CN106282151A - 固定化脂肪酶、其用途及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及固定化脂肪酶、其用途及制备方法。具体而言,本发明固定化脂肪酶的特征包括(1)载体含有多孔无机材料和酯化淀粉,和/或(2)固定化脂肪酶含有涂膜剂,和/或(3)固定化脂肪酶采用挤压造粒方式制备得到。本发明固定化脂肪酶具有提高的酶活和延长的半衰期。
Description
技术领域
本发明涉及固定化脂肪酶、其用途及制备方法。
背景技术
脂肪酶是一种羧酸酯水解酶,能够作用于酰基甘油,起到释放脂肪酸和甘油的作用,作为重要的工业用酶广泛应用于食品、制革、饲料、洗涤及油脂化工等领域。但是脂肪酶价格较贵,以及在回收利用及稳定性上的问题使其在工业应用上受到限制。而固定化可以很好的解决这一问题。酶的固定化就是在催化过程中提高酶的稳定性和重复利用性的一种技术。经固定化后,脂肪酶具有稳定性高、连续性好、回收方便、易于控制、可反复使用、成本降低等优点,为大规模的工业应用提供了技术上和经济上的支持。
湿法混合制粒固定化酶是制粒与固定化过程同步进行的,使用载体、粘合剂和酶液在高速混合制粒机中进行制粒,该方法操作简单,效率高,制粒时间短,所制备的酶颗粒酶活稳定,易回收利用。并且该方法使用的载体成本很低,制备的酶颗粒成本也低,可以用于工业生产。如US 005776741A中,用二氧化硅做载体,明胶和聚乙烯吡咯烷酮做粘合剂,湿法混合制粒固定化酶。
本领域仍然需要酶活提高且半衰期延长的固定化脂肪酶及其制备方法。
发明内容
本发明第一方面提供一种固定化脂肪酶制品,所述固定化脂肪酶制品含有脂肪酶和载体,其中,所述载体包含酯化淀粉和多孔无机材料。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是液体脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是来自动物、植物或微生物的脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)、米根霉(Rhizopus oryzae)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、南极假丝酵母(Candida antarctica)、黑曲霉(Aspergillus niger)、伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)、皱褶假丝酵母(Candida rugosa)、产碱杆菌(Alcaligenes sp.)、爪哇毛霉(Mucor javanicus)、雪白根霉(Rhizopus niveus)中的任何一种或其基因改造菌种。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料选自活性炭、高岭土、多孔玻璃、氧化铝、羟基磷灰石和/或二氧化硅中的一种或几种,优选二氧化硅。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅选自白炭黑、硅胶、硅藻土中的一种或两种以上的混合物。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅的纯度为85%以上,优选90%以上,最优先95%以上。
在一个具体实施例中,所述酯化淀粉选自无机酸酯淀粉和有机酸酯淀粉。
在一个具体实施例中,所述酯化淀粉为有机酸酯淀粉,优选辛烯基琥珀酸酯淀粉、月桂酸酯淀粉、硬脂酸酯淀粉或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料与酯化淀粉的重量比为99.9:0.1~50:50,优选90:10~60:40,特别优选80:20~70:30。
在一个具体实施例中,所述载体平均粒径为10~60μm,优选20~50μm。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品还含有粘合剂。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和/或麦芽糊精。
在一个具体实施例中,所述粘合剂的总用量为载体质量的5%~35%,优选10%~30%,最优选15%~25%。
在一个具体实施例中,所述化学改性纤维素选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述麦芽糊精的DE值为10-30,优选16-20。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和麦芽糊精,其中,化学改性纤维素与麦芽糊精的质量比为1:99~99:1,优选10:90~50:50,最优选20:80~30:70。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品为颗粒形式,粒径为100~1000μm,优选300~700μm。
