CN106332780A - 一种红花离体再生体系建立方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种红花离体再生体系建立方法，通过植物组织培养方法短时间内获得大量优质红花种苗的方法。以红花幼嫩叶片为外植体，经过外植体消毒、不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了一种红花离体再生体系建立方法，为满足对红花优质种苗的需求、加速红花良种的推广具有重要的现实意义。具有技术工艺路线简单，操作容易，技术易掌握，生根快，生长健壮，根系粗壮，叶色浓绿等特点。

Description

一种红花离体再生体系建立方法
技术领域
本发明涉及红花繁殖技术，特征是一种红花离体再生体系建立方法。
背景技术
红花又名刺红花、草红花、红蓝花。其形态特征是一年生草本，高40~90厘米，光滑无毛，茎直立，基部木质化，上部多分枝，叶互生，质硬。无柄而抱茎，卵形或卵状披针形，基部渐狭，先端尖锐，边缘具刺齿，上部叶小，成苞片状，。花序大，顶生，总苞片多列，外面1~3片呈叶状，披针形，边缘有针刺，内列呈卵形，边缘无刺而呈卵形。花托扁平，管状花多数，通常两性，橘红色。果期8~9月，红花的花可入药。孕妇慎用。5~6月花瓣由黄变红时采摘，晒干、阴干或烘干。生长：全国各地均有栽培。性味：温、味辛。功效：活血通经，去瘀止痛。目前，红花种苗主要是通过种子、球根萌发、扦插等方式进行繁育。种种方式都有各自特色，主要缺点是繁殖系数低，这很大程度上影响了其规模化发展和市场化的要求。而植物组织培养技术具有加速育种进程、缩短繁殖时间、改良植物品质、节省空间、减少劳动、可终年生产、不受自然条件限制等特点，可有效解决红花种苗繁殖耗时长、繁殖系数低的问题。因此，建立红花离体再生技术体系，对推动优良红花园艺品种在我国的生产及应用具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种红花离体再生体系建立方法，以红花幼嫩叶片为外植体，经过外植体消毒、不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了一种红花离体再生体系建立方法，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种红花离体再生体系建立方法，包括以下的步骤：一种红花离体再生体系建立方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤1，外植体消毒：从生长旺盛的红花植株上的幼嫩叶片为外植体，先用流水下冲洗4h后置于超净工作台中，再于用75%乙醇消毒32s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒12min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；
步骤2，芽诱导培养：将步骤（1）处理后的叶片切成2×2cm长的小块并接种到诱导培养基上,先在29℃条件下全暗培养5天，然后每天光照9小时，光照强度为3200lx，直至诱导形成不定芽；
步骤3，增殖培养：将步骤（2）培养的叶片边缘伤口处产生的愈伤组织上的不定芽长至约6cm时切下，剪掉其茎尖并接种至增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在28℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照12小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为26℃的条件下培养26天后，其叶腋处就会长出许多小芽，再将这些小芽反复切割进行继代培养，得到不定芽；
步骤4生根培养：将步骤（3）过程获得的高度约为6cm的小芽分切下并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养9天，然后置于每天光照11小时，光照强度为2600lx，培养温度为26℃的条件下培养22天左右即开始生根；
步骤5，炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约9cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基并在多菌灵溶液中浸泡11s，栽入由营养土:沙土＝5:1混合成的基质,保持湿度并给予86%的遮阴处理。
步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+3mg/L6-BA+2mg/L NAA+36g/L蔗糖+6.6g/L琼脂，pH为5.3。
步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+3mg/L NAA+2mg/L 6-BA+36g/L蔗糖+3.5～6.6g/L琼脂，pH为5.3。
步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+3mg/L NAA+36g/L蔗糖+6.6g/L琼脂，pH为5.3。
与现有技术相比本发明的优点是:通过植物组织培养方法短时间内获得大量优质红花种苗的方法。以红花幼嫩叶片为外植体，经过外植体消毒、不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了一种红花离体再生体系建立方法，为满足对红花优质种苗的需求、加速红花良种的推广具有重要的现实意义。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）外植体消毒：从生长旺盛的红花植株上的幼嫩叶片为外植体，先用流水下冲洗3h后置于超净工作台中，再于用75%乙醇消毒10s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒4min，用无菌水冲洗6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
（2）芽诱导培养：将步骤（1）处理后的叶片切成2×2cm长的小块并接种到诱导培养基上,先在28℃条件下全暗培养1天，然后每天光照12小时，光照强度为2000lx条件培养29天即可诱导形成不定芽，诱导率为97%。所述的诱导培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+28g/L蔗糖+2.5g/L琼脂，pH为5.6。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养的叶片边缘伤口处产生的愈伤组织上的不定芽长至约4.0cm时切下，剪掉其茎尖并接种至增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在26℃条件下全暗培养5天，然后每天光照12小时，光照强度为2000lx，培养温度为26℃的条件下培养16天后，其叶腋处就会长出许多小芽，再将这些小芽反复切割进行继代培养，以得到更多的不定芽。所述的增殖培养基为MS+0.3mg/L NAA+0.8mg/L 6-BA+28g/L蔗糖+5.6g/L琼脂，pH为5.6。
（4）生根培养：将步骤（3）过程获得的高度约为2cm的小芽分切下并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1600lx，培养温度为26℃的条件下培养16天即开始生根，生根率100%。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约4cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖自然光照下炼苗5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基并在多菌灵溶液中浸泡10s，栽入由营养土:沙土＝2:1混合成的基质,保持湿度并给予65%的遮阴处理，移栽成活率为99%以上。所述的生根培养基为1/2MS+0.3mg/L NAA+12g/L蔗糖+3g/L琼脂，pH为5.6。
实施例2：
（1）外植体消毒：从生长旺盛的红花植株上的幼嫩叶片为外植体，先用流水下冲洗1h后置于超净工作台中，再于用75%乙醇消毒10s后用无菌水洗5次，再用0.1%升汞溶液消毒3min，用无菌水冲洗6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
（2）芽诱导培养：将步骤（1）处理后的叶片切成3×2cm2长的小块并接种到诱导培养基上,先在28℃条件下全暗培养5天，然后每天光照11小时，光照强度为1600lx条件培养26天即可诱导形成不定芽，诱导率为93%。所述的诱导培养基为MS+0.8mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+36g/L蔗糖+3.0g/L琼脂，pH为5.6。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养的叶片边缘伤口处产生的愈伤组织上的不定芽长至约1.5cm时切下，剪掉其茎尖并接种至增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在28℃条件下全暗培养6天，然后每天光照12小时，光照强度为2500lx，置于培养温度为26℃的条件下培养16天后，其叶腋处就会长出许多小芽，再将这些小芽反复切割进行继代培养，以得到更多的不定芽。所述的增殖培养基为MS+0.1mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA+35g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.6。
（4）生根培养：将步骤（3）过程获得的高度约为3cm的小芽分切下并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照11小时，光照强度为1600lx，培养温度为26℃的条件下培养20天即开始生根，生根率100%。所述的生根培养基为1/2MS+0.5mg/L NAA+12g/L蔗糖+3/L琼脂，pH为5.6。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约4cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基并在多菌灵溶液中浸泡8s，栽入由营养土:沙土＝2:2混合成的基质,保持湿度并给予60%的遮阴处理，移栽成活率为96%以上。

