CN106353494A - 邻苯二甲酸二丁酯检测试纸条及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种邻苯二甲酸二丁酯检测试纸条，所述试纸条包括样品垫、量子点标记垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和背板；所述的量子点标记垫上含有量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体；本发明中所述的基于量子点的邻苯二甲酸二丁酯检测试纸条通过将量子点技术和纳米抗体结合，可定量的对邻苯二甲酸二丁酯进行快速检测，灵敏度高，邻苯二甲酸二丁酯的检出限低至为1ng/ml；特异性强，交叉反应少。

Description

邻苯二甲酸二丁酯检测试纸条及其制备方法

技术领域

本发明涉及食品安全检测领域，尤其涉及一种邻苯二甲酸二丁酯检测试纸条及其制备方法。

背景技术

邻苯二甲酸二丁酯是应用于塑料工业的主要增塑剂和软化剂，该物质可以通过食品包装材料直接迁移到食品中，也可通过含有该物质的塑料制品迁移到环境中，从而对空气、水、土壤和食品造成污染。通过呼吸、饮食和皮肤接触进入人体后会对人体健康造成危害。

针对食品安全领域中危害较大的邻苯二甲酸二丁酯添加物，传统的检测方法是：利用人工合成半抗原免疫小鼠获取单克隆抗体技术再进一步制备相关的检测试剂盒，该工艺流程复杂，生产周期长，单抗的稳定性差，灵敏度低等因素制约着相关检测试剂的规模化生产与使用；另外试纸条中胶体金和磁性纳米颗粒生物相容性低，只能进行半定量，不能准确的定量。除了试剂盒的检测方法，现有技术还公开有利用高效液相色谱或气相色谱等精密仪器检测邻苯二甲酸二丁酯的方法，但是该方法测量处理繁琐、时间长，仪器使用费昂贵等缺点。因此，如何构建一种集快速、定量、灵敏和高特异性等技术优势为一体的检测方法称为本领域急需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于量子点和纳米抗体技术的邻苯二甲酸二丁酯检测试剂盒。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种邻苯二甲酸二丁酯检测试纸条，所述试纸条包括样品垫、量子点标记垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和背板，所述样品垫、量子点标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫从上到下依次固定在背板；所述的量子点标记垫上设置有量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体。

优选的，所述量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体是由邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体与水溶性荧光量子点通过酰胺键结合得到的。

优选的，所述的水溶性荧光量子点的粒径为10～100nm。

优选的，所述的水溶性荧光量子点的发射波长为620nm，发红色光。

优选的，所述硝酸纤维素膜上设置有相互分离的检测区和质控区，所述检测区喷涂邻苯二甲酸二丁酯包被抗原，所述质控区喷涂与量子点邻苯二甲酸二丁酯标记纳米抗体特异结合的抗抗体。

本发明还提供了一种试纸条的制备方法，将量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体喷涂在标记垫上得到所述量子点标记垫，将所述样品垫、量子点标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫从上到下依次固定在背板上得到试纸条。

本发明还提供了一种量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体，所述抗体的制备方法包括以下步骤：

将邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体和水溶性荧光量子点溶液进行偶联反应，得到量子点标记邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体。

优选的，所述水溶性荧光量子点和邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体的质量比为20～30:1。

优选的，所述步骤1)中羧基活化的温度为35～40℃，羧基活化的时间为20～40min。

优选的，所述步骤2)中偶联的温度为35～40℃，偶联的时间为3～4h。

本发明的有益效果：本发明提供的基于量子点的邻苯二甲酸二丁酯检测试纸条，通过将量子点技术和纳米抗体结合，可定量的对邻苯二甲酸二丁酯进行快速检测，灵敏度高，邻苯二甲酸二丁酯的检出限低至为1ng/ml；特异性强，交叉反应少，本发明所述的试纸条对邻苯二甲酸二异丁酯交叉反应为49％，邻苯二甲酸二甲酯，邻苯二甲酸二辛酯，邻苯二甲酸二异辛酯和邻苯二甲酸二异壬酯的交叉反应小于1％。

