品，溶解后，制得茶多酚溶液；
(2)所述的茶多酚溶液过AB-8型大孔树脂柱，洗脱后用乙酸乙酯进行萃取，收集有机层；
(3)将步骤(2)得到的有机层干燥、溶解后过D101型大孔树脂柱，洗脱后经乙酸乙酯萃取，收集有机层；
(4)将步骤(3)得到的有机层干燥、溶解后进行结晶，结晶结束后过滤、干燥得表儿茶素没食子酸酯。
茶多酚儿茶素类共有4种化合物，他们的极性有着较大的差别。本发明利用不同极性的大孔树脂柱对ECG吸附能力的不同，通过对洗脱剂的筛选达到分离纯化的目的。
步骤(1)中，茶多酚粗品用水进行溶解，溶解的温度为40～60℃；溶解后通常进行过滤以除去不溶杂质。
步骤(2)中，对茶多酚溶液进行AB-8型大孔树脂柱层析时，树脂径高比为1:6～1:7，树脂的填充量为600～800g。AB-8型树脂为弱极性树脂对弱极性及极性稍强的化合物吸附能力较强，ECG的极性较弱，故采用AB-8型树脂进行初步分离试验。大孔树脂的柱效与其径高比及填充量有很大关系，所选的参数值为最佳范围，径高比和填充量过大会导致ECG难以洗脱，径高比和填充量过小达不到分离效果。
洗脱时，依次采用水、10％～20％乙醇水溶剂、45％～60％乙醇水溶液进行洗脱，收集的洗脱液为45％～60％乙醇水溶液洗脱下的溶液。采用该洗脱溶剂进行梯度洗脱可以最大程度的使目标成分洗脱下来。
洗脱流速为1～2BV/h，分别选流速为1BV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h进行试验，以洗脱液所含ECG的纯度为指标，确定流速为1-2BV/h为最佳。洗脱的体积为4BV～6BV，洗脱体积过少，洗脱不完全仍有ECG残留在树脂上，洗脱体积过多造成后续工艺的处理量过大，不利用生产。
步骤(3)中，有机层干燥后用水进行溶解，然后进行D101型大孔树脂柱层析，树脂径高比为1:6～1:7，树脂的填充量为350～400g。D101型树脂为非极性，其对非极性及弱极性的物质吸附能力较强，通过利用AB-8型层析柱已除去极性较大的杂质，使用D101型树脂通过选择合适的洗脱剂可以洗脱得到弱极性目标成分ECG。大孔树脂的柱效与其径高比及填充量有很大关系，所选的参数值为最佳范围，径高比和填充量过大会导致ECG难以洗脱，径高比和填充量过小达不到分离效果。
洗脱用的溶剂对ECG的解吸附有较大影响，洗脱时，依次采用15％～20％乙醇水溶剂、50％～60％乙醇水溶液进行洗脱，收集的洗脱液为50％～60％乙醇水溶液洗脱下的溶液。采用该洗脱溶剂进行梯度洗脱可以最大程度的使目标成分洗脱下来。
洗脱流速为1～2BV/h，分别选流动相为1BV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h进行试验，以洗脱液所含ECG的纯度为指标，确定流速为1-2BV/h为最佳，洗脱的体积为5～7BV，洗脱体积过少，洗脱不完全仍有ECG残留在树脂上，洗脱体积过多造成后续工艺的处理量过大，不利用生产。
步骤(4)中，有机层干燥后、用水进行溶解，然后于4～8℃结晶36～48小时，结晶后过滤，并于55～65℃干燥8～10小时，即可得高纯度的表儿茶素没食子酸酯。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明采用AB-8型大孔树脂和D101型大孔树脂两步层析，最终ECG的得率高，同时纯度可达99％以上。
本发明在每次柱层析后均用乙酸乙酯进行萃取，不仅能使洗脱液中的ECG得到浓缩，而且能除去洗脱液中的色素—萃取稳定后，乙酸乙酯层几乎为无色溶液，颜色留在水层，起到一定的纯化作用。
经过本发明两步柱层析纯化，最终结晶溶液中ECG的纯度及浓度高，不需另加晶种即可实现结晶工艺。
本发明方法中，大孔树脂能够重复使用，经济效益好，节省成本。所用实验设备简单，操作容易，适用于工业生产。
相对于化学合成，本发明方法不仅不会产生有机溶剂的残留，而且属于天然植物提取物。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施例1
称取100g茶多酚粗品(购于西安源森生物科技有限公司，批号20160104)，加入400ml自来水，60℃溶解，搅拌0.5h，过滤，得滤液，将滤液以自来水定容至800ml，上AB-8大孔树脂柱(1.6L)，树脂径高比1:7，重800g，以1BV/h流速洗脱，用水，10％乙醇，45％乙醇水溶液，梯度洗脱6BV，收集45％乙醇水洗液，浓缩至一半体积、乙酸乙酯等体积萃取三次(收集乙酸乙酯层)、蒸干，加入210ml水溶解，上D101大孔树脂柱(1.6L)，树脂径高比1:7，重400g，以1BV/h流速，利用15％乙醇水溶液，50％乙醇水溶液，梯度洗脱6BV，收集50％乙醇水溶液，浓缩至一半体积、乙酸乙酯等体积萃取三次(收集乙酸乙酯层)、蒸干，加60ml纯化水溶解，至4℃环境下结晶36h，过滤、60℃真空烘箱8h，即可得到99.2％高纯度的ECG，得率为69％。
