CN106377523B - 一种天然活性药物及其制备与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体来说，涉及一种天然活性药物及其制备与应用。本发明所述天然活性药物的分子式为：C33H28O6，具体制法为：取吉祥草干燥全草，用95%的乙醇加热回流提取，提取液减压浓缩至无醇味，得浸膏；取浸膏，用水混悬后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯萃取物，拌样后上硅胶柱层析，用氯仿‑甲醇（50:1→2:1）进行梯度洗脱，薄层监视，收集氯仿‑甲醇（20:1）洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，所得浓缩物经ODS柱色谱分离，用甲醇‑水（10:90→90:10）进行梯度洗脱，薄层监视，收集40:60→50:50的甲醇‑水部分，减压浓缩回收溶剂后经Sephadex LH‑20凝胶柱层析分离，收集氯仿‑甲醇（1:1）部分，浓缩回收溶剂，得到天然活性药物吉祥草双黄酮化合物A。本发明所述天然活性药物用于抗肾癌药物的制备。

Description

一种天然活性药物及其制备与应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体来说，涉及到一种天然活性药物及其制备与应用。
背景技术
吉祥草为百合科植物吉祥草属的全草。主要分布在我国华东、中南、西南各省区，在贵州、湖南、云南、广西、四川等苗族人口主要聚居区，对吉祥草的使用都较广泛，是我国西南苗族地区常用的传统草药之一。味甘，性凉，具有清肺止咳、凉血止血、解毒利咽等功效，民间常用于治疗支气管炎、肺炎、肺结核、阴虚哮喘、吐血、咯血、黄疸、治跌打损伤、扭挫伤、遗精、急惊风、日翳、疳积、肝癌、胆结石、风湿关节炎疼痛、水肿等病症。吉祥草在中医临床中应用广泛，近年来对吉祥草化学和药理的深入研究，对认识吉祥草及其成分多方面的药理作用及临床传统应用提供了理论依据。
现代科学研究证明，吉祥草中含有甾体类、黄酮类、木脂素类、萜类、有机酸、挥发油等多种化学成分。其药理作用主要表现在抗溶血、止咳、化痰及抗炎作用、杀灭钉螺作用、cAMP磷酸二酯酶抑制作用、降血糖作用、镇痛等作用。目前，吉祥草大部分的功效都得到了相关物质基础的支持，但在抗肿瘤活性还有所欠缺，有待进行深入的研究。
发明内容
针对上述问题，通过实验与研究，本发明提供了一种天然活性药物及其制备与应用。
本发明所述的天然活性药物命名为吉祥草双黄酮化合物A，分子式为：C33H28O6，结构式如下：
Figure BDA0001092342150000021
本发明所述天然活性药物吉祥草双黄酮化合物A的制备方法，所述方法具体为：取吉祥草干燥全草，用95％的乙醇加热回流提取，提取液减压浓缩至无醇味，得浸膏；取浸膏，用水混悬后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯萃取物，拌样后上硅胶柱层析，用氯仿-甲醇(50:1→2:1)进行梯度洗脱，薄层监视，收集氯仿-甲醇(20:1)洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，所得浓缩物经ODS柱色谱分离，用甲醇-水(10:90→90:10)进行梯度洗脱，薄层监视，收集40:60→50:50的甲醇-水部分，减压浓缩回收溶剂后经Sephadex LH-20凝胶柱层析分离，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，浓缩回收溶剂，得到吉祥草双黄酮化合物A。
本发明所述的天然活性药物吉祥草双黄酮化合物A的应用，所述天然活性药物吉祥草双黄酮化合物A用于抗肾癌药物的制备。
附图说明
图1：表示吉祥草双黄酮化合物A的结构式。
图2：表示吉祥草双黄酮化合物A的MS质谱图。
图3：表示吉祥草双黄酮化合物A的1H-NMR和13C-NMR数据。
图4：表示吉祥草双黄酮化合物A对786-O细胞的增殖抑制率。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明所述的制备方法做进一步说明，但是本发明的保护范围并不限于此。
实施例1
取吉祥草干燥全草5kg，用95％的乙醇35L加热回流提取3次，每次2h，提取液减压浓缩至无醇味，得浸膏700g；取浸膏，用2L水混悬后依次用2L石油醚、2L乙酸乙酯萃取两次；取乙酸乙酯萃取物166g，拌样后上硅胶柱层析，用氯仿-甲醇进行梯度洗脱，比例依次为：50:1、40:1、20:1、10:1、2:1，薄层监视，收集氯仿-甲醇(20:1)洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，所得浓缩物经ODS柱色谱分离，用甲醇-水进行梯度洗脱，比例依次为：10:90、30:70、40:60、70:30、90:10)，薄层监视，收集40:60的甲醇-水部分，减压浓缩回收溶剂后经SephadexLH-20凝胶柱层析分离，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，浓缩回收溶剂，得到吉祥草双黄酮化合物A 12mg。
实施例2
取吉祥草干燥全草5kg，用95％的乙醇35L加热回流提取3次，每次2h，提取液减压浓缩至无醇味，得浸膏756g；取浸膏，用3L水混悬后依次用2L石油醚、2L乙酸乙酯萃取两次；取乙酸乙酯萃取物186g，拌样后上硅胶柱层析，用氯仿-甲醇进行梯度洗脱，比例依次为：50:1、35:1、20:1、15:1、5:1、2:1，薄层监视，收集氯仿-甲醇(20:1)洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，所得浓缩物经ODS柱色谱分离，用甲醇-水进行梯度洗脱，比例依次为：10:90、30:70、50:50、70:30、90:10)，薄层监视，收集50:50的甲醇-水部分，减压浓缩回收溶剂后经Sephadex LH-20凝胶柱层析分离，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，浓缩回收溶剂，得到吉祥草双黄酮化合物A 13mg。
实施例3
取吉祥草干燥全草5kg，用95％的乙醇35L加热回流提取3次，每次2h，提取液减压浓缩至无醇味，得浸膏700g；取浸膏，用3L水混悬后依次用2L石油醚、2L乙酸乙酯萃取两次；取乙酸乙酯萃取物166g，拌样后上硅胶柱层析，用氯仿-甲醇进行梯度洗脱，比例依次为：50:1、40:1、20:1、10:1、2:1，薄层监视，收集氯仿-甲醇(20:1)洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，所得浓缩物经ODS柱色谱分离，用甲醇-水进行梯度洗脱，比例依次为：10:90、30:70、40:60、70:30、90:10)，薄层监视，收集45:55的甲醇-水部分，减压浓缩回收溶剂后经SephadexLH-20凝胶柱层析分离，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，浓缩回收溶剂，得到吉祥草双黄酮化合物A 13mg。
吉祥草双黄酮化合物A:红色无定形粉末；
Figure BDA0001092342150000041
(c 0.77,Acetone)；UV(Acetone):λmax(logε)＝327nm(3.52)；IR(KBr):Vmax＝3441,2923,1609,1552,1512,1421,1383,1271,1157,1109,838cm-1；1H and 13CNMR(acetone-d6),见图3；HR-ESI-MS m/z:521.1981[M+H]+(100)(calcd for C33H28O6,521.1964)，见图2。
药理实验
在5％CO2、37℃条件下，用含10％新生小牛血清的RPMI-1640培养液传代培养人肾癌786-O细胞。取对数生长期786-O细胞以5×103/孔接种于96孔板培养，常规条件培养24h后，设置药物组和正常对照组，药物组分别加入经培养基稀释的不同浓度吉祥草双黄酮化合物A(12.5、25、50、100、200mg·L-1，含DMSO的体积分数小于0.1％)供试液200μL，正常对照组加入等体积的培养液，各组均设6个复孔，置5％CO2、37℃孵箱培养24h，于每孔加入MTT(5g·L-1)20μl，孵育4h后，小心吸弃孔内上清液，每孔加入DMSO150μl，振荡待蓝色晶体溶解后，酶标仪于570nm(参考波长630nm)处检测每孔的吸光度(A)值，确定药物对肿瘤细胞的抑制率。细胞的生长抑制率(％)＝[1－实验组(A570nm－A630nm)/对照组(A570nm－A630nm)]×100％。
不同浓度梯度的吉祥草双黄酮化合物A作用于人肾癌786-O细胞24h后，与正常对照组比较，药物对786-O细胞的增殖抑制率随着药物浓度的升高而增大，呈浓度依赖性，24h时IC50值为61.22mg·L-1，吉祥草双黄酮化合物A对人肾癌786-O细胞的抑制明显，结果见图4。