附图说明

图1为邻苯二甲酸二丁酯检测试纸条示意图；

图2为量子点的电镜图；

图3为量子点邻苯二甲酸二丁酯检测试纸条检测值与浓度标准曲线图。

具体实施方式

本发明提供了一种邻苯二甲酸二丁酯检测试纸条，所述试纸条包括样品垫、量子点标记垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和背板，所述样品垫、量子点标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫从上到下依次固定在背板；所述的量子点标记垫上设置有量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体。

在本发明中，所述的量子点标记垫上设置有量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体，所述的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体为能特异识别邻苯二甲酸二丁酯的小分子多肽。

在本发明中，所述的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体是通过酵母展示技术获得的新型纳米抗体筛选文库，然后利用邻苯二甲酸二丁酯作为靶标进行高通量筛选，获取特异的小分子多肽。

在本发明中，优选的将所述的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体与水溶性荧光量子点通过酰胺键结合，得到量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体。

在本发明中，所述的水溶性荧光量子点的粒径优选为10～100nm，更优选的为2～20nm，最优选的为5～15nm；所述的水溶性荧光量子点的发射波长为620nm；所述的水溶性荧光量子点发红色光，所述的水溶性荧光量子点可通过荧光强度检测。在本发明中，所述的量子点优选的为硒化镉/硫化锌量子点。

在本发明中，将所述样品垫、量子点标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫从上到下依次固定在背板上，裁切得到试纸条。在本发明中，所述硝酸纤维素膜上设置有相互分离的检测区和质控区，所述检测区含有邻苯二甲酸二丁酯包被抗原，所述质控区含有与量子点邻苯二甲酸二丁酯标记纳米抗体特异结合的抗抗体；

本发明中，所述试纸条的工作原理如下：在样品垫加入待测样品后，基于竞争法原理，当样品中没有待测邻苯二甲酸二丁酯小分子时，邻苯二甲酸二丁酯标记抗体层析到检测区处喷涂的包被抗原并与抗原结合，在检测区处形成包被抗原-量子点标记抗体免疫复合物；同时，多余的量子点标记抗体则在质控区处与抗抗体结合形成量子点标记抗体-抗抗体免疫复合物；当样品中有待测邻苯二甲酸二丁酯小分子时，邻苯二甲酸二丁酯小分子与邻苯二甲酸二丁酯标记抗体结合后层析到检测区处喷涂的包被抗原而不被包被抗原结合，在检测区处不能形成包被抗原-量子点标记抗体免疫复合物；使用荧光检测判读仪测定检测区的荧光强度，通过与设定的标准曲线比对而确定样品中的邻苯二甲酸二丁酯小分子含量。质控区的测定结果则作为该测定方法的质控内标。

在本发明中，所述的邻苯二甲酸二丁酯检测试纸条优选与干燥剂共同包装成邻苯二甲酸二丁酯检测试剂盒，所述干燥剂的功能为防潮，防止所述试纸条失效，所述的干燥剂为本领域常规干燥剂，无其他特殊要求。本发明将得到的试纸条与干燥剂一起放入铝箔袋密封包装，得到量子点邻苯二甲酸二丁酯检测试剂盒。

在本发明中，还涉及所述的试纸条的制备，所述的试纸条的制备包括将量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体喷涂在标记垫上得到所述量子点标记垫；将所述样品垫、量子点标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫从上到下依次固定在背板上得到试纸条。

其中还包括设置有检测区和质控区的硝酸纤维素膜的制备，具体的方法为：将邻苯二甲酸二丁酯偶联BSA包被抗原和抗抗体分别喷涂在硝酸纤维素膜的两端不同区域，形成检测区和质控区，所述的邻苯二甲酸二丁酯偶联BSA包被抗原的浓度优选的为1～2mg/ml，更优选的为1.5mg/ml，所述抗抗体的浓度优选的为0.5～1.5mg/ml，更优选的为1mg/ml；所述抗原和抗抗体的喷涂优选的使用喷膜仪；本发明在得到含有检测区和质控区的硝酸纤维素膜后对其进行干燥，所述的干燥采用本领域常规的干燥方法即可，无其他特殊要求。

本发明还提供了一种量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体，所述抗体的制备方法，包括以下步骤：将邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体和水溶性荧光量子点溶液偶联得到量子点标记邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体。

