CN106310216A

CN106310216A - 吉林人参低聚肽在制备增强免疫力的食品或保健食品中的用途

Info

Publication number: CN106310216A
Application number: CN201510357189.4A
Authority: CN
Inventors: 李勇; 王军波; 石丰
Original assignee: Jilin Peptide Valley Bioengineering Co Ltd
Current assignee: Jilin Peptide Valley Bioengineering Co Ltd
Priority date: 2015-06-26
Filing date: 2015-06-26
Publication date: 2017-01-11
Also published as: WO2016206362A1

Abstract

本发明公开了吉林人参低聚肽在制备增强免疫力的食品或保健食品中的用途。吉林人参低聚肽是从吉林人参中利用生物酶解技术得到的小分子生物活性肽的混合物。吉林人参低聚肽易吸收、吸收快且黏度低，生物利用率高。本发明发现了吉林人参低聚肽可以通过增强细胞免疫功能和体液免疫功能，提高特异性免疫功能，通过增强单核-巨噬细胞吞噬功能，提高非特异性免疫功能，从而起到增强免疫力的作用，可用于制备增强免疫力的食品或保健食品，并为通过饮食来增强免疫力提供了一种新途径。

Description

吉林人参低聚肽在制备增强免疫力的食品或保健食品中的用途

技术领域

本发明涉及吉林人参低聚肽的一种新用途，具体来说是吉林人参低聚肽在制备增强免疫力的食品或保健食品中的用途。

背景技术

人体的免疫系统是人体抵御病原菌侵犯，保持健康、避免发生各种疾病的防御系统。其基本功能主要表现在四个方面：免疫防御、免疫监视、免疫耐受和免疫调节。随着现代生活节奏加快、工作压力加大以及工业化生产对环境的破坏、雾霾等恶劣天气的产生，使得人类免疫系统功能降低，各种疾病的发病率均呈上升趋势。而许多疾病的发生、发展与机体免疫系统的功能失调和免疫功能缺陷有着密切的联系。为此，从调节患者免疫功能着手，以防治机体疾病的发生发展为目标，受到各界广泛的重视。所以免疫调节剂已成为各国医药工作者研究的重点。虽然一些药物制剂临床研究较多，但长期服用容易产生副作用。因此寻找一种安全、有效、天然的免疫调节辅助剂显得尤为迫切。

生物机体内存在着天然的肽类分子，对机体的正常生命活动不可或缺，由于其具有生物活性，因此将这些参与机体的生命活动的肽类分子又称为生物活性肽。肽在分子结构上处于氨基酸和蛋白质的中间位置，它具有氨基酸和蛋白质所不能替代的功能。低聚肽，又称为活性小分子肽，一般由10个或10个以下氨基酸组成，其生物学意义主要在于吸收机制优于氨基酸，且能直接参与蛋白质的合成；另外，肽类具有的独特而广泛的生理调节功能，如类吗啡样活性、激素和调节激素的活性，可以增强免疫、降血压、降血脂、降血糖、消除疲劳、抗肿瘤、延缓衰老、抗氧化、调节内分泌、促进矿物质吸收等。目前生物活性肽以其高效、安全的特点异军突起，逐渐显示出其在临床营养中的重要作用和广泛的应用前景。

作为我国传统的名贵中草药的人参，其含有的多种活性成分日益受到人们的关注，研究也遍布全球，每隔几年都会在我国、韩国和日本举办国际人参研究学术讨论会。据报道，世界人参的四大家族为中国的吉林人参、朝鲜的高丽参、日本的东洋参、加拿大和美国的西洋参。而我国是世界上最大的人参生产国，年产鲜参2.28万吨，占世界总产量的48％左右，所以研究和开发人参的保健作用将为我国产生巨大的经济效益。我国的人参为五加科植物人参的干燥根及根茎，主要产于吉林省。自2012年9月4日，我国卫生部批准人参成为新资源食品，人参的应用将由单一的中药材及保健产品拓展到食品、饮料等领域，这为我国的人参产业发展提供了新的契机。人参具有大补元气、生津止渴、安神等功效。近年来，大量药理研究、临床观察和流行病学调查研究均证实人参具有改善微循环、提高组织抗缺氧能力、抑制血小板聚集、增强免疫力、改善记忆力、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗疲劳等多种生物活性，对治疗心血管疾病和糖尿病等都有较好疗效。人参的化学成分极为复杂，目前的研究多集中于人参皂甙，而对人参中的重要成分低聚肽类的研究较少，其在增强免疫力食品或保健食品中的应用未见报道。人参低聚肽在人体内吸收快，因而可避免活性物质的浪费，大大提高其生理调节作用，故可作为一种新型的具有增强免疫力的食品或保健食品的主要配料。