Claims (3)

1.一种天然活性药物，其特征在于，所述天然活性药物命名为吉祥草双黄酮化合物A，分子式为：C33H28O6，结构式如下：
Figure FDA0002691836360000011
2.权利要求1所述的天然活性药物吉祥草双黄酮化合物A的制备方法，其特征在于，所述方法具体为：取吉祥草干燥全草，用95％的乙醇加热回流提取，提取液减压浓缩至无醇味，得浸膏；取浸膏，用水混悬后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯萃取物，拌样后上硅胶柱层析，用氯仿-甲醇按照50:1到2:1的比例进行梯度洗脱，薄层监视，收集氯仿-甲醇比例为20:1的洗脱部分，减压浓缩回收溶剂，所得浓缩物经ODS柱色谱分离，用甲醇-水按照10:90到90:10的比例进行梯度洗脱，薄层监视，收集比例为40:60到50:50的甲醇-水部分，减压浓缩回收溶剂后经Sephadex LH-20凝胶柱层析分离，收集氯仿-甲醇比例为1:1的部分，浓缩回收溶剂，得到吉祥草双黄酮化合物A。
3.权利要求1所述的天然活性药物吉祥草双黄酮化合物A的应用，其特征在于，所述天然活性药物吉祥草双黄酮化合物A用于抗肾癌药物的制备。
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