在本发明中，水溶性量子点的制备优选的包括以下步骤，向硒粉和油酸中通入氮气，加热到220℃后溶于十八烯，制备得到硒前驱体；

向氧化镉和油酸中通入氮气，加热到240℃后溶于十八烯，制备得到镉前驱体；

向锌粉和油酸中通入氮气，加热到310℃后溶于十八烯，制备得到锌前驱体；

向硫粉和油酸中通入氮气，加热到150℃后溶于十八烯，制备得到硫前驱体；

将所述硒前驱体加热到240℃，然后与镉前驱体混合，制备得到硒化镉量子点。

在本发明中，所述硒粉和用于溶解硒粉的油酸的质量比优选的为1：(2.8～3.2)，更优选的为1：3；所述氧化镉和用于溶解氧化镉油酸的质量比优选的为1：(2.8～3.2)，更优选的为1：3；所述锌粉和用于溶解锌粉的油酸的质量比优选的为1：(7.5～8.5)，更优选的为1：8；所述硫粉和用于溶解硫粉的油酸的质量比优选的为1：(7.5～8.5)，更优选的为1：8。

本发明在得到上述硒、镉、锌和硫前驱体后，优选的将硒前驱体加热到240℃，然后与镉前驱体混合，制备得到硒化镉量子点；本发明在得到硒化镉量子点后，依次交替的向其中滴加硫前驱体和锌前驱体，得到核壳结构的油相硒化镉/硫化锌量子点。

本发明在得到油相硒化镉/硫化锌量子点后，通过聚马来酸十六醇酯包覆修饰油相硒化镉/硫化锌量子点，制备得到水溶性荧光量子点，所述的油相硒化镉/硫化锌量子点与聚马来酸十六醇酯的摩尔比优选的为1:75～85，更优选的为1:80；所述包覆修饰的溶液为氯仿，所述包覆修饰的时间优选的为22～26h，更优选的为24h；所述的包覆修饰的温度优选的为20～30℃，更优选的为25℃；所述包覆修饰是在密闭条件下缓慢搅拌进行的，所述搅拌转速优选的为10～100rpm；本发明在所述的包覆修饰步骤后，还包括旋转蒸发步骤除去氯仿；并将去除氯仿后的硒化镉/硫化锌量子点用10％氨水溶解，并通过挥发除氨，用去离子水清洗后得到水溶性荧光量子点。

得到水溶性量子点后，本发明将所述水溶性量子点进行羧基活化，在本发明中水溶性荧光量子点羧基活化的温度优选的为35～40℃，更优选的为37℃，羧基活化时间优选的为20～40min，更优选的为30min。

在本发明中所述的水溶性荧光量子点的羧基活化优选的包括以下步骤：2A)制备含量子点的MES溶液；2B)制备量子点-MES-EDC溶液；2C)制备量子点-MES-EDC-NHS溶液。

在本发明中，将水溶性荧光量子点分散到MES缓冲液中得到含量子点的MES溶液，所述的水溶性荧光量子点和MES的质量体积比优选的为5:1，所述的MES缓冲液的浓度优选的为0.05～0.15M，更优选的为0.1M，所述MES缓冲液的pH值优选的为4.5～5.0，更优选的为4.7。本发明在得到含量子点的MES溶液后，向所述含量子点的MES溶液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)得到量子点-MES-EDC溶液，所述的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺在量子点-MES-EDC溶液中的终浓度优选的为4～6mM，更优选的为5mM。

本发明在得到量子点-MES-EDC溶液后，向所述的量子点-MES-EDC溶液中加入N-羟基丁二酰亚胺(NHS)得到量子点-MES-EDC-NHS溶液，所述的N-羟基丁二酰亚胺在量子点-MES-EDC-NHS溶液中的终浓度优选的为3～8mM，更优选的为5mM。

在本发明中，得到羧基活化后的水溶性荧光量子点溶后，邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体和羧基活化后的水溶性荧光量子点溶液偶联，所述偶联的温度优选的为35～40℃，更优选的为37℃，所述偶联的时间优选的为3～4h，更优选的为3.5h。