本发明第二方面提供一种固定化脂肪酶制品,所述固定化脂肪酶制品含有脂肪酶、载体和涂膜剂,其中,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐、乳清蛋白、分离蛋白和胶原蛋白中的一种或多种。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是液体脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是来自动物、植物或微生物的脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)、米根霉(Rhizopus oryzae)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、南极假丝酵母(Candida antarctica)、黑曲霉(Aspergillus niger)、伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)、皱褶假丝酵母(Candida rugosa)、产碱杆菌(Alcaligenes sp.)、爪哇毛霉(Mucor javanicus)、雪白根霉(Rhizopus niveus)中的任何一种或其基因改造菌种。
在一个具体实施例中,所述载体包含多孔无机材料。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料选自活性炭、高岭土、多孔玻璃、氧化铝、羟基磷灰石和/或二氧化硅中的一种或几种,优选二氧化硅。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅选自白炭黑、硅胶、硅藻土中的一种或两种以上的混合物。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅的纯度为85%以上,优选90%以上,最优先95%以上。
在一个具体实施例中,所述载体平均粒径为10~60μm,优选20~50μm。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐和胶原蛋白。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂的总用量为载体质量的1%~5%,优选2%~4%。
在一个具体实施例中,所述酪蛋白酸盐是酪蛋白酸钠,所述胶原蛋白是明胶。
在一个具体实施例中,所述明胶选自A型和B型明胶。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐(如酪蛋白酸钠)和胶原蛋白,其中,酪蛋白酸盐(如酪蛋白酸钠)与胶原蛋白(如明胶)的质量比为1:99~99:1,优选5:95~50:50,最优选10:90~20:80。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品还含有粘合剂。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和/或麦芽糊精。
在一个具体实施例中,所述粘合剂的总用量为载体质量的5%~35%,优选10%~30%,最优选15%~25%。
在一个具体实施例中,所述化学改性纤维素选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述麦芽糊精的DE值为10-30,优选16-20。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和麦芽糊精,其中,化学改性纤维素与麦芽糊精的质量比为1:99~99:1,优选10:90~50:50,最优选20:80~30:70。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品为颗粒形式,粒径为100~1000μm,优选300~700μm。
本发明第三方面提供一种固定化脂肪酶制品,所述固定化脂肪酶制品含有脂肪酶和载体,其中,所述固定化脂肪酶制品采用挤压造粒方式制备得到。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是液体脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是来自动物、植物或微生物的脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)、米根霉(Rhizopus oryzae)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、南极假丝酵母(Candida antarctica)、黑曲霉(Aspergillus niger)、伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)、皱褶假丝酵母(Candida rugosa)、产碱杆菌(Alcaligenes sp.)、爪哇毛霉(Mucor javanicus)、雪白根霉(Rhizopus niveus)中的任何一种或其基因改造菌种。
在一个具体实施例中,所述载体包含多孔无机材料。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料选自活性炭、高岭土、多孔玻璃、氧化铝、羟基磷灰石和/或二氧化硅中的一种或几种,优选二氧化硅。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅选自白炭黑、硅胶、硅藻土中的一种或两种以上的混合物。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅的纯度为85%以上,优选90%以上,最优先95%以上。