实施例2
称取100g茶多酚粗品，加入400ml自来水，60℃溶解，搅拌0.5h，过滤，得滤液，将滤液以自来水定容至900ml，上AB-8大孔树脂柱(1.6L)，树脂径高比1:7，重800g，以1.5BV/h流速洗脱,用水，15％乙醇，50％乙醇水溶液，梯度洗脱6BV，收集50％乙醇水洗液，浓缩至一半体积、乙酸乙酯等体积萃取三次(收集乙酸乙酯层)、蒸干，加入280ml水溶解，上D101大孔树脂柱，树脂径高比1:7，重400g，以1.5BV/h流速,利用20％乙醇水溶液，55％乙醇水溶液，梯度洗脱6BV，收集55％乙醇水溶液，浓缩至一半体积、乙酸乙酯等体积萃取三次(收集乙酸乙酯层)、蒸干，加90ml纯化水溶解，至6℃环境下结晶40h，过滤、60℃真空烘箱9h，即可得到99.4％高纯度的ECG，得率为68.8％。
实施例3
称取100g茶多酚粗品，加入400ml自来水，60℃溶解，搅拌0.5h，过滤，得滤液，将滤液以水定容至1000ml，上AB-8大孔树脂柱(1.6L)，树脂径高比1:7，重800g，以2BV/h流速洗脱,用水，20％乙醇，60％乙醇水溶液，梯度洗脱6BV，收集60％乙醇水洗液，浓缩至一半体积、乙酸乙酯等体积萃取三次(收集乙酸乙酯层)、蒸干，加入280ml水溶解，上D101大孔树脂柱，树脂径高比1:7，重400g，以2BV/h流速,利用20％乙醇水溶液，60％乙醇水溶液，梯度洗脱6BV，收集60％乙醇水溶液，浓缩至一半体积、乙酸乙酯等体积萃取三次(收集乙酸乙酯层)、蒸干，加120ml纯化水溶解，至8℃环境下结晶48h，过滤、60℃真空烘箱10h，即可得到99.6％高纯度的ECG，得率为68％。
对比例1
取茶多酚粗品10kg，加100L纯化水于室温搅拌溶解，室温下静置24h，过滤，残渣弃去；
滤液加100L乙酸乙酯进行液-液萃取2次，合并乙酸乙酯层，于60℃减压浓缩至稠膏状，加入30L纯化水溶解，得到茶多酚样品溶液；
将上述茶多酚样品溶液过装有D101大孔吸附树脂层析柱，加10％乙醇100L进行充分解吸附洗脱，收集洗脱液，得到表儿茶素没食子酸酯溶液；
将上述表儿茶素没食子酸酯溶液于55℃减压浓缩至稠膏状后，加入丙酮8L溶解放冷，加入约100毫克含量为99.6％的高纯度表而茶素没食子酸酯做为晶种，静置，在25℃下结晶24小时，过滤，虑饼加600mL纯化水洗涤，于55℃下减压干燥，得纯度为99.2％的表儿茶素没食子酸酯，得率为63％。

Claims (2)

1.一种表儿茶素没食子酸酯的制备方法，其特征在于，包括：
(1)取茶多酚粗品，溶解后，制得茶多酚溶液；
(2)所述的茶多酚溶液过AB-8型大孔树脂柱，洗脱后用乙酸乙酯进行萃取，收集有机层；
(3)将步骤(2)得到的有机层干燥、溶解后过D101型大孔树脂柱，洗脱后经乙酸乙酯萃取，收集有机层；
(4)将步骤(3)得到的有机层干燥、溶解后进行结晶，结晶结束后过滤、干燥得表儿茶素没食子酸酯；
步骤(2)中，对茶多酚溶液进行AB-8型大孔树脂柱层析时，树脂径高比为1～6:7，树脂的填充量为600～800g；洗脱时，依次采用水、10％～20％乙醇水溶剂、45％～60％乙醇水溶液进行洗脱，收集的洗脱液为45％～60％乙醇水溶液洗脱下的溶液；洗脱时，洗脱流速为1～2BV/h，洗脱的体积为4BV～6BV；
步骤(3)中，有机层干燥后用水进行溶解，然后进行D101型大孔树脂柱层析，树脂径高比为1～6:7，树脂的填充量为350～400g；洗脱时，依次采用15％～20％乙醇水溶剂、50％～60％乙醇水溶液进行洗脱，收集的洗脱液为50％～60％乙醇水溶液洗脱下的溶液；洗脱流速为1～2BV/h，洗脱的体积为5～7BV；
步骤(4)中，有机层干燥后、用水进行溶解，然后于4～8℃结晶36～48小时，结晶后过滤，并于55～65℃干燥8～10小时。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，茶多酚粗品用水进行溶解，溶解的温度为40～60℃。
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