CN106366161B - 皮肤透过性肽 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及皮肤透过性肽，更具体地说，本发明涉及能透过皮肤，从而将药物递送至皮肤的分离肽，涉及编码该肽的分离多核苷酸，涉及包含该肽以便作透皮递送的组合物，还涉及包含该肽和加载物的肽/加载物组合物。

Description

皮肤透过性肽
本申请是申请日为2013年05月31日、申请号为2013800290525、发明名称为“皮肤透过性肽”的发明申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及皮肤可透过肽，更具体地说，涉及能够透过皮肤以递送药物的分离的肽，编码该肽的分离的多核苷酸，包含该肽的用于透皮递送的组合物，以及包含该肽和加载物的肽-加载物复合物。
背景技术
经皮的药物递送因其便于使用而具有各种应用和形式，例如止痛贴剂、尼古丁贴剂或节育贴剂。经皮药物递送主要涉及通过皮肤进入全身循环的递送，但是诸如特应性皮炎治疗剂的药物，用于增白或改善皱纹的化妆品等等，它们用于将药物转运进入皮肤器官本身。虽然有这样的便利性和功能，经皮药物递送因皮肤的结构而有许多困难。因此，难以开发透过皮肤的药物。皮肤的最外层具有角质层，其由厚度约10μm到45μm的10到15层角质细胞层构成，而这种角质层具有称为“砖和灰浆(brick and mortar)”结构的形式。在角质层中，所谓的砖结构由含有丰富角蛋白的角质细胞构成，而所谓的灰浆结构由填充角质细胞之间的空间的脂质，例如神经酰胺、脂肪酸或蜡构成。这一结构防止内部水份从皮肤表面散失并抵御外部攻击。然而，这一结构因精确对应于其功能而具有极低渗透性。仅有分子量为500Da或更低的分子能经扩散，主要是穿过灰浆结构的胞内脂质层或脂质层之间的亲水性结构而穿过皮肤。药物的特性可极大程度地影响经皮肤的此类药物递送。除了直接穿过皮肤表面，通过诸如汗腺、皮肤孔、皮脂腺等结构也可发生经皮肤的药物递送。
在此背景下，人们积极进行了许多研究来开发能穿过皮肤且无论分子大小或特性均能在整个皮肤均匀扩散的药物，以及药物递送方法。例如，韩国专利号1054519公开了稳定性和皮肤透过性优于天然人生长激素的人生长激素-衍生肽，以及包含其的组合物。韩国专利号1104223公开了IL-10衍生肽以及包含其的组合物，所述IL-0衍生肽具有与人IL-10(白介素-10)相同的功能，并且稳定性和皮肤透过性优于天然IL-10。然而，由于这些肽本身表现出功能性，它们的缺点在于可能不能用作药物递送的运载体。因此，现已开发了可用于治疗皮肤疾病和增强药学活性组合物的皮肤透过性的皮肤可透过肽(美国专利号7,659,252)。该肽的优点在于其表现出优异的皮肤透过性，其也可用作透皮递送其它药物的运载体。然而，一旦穿过皮肤，该肽经体内的循环系统消耗，因此靶向皮肤的药物不能表现出其特定作用。
在此背景下，本发明人作出艰苦的努力，开发出皮肤可透过肽，该肽可用作运载体以供透皮递送药物，还具有在皮肤中保留的特性，因此，发明人开发并分离了具有SEQ IDNO:1-10所示任一氨基酸序列的肽，藉此完成了本发明。
发明内容
技术问题
本发明的目的是提供由选自SEQ ID NO:1-10中任一氨基酸序列构成的分离肽。
本发明的另一目的是提供编码该肽的分离多核苷酸。
本发明还有另一目的是提供包含该分离肽和加载物的肽-加载物复合物。
本发明还有另一目的是提供包含该分离肽的用于透皮递送的组合物。
本发明还有另一目的是提供利用该肽透皮递送加载物的方法。
技术方案
