CN106310248A - 猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物用于治疗猪伪狂犬病的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物用于治疗猪伪狂犬病的用途。本发明通过施用加大剂量的猪伪狂犬病病毒活疫苗接种感染猪伪狂犬病病毒的猪只，意外发现猪伪狂犬病病毒活疫苗具有治疗作用，能有效减轻猪的各种临床症状的严重性及降低死亡率，同时，也提供了一种治疗猪伪狂犬病病毒感染的相关疾病的技术手段，具有积极的意义。

Description

猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物用于治疗猪伪狂犬病的用途

技术领域

本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物用于治疗猪伪狂犬病的用途。

背景技术

伪狂犬病，又称Aujeszky氏病，是由疱疹病毒科(Herpesviridae)α亚科中的猪疱疹病毒Ⅰ型(Suid herpesvirus 1strain)所引起的猪、牛、羊等多种家畜、家禽和野生动物的一种以发热、奇痒(除猪外)及脑脊髓炎为主症的急性传染病。猪的伪狂犬病在我国广泛存在，危害严重，是制约规模化猪场生产的主要疫病之一。它能引起妊娠母猪流产、死胎或木乃伊胎和仔猪出现神经症状、麻痹，死亡率高。

该病几乎遍布世界上所有养猪国家，分布十分广泛。目前治疗该病最常用的是中药、抗病毒西药和抗菌药，中药由于其组方不合理或只是简单的粉碎，粒径过大，药物释放较慢，导致其生物利用度较低，临床效果不是很好；抗菌药由于有药物残留和易于产生耐药性，使用受到严格限制；而各种抗病毒药如利巴韦林、金刚烷胺等农业部已经禁止使用。此外，现有技术中描述的疫苗仅仅关注于预防猪伪狂犬病病毒的感染，而不考虑任何其它医学用途。因此，在本领域中，现有的用于预防猪伪狂犬病病毒感染的疫苗，未披露它们能用于治疗猪伪狂犬病的作用，亦未披露它们在治疗猪伪狂犬病的临床效果。

发明内容

本发明解决了现有技术中的问题且提供了明显区别于现有技术的进步，本发明提供了猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物的药物用途，所述用途为猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物对伪狂犬病的治疗作用。

一般而言，现有技术中，针对猪伪狂犬病病毒活疫苗，施用于动物时，目的为预防伪狂犬病病毒感染，即在动物感染伪狂犬病病毒前进行免疫，产生相应抗体，以抵御病毒的侵袭。本发明人在一起感染伪狂犬病病毒的猪群中，施用了加大剂量的猪伪狂犬病病毒活疫苗进行接种，意外发现猪伪狂犬病病毒活疫苗具有治疗作用，能有效减轻猪的各种临床症状的严重性及降低死亡率。

适用于本发明具有治疗作用的疫苗组合物为包含不少于猪伪狂犬病病毒活疫苗猪用预防免疫标准的1.5倍施用量。

优选地，适用于本发明具有治疗作用的疫苗组合物为包含猪伪狂犬病病毒活疫苗猪用预防免疫标准的1.5倍～3倍施用量。

优选地，适用于本发明具有治疗作用的疫苗组合物为包含猪伪狂犬病病毒活疫苗猪用预防免疫标准的2倍施用量。

本发明所用术语“疫苗组合物”指含有抗原的药物组合物，该药物组合物可诱导、刺激或增强动物机体针对相应病原的免疫反应。

对疫苗组合物的“免疫反应或免疫学反应”为宿主对所施用的疫苗组合物产生的细胞免疫反应和/或抗体介导的免疫反应。通常，“免疫反应”包括(但不限于)一种或多种以下效应：产生或活化针对在感兴趣的疫苗组合物中包括的抗原的特异性抗体、B细胞、辅助T细胞、抑制T细胞和/或细胞毒力T细胞。

本发明所用术语“活疫苗”指以毒力已经减弱但仍可在宿主体内或细胞上复制的病毒制备的疫苗。本发明所用的术语“减毒”用于指以使病原丧失致病性、但保持免疫原性的方式对基因进行突变来人工降低病原体毒性。通常，通过UV辐射、化学处理或体外连续高阶继代培养实现减毒。人工的基因改变，例如将已知序列中的特定核苷酸缺失以使毒力减弱。