在一个具体实施例中,所述载体平均粒径为10~60μm,优选20~50μm。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品还含有粘合剂。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和/或麦芽糊精。
在一个具体实施例中,所述粘合剂的总用量为载体质量的5%~35%,优选10%~30%,最优选15%~25%。
在一个具体实施例中,所述化学改性纤维素选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述麦芽糊精的DE值为10-30,优选16-20。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和麦芽糊精,其中,化学改性纤维素与麦芽糊精的质量比为1:99~99:1,优选10:90~50:50,最优选20:80~30:70。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品为颗粒形式,粒径为100~1000μm,优选300~700μm。
在一个具体实施例中,所述挤压造粒包括:将含脂肪酶的溶液施加到搅拌中的载体中,搅拌形成颗粒,然后将所形成的颗粒进行挤压,从而形成所述固定化脂肪酶制品。
在一个具体实施例中,在挤压之后还包括将挤压造粒所得颗粒进行抛丸处理。
在一个具体实施例中,抛丸处理后干燥所述颗粒,使其含水量为5%~10%。
本发明第四方面提供一种固定化脂肪酶制品,所述固定化脂肪酶制品含有脂肪酶、载体和涂膜剂,其中,所述载体含有酯化淀粉和多孔无机材料,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐、乳清蛋白、分离蛋白和胶原蛋白中的一种或多种。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是液体脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是来自动物、植物或微生物的脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)、米根霉(Rhizopus oryzae)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、南极假丝酵母(Candida antarctica)、黑曲霉(Aspergillus niger)、伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)、皱褶假丝酵母(Candida rugosa)、产碱杆菌(Alcaligenes sp.)、爪哇毛霉(Mucor javanicus)、雪白根霉(Rhizopus niveus)中的任何一种或其基因改造菌种。
在一个具体实施例中,所述载体包含多孔无机材料和酯化淀粉。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料选自活性炭、高岭土、多孔玻璃、氧化铝、羟基磷灰石和/或二氧化硅中的一种或几种,优选二氧化硅。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅选自白炭黑、硅胶、硅藻土中的一种或两种以上的混合物。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅的纯度为85%以上,优选90%以上,最优先95%以上。
在一个具体实施例中,所述酯化淀粉选自无机酸酯淀粉和有机酸酯淀粉。
在一个具体实施例中,所述酯化淀粉为有机酸酯淀粉,优选辛烯基琥珀酸酯淀粉、月桂酸酯淀粉、硬脂酸酯淀粉或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料与酯化淀粉的重量比为99.9:0.1~50:50,优选90:10~60:40,特别优选80:20~70:30。
在一个具体实施例中,所述载体平均粒径为10~60μm,优选20~50μm。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐和胶原蛋白。
在一个具体实施例中,所述酪蛋白酸盐是酪蛋白酸钠,所述胶原蛋白是明胶。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂的总用量为载体质量的1%~5%,优选2%~4%。
在一个具体实施例中,所述明胶选自A型和B型明胶。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐和胶原蛋白,其中,酪蛋白酸盐(如酪蛋白酸钠)与胶原蛋白(如明胶)的质量比为1:99~99:1,优选5:95~50:50,最优选10:90~20:80。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品还含有粘合剂。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和/或麦芽糊精。