本发明中所述的偶联优选的为将羧基活化后的水溶性荧光量子点和邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体混合到硼砂缓冲液中进行偶联；本发明在所述的偶联反应结束后，加入BSA溶液对剩余活性羧基位点进行封闭；本发明在所述封闭反应结束后优选的进行洗涤、重悬得到量子点标记邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体。

在本发明中所述羧基活化后的水溶性荧光量子点和邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体的质量比优选的为20～30:1；更优选的为23～27:1，最优选的为25:1；所述硼砂缓冲液的浓度优选的为45～55mM，更优选的为50mM，所述硼砂缓冲液的pH优选的为8.2～8.7，更优选的为8.5。

所述封闭反应的温度优选的为35～40℃，更优选的为37℃，所述封闭反应的时间优选的为0.3～0.7h，更优选的为0.5h。

本发明在封闭反应结束后，优选的用pH7.4的0.02M PBS缓冲液洗涤、重悬得到量子点标记邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体，于4℃保存待用。

在本发明中，将制备得到的量子点标记邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体用PBS缓冲液稀释后得到稀释抗体溶液，所述PBS缓冲液的浓度优选的为0.01～0.03M，更优选的为0.02M，所述稀释的倍数优选的为80～120倍，更优选的为100倍；本发明在得到稀释抗体溶液后，使用所述的稀释抗体溶液浸泡玻璃纤维膜，并将浸泡后的玻璃纤维素膜在37℃烘箱中干燥，得到量子点标记垫。

下面结合实施例对本发明提供的量子点邻苯二甲酸二丁酯检测试剂盒及其制备方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

硒粉，油酸，按1：3比例通氮气加热到220℃溶于十八烯，制备硒前驱体；将氧化镉，油酸，按1：3比例通氮气加热到240℃溶于十八烯，制备镉前驱体；将锌粉，油酸，按1：8比例通氮气加热到310℃溶于十八烯，制备锌前驱体；将硫粉通氮气加热到150℃溶于十八烯，制备硫前驱体。将硒前驱体加热到240℃，然后注入镉前驱体，制备硒化镉量子点。硒化镉量子点，通过依次交替滴加硫和锌前驱体，得到核壳结构的油相硒化镉/硫化锌量子点。油相硒化镉/硫化锌量子点与聚马来酸十六醇酯的按1:80摩尔比溶于氯仿，并在室温密闭条件下10rpm搅拌24h，然后旋转蒸发除去氯仿；用10％氨水溶解，并通过挥发除氨和用去离子水清洗后得到水溶性荧光量子点。

5mg水溶性荧光量子点分散到lmL MES缓冲液(0.1M、pH4.7)中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)至终浓度为5mM、加入NHS(N-羟基丁二酰亚胺)至终浓度为10mM，在37℃，反应30min得到羧基活化后的量子点。离心分离后取0.2mg邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体和上述羧基活化后的量子点混合到50mMpH8.5的硼砂缓冲液中37℃下反应3.5h时。反应结束后，加入终浓度为5％的BSA溶液对剩余活性羧基位点进行封闭，封闭反应在37℃下进行0.5h。完成后，用pH7.4的0.02MPBS缓冲液洗涤、重悬得到量子点标记邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体，4℃保存待用。将制得的量子点标记邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体用0.02MPBS缓冲液稀释100倍，将此溶液浸泡玻璃纤维膜并在37℃烘箱中干燥，得到量子点标记垫。

将所述邻苯二甲酸二丁酯偶联BSA包被抗原浓度配制为1.5mg/ml，抗抗体浓度配制为1mg/ml分别用喷膜仪喷在硝酸纤维素膜的两端不同区域，形成检测区和质控区，得到含有检测区和质控区的硝酸纤维素膜，干燥后使用。

将样品垫、干燥好的量子点邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫从上到下依次固定在背板上，裁切得到检测邻苯二甲酸二丁酯试纸，然后将试纸与干燥剂一起放入铝箔袋密封包装，得到量子点邻苯二甲酸二丁酯检测试剂盒。