根据本发明，所述猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物，优选猪伪狂犬病病毒自然缺失毒性基因的自然缺失株活疫苗组合物或人工缺失毒性基因的基因变异株活疫苗组合物。

优选地，所述猪伪狂犬病病毒包括猪伪狂犬病病毒JS-2012株、猪伪狂犬病病毒HeN1株、NVDC-PRV-BJ株、NVDC-PRV-HEB株和NVDC-PRV-SD株、PRV TJ株、猪伪狂犬病病毒变异株PRV-ZJ01、猪伪狂犬病病毒变异株HN1201株、猪伪狂犬病病毒变异株HN1202株、猪伪狂犬病病毒Fa株、猪伪狂犬病病毒Bartha K-61株、猪伪狂犬病病毒Bucharest株、猪伪狂犬病病毒HB-98株、猪伪狂犬病病毒SA215株、猪伪狂犬病病毒HN1201-R株。

猪伪狂犬病病毒株JS-2012株公开于免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定[J].童武，张青占，郑浩等，中国动物传染病学报2013,21(3):1-7；猪伪狂犬病病毒HeN1株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为CGMCCNO.6656，公开于中国专利申请CN102994458A；NVDC-PRV-BJ株、NVDCPRV-HEB株和NVDC-PRV-SD株公开于Pathogenic PseudorabiesVirus,Xiuling Yu,Zhi Zhou,Dongmei Hu,et al.China,2012EmergingInfectiousDiseases，www.cdc.gov/eid ol.20,No.1,January 2014；PRV TJstrain(PRV TJ株)，公开于Chun-Hua Wang,Jin Yuan,Hua-Yang Qin，et al，A novel gE-deleted pseudorabies virus(PRV)provides rapidandcomplete protection from lethal chal lenge with the PRV variantemerging in Bartha-K61-vaccinated swine population in China.Vaccine 32(2014):3379–3385中；猪伪狂犬病病毒变异株PRV-ZJ01，其保藏号为CGMCC No.8170，公开于中国专利申请CN103627678A；猪伪狂犬病病毒HN1201株(Pseudorabies virus,strain HN1201)保藏号为CCTCC NO.V 201311，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2013年5月20日；猪伪狂犬病病毒HN1202株(Pseudorabies virus,strain HN1202)保藏号为CCTCC NO.V201335，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2013年8月26日；猪伪狂犬病病毒Fa株公开于伪狂犬病毒Fa株gB_gC_gD基因的克隆与序列分析[J].陈振海等，福建农业学报2007，22(2)：120-125；猪伪狂犬病病毒Bartha K-61株公开于西班牙海博莱生物大药厂生产商品化疫苗；猪伪狂犬病病毒Bucharest株公开于硕腾公司生产商品化疫苗；猪伪狂犬病病毒HB-98株公开于武汉科前生产商品化疫苗；猪伪狂犬病毒SA215株公开于新型伪狂犬病病毒基因缺失株的构建及生物学特性研究(初报)[J].郭万柱等，四川农业大学学报2000，18(1)1-3；猪伪狂犬病病毒HN1201-R株(Pseudorabies virus,strain HN1201-R)保藏号为CCTCC NO.V201516，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2015年3月17日。

作为本发明的一种优选实施方式，在本发明的猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物中，所述组合物为猪伪狂犬病病毒HN1201株、HN1201-R株、Bartha K-61株、Bucharest株、HB-98株和SA215株减毒活疫苗组合物。

术语“治疗”指通过施用猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物使猪伪狂犬病毒相关疾病或猪伪狂犬病病毒感染引起的症状减轻或转好的所有行为。

本文所用的术语“猪伪狂犬病病毒相关疾病”用于指由猪伪狂犬病毒感染引起的疾病。它的例子包括发病仔猪表现出明显的神经症状、昏睡、呜叫、呕吐、拉稀、体温升高，一旦发病，怀孕母猪可发生流产、产木乃伊胎儿或死胎或繁殖障碍，但不限于此。