在一个具体实施例中,所述粘合剂的总用量为载体质量的5%~35%,优选10%~30%,最优选15%~25%。
在一个具体实施例中,所述化学改性纤维素选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述麦芽糊精的DE值为10-30,优选16-20。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和麦芽糊精,其中,化学改性纤维素与麦芽糊精的质量比为1:99~99:1,优选10:90~50:50,最优选20:80~30:70。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品为颗粒形式,粒径为100~1000μm,优选300~700μm。
本发明第五方面提供一种固定化脂肪酶制品,所述固定化脂肪酶制品含有脂肪酶和载体,其中,所述载体含有酯化淀粉和多孔无机材料,且所述固定化脂肪酶制品采用挤压造粒方式制备得到。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是液体脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是来自动物、植物或微生物的脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)、米根霉(Rhizopus oryzae)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、南极假丝酵母(Candida antarctica)、黑曲霉(Aspergillus niger)、伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)、皱褶假丝酵母(Candida rugosa)、产碱杆菌(Alcaligenes sp.)、爪哇毛霉(Mucor javanicus)、雪白根霉(Rhizopus niveus)中的任何一种或其基因改造菌种。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料选自活性炭、高岭土、多孔玻璃、氧化铝、羟基磷灰石和/或二氧化硅中的一种或几种,优选二氧化硅。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅选自白炭黑、硅胶、硅藻土中的一种或两种以上的混合物。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅的纯度为85%以上,优选90%以上,最优先95%以上。
在一个具体实施例中,所述酯化淀粉选自无机酸酯淀粉和有机酸酯淀粉。
在一个具体实施例中,所述酯化淀粉为有机酸酯淀粉,优选辛烯基琥珀酸酯淀粉、月桂酸酯淀粉、硬脂酸酯淀粉或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料与酯化淀粉的重量比为99.9:0.1~50:50,优选90:10~60:40,特别优选80:20~70:30。
在一个具体实施例中,所述载体平均粒径为10~60μm,优选20~50μm。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品还含有粘合剂。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和/或麦芽糊精。
在一个具体实施例中,所述粘合剂的总用量为载体质量的5%~35%,优选10%~30%,最优选15%~25%。
在一个具体实施例中,所述化学改性纤维素选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述麦芽糊精的DE值为10-30,优选16-20。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和麦芽糊精,其中,化学改性纤维素与麦芽糊精的质量比为1:99~99:1,优选10:90~50:50,最优选20:80~30:70。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品为颗粒形式,粒径为100~1000μm,优选300~700μm。
在一个具体实施例中,所述挤压造粒包括:将含脂肪酶的溶液施加到搅拌中的载体中,搅拌形成颗粒,然后将所形成的颗粒进行挤压,从而形成所述固定化脂肪酶制品。
在一个具体实施例中,在挤压之后还包括将挤压造粒所得颗粒进行抛丸处理。
在一个具体实施例中,抛丸处理后干燥所述颗粒,使其含水量为5%~10%。