在一方面，本发明提供由选自SEQ ID NO:1-10中任一氨基酸序列构成的分离肽。
如下所示，本文所用的氨基酸序列的缩写根据IUPAC-IUB命名：
本发明开发了一新型肽，其表现出皮肤透过性，还表现出皮肤维持性，因此可应用于药物，例如肽或蛋白质的透皮递送系统。
本发明的肽可由以下SEQ ID NO:1-10所示任一氨基酸序列构成：
NQTDHLFSTFIS(SEQ ID NO.1)、NGSLNTHLAPIL(SEQ ID NO.2)、GGSIAASELEYY(SEQID NO.3)、ELKQVVISDINH(SEQ ID NO.4)、MVRDHPGLSGWT(SEQ ID NO.5)、TSGISINKLPHT(SEQID NO.6)、IFAALDYNLGRH(SEQ ID NO.7)、DMKWTLKEWMTH(SEQ ID NO.8)、QIEKHVYFNASQ(SEQID NO.9)、TNIPSLSGILMK(SEQ ID NO.10)。
在本发明中，具有以下氨基酸序列的分离肽也包括在本发明的范围内：通过在以上序列的末端除去或取代一个或多个氨基酸而制备的氨基酸序列，或与以上序列显示80％或更高同源性的氨基酸序列，只要其由SEQ ID NO:1-10所示任一氨基酸序列构成并也表现出皮肤透过性和/或皮肤维持性。
本发明的由SEQ ID NO:1-10所示任一氨基酸序列构成的分离肽的特征在于其表现出皮肤透过性，还表现出皮肤维持性。
本文所用的术语“皮肤透过性”表示肽穿过皮肤从而渗透进入皮肤的能力，术语“皮肤维持性”表示肽穿过皮肤组织而渗透皮肤，然后不递送到循环系统，而是与皮肤组织结合从而在皮肤中维持的能力。在靶向于皮肤组织的药物组合物或化妆品中，优选维持在皮肤组织中的特性，从而与肽结合的组分在皮肤组织或皮肤细胞中行使其功能。因此，本发明的肽因其优异的皮肤维持性以及皮肤透过性，它能用作靶向皮肤组织的药物组合物或化妆品的运载体。
表现出皮肤透过性的肽可用于透皮递送与其结合的各种加载物，例如其它肽、蛋白质、多核苷酸、寡核苷酸、siRNA或市售可得的药物。
本文所用的术语“加载物”表示穿过皮肤而递送入皮肤的物质。就本发明的目的而言，加载物的类型不作特别限定，只要其连接于待递送入皮肤的本发明分离肽，其例子包括用于基因治疗的物质，例如肽、蛋白质、多核苷酸、寡核苷酸、核酶、siRNA、载体或病毒，或市售可得的药物，等等。在本发明的一个实施方式中，发现通过噬菌体展示方法呈递本发明肽的噬菌体能渗透猪皮(实施例1-5)。
可将加载物以复合物的形式递送入皮肤，所述复合物通过将本发明的分离肽与加载物连接而制得。在此，复合物中的加载物可经共价键连接于肽；或者加载物可经非共价相互作用连接于肽。此外，如果加载物是肽或蛋白质，其可以是融合蛋白的形式，但不限于此。
如果加载物经共价键连接于肽，它们可通过接头或直接彼此相连。
本文所用的术语“接头”基本上指能利用共价键连接两个不同融合伴侣的元件(例如，生物聚合物，等等)。接头可以是肽接头或非肽接头。如果接头的肽接头，其可以由一个或多个氨基酸构成。
包含选自SEQ ID NO:1-10中任一氨基酸序列的本发明肽可以是修饰肽的形式，其N-和/或C-末端经化学修饰或被有机化合物保护，或其末端加有氨基酸，以便抵御蛋白水解酶并改善其稳定性。具体地说，如果该肽是化学合成的，其N-和C-末端带有电荷。为除去电荷，可进行N-末端乙酰化或/和C-末端酰胺化，但不限于此。此外，所述肽可以是这样的肽，其C-末端进一步与丹酰基连接，但不限于此。