本文所用的术语“猪伪狂犬病病毒相关疾病”可以进一步用于指表现为任何年龄的猪都会感染，可在猪群水平传播，潜伏期短(1～2天)，发病率在10％～100％之间，发病猪死亡率在10％～100％之间(仔猪死亡率可高达100％)，感染后可引起猪只高热(40～42℃，持续3日以上)，呼吸困难，腹泻，喘，咳嗽，打喷嚏，后肢麻痹，犬坐，突然倒地，抽搐，侧卧不起，角弓反张，泳状划水，最后衰竭而死，并可引起种公猪精液质量下降，怀孕母猪流产(高达35％)，早产，死胎，弱仔(弱仔14日龄前全部死亡)等繁殖障碍症状，但不限于此。以及感染后会造成成年猪(体重在50kg以上猪)高热(40～42℃，持续3日以上)，呼吸困难，腹泻，喘，咳嗽，打喷嚏，后肢麻痹，犬坐，突然倒地，抽搐，侧卧不起，角弓反张，泳状划水，最后衰竭而死；新生及4周龄以内的仔猪突然发病，发生大批死亡，死亡率达90％以上；发病仔猪主要表现为体温上升达41℃以上，食欲废绝，伴有明显的神经症状和腹泻；断奶前后仔猪主要为呼吸系统症状，表现呼吸困难、咳嗽、流鼻涕等。

本发明具有治疗作用的疫苗组合物可包括一种或多种可兽用载剂。本文所用“可兽用载剂”包括任何即全部溶剂、分散介质、涂布剂、佐剂、稳定剂、稀释剂、防腐剂、抗细菌及抗真菌剂、等渗剂、吸附延迟剂及诸如此类。

本领域技术人员容易理解，本发明具有治疗作用的疫苗组合物可纳入已知可注射用生理学上可接受的无菌溶液。另外，本发明具有治疗作用的疫苗组合物可包括稀释剂、等渗剂、稳定剂或佐剂。稀释剂可包括水、盐水、葡萄糖、乙醇、甘油及诸如此类。等渗剂可尤其包括氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇及乳糖。稳定剂尤其包括白蛋白及乙二胺四乙酸的碱金属盐。

本文所用“佐剂”可包括氢氧化铝及磷酸铝；皂苷，例如Qui l A、QS-21(Cambridge Biotech公司，Cambridge MA)、GPI-0100(GalenicaPharmaceuticals公司，Birmingham，AL)；油包水乳液；水包油乳液；水包油包水乳液。该乳液可尤其基于轻质液体石蜡油(欧洲药典类型(European Pharmacopea type))；类异戊二烯油，例如由烯烃(尤其系异丁烯或癸烯)寡聚产生之角鲨烷或角鲨烯油；含有直链烷基之酸或醇之酯，更具体而言为植物性油、油酸乙酯、丙二醇二-(辛酸酯/癸酸酯)、甘油三-(辛酸酯/癸酸酯)或丙二醇二油酸酯；具支链脂肪酸或醇之酯，尤其系异硬脂酸酯。油可与乳化剂组合使用以形成乳液。乳化剂优选系非离子型表面活性剂，具体而言系山梨醇酐、二缩甘露醇(例如无水甘露醇油酸酯)、二醇、聚甘油、丙二醇与油酸、异硬脂酸、蓖麻油酸或羟基硬脂酸之视情况经乙氧基化之酯，及聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物嵌段，具体而言系普流尼克(Pluronic)产品，尤其系L121。参见Hunter等人，The Theory and Practical Application ofAdjuvants(Ed.Stewart-Tull，D.E.S.).John Wiley and Sons，NY，第51-94页(1995)及Todd等人，Vaccine 15：564-570(1997)。

其它适宜佐剂尤其包括(但不限于)RIBI佐剂系统(Ribi公司)、嵌段共聚物(CytRx，Atlanta GA)、SAF-M(Chiron，Emeryville CA)、单磷酰脂质A、阿夫立定(Avridine)脂质-胺佐剂、自大肠杆菌(E.coli)(重组的或其它方式)之不耐热肠毒素、霍乱毒素、IMS 1314或胞壁酰二肽。

另外，该组合物可包括一或多种可药用载剂。本文所用“可药用载剂”包括任何及全部溶剂、分散介质、涂布剂、稳定剂、稀释剂、防腐剂、抗细菌及抗真菌剂、等渗剂、吸附延迟剂及诸如此类。

所述组合物可进一步包括一种或多种其它免疫调节剂，例如白介素、干扰素或其它细胞因子。所述组合物亦可包括庆大霉素(Gentamicin)及硫柳汞(Merthiolate)。