本发明第六方面提供一种固定化脂肪酶制品,所述固定化脂肪酶制品含有脂肪酶、载体和涂膜剂,其中,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐、乳清蛋白、分离蛋白和胶原蛋白中的一种或多种,且所述固定化脂肪酶制品采用挤压造粒方式制备得到。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是液体脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是来自动物、植物或微生物的脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)、米根霉(Rhizopus oryzae)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、南极假丝酵母(Candida antarctica)、黑曲霉(Aspergillus niger)、伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)、皱褶假丝酵母(Candida rugosa)、产碱杆菌(Alcaligenes sp.)、爪哇毛霉(Mucor javanicus)、雪白根霉(Rhizopus niveus)中的任何一种或其基因改造菌种。
在一个具体实施例中,所述载体包含多孔无机材料。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料选自活性炭、高岭土、多孔玻璃、氧化铝、羟基磷灰石和/或二氧化硅中的一种或几种,优选二氧化硅。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅选自白炭黑、硅胶、硅藻土中的一种或两种以上的混合物。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅的纯度为85%以上,优选90%以上,最优先95%以上。
在一个具体实施例中,所述载体平均粒径为10~60μm,优选20~50μm。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐和胶原蛋白。
在一个具体实施例中,所述酪蛋白酸盐是酪蛋白酸钠,所述胶原蛋白是明胶。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂的总用量为载体质量的1%~5%,优选2%~4%。
在一个具体实施例中,所述明胶选自A型和B型明胶。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐和胶原蛋白,其中,酪蛋白酸盐(如酪蛋白酸钠)与胶原蛋白(如明胶)的质量比为1:99~99:1,优选5:95~50:50,最优选10:90~20:80。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品还含有粘合剂。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和/或麦芽糊精。
在一个具体实施例中,所述粘合剂的总用量为载体质量的5%~35%,优选10%~30%,最优选15%~25%。
在一个具体实施例中,所述化学改性纤维素选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述麦芽糊精的DE值为10-30,优选16-20。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和麦芽糊精,其中,化学改性纤维素与麦芽糊精的质量比为1:99~99:1,优选10:90~50:50,最优选20:80~30:70。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品为颗粒形式,粒径为100~1000μm,优选300~700μm。
在一个具体实施例中,所述挤压造粒包括:将含脂肪酶的溶液施加到搅拌中的载体中,搅拌形成颗粒,然后将所形成的颗粒进行挤压,从而形成所述固定化脂肪酶制品。
在一个具体实施例中,在挤压之后还包括将挤压造粒所得颗粒进行抛丸处理。
在一个具体实施例中,抛丸处理后干燥所述颗粒,使其含水量为5%~10%。
本发明第七方面提供一种固定化脂肪酶制品,所述固定化脂肪酶制品含有脂肪酶、载体和涂膜剂,其中,所述载体含有酯化淀粉和多孔无机材料,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐、乳清蛋白、分离蛋白和胶原蛋白中的一种或多种,且所述固定化脂肪酶制品采用挤压造粒方式制备得到。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是液体脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶是来自动物、植物或微生物的脂肪酶。
在一个具体实施例中,所述脂肪酶来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyceslanuginosus)、米根霉(Rhizopus oryzae)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、南极假丝酵母(Candida antarctica)、黑曲霉(Aspergillus niger)、伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)、皱褶假丝酵母(Candida rugosa)、产碱杆菌(Alcaligenes sp.)、爪哇毛霉(Mucor javanicus)、雪白根霉(Rhizopus niveus)中的任何一种或其基因改造菌种。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料选自活性炭、高岭土、多孔玻璃、氧化铝、羟基磷灰石和/或二氧化硅中的一种或几种,优选二氧化硅。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅选自白炭黑、硅胶、硅藻土中的一种或两种以上的混合物。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅的纯度为85%以上,优选90%以上,最优先95%以上。