根据其长度，本发明的肽可通过本领域熟知的方法合成，例如，通过自动肽合成仪，或通过遗传工程技术产生。例如，通过遗传工程制备编码包含融合伴侣和本发明肽的融合蛋白的融合基因，然后将其转化入宿主细胞以表达融合蛋白。随后，利用蛋白酶或某化合物从融合蛋白中切割并分离本发明肽，从而产生所需肽。为此，编码可被蛋白酶(例如Xa因子或肠激酶)，或某化合物(例如CNBr或羟胺)切割的氨基酸残基的DNA序列可插入编码融合伴侣和本发明肽的多核苷酸之间。
根据本发明的一种实施方式，通过噬菌体展示方法选择了10类皮肤可透过肽(SEQID NO:1-10)，并检测包含所选皮肤可透过肽的噬菌体的皮肤透过性。结果，与对照组相比，它们显示出优异的皮肤透过性(表1)。此外，合成了各C-末端连接有丹酰基的肽衍生物，并测量了它们吸光度来检测肽的皮肤透过性。结果，这些肽也显示出优异的皮肤透过性(表2)。此外，检测了包含皮肤可透过肽的噬菌体的皮肤维持性。结果，与对照组相比，它们显示出极其优异的皮肤维持性(表3)。此外，将肽的C-末端连接于丹酰基制备各衍生物，利用衍生物检测这些肽的皮肤维持性。结果，这些肽显示出优异的皮肤维持性(表4)。
在另一方面，本发明提供编码肽的多核苷酸。就此而言，由于密码子简并性，编码本发明肽的多核苷酸可优选由以下SEQ ID NO:11-20中任一核苷酸序列构成，但不限于此。
编码皮肤可透过肽的多核苷酸：
AATCAGACTGATCATCTTTTTTCGACGTTTATTTCT(SEQ ID NO.11)、
AATGGTTCTCTTAATACTCATCTTGCGCCGATTCTG(SEQ ID NO.12)、
GGTGGTAGTATTGCTGCTTCGGAGCTGGAGTATTAT(SEQ ID NO.13)、
GAGCTGAAGCAGGTTGTGATTTCTGATATTAATCAT(SEQ ID NO.14)、
ATGGTTCGGGATCATCCTGGTCTTTCTGGTTGGACG(SEQ ID NO.15)、
ACTTCGGGGATTTCTATTAATAAGTTGCCGCATACT(SEQ ID NO.16)、
ATTTTTGCTGCGTTGGATTATAATCTGGGTCGTCAT(SEQ ID NO.17)、
GATATGAAGTGGACGCTGAAGGAGTGGATGACTCAT(SEQ ID NO.18)、
CAGATTGAGAAGCATGTTTATTTTAATGCTAGTCAG(SEQ ID NO.19)、
ACGAATATTCCTTCGTTGTCGGGGATTCTTATGAAG(SEQ ID NO.20)
在还有另一方面，本发明提供包含分离肽和加载物的肽-加载物复合物。
所述分离肽、加载物和复合物如上所述。
在还有另一方面，本发明提供用于透皮递送的组合物，其包含分离的肽。
所述组合物还可包含加载物。如果所述组合物包含加载物，所述肽和所述加载物可以肽-加载物复合物的形式存在。
由于所述肽显示出皮肤透过性，其可用作透皮或皮下递送各种加载物，例如肽、蛋白质、多核苷酸或寡核苷酸、核酶、siRNA或市售可得药物等等的组合物，其起到加载物的运载体的作用。所述运载体是指将某物质递送到特定部位的元件。本发明的肽显示出皮肤透过性，因此，包含其的组合物可用作将所述加载物递送入皮肤的运载体。
具体地说，为透过身体表面递送药物，所述运载体或组合物可包含(a)充足量的本发明肽，其能引起透过身体表面递送药物而不损伤身体；和(b)有效量的加载物，但不限于此。
鉴于本发明的目的，包含本发明肽、用于透皮递送的组合物宜配制成便于皮肤递送的制品，例如皮肤的外用制品的形式。所述组合物还可与脂质体、胶束和微球一起制备。
本文所用的术语“皮肤的外用制品”表示提供外用的制品。其例子包括药膏、乳霜、凝胶、洗液、糊剂、贴剂等，但其类型并无具体限定，只要在施加于皮肤表面时用于将所需物质递送入皮肤。