本发明具有治疗作用的疫苗组合物施用方式包括经真皮内、经气管内或经直肠内施用。优选可经肌肉或经鼻内施用，最优选为经肌内施用。在动物体内，可证明经由静脉内或藉由直接注射至目标组织中来施用所述上述疫苗组合物是有利的。对于全身施用，静脉内、血管内、肌内、鼻内、动脉内、腹膜内、口服是优选的。更局部施用可经皮下、经真皮内、经皮内、经心脏内、经髓内、经肺内或直接在或靠近拟治疗的组织(结蹄组织、神经组织、肌肉组织)实现。根据治疗所期望的持续时间及有效性，本发明具有治疗作用的疫苗组合物施用次数为一次或数次，亦可间歇施用，例如以每日计投与数天、数周或数月且以不同剂量。

本发明具有治疗作用的疫苗组合物还可用于治疗动物个体中或动物群体的猪繁殖与呼吸综合征病毒感染。

所述“猪繁殖与呼吸综合征病毒感染”包括猪繁殖与呼吸综合征病毒所引起的相关症状：自由咳嗽及呼吸困难、生长缓慢、饲料效率降低、昏睡、厌食或在肥育中期至后期死亡率显著增加。

本发明具有以下突出优点：

本发明提供了一种治疗猪伪狂犬病的与现有技术不同的技术手段，有效减轻猪伪狂犬病毒感染的各种临床症状的严重性及降低死亡率，具有积极的意义；

令人意外的是本发明具有治疗作用的疫苗组合物还可用于治疗动物个体中或动物群体的猪繁殖与呼吸综合征病毒感染，对猪繁殖与呼吸综合征病毒所引起的相关症状：自由咳嗽及呼吸困难、生长缓慢、饲料效率降低、昏睡、厌食或在肥育中期至后期死亡率显著增加等方面有显著的治疗作用，对于临床具有积极的指导意义。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1猪伪狂犬病病毒活疫苗Bartha K-61株治疗试验

将21日龄PRV抗体阴性仔猪14头随机分成2组，第1组10头，第2组4头，将猪伪狂犬病病毒Bartha株病毒液2.8×10^9.0TCID₅₀剂量稀释后喷雾感染猪群，第2天出现临床症状，分别采集各猪只鼻拭子，并对第一组进行接种猪伪狂犬病病毒活疫苗Bartha K-61株(西班牙海博莱生物大药厂生产，批次77BN)两头份，每天固定时间观察临床状况。

结果显示，第1组接种组接种当天死亡2头，第2天死亡1头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第2组在感染后第2天死亡1头，第3天全部死亡，有明显的临床体征。具体结果见表1。

表1猪伪狂犬病病毒活疫苗Bartha K-61株治疗试验结果

组别	感染方式	仔猪数	鼻拭子阳性率	治疗剂量	存活数	保护率(％)
							1	喷雾	10	10/10	2头份	7	70
2	喷雾	4	4/4	—	0	0

通过比较两组仔猪的最终存活情况，明显可以看出，猪伪狂犬病病毒活疫苗对感染猪伪狂犬病毒的猪只有治疗作用，可以作为解决感染猪伪狂犬病的一种技术手段。

实施例2猪伪狂犬病病毒活疫苗Bucharest株治疗试验

将21日龄PRV抗体阴性仔猪14头随机分成2组，第1组10头，第2组4头，将猪伪狂犬病病毒Bartha株病毒液2.8×10^9.0TCID₅₀剂量稀释后喷雾感染猪群，第2天出现临床症状，分别采集各猪只鼻拭子，并对第一组进行接种猪伪狂犬病病毒活疫苗Bucharest株(硕腾美国公司林肯厂生产，批次A407908)两头份，每天固定时间观察临床状况。

结果显示，第1组接种组接种当天死亡2头，第2天死亡2头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第2组在感染后第2天死亡1头，第3天全部死亡，有明显的临床体征。具体结果见表2。

表2猪伪狂犬病病毒活疫苗Bucharest株治疗试验结果

组别	感染方式	仔猪数	鼻拭子阳性率	治疗剂量	存活数	保护率(％)
							1	喷雾	10	10/10	2头份	6	60
2	喷雾	4	4/4	—	0	0