在一个具体实施例中,所述酯化淀粉选自无机酸酯淀粉和有机酸酯淀粉。
在一个具体实施例中,所述酯化淀粉为有机酸酯淀粉,优选辛烯基琥珀酸酯淀粉、月桂酸酯淀粉、硬脂酸酯淀粉或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料与酯化淀粉的重量比为99.9:0.1~50:50,优选90:10~60:40,特别优选80:20~70:30。
在一个具体实施例中,所述载体平均粒径为10~60μm,优选20~50μm。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐和胶原蛋白。
在一个具体实施例中,所述酪蛋白酸盐是酪蛋白酸钠,所述胶原蛋白是明胶。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂的总用量为载体质量的1%~5%,优选2%~4%。
在一个具体实施例中,所述明胶选自A型和B型明胶。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐和胶原蛋白,其中,酪蛋白酸盐(如酪蛋白酸钠)与胶原蛋白(如明胶)的质量比为1:99~99:1,优选5:95~50:50,最优选10:90~20:80。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品还含有粘合剂。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和/或麦芽糊精。
在一个具体实施例中,所述粘合剂的总用量为载体质量的5%~35%,优选10%~30%,最优选15%~25%。
在一个具体实施例中,所述化学改性纤维素选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述麦芽糊精的DE值为10-30,优选16-20。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和麦芽糊精,其中,化学改性纤维素与麦芽糊精的质量比为1:99~99:1,优选10:90~50:50,最优选20:80~30:70。
在一个具体实施例中,所述固定化脂肪酶制品为颗粒形式,粒径为100~1000μm,优选300~700μm。
在一个具体实施例中,所述挤压造粒包括:将含脂肪酶的溶液施加到搅拌中的载体中,搅拌形成颗粒,然后将所形成的颗粒进行挤压,从而形成所述固定化脂肪酶制品。
在一个具体实施例中,在挤压之后还包括将挤压造粒所得颗粒进行抛丸处理。
在一个具体实施例中,抛丸处理后干燥所述颗粒,使其含水量为5%~10%。
本发明第八方面提供一种固定化脂肪酶的制备方法,所述方法包括将含脂肪酶的溶液施加到搅拌中的载体中,搅拌形成颗粒,然后将所形成的颗粒进行挤压,从而形成所述固定化脂肪酶。
在一个具体实施例中,在挤压之后还包括将挤压造粒所得颗粒进行抛丸处理。
在一个具体实施例中,抛丸处理后干燥所述颗粒,使其含水量为5%~10%。
在一个具体实施例中,所述载体包含多孔无机材料。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料选自活性炭、高岭土、多孔玻璃、氧化铝、羟基磷灰石和/或二氧化硅中的一种或几种,优选二氧化硅。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅选自白炭黑、硅胶、硅藻土中的一种或两种以上的混合物。
在一个具体实施例中,所述二氧化硅的纯度为85%以上,优选90%以上,最优先95%以上。
在一个具体实施例中,所述载体还含有酯化淀粉。
在一个具体实施例中,所述酯化淀粉选自无机酸酯淀粉和有机酸酯淀粉。
在一个具体实施例中,所述酯化淀粉为有机酸酯淀粉,优选辛烯基琥珀酸酯淀粉、月桂酸酯淀粉、硬脂酸酯淀粉或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述多孔无机材料与酯化淀粉的重量比为99.9:0.1~50:50,优选90:10~60:40,特别优选80:20~70:30。
在一个具体实施例中,所述载体平均粒径为10~60μm,优选20~50μm。
在一个具体实施例中,所述含脂肪酶的溶液还含有粘合剂。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和/或麦芽糊精。
在一个具体实施例中,所述粘合剂的总用量为载体质量的5%~35%,优选10%~30%,最优选15%~25%。
在一个具体实施例中,所述化学改性纤维素选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素或其任意混合物。