此外，所述组合物可包含本领域已知的一种或多种药学上可接受的运载体或添加剂。在此，所述运载体优选适合作透皮递送或局部递送的物质。此外，可用于本发明的运载体或添加剂优选对皮肤无毒并且不与组合物中所含的其它组分发生不良相互作用的那些。
此外，本发明的组合物可用于递送本身对皮肤不易于递送的药物，因此，除了本发明的肽，还可包含能增强皮肤透过性的物质。增强皮肤透过性的物质优选能最大程度降低对皮肤有破坏、刺激和全身症状的物质。可以进一步包含在本发明组合物中并能增强皮肤透过性的物质的例子包括饱和或不饱和的脂肪酸；脂肪醇；胆酸；非离子型表面活性剂、胺、酰胺、烃溶剂、萜类、低级烷酯、环糊精增强剂、含氮杂环、亚砜和脲；和它们的衍生物，但不限于此。
此外，如果待递送的物质是治疗性物质，包含本发明肽的组合物可以是药物组合物的形式。
当本发明的肽配制成药物组合物时，可利用惯常使用的稀释剂或赋形剂，例如填充剂、增重剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等来制备。其可包括无菌水溶液、非水性溶剂、混悬液、乳液、冻干剂和栓剂。对于非水性溶剂和混悬液，可利用丙二醇、聚乙二醇、植物油，例如橄榄油，可注射酯类，例如油酸乙酯。witepsol、聚乙二醇(macrogol)、吐温61、可可油、月桂油(lauricbutter)、甘油明胶等可用作栓剂基料。
此外，本发明的肽可包含碳水化合物，例如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖，抗氧化剂，例如抗坏血酸或谷胱甘肽，螯合剂、低分子量蛋白质，或其它稳定剂以增加稳定性或吸收率。
此外，所述组合物可以是化妆品组合物的形式。
由于所述肽表现出优异的皮肤透过性和皮肤维持性，其包含在化妆品组合物中以帮助将化妆品组合物中的活性成分，例如各种组分，如增白组分递送入皮肤。
本发明的化妆品组合物可用作常规化妆品或药妆品的组分，连同美容学领域通常使用的辅助剂，例如脂质、有机溶剂、增溶剂、浓缩物、胶凝剂、软化剂、抗氧化剂、悬浮剂、稳定剂、起泡剂、芳香剂、表面活性剂、水、离子或非离子乳化剂、填充剂、(多价)螯合剂、螯合剂、防腐剂、维生素、阻断剂、润湿剂、精油、染料、色素、亲水性或亲脂性激活剂、脂质囊泡或美容学或皮肤病学领域常规使用的其它辅助剂，例如化妆品中通常使用的其它组分。
本文所用的术语“药妆品(化妆医药)”是指通过向化妆品引入药物的专门治疗功能而制备的功能产品，其通过增强生理学疗效或作用而具有专门的功能，而不似常规化妆品。例如，药妆品表示帮助皮肤增白的产品、帮助改善皮肤皱纹的产品、帮助将皮肤晒成褐色(sun tanning)或帮助皮肤抵御UV的产品。
包含本发明化妆品组合物的化妆品可配制成，例如溶液、混悬液、乳液、糊剂、凝胶、乳霜、洗液、粉末、皂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉末基(powder foundation)、乳液基(emulsion foundation)、蜡基(wax foundation)或喷雾剂的形式，但不限于此。更详细地说，其可配制成以下形式：皮肤柔软剂、紧肤洗液、营养洗液、营养乳霜、按摩乳、洗液、凝胶、精华素、眼霜、清洁乳霜、清洁泡沫、洁肤水、剥撕式面膜(pack)、软膏、美容棒(stick)、贴剂、喷雾剂或粉末剂。
在还有另一方面，本发明提供利用所述肽透皮递送加载物的方法。
所述肽和加载物与上述相同。