通过比较两组仔猪的最终存活情况，明显可以看出，猪伪狂犬病病毒活疫苗对感染猪伪狂犬病病毒的猪只有治疗作用。

实施例3猪伪狂犬病病毒活疫苗HB-98株治疗试验

将21日龄PRV抗体阴性仔猪44头随机分成5组，第1-4组10头，第5组4头，将猪伪狂犬病病毒鄂A株病毒液8.8×10^9.0TCID₅₀剂量稀释后喷雾感染猪群，第2天出现临床症状，分别采集各猪只鼻拭子，并对第一组进行接种猪伪狂犬病病毒活疫苗HB-98株(武汉科前生产，批次150105)1头份，第二组接种1.5头份。第三组接种2头份，第四组接种3头份，每天固定时间观察临床状况。

结果显示，第1组接种当天死亡3头，第2天死亡5头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第2组接种当天死亡3头，第2天死亡2头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第3组接种当天死亡2头，第2天死亡2头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第4组接种当天死亡2头，第2天死亡2头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第5组在感染后第2天死亡1头，第3天全部死亡，有明显的临床体征。具体结果见表3。

表3猪伪狂犬病病毒活疫苗HB-98株治疗试验结果

组别	感染方式	仔猪数	鼻拭子阳性率	治疗剂量	存活数	保护率(％)
							1	喷雾	10	10/10	1头份	2	20
2	喷雾	10	10/10	1.5头份	5	50
							3	喷雾	10	10/10	2头份	6	60
4	喷雾	10	10/10	3头份	6	60
							5	喷雾	4	4/4	—	0	0

通过比较各组仔猪的最终存活情况，明显可以看出，猪伪狂犬病病毒活疫苗对感染猪伪狂犬病病毒的猪只有治疗作用，而且发现，治疗剂量对治疗效果有着一定的影响。

实施例4猪伪狂犬病病毒HN1201-R株弱毒活疫苗的制备

1.病毒的增殖

猪伪狂犬病病毒HN1201-R株为猪伪狂犬病病毒HN1201株通过自然传代方式致弱获得的减毒疫苗株，保藏号为CCTCC NO.V 201516，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2015年3月17日。将猪伪狂犬病病毒HN1201-R株病毒接种于已长成单层的ST细胞，吸附1h后，加入1000ml含2％胎牛血清的DMEM培养液，置37℃温室中转瓶培养，转速为6转/小时。待80％细胞病变后，反复冻融2次，收获病毒，测定病毒滴度，置低温保存。

2.稳定剂的配制

每100ml去离子水中加蔗糖40g，明胶8g，充分融化后，置高压蒸气灭菌(121℃30min)。

3.疫苗的制备

将上述制备并保存的病毒液与稳定剂按1:1(体积比)混合，冻干。疫苗含量具体配比见表4。

表4猪伪狂犬病病毒HN1201-R株弱毒活疫苗含量配比

	疫苗1(TCID50)
		HN1201-R株抗原	106.0
保护剂(V/V)	50％

实施例5猪伪狂犬病病毒HN1201-R株弱毒活疫苗治疗试验

将21日龄PRV抗体阴性仔猪14头随机分成2组，第1组每组10头，第2组4头，将猪伪狂犬病病毒HN1201株病毒液2.8×10^9.0TCID₅₀剂量稀释后喷雾感染猪群，第2天出现临床症状，分别采集各猪只鼻拭子，并对第1组进行接种实施例4制备的猪伪狂犬病病毒活疫苗HN1201株两头份，每天固定时间观察临床状况。

结果显示，第1组接种组接种当天死亡2头，第2天死亡1头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第2组在感染后第2天死亡2头，第3天全部死亡，有明显的临床体征。具体结果见表5。

表5猪伪狂犬病病毒活疫苗HN1201-R株治疗试验结果

组别	感染方式	仔猪数	鼻拭子阳性率	治疗剂量	存活数	保护率(％)
							1	喷雾	10	10/10	2头份	7	70
2	喷雾	4	4/4	—	0	0

通过比较两组仔猪的最终存活情况，明显可以看出，猪伪狂犬病病毒活疫苗对感染猪伪狂犬病病毒的猪只有治疗作用。

实施例6猪伪狂犬病病毒弱毒活疫苗治疗效果比较试验

将21日龄PRV抗体阴性仔猪44头随机分成5组，第1-4组10头，第5组4头，将猪伪狂犬病病毒HN1201株病毒液8.8×10^9.0TCID₅₀剂量稀释后喷雾感染猪群，第2天出现临床症状，分别采集各猪只鼻拭子，并对第1组进行接种猪伪狂犬病病毒活疫苗Bartha K-61株(西班牙海博莱生物大药厂生产，批次77BN)两头份，第2组进行接种猪伪狂犬病病毒活疫苗Bucharest株(硕腾美国公司林肯厂生产，批次A407908)两头份，第3组进行接种猪伪狂犬病病毒活疫苗HB-98株(武汉科前生产，批次150105)2头份，第4组进行接种实施例4制备的猪伪狂犬病病毒活疫苗HN1201-R株两头份，每天固定时间观察临床状况。