在一个具体实施例中,所述麦芽糊精的DE值为10-30,优选16-20。
在一个具体实施例中,所述粘合剂包含化学改性纤维素和麦芽糊精,其中,化学改性纤维素与麦芽糊精的质量比为1:99~99:1,优选10:90~50:50,最优选20:80~30:70。
在一个具体实施例中,所述方法还包括,挤压前将搅拌所形成的颗粒进行涂膜。
在一个具体实施例中,使用涂膜剂进行涂膜,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐、乳清蛋白、分离蛋白和胶原蛋白中的一种或多种。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐和胶原蛋白。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂的总用量为载体质量的1%~5%,优选2%~4%。
在一个具体实施例中,所述明胶选自A型和B型明胶。
在一个具体实施例中,所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐和胶原蛋白,其中,酪蛋白酸盐(如酪蛋白酸钠)与胶原蛋白(如明胶)的质量比为1:99~99:1,优选5:95~50:50,最优选10:90~20:80。
本发明包括采用上述方法制备得到的固定化脂肪酶制品。
传统的脂肪酶固定化材料树脂成本太高且工艺复杂,如商品化的固定化脂肪酶Novozym435所采用的是大孔丙烯酸树脂。CN101575594中,树脂的预处理至少需要2天时间,干燥时间也长。也有用高分子多糖固定化脂肪酶,如CN101050455中以魔芋葡甘聚糖为载体制备了固定化脂肪酶膜,但该方法工艺复杂,不利于工业化生产。CN1844382中采用成本较低的凹凸棒土做载体固定化脂肪酶,但是酶易脱落、不易回收利用。
US005776741A中,用二氧化硅做载体,明胶和聚乙烯吡咯烷酮做粘合剂,湿法混合制粒固定化酶,酶液用量大,成本高,但是酶活力较低,半衰期较短。
与这些方法相比,本发明的混合挤压制粒固定化酶载体中添加了酯化淀粉,较大的提高了酶活,制粒后经过添加涂膜剂,制备的固定化酶酶活半衰期延长。
具体实施方式
本发明提供固定化脂肪酶。本发明的固定化脂肪酶的特征包括(1)载体含有多孔无机材料和酯化淀粉,和/或(2)固定化脂肪酶含有涂膜剂,涂膜剂含有酪蛋白酸盐、乳清蛋白、分离蛋白和胶原蛋白中的一种或多种,和/或(3)固定化脂肪酶采用挤压造粒方式制备得到。
具体而言,本发明的固定化脂肪酶含有脂肪酶和载体,其中,所述载体包含酯化淀粉和多孔无机材料,所述固定化脂肪酶制品任选地含有涂膜剂,并任选地采用挤压造粒方式制备得到。
或者,本发明的固定化脂肪酶含有脂肪酶、载体和涂膜剂,任选地,所述载体含有酯化淀粉,并任选地采用挤压造粒方式制备得到。
或者,本发明的固定化脂肪酶含有脂肪酶和载体,采用挤压造粒方式制备得到,任选地,所述载体含有酯化淀粉,以及任选地所述固定化脂肪酶含有涂膜剂。
即本发明包括:
(a)载体含有酯化淀粉,未使用涂膜剂,也未采用挤压造粒方式制备得到的固定化脂肪酶;
(b)载体含有酯化淀粉,使用涂膜剂,但未采用挤压造粒方式制备得到的固定化脂肪酶;
(c)载体含有酯化淀粉,未使用涂膜剂,但采用挤压造粒方式制备得到的固定化脂肪酶;
(d)载体含有酯化淀粉,使用涂膜剂,同时采用挤压造粒方式制备得到的固定化脂肪酶;
(e)载体不含有酯化淀粉,使用涂膜剂,但未采用挤压造粒方式制备得到的固定化脂肪酶;
(f)载体不含有酯化淀粉,使用涂膜剂,但采用挤压造粒方式制备得到的固定化脂肪酶;和
(g)载体不含有酯化淀粉,未使用涂膜剂,但采用挤压造粒方式制备得到的固定化脂肪酶。
适用于本发明的脂肪酶是液体脂肪酶,通常来自动物、植物或微生物。例如,本发明的脂肪酶可来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)、米根霉(Rhizopus oryzae)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、南极假丝酵母(Candidaantarctica)、黑曲霉(Aspergillus niger)、伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)、皱褶假丝酵母(Candida rugosa)、产碱杆菌(Alcaligenes sp.)、爪哇毛霉(Mucorjavanicus)、雪白根霉(Rhizopus niveus)中的任何一种或其基因改造菌种。
本发明的载体为本领域周知的各种用于脂肪酶固定的载体,通常含有多孔无机材料。适合用于物理吸附法制备固定化脂肪酶的各种多孔无机材料载体都可用于本发明。所谓“多孔无机材料”是指具有微小细孔、质轻、表面积很大的各种天然或人工无机非金属材料。例如包括但不限于活性炭、高岭土、多孔玻璃、氧化铝、羟基磷灰石和/或二氧化硅中的一种或几种,优选二氧化硅和氧化铝。
所述二氧化硅包括但不限于白炭黑、硅胶、硅藻土中的一种或两种以上的混合物。若使用两种以上二氧化硅的混合物,则对混合物中各种成分之间的比例无特殊限制,例如,可以是1:99~99:1。
为减少杂质对酶活的影响,通常使用较高纯度的二氧化硅。例如,使用纯度在85%以上,优选90%以上,最优选95%以上的二氧化硅。