发明内容

本发明的目的在于提供一种低黏度、易吸收且吸收快的吉林人参低聚肽在制备增强免疫力食品或保健食品中的用途，为通过饮食来增强免疫力提供一种新途径。

其中所述的食品为粉剂、液体饮料、奶粉及奶制品或烘焙制品。

其中所述的保健食品为粉剂、片剂、软/硬胶囊或口服液。

本发明发现了现有物质——吉林人参低聚肽具有增强免疫力的功能，发现了其在制备增强免疫力的食品或保健食品中的用途。动物实验发现补充吉林人参低聚肽能够通过增强实验小鼠细胞免疫功能和体液免疫功能，提高其特异性免疫功能，通过增强单核-巨噬细胞吞噬功能，提高其非特异性免疫功能，从而起到增强免疫力的作用，表明其具有显著的增强免疫力的功效。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，这些实例应被理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。

实施例1、对实验小鼠增强免疫力的研究

一、材料和方法

样品：吉林人参低聚肽(GOP)，由吉林肽谷生物工程有限责任公司生产，淡黄色固体粉末，主要成分为相对分子质量小于1000的小分子寡肽，含量为93.45％，游离氨基酸占3.94％。

实验动物：健康清洁级balb/c雌性小鼠280只，6～8周龄，体重18～22g，由北京大学医学部实验动物中心提供。实验动物分笼饲养，每笼5只，自由饮食、饮水。动物饲养实验室符合国标清洁级，温度范围25℃±1℃，相对湿度50％～60％，室内照明控制在12h/12h光暗周期节律。

二、实验方法

剂量及分组：balb/c雌性小鼠280只，实验前称小鼠体重，按体重随机分为7组，每组40只。设立空白对照组、乳清蛋白对照组(0.15g/kg BW)及5个吉林人参低聚肽剂量组(GOP0.0375、0.075、0.15、0.3、0.6g/kg BW)，各组动物再分为4个亚组，每组10只。空白对照组小鼠灌胃蒸馏水，其余各组灌胃相应浓度的乳清蛋白及吉林人参低聚肽的水溶液。各组小鼠均给以普通饲料，自由进食和饮水。每天灌胃1次，连续灌胃30d，参照《保健食品检验与评价技术规范(2003年版)》进行下列实验。

1)迟发型变态反应、血清溶血素的测定、抗体生成细胞检测

取各组第1亚组10只小鼠，试验26d时腹腔注射0.2mL 2％(V/V)SRBC进行免疫，30d时测量左后足跖部厚度，然后在测量部位皮下注射20μL 20％(V/V)SPBC，注射后24h测量左后足跖部厚度，同一部分测3次，取平均值，观察迟发型变态反应能力(足跖增厚法)。之后摘除眼球采血于离心管内，放置约1h，2000r/min离心10min，收集血清，进行血清溶血素[半数溶血值(HC50)法]测定。小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，采用Jerne改良玻片法进行抗体生成细胞检测。

2)小鼠碳廓清实验

取各组第2亚组10只小鼠，按体重从小鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁(100ml/kg)，待墨汁注入立即计时。注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μL，并立即将其加到2mL0.1％Na₂CO₃溶液中。用721分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD)，以Na₂CO₃溶液作空白对照。将小鼠处死，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，分别称重。计算吞噬指数，来表示小鼠碳廓清的能力。

3)ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞活性测定

取各组第3亚组10只小鼠，无菌取脾，至于盛有适量无菌Hank’s液平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hank’s液洗2次(每次1000r/min离心10min)。将细胞悬浮于1mL的RPMI1640完全培养液(含10％小牛血清)中，用1％冰醋酸稀释后计数(活细胞数应在95％以上)，用台盼兰染色计数活细胞数(应在95％以上)。最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×10⁷个/mL，采用乳酸脱氢酶法进行NK细胞活性检测；调整细胞浓度为3×10⁶个/mL，采用MTT法进行淋巴细胞增殖能力的检测。

4)小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验

取各组第4亚组10只小鼠，每鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1mL。间隔30min，颈椎脱臼处死动物，经腹腔注入生理盐水2mL，轻揉腹部20次后，切开腹壁吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移至37℃CO₂培养箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％(V/V)Giemsa-磷酸缓冲液染色30min，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数巨噬细胞，每张片计数100个，计算吞噬百分率和吞噬指数。

统计方法：所有实验数据均以平均值±标准差表示。采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析，差异显著者进行方差齐性检验，方差齐者以LSD法对多组均数进行post-hoc分析，方差不齐者以Dunnett's T3法对多组均数进行post-hoc分析。以P＜0.05为差异显著性标准。

三、实验结果

1)吉林人参低聚肽对小鼠体重和免疫器官指数的影响

试验期间通过灌胃方式补充吉林人参低聚肽未产生任何死亡率。

由表1可知，各组之间初始体重、终期体重无显著差异(P＞0.05)。GOP 0.0375、0.3g/kgBW组小鼠脾脏指数显著高于空白对照组(P＜0.05)，但与乳清蛋白对照组差异不显著(P＞0.05)。GOP 0.3g/kg BW组小鼠胸腺指数显著高于空白对照组和乳清蛋白对照组(P＜0.05)，GOP 0.15g/kg BW组小鼠胸腺指数显著乳清蛋白对照组(P＜0.05)，但与对照组差异不显著(P＞0.05)。