结果显示，第1组接种组接种当天死亡3头，第2天死亡3头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第2组接种组接种当天死亡3头，第2天死亡3头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第3组接种组接种当天死亡2头，第2天死亡3头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第4组接种组接种当天死亡2头，第2天死亡1头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第5组在感染后第2天死亡1头，第3天全部死亡，有明显的临床体征。具体结果见表6。

表6猪伪狂犬病病毒弱毒活疫苗治疗效果比较试验结果

组别	感染方式	仔猪数	鼻拭子阳性率	治疗剂量	存活数	保护率(％)
							1	喷雾	10	10/10	2头份	4	40
2	喷雾	10	10/10	2头份	4	40
							3	喷雾	10	10/10	2头份	5	50
4	喷雾	10	10/10	2头份	7	70

5

喷雾

4

4/4

—

0

0

通过比较各组仔猪的最终存活情况，明显可以看出，不同来源的猪伪狂犬病病毒活疫苗对感染猪伪狂犬病毒的猪只具有不同程度的治疗作用；尤其是猪伪狂犬病病毒HN1201-R株活疫苗，治疗作用最为明显，疗效最佳。

实施例7猪伪狂犬病病毒HN1201-R株弱毒活疫苗治疗广谱性试验

将21日龄PRV抗体阴性仔猪42头随机分成6组，第1、3、5组各10头，第2、4、6组各4头，将猪伪狂犬病病毒Bartha株病毒液2.8×10^9.0TCID₅₀剂量稀释后喷雾感染猪群第1组和第2组，将猪伪狂犬病病毒鄂A株病毒液2.8×10^9.0TCID₅₀剂量稀释后喷雾感染猪群第3组和第4组，将猪伪狂犬病病毒HN1201株病毒液2.8×10^9.0TCID₅₀剂量稀释后喷雾感染猪群第5组和第6组。观察各组情况，各组第2天均出现不同程度的临床症状，分别采集各猪只鼻拭子，并对第1组、第3组和第5组进行接种实施例4制备的猪伪狂犬病病毒活疫苗HN1201-R株两头份，每天固定时间观察临床状况。

结果显示，第1组接种组接种当天死亡2头，第2天死亡1头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第3组接种组接种当天死亡2头，第2天死亡1头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第5组接种组接种当天死亡2头，第2天死亡1头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；第2组在感染后第2天死亡1头，第3天全部死亡，有明显的临床体征；第4组在感染后第2天死亡1头，第3天全部死亡，有明显的临床体征；第6组在感染后第2天死亡2头，第3天全部死亡，有明显的临床体征。具体结果见表7。

表7猪伪狂犬病病毒HN1201-R株弱毒活疫苗治疗广谱性试验结果

通过比较各组仔猪的最终存活情况，明显可以看出，猪伪狂犬病病毒活疫苗对感染猪伪狂犬病毒的猪只有治疗作用，而且发现，猪伪狂犬病病毒HN1201-R株弱毒活疫苗对不同来源的猪伪狂犬病病毒感染的猪只均具有良好的治疗作用，对市场的广泛推广及应用具有积极的意义。

实施例8猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物的应用试验

此研究包括刚出生的231头仔猪，将这些仔猪按窝隔离，并分为两组，即疫苗治疗组(180头)、对照组(51头)。

A组：在研究当天(第0天)，对1日龄的仔猪进行单次接种实施例4制备的猪伪狂犬病病毒活疫苗HN1201-R株两头份。

B：对照组为未经治疗的仔猪。

一周后研究终止。

所记录参数如下：

(1)临床表现(所有动物)

(2)死亡率(所有动物)

(3)尸检(若可能，每一只死亡或处死动物)