实施例2

硒粉，油酸，按1：3比例通氮气加热到220℃溶于十八烯，制备硒前驱体；将氧化镉，油酸，按1：3比例通氮气加热到240℃溶于十八烯，制备镉前驱体；将锌粉，油酸，按1：8比例通氮气加热到310℃溶于十八烯，制备锌前驱体；将硫粉通氮气加热到150℃溶于十八烯，制备硫前驱体。将硒前驱体加热到240℃，然后注入镉前驱体，制备硒化镉量子点。硒化镉量子点，通过依次交替滴加硫和锌前驱体，得到核壳结构的油相硒化镉/硫化锌量子点。油相硒化镉/硫化锌量子点与聚马来酸十六醇酯的按1:80摩尔比溶于氯仿，并在室温密闭条件下50rpm搅拌24h，然后旋转蒸发除去氯仿；用10％氨水溶解，并通过挥发除氨和用去离子水清洗后得到水溶性荧光量子点。

5.5mg水溶性荧光量子点分散到lmLMES缓冲液(0.1M、pH4.7)中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)至终浓度为5mM、加入NHS(N-羟基丁二酰亚胺)至终浓度为10mM，在37℃，反应30min得到羧基活化后的量子点。离心分离后取0.26mg邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体和上述羧基活化后的量子点混合到50mMpH8.5的硼砂缓冲液中37℃下反应3.8h时。反应结束后，加入终浓度为5％的BSA溶液对剩余活性羧基位点进行封闭，封闭反应在37℃下进行0.5h。完成后，用pH7.4的0.02MPBS缓冲液洗涤、重悬得到量子点标记邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体，4℃保存待用。将制得的量子点标记邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体用0.02MPBS缓冲液稀释110倍，将此溶液浸泡玻璃纤维膜并在37℃烘箱中干燥，得到量子点标记垫。

将所述邻苯二甲酸二丁酯偶联BSA包被抗原浓度配制为1.45mg/ml，抗抗体浓度配制为0.95mg/ml分别用喷膜仪喷在硝酸纤维素膜的两端不同区域，形成检测区和质控区，得到含有检测区和质控区的硝酸纤维素膜，干燥后使用。

将样品垫、干燥好的量子点邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫从上到下依次固定在背板上，裁切得到检测邻苯二甲酸二丁酯试纸，然后将试纸与干燥剂一起放入铝箔袋密封包装，得到量子点邻苯二甲酸二丁酯检测试剂盒。

实施例3

硒粉，油酸，按1：3比例通氮气加热到220℃溶于十八烯，制备硒前驱体；将氧化镉，油酸，按1：3比例通氮气加热到240℃溶于十八烯，制备镉前驱体；将锌粉，油酸，按1：8比例通氮气加热到310℃溶于十八烯，制备锌前驱体；将硫粉通氮气加热到150℃溶于十八烯，制备硫前驱体。将硒前驱体加热到240℃，然后注入镉前驱体，制备硒化镉量子点。硒化镉量子点，通过依次交替滴加硫和锌前驱体，得到核壳结构的油相硒化镉/硫化锌量子点。油相硒化镉/硫化锌量子点与聚马来酸十六醇酯的按1:80摩尔比溶于氯仿，并在室温密闭条件下30rpm搅拌24h，然后旋转蒸发除去氯仿；用10％氨水溶解，并通过挥发除氨和用去离子水清洗后得到水溶性荧光量子点。

4.5mg水溶性荧光量子点分散到lmLMES缓冲液(0.1M、pH4.7)中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)至终浓度为5mM、加入NHS(N-羟基丁二酰亚胺)至终浓度为10mM，在37℃，反应30min得到羧基活化后的量子点。离心分离后取0.24mg邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体和上述羧基活化后的量子点混合到50mMpH8.5的硼砂缓冲液中37℃下反应3.2h时。反应结束后，加入终浓度为5％的BSA溶液对剩余活性羧基位点进行封闭，封闭反应在37℃下进行0.5h。完成后，用pH7.4的0.02MPBS缓冲液洗涤、重悬得到量子点标记邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体，4℃保存待用。将制得的量子点标记邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体用0.02MPBS缓冲液稀释90倍，将此溶液浸泡玻璃纤维膜并在37℃烘箱中干燥，得到量子点标记垫。