详细地说，透皮递送加载物的本发明方法可以是这样一种方法，包括将有效量的肽-药物复合物或包含其的组合物施加到对象皮肤的步骤。由于本发明的肽表现出优异的皮肤透过性，采用该方法可将与该肽相连的加载物有效递送入皮肤。所述对象可以是不作限制的任一对象，只要其需要透皮递送加载物。其例子包括哺乳动物或鸟类，例如牛、猪、绵羊、鸡、狗、人等等，但不限于此。
有益效果
本发明的肽表现出优异的皮肤维持性以及皮肤透过性，因此，其可广泛用于开发意欲施加于皮肤组织的各种试剂以便透皮递送。
附图描述
图1显示了表示阴性对照组、对照组或S3-2的结合于猪皮的各噬菌体量。
最佳实施方式
以下将参考实施例更详细地描述本发明。然而，这些实施例仅是出于说明的目的，本发明不应受限于这些实施例。
实施例1：选择皮肤可透过肽
应用透皮扩散测试来选择皮肤透过性肽。为此，利用Franz玻璃池(标准直径9mm,接收器5ml,Permgear)。将猪皮(厚度为0.7mm，Medikinetics)置于该玻璃池的顶部和底部之间，用噬菌体处理顶部。然后，扩增穿透猪皮维持在接收器中的噬菌体。该过程进行一次，定义为1轮选择。对1轮扩增的噬菌体进行第二轮。以此方式，竞争性地选择表现出优异皮肤透过性的噬菌体，总共进行3轮选择。
此外，为降低皮肤和噬菌体的外壳蛋白之间的非特异性结合，对该玻璃池的顶部和底部分别施用溶解于500μl和5ml TBS(50mM Tris pH 7.5,150mM NaCl)溶液中的1％BSA(西格玛公司-Sigma)。
此外，为利用具有随机肽序列的噬菌体启动该实验，采用了Ph.D-12噬菌体文库试剂盒(新英格兰生物试验室公司-New England Biolab)。用500μl TBS(1％BSA)处理109个噬菌体，然后温育16小时。接收器中的全部5ml TBS用于扩增噬菌体。
利用大肠杆菌ER2738(新英格兰生物试验室公司)作为噬菌体扩增的宿主细胞。将振荡培养的ER2738接种在25ml LB培养基中，然后用含有噬菌体的5mlTBS处理，所述噬菌体在O.D.(550nm)为0.5时穿出，然后温育4小时。随后，以8000G离心细胞以分离噬菌体与大肠杆菌。接着用6ml沉淀溶液(20％PEG6000,2.5M NaCl)处理含噬菌体的上清液以沉淀噬菌体。以8000G离心后，用TBS处理沉淀的噬菌体以分离和保存噬菌体。
最后，为证实皮肤透过性噬菌体的肽，扩增单菌落中的噬菌体。在LB/X-gal/IPTG平板上通过蓝色选择具有噬菌体的大肠杆菌ER2738。详细地说，用TBS稀释适当量的噬菌体，将其中的2μl加入300μl ER2738培养肉汤，然后将该肉汤与4ml TOP琼脂混合，加在LB/X-gal/IPTG平板上。该平板温育16小时，然后选择蓝色菌落。各菌落在5ml ER2738培养肉汤中培养6小时，然后利用Ph.D-13噬菌体抽取试剂盒(凯杰公司-Qiagen)分离DNA。分析它们的核苷酸序列以选择10类皮肤可透过肽(S3-1噬菌体(SEQ ID NO.1)、S3-2噬菌体(SEQ IDNO.2)、S3-3噬菌体(SEQ ID NO.3)、S3-7噬菌体(SEQ ID NO.4)、S3-8噬菌体(SEQ IDNO.5)、S3-9噬菌体(SEQ ID NO.6)、S4-4噬菌体(SEQ ID NO.7)、S4-7噬菌体(SEQ IDNO.8)、S4-9噬菌体(SEQ ID NO.9)和S4-10噬菌体(SEQ ID NO.10))。
实施例2：含皮肤可透过肽的噬菌体的皮肤透过性测试
检测能表达实施例1所选择各肽的噬菌体的皮肤透过性，所述肽具有SEQ ID NO:1-10所示氨基酸序列。