养猪场发病情况

一日龄部分仔猪开始不停拉稀，走路有轻微异样。根据母猪饲养及农场免疫程序，并通过对仔猪排泄物进行鉴定，确定为伪狂犬病毒感染。

结果

自研究起始至研究结束，疫苗治疗组接种当天死亡15头，第二天死亡6头，其他猪只出现临床体征在3天后逐步恢复正常，最终存活；

对照组在研究当天死亡20头，第二天死亡20头，有明显的临床体征。

具体结果见表8。

表8猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物的应用试验结果

通过比较各组仔猪的最终存活情况，以及临床体征变化，A组治疗组除了有两窝仔猪A6和A11没有感染病毒以及B组对照组除了B4没有感染病毒存活外，其他各窝采集鼻拭子均呈现阳性；在临床表现方面，所有感染猪只，对照组和治疗组有类似的临床表现，体温升高、精神沉郁、拉稀、走路异样，通过对死亡猪只进行尸检，死亡猪只均为典型的猪伪狂犬病毒感染，不同的是，对照组和治疗在进行治疗后，临床症状差异明显，对照组临床症状逐渐加重，所有感染猪只均出现死亡情况，而治疗组在进行治疗后2天就逐渐好转，3天大部分感染猪只痊愈；整个试验过程中，对照组猪只比治疗组猪只显著较高的死亡率，对照组平均78.43％死亡率(感染猪只全部死亡)，治疗组仅仅为11.67％死亡率，下降了85.12％。

证明了猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物对猪伪狂犬病病毒感染具有良好的治疗作用，能显著降低死亡率，提高存活数，有效减轻猪伪狂犬病毒感染的各种临床症状的严重性，提供了一种治疗猪伪狂犬病的技术手段，具有积极的意义。

实施例9猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物在治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒感染方面的应用

此试验中包括463头商品猪，将这些猪按照体重、以及是否一窝所生区分开，随机分为2组，即疫苗治疗组(236头猪)A、对照组(227头猪)B。

A组:在试验开始当天(第0天)，对约14日龄的猪进行单次接种实施例4制备的猪伪狂犬病病毒活疫苗HN1201-R株两头份。

B组:对照组为未经治疗的猪。

在肥育结束时(试验第24周)终止试验。

所记录的参数

参数记录如下：

(1)个体体重(所有动物)

(2)僵猪率(所有动物)

(3)临床表现(所有动物)

(4)死亡率(所有动物)

(5)尸检(若可能，每一只死亡或处死动物)

根据饲养及肥育农场的发病史，动物自育肥中期开始出现呼吸道症状。这些症状伴有肥育期间的体重增加程度降低(ADWG 700-740g)及死亡率增加(7.4％-8.6％)。此时被认为涉及的病原体为主要为PRRSV。有趣的是，在此试验的结果表明，PRRSV的感染在呼吸道症状出现前约4-6周被检测到，可能是猪群中存在早期潜伏感染造成的。

结果

体重、体重增加、平均每日体重增加(ADWG)

在试验起始时疫苗治疗组和对照组体重相当。在试验至第17周及第24周时，疫苗治疗组的体重显著高于对照组的体重(分别为p＝0.0005及p＜0.0001)。自试验起始至第24周，疫苗治疗组动物比对照组动物多增重4.8kg。此对应于，从试验起始至第17周时，疫苗治疗组动物的ADWG较对照组高16.4g/d，至第24周时疫苗治疗组动物的ADWG较对照组高24.3g/d。对于整个肥育期(第10-24周)而言，ADWG可从对照组动物的730.6g/d增加至疫苗治疗组动物的782.1g/d，具体情况见表9。

表9疫苗治疗组和对照组体重增长情况

*表示组间比较t检验之p值，ns表示差异不显著，***表示差异显著，p≤0.001表示差异极显著。

僵猪率

在任一称重时间点，未在疫苗治疗组与对照组之间观测到僵猪率的显著差异。治疗组和对照组的僵猪率都较低(2.7％-4.4％)。

临床表现

对照组和疫苗治疗组有类似的临床表现，跛行、腹泻(在4％-6％的动物中)。这些表现在对照组和疫苗治疗组中出现频率相等。对死亡动物进行尸检且随后进行微生物学检验发现，猪链球菌可能是引起跛行的感染性病原体，溶血性大肠杆菌可能是腹泻的原因。此外，对照组在12-24周呼吸道症状明显(在17-22％的动物中)，咳嗽、呼吸困难，严重的猪只呈犬坐呼吸。与对照组相比，疫苗治疗组猪只中咳嗽及呼吸困难的频率分别降低32％及35.3％。表明疫苗治疗组对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染具有较好的治疗效果。