Claims (4)

1.一种红花离体再生体系建立方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤1，外植体消毒：从生长旺盛的红花植株上的幼嫩叶片为外植体，先用流水下冲洗4h后置于超净工作台中，再于用75%乙醇消毒32s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒12min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；
步骤2，芽诱导培养：将步骤（1）处理后的叶片切成2×2cm长的小块并接种到诱导培养基上,先在29℃条件下全暗培养5天，然后每天光照9小时，光照强度为3200lx，直至诱导形成不定芽；
步骤3，增殖培养：将步骤（2）培养的叶片边缘伤口处产生的愈伤组织上的不定芽长至约6cm时切下，剪掉其茎尖并接种至增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在28℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照12小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为26℃的条件下培养26天后，其叶腋处就会长出许多小芽，再将这些小芽反复切割进行继代培养，得到不定芽；
步骤4生根培养：将步骤（3）过程获得的高度约为6cm的小芽分切下并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养9天，然后置于每天光照11小时，光照强度为2600lx，培养温度为26℃的条件下培养22天左右即开始生根；
步骤5，炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约9cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基并在多菌灵溶液中浸泡11s，栽入由营养土:沙土＝5:1混合成的基质,保持湿度并给予86%的遮阴处理。
2. 根据权利要求1所述的一种红花离体再生体系建立方法，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+3mg/L6-BA+2mg/L NAA+36g/L蔗糖+6.6g/L琼脂，pH为5.3。
3. 根据权利要求1所述的一种红花离体再生体系建立方法，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+3mg/L NAA+2mg/L 6-BA+36g/L蔗糖+3.5～6.6g/L琼脂，pH为5.3。
4. 根据权利要求1所述的一种红花离体再生体系建立方法，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+3mg/L NAA+36g/L蔗糖+6.6g/L琼脂，pH为5.3。
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