详细地说，将猪皮置于Franz玻璃池的顶部和底部之间。为降低皮肤和噬菌体的外壳蛋白之间的非特异性结合，对该玻璃池的顶部和底部分别施用溶解于500μl和5ml TBS溶液中的1％BSA。待处理的噬菌体数量经测定是1010，然后加入Franz玻璃池的顶部。此时，能表达具有“TDMNKTEIRFVR(SEQ ID NO.21)”所示氨基酸序列的肽的噬菌体用作对照组。该噬菌体与猪皮反应16小时，然后检测穿过猪皮维持在接收器中的噬菌体数量。为此，将300μlER2738培养肉汤与接收器中含有噬菌体的10μl TBS混合。然后将所得物与4ml TOP琼脂混合。将混合物加在LB/X-gal/IPTG平板上，温育该平板16小时。然后计数蓝色菌落数量(表1)。
[表1]
如表1所示，与对照相比，具有如此选择的10类肽的所有噬菌体表现出优异的皮肤透过性。具体地说，在具有10类肽的噬菌体中，发现S3-1、S3-2、S3-3和S3-7表现出更优异的皮肤透过性；其中，S3-2表现出最优异的皮肤透过性。
这些结果表明，本发明的10类分离肽具有优异的皮肤透过性。
实施例3：皮肤可透过肽衍生物的皮肤透过性测试
将丹酰基连接于具有SEQ ID NO:1-10所示任一氨基酸序列的实施例1所选择各肽的C-末端，从而合成它们的衍生物，以便检测它们的皮肤透过性。
详细地说，化学合成各肽，然后将丹酰基加在各肽的C-末端以合成它们的衍生物。由“TDMNKTEIRFVR(SEQ ID NO.21)”所示氨基酸序列构成的肽用作对照组，该肽通过在C-末端加入丹酰基而制备。
此外，将猪皮置于Franz玻璃池的顶部和底部之间，对该池的顶部和底部分别加入500μl和5ml TBS溶液。然后，将相同浓度的各衍生物加于该池的顶部，随后温育16小时。温育完成后，利用victor荧光计(340/520)检测底部接收器中各衍生物的量以比较透过程度(表2)。
[表2]
如表2所示，与对照组相比，如此合成的10类肽衍生物表现出非常优异的皮肤透过性。具体地说，在10类肽中，发现S3-1肽、S3-2肽、S3-3肽、S3-7肽、S3-8肽、S3-9肽和S4-9肽表现出较优异的皮肤透过性，其中，S3-2肽表现出最优异的皮肤透过性。
实施例4：含皮肤可透过肽的噬菌体的皮肤维持性测试
皮肤通透主要通过溶解于皮肤组分中的物质从最外层向最内层扩散的机理而发生。通过该机理，可有效地活性成分递送穿透皮肤。皮肤表面由角质细胞和细胞间物质构成。所选择的肽如想有效透过皮肤，它们应在构成皮肤表面的组分中表现出良好的溶解性。可通过检测与皮肤短时反应后(10分钟)，某物质与皮肤的结合量来分析该物质在皮肤组分中的此类溶解性。此外，当利用洗出(wash-off)产物时，其应该与皮肤表现出高结合亲和力。在此例中，该产物首先与皮肤结合，然后扩散进入内层。因此，检测所选噬菌体与皮肤的结合亲和力来检测这些肽的优势。
首先，将猪皮切割成10mm×10mm见方，然后加入能表达实施例中所选各肽的噬菌体以检测它们与猪皮的结合亲和力。此时，表达具有“TDMNKTEIRFVR(SEQ ID NO.21)”所示氨基酸序列的肽的噬菌体用作对照组。
为检测与猪皮结合的噬菌体的量，利用抗-M13抗体-HRP偶联物。为排除抗体本身与皮肤结合所产生的信号，利用无噬菌体对照组作为阴性对照组。将如此切割的猪皮置于1.5ml试管中，向其中加入500μl TBS(1％BSA)。然后，阴性对照中不加入噬菌体，将1010个噬菌体加入待检测的对照组和噬菌体组，随后温育10分钟。之后用含1％BSA的TBS溶液以12,000RPM洗涤1分钟，10次。然后加入含有抗-M13抗体-HRP(辣根过氧化物酶)偶联物、含有1％BSA的500μl TBS溶液，随后温育5分钟。