死亡率

整个试验过程中，对照组猪只具有比疫苗治疗组猪只显著较高的死亡率(疫苗治疗组动物：2.12％)。疫苗接种组猪只的死亡率比对照组猪只下降58.2％。

本实施例在肥育后期有典型呼吸道症状的农场进行。猪在12-19周龄时发展出呼吸道症状、死亡率增加、且体重增加幅度减小。通过血清学及微生物学筛查发现，猪繁殖与呼吸综合征参与其中。

与对照组相比，疫苗治疗组的以下统计学显著表现值得注意：

-增重损失减小

-死亡率降低

-咳嗽及呼吸困难减少

如所预期，僵猪率未观测到统计学显著差异，因为僵猪的出现并非猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的典型表现。

将这些表现汇总能得出以下结论：

1、本实验在肥育中受猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的畜群中进行，观测到呼吸道症状、增重损失及死亡率增加。

2、猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物对动物进行疫苗接种可降低或甚至防治猪繁殖与呼吸综合征病毒感染引起的各种症状，能显著降低死亡率，减小增重损失，有效减轻咳嗽及呼吸困难症状，具有良好的治疗作用，对于临床具有积极的指导意义。

以上所述仅是本发明的优选实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，虽然本发明已以优选实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物的用途，所述疫苗组合物是用于治疗动物个体中或动物群体的猪伪狂犬病病毒感染的药物，其中对有需要的动物施用治疗有效量的该药物。

2.根据权利要求1所述的猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物的用途，其特征在于，所述治疗有效量为不小于猪伪狂犬病病毒活疫苗猪用预防免疫标准的1.5倍；优选地，所述治疗有效量为猪伪狂犬病病毒活疫苗猪用预防免疫标准的1.5倍～3倍；更优选地，所述治疗有效量为猪伪狂犬病病毒活疫苗猪用预防免疫标准的2倍。

3.根据权利要求1所述的猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物的用途，其特征在于，所述猪伪狂犬病病毒活疫苗为自然缺失毒性基因的自然缺失株或人工缺失毒性基因的基因变异株。

4.根据权利要求3所述的猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物的用途，其特征在于，所述猪伪狂犬病病毒活疫苗为猪伪狂犬病活疫苗Bartha K-61株、猪伪狂犬病活疫苗Bucharest株、猪伪狂犬病活疫苗HB-98株、猪伪狂犬病活疫苗SA215株中一种或多种，以及猪伪狂犬病病毒JS-2012株、猪伪狂犬HeN1株、NVDC-PRV-BJ株、NVDC-PRV-HEB株、NVDC-PRV-SD株、PRV TJ株、猪伪狂犬病毒变异株PRV-ZJ01、猪伪狂犬病毒变异株HN1201株、猪伪狂犬病毒变异株HN1202株、猪伪狂犬病病毒Fa株通过自然缺失毒性基因或人工缺失毒性基因而得到的弱毒疫苗株制备的猪伪狂犬病病毒活疫苗；优选地，所述猪伪狂犬病病毒活疫苗为猪伪狂犬病活疫苗HN1201-R株。

5.根据权利要求1所述的猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物的用途，其特征在于，所述的猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物包含至少一种选自兽医学上可接受的载体、可药用的载体及免疫调节剂组成的额外组分。

6.根据权利要求1-5任一项所述的用途，其特征在于，所述施用选自：皮内、气管内、直肠内；优选地，所述施用选自：肌肉、鼻内。

7.根据权利要求1-6任一项所述的用途，其特征在于，所述施用动物为猪。

8.根据权利要求1-7任一项所述的用途，其特征在于，所述猪伪狂犬病病毒感染包括猪伪狂犬病病毒所引起的相关症状：发病仔猪表现出明显的神经症状、昏睡、呜叫、呕吐、拉稀、体温升高，怀孕母猪流产、产木乃伊胎儿或死胎或繁殖障碍。

9.猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物的用途，其特征在于，所述用途还包括用于治疗动物个体中或动物群体的猪繁殖与呼吸综合征病毒感染。

10.根据权利要求9所述的猪伪狂犬病病毒活疫苗组合物的用途，其特征在于，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒感染包括猪繁殖与呼吸综合征病毒所引起的相关症状：自由咳嗽及呼吸困难、生长缓慢、饲料效率降低、昏睡、厌食或在肥育中期至后期死亡率显著增加。