将所述邻苯二甲酸二丁酯偶联BSA包被抗原浓度配制为1.55mg/ml，抗抗体浓度配制为1.05mg/ml分别用喷膜仪喷在硝酸纤维素膜的两端不同区域，形成检测区和质控区，得到含有检测区和质控区的硝酸纤维素膜，干燥后使用。

将样品垫、干燥好的量子点邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫从上到下依次固定在背板上，裁切得到检测邻苯二甲酸二丁酯试纸，然后将试纸与干燥剂一起放入铝箔袋密封包装，得到量子点邻苯二甲酸二丁酯检测试剂盒。

实施例4

测试上述实施例1中制备得到的量子点邻苯二甲酸二丁酯检测试剂盒的灵敏度和交叉反应情况。

称取邻苯二甲酸二丁酯标准品，用甲醇配制为1mg/mL浓度标准样品，然后用0.02M的PBS(pH＝7.4)缓冲液进行稀释，配制浓度为0ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml的标准溶液，使用量子点邻苯二甲酸二丁酯检测试剂盒进行检测；每个样品加样50ul，10分钟后采用荧光检测仪读取检测结果；绘制标准曲线时采用双对数模型进行标准曲线的拟合。以B的自然对数ln(B)为纵坐标，以标准溶液实际浓度C(ng/ml)的自然对数ln(C)为横坐标。检测值比值按公式B＝A/(A0-A)计算(A0为0ng/ml标准样检测值，A为标准样或待测样检测值)。检测标准曲线如图2所示，检出限为1ng/ml。

交叉反应的测定，使用量子点邻苯二甲酸二丁酯检测试剂盒分别检测邻苯二甲酸二甲酯，邻苯二甲酸二异丁酯，邻苯二甲酸二辛酯，邻苯二甲酸二异辛酯，邻苯二甲酸二异壬酯，结果显示检测邻苯二甲酸二丁酯的量子点定量试剂盒对邻苯二甲酸二异丁酯交叉反应率为49％，与其余4种药物交叉反应小于1％。

由以上实施例可知，本发明中所述的基于量子点的邻苯二甲酸二丁酯检测试剂盒通过将量子点技术和纳米抗体结合，可实现了对邻苯二甲酸二丁酯小分子的定量检测，具有灵敏度高、特异性强、快速、简便等优点。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种邻苯二甲酸二丁酯检测试纸条，包括样品垫、量子点标记垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和背板，所述样品垫、量子点标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫从上到下依次固定在背板；所述的量子点标记垫上设置有量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体是由邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体与水溶性荧光量子点通过酰胺键结合得到的。

3.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述的水溶性荧光量子点的粒径为10～100nm。

4.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述的水溶性荧光量子点的发射波长为620nm，发红色光。

5.根据权利要求1所述试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上设置有相互分离的检测区和质控区，所述检测区喷涂邻苯二甲酸二丁酯包被抗原，所述质控区喷涂有与量子点邻苯二甲酸二丁酯标记纳米抗体特异结合的抗体。

6.权利要求1～5任意一项所述试纸条的制备方法，其特征在于，将量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体喷涂在标记垫上得到所述量子点标记垫，将所述样品垫、量子点标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫从上到下依次固定在背板上得到试纸条。

7.根据权利要求6所述试纸条的制备方法，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上设置有相互分离的检测区和质控区，所述检测区喷涂邻苯二甲酸二丁酯包被抗原，所述质控区喷涂有与量子点邻苯二甲酸二丁酯标记纳米抗体特异结合的抗抗体。

8.一种量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体，其特征在于，所述抗体的制备方法包括以下步骤：

将邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体和水溶性荧光量子点溶液进行偶联反应，得到量子点标记邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体。

9.根据权利要求8所述的量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体，其特征在于，所述水溶性荧光量子点和邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体的质量比为20～30:1。

10.根据权利要求8所述的量子点标记的邻苯二甲酸二丁酯纳米抗体，其特征在于，所述步骤2)中羧基活化的温度为35～40℃，羧基活化的时间为20～40min；所述步骤3)中偶联的温度为35～40℃，偶联的时间为3～4h。