向培养液中加入含有1％BSA的TBS溶液，然后以12,000RPM进行洗涤1分钟，10次。完全除去残留的缓冲液，再加入TMB溶液(四甲基联苯胺溶液,Amersham)。此时，偶联于抗体的HRP降解TMB以产生蓝色。最后，加入0.2N硫酸以终止反应，蓝色变为黄色。然后检测吸光度(450nm)以测定噬菌体-皮肤之间的结合亲和力。随后，依据从各吸光度中除去阴性对照组的吸光度而获得的吸光度来比较各活性，结果示于表3和图1。图1显示了表示阴性对照组、对照组或S3-2的结合于猪皮的各噬菌体量。
[表3]
如表3和图1所示，与对照组相比，维持在皮肤中的各肽表现出高度皮肤维持性。具体地说，在10类肽中，发现S3-1、S3-2、S3-3和S3-7表现出较高的皮肤结合亲和力，其中，S3-2肽表现出最高的皮肤结合亲和力。
实施例5：皮肤可透过肽衍生物的皮肤维持性测试
为检测实施例3合成的衍生物的皮肤结合亲和力，将猪皮与各衍生物反应，然后检测溶解于表面的肽的量。详细地说，将猪皮切割并置于1.5 ml试管中，向其中加入500μlTBS(1％BSA)。向其中加入对照组和待检测的各衍生物，然后与皮肤温育10分钟。具有“TDMNKTEIRFVR(SEQ ID NO.21)”所示氨基酸序列的肽用作对照组。温育后，利用TBS(1％BSA)以12,000 RPM进行洗涤1分钟，10次，将反应完成的猪皮转移至24-孔板。利用victor荧光计(340/520)检测维持在表面上的肽量，并作比较(表4)。
[表4]
如表4所示，维持在皮肤中的各肽衍生物的水平均高于对照组。具体地说，在10类肽中，发现S3-1肽、S3-2肽、S3-7肽和S3-8肽在皮肤中的维持水平较高，其中，S3-2肽在皮肤中的维持水平最高。
基于以上描述，本领域技术人员应该理解，可采用不同的特定形式实施本发明而不改变其技术构思或实质性特征。因此，应该理解，以上实施方式不是限制性的，而是在各个方面是说明性的。本发明的范围由随附的权利要求而非在前的说明书的限定，因此，落在权利要求的边界和界限内的改变和改进，或此类边界和界限的等价方式应包括在权利要求内。

Claims (9)

1.一种分离的肽，其特征在于，所述肽由SEQ ID NO:1的氨基酸序列构成。
2.如权利要求1所述的肽，其特征在于，所述肽在其C-末端被酰胺化。
3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1所述的肽。
4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸由SEQ ID NO:11的核苷酸序列构成。
5.一种透皮递送组合物，其特征在于，所述组合物包含权利要求1或2所述的分离的肽。
6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含加载物，所述加载物是穿过皮肤而递送入皮肤的物质。
7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述加载物通过共价键连接于所述分离的肽；或者，所述加载物通过非共价相互作用连接于所述分离的肽。
8.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述组合物是皮肤外用制品的形式。
9.一种肽-加载物复合物，其特征在于，所述肽-加载物复合物包含权利要求1或2所述的分离的肽和加载物，所述加载物是穿过皮肤而递送入皮肤的物质。
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