表1 吉林人参低聚肽对小鼠体重和免疫器官指数的影响(n＝10)

注：乳清蛋白对照，剂量为0.15g/kg BW。*表示与空白对照组相比差异显著(P＜0.05)，#表示与乳清蛋白对照组相比差异显著(P＜0.05)。

脾脏指数：脾脏/体重；胸腺指数：胸腺/体重。

2)吉林人参低聚肽对小鼠细胞免疫功能的影响

本研究通过ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖实验和迟发型变态反应实验对吉林人参低聚肽在小鼠细胞免疫功能中的作用进行了观察，结果见表2。

由表2可知，与空白对照组比较，GOP 0.15、0.3g/kg BW显著提高了ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力和迟发型变态反应能力(足趾肿胀度)(P＜0.05)，且GOP 0.3g/kg BW组显著优于乳清蛋白对照组(P＜0.05)。同时，吉林人参低聚肽其他剂量也均显著提高了小鼠迟发型变态反应能力(P＜0.05)；且除最低剂量(0.0375g/kg BW)，其他剂量均显著优于乳清蛋白对照组(P＜0.05)。由此提示，吉林人参低聚肽具有促进小鼠细胞免疫功能的作用，且效果优于乳清蛋白。

表2 吉林人参低聚肽对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响(n＝10)

3)吉林人参低聚肽对小鼠体液免疫功能的影响

本研究中通过抗体生成细胞(IgM-PFC)和血清溶血素(HC50)含量的检测对吉林人参低聚肽在小鼠体液免疫功能中的作用进行了观察，结果见表3。

由表3可知，GOP 0.3、0.6g/kg BW组小鼠的抗体生成细胞数显著高于空白对照组和乳清蛋白对照组(P＜0.05)，GOP 0.0375、0.15g/kg BW组显著高于空白对照组(P＜0.05)，而乳清蛋白对照组与空白对照组差异不显著(P＞0.05)。乳清蛋白组和GOP 0.0375g/kg BW组小鼠血清溶血素含量显著高于空白对照组(P＜0.05)。由此说明，吉林人参低聚肽可增强小鼠体液免疫功能，且效果优于乳清蛋白。

表3 吉林人参低聚肽对小鼠体液免疫功能的影响(n＝10)

4)吉林人参低聚肽对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

本研究通过小鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验观察了吉林人参低聚肽对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响，结果如表4所示。

由表4可知，与空白对照组比较，乳清蛋白、GOP 0.0375、0.075、0.15、0.3、0.6g/kg BW均可显著提高小鼠碳廓清能力(P＜0.05)。其中GOP 0.3、0.6g/kg BW组显著高于乳清蛋白对照组(P＜0.05)。

GOP 0.075、0.15、0.3g/kg BW组小鼠巨噬细胞吞噬率显著高于空白对照组和乳清蛋白对照组(P＜0.05)。GOP 0.075、0.15、0.3g/kg BW组小鼠巨噬细胞指数显著高于空白对照组(P＜0.05)，且GOP 0.075、0.3g/kg BW组小鼠巨噬细胞吞噬指数显著高于乳清蛋白对照组(P＜0.05)。

由此提示，吉林人参低聚肽可增强小鼠小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能，效果优于乳清蛋白。

表4 吉林人参低聚肽对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响(n＝10)

5)吉林人参低聚肽对小鼠NK细胞活性的影响

由表5可知，GOP 0.0375、0.075g/kg BW组小鼠NK细胞活性显著高于空白对照组和乳清蛋白组(P＜0.05)，GOP0.15g/kg BW组小鼠NK细胞活性有高于空白对照组的趋势(P＜0.10)，而乳清蛋白对照组与空白对照组差异不显著(P＞0.05)。由此说明GOP可以增强小鼠NK细胞活性。

表5 GOP对小鼠NK细胞活性的影响(n＝10)

四、实验结论

本研究通过设立空白对照组和乳清蛋白组作为对照组，探讨吉林人参低聚肽的增强免疫力的作用。结果表明，吉林人参低聚肽可以通过增强细胞免疫功能和体液免疫功能，提高特异性免疫功能，通过增强单核-巨噬细胞吞噬功能和NK细胞活性，提高非特异性免疫功能，从而起到增强免疫力的作用，具备作为一种新型免疫力增强制剂的潜力，其适宜浓度范围为每天0.0375～0.6g/kg BW。

Claims

1.吉林人参低聚肽在制备增强免疫力的食品或保健食品中的用途。

2.根据权利要求1所述的吉林人参低聚肽在制备增强免疫力的食品或保健食品中的用途，其特征在于：所述增强免疫力的食品为粉剂、液体饮料、奶粉及奶制品和烘焙制品。

3.根据权利要求1所述的吉林人参低聚肽在制备增强免疫力的食品或保健食品中的用途，其特征在于：所述增强免疫力的保健食品为粉剂、片剂、软/硬胶囊和口服液。