若存在,载体中还可含有酯化淀粉。酯化淀粉通常是指在糊化温度以下淀粉乳与酸在一定条件下进行酯化反应而得到的一类变性淀粉。酸可以是无机酸,也可以是有机酸。因此,适用于本发明的酯化淀粉选自无机酸酯淀粉和有机酸酯淀粉。优选地,本发明使用有机酸酯淀粉,优选辛烯基琥珀酸酯淀粉、月桂酸酯淀粉、硬脂酸酯淀粉或其任意混合物。对于用来形成酯化淀粉的淀粉来源并无特殊限制,例如可使用玉米淀粉、小麦淀粉、木薯淀粉等。
载体中多孔无机材料与酯化淀粉(若存在)的重量比通常为99.9:0.1~50:50,优选95:5~55:45,更优选90:10~60:40。在一个具体实施例中,使用80:20~70:30的比例。
载体的平均粒径通常为10~60μm,优选20~50μm。
固定化脂肪酶还可含有涂膜剂。涂膜剂是将高分子成膜材料溶解后用来涂膜在颗粒表面的物质。适用于固定化脂肪酶的各种已知涂膜剂都可用于本发明。优选的涂膜剂为分离蛋白、乳清蛋白、胶原蛋白、酪蛋白酸盐中的一种或几种。
其中分离蛋白包括大豆分离蛋白,玉米分离蛋白,小麦分离蛋白,大米分离蛋白,优选大豆分离蛋白;乳清蛋白优选牛乳清蛋白,羊乳清蛋白;胶原蛋白优选来自水产动物体内的胶原蛋白,来自哺乳动物结缔组织的胶原蛋白,如明胶,其中明胶可以是A型和B型;酪蛋白酸盐优选酪蛋白酸钠。
当使用分离蛋白、乳清蛋白、胶原蛋白、酪蛋白酸盐中的两种以上时,其用量配比并无特殊限制。
涂膜剂优选含有酪蛋白酸盐和胶原蛋白。涂膜剂中酪蛋白酸盐(如酪蛋白酸钠)与胶原蛋白(如明胶)的质量比为1:99~99:1,优选5:95~50:50,最优选10:90~20:80。涂膜剂的总用量为载体质量的1%~5%,优选2%~4%。
固定化脂肪酶还可含有粘合剂。粘合剂是具有粘性的物质,借助其粘性能将两种分离的材料连接在一起。适用于固定化脂肪酶的各种已知粘合剂都可用于本发明。粘合剂优选包括淀粉、糊精、聚乙烯醇、改性纤维素、聚乙烯吡咯烷酮。粘合剂进一步优选包含化学改性纤维素和/或麦芽糊精。化学改性纤维素选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素或其任意混合物。通常,麦芽糊精是以淀粉为原料,经酶法工艺低程度控制水解转化,提纯,干燥而成,经控制水解DE值在20%以下的产品称为麦芽糊精。本文中,所述麦芽糊精的DE值为10-30,优选16-20。可以精制淀粉,例如玉米淀粉、小麦淀粉、木薯淀粉制备得到麦芽糊精。也可采用市售麦芽糊精来实施本发明。化学改性纤维素与麦芽糊精的质量比为1:99~99:1,优选10:90~50:50,最优选20:80~30:70。粘合剂的总用量为载体质量的5%~35%,优选10%~30%,最优选15%~25%。
固定化脂肪酶制品中酶的量,参考诺维信水解活力测试方法,所用液体酶水解活力为30000-100000IU/ml,优选水解活力为40000-60000IU/ml的液体酶。液体酶用量与载体的质量比为0.5:1-5:1,优选1:1-2:1。
对于本发明的固定化脂肪酶而言,参照诺维信酯交换活力测定方法,其使用1次后的酶活大于400IU/g,优选大于420IU/g,更优选大于450IU/g。在一个具体实施例中,参照诺维信酯交换活力测定方法,所述固定化脂肪酶制品使用5次后的酶活大于350IU/g,优选大于370IU/g。在一个具体实施例中,参照诺维信酯交换活力测定方法,所述固定化脂肪酶制品使用15次后的酶活大于300IU/g,优选大于320IU/g。在一个具体实施例中,参照诺维信酯交换活力测定方法,所述固定化脂肪酶制品使用30次后的酶活大于220IU/g,优选大于250IU/g。在一个具体实施例中,参照诺维信酯交换活力测定方法,所述固定化脂肪酶制品使用50次后的酶活大于140IU/g,优选大于200IU/g。
本发明的固定化脂肪酶制品可以是散装的形式,也可以是各种包装形式。
本发明固定化脂肪酶的水分含量通常为5%~10%。颗粒大小通常为300~700μm。
本发明还包括酯化淀粉和/或酪蛋白酸钠在制备固定化脂肪酶中的用途。
本发明制备固定化脂肪酶的方法通常包括将含脂肪酶的溶液施加到搅拌中的载体中,搅拌形成颗粒,任选的抛丸,以及干燥颗粒的步骤。优选地,在搅拌形成颗粒后,对所得颗粒挤压造粒处理。
通常,将粘合剂与酶液混合。例如,将化学改性纤维素溶于去离子水中,麦芽糊精溶于酶液中,然后将二者混合搅拌均匀。
载体可以经处理或未经处理。
载体处理方法为,将载体加入混合设备中,混合均匀。
所述设备可选为容器回转型(如双锥式,V式)、容器固定型(如流动床、气力式、机械搅拌式)、复合型。
在一个具体的实施方式中,将载体加入制粒机(例如高速混合制粒机,如常州佳发制粒设备有限公司的GHL-7.5/5/2.5)中,搅拌混匀。在载体中使用酯化淀粉的情况下,称取预定量的二氧化硅和酯化淀粉,加入制粒机中拌匀。搅拌的速度和时间可根据实际情况确定,直至获得搅拌均匀的混合物。
将含脂肪酶的溶液施加到搅拌中的载体上。通常以通过喷枪喷淋到载体上,喷淋速度可以是例如40mL/min到150mL/min。喷淋的同时进行搅拌,搅拌速度通常为100~800rpm,优选200~600rpm,剪切速度控制为600~2000rpm,优选1000~1500rpm。液体加完后,继续搅拌剪切直到成粒为止,通常继续搅拌剪切1-5分钟(例如3min)。
然后可干燥所得颗粒至样品水分含量为5%~10%,筛分出300~700μm的颗粒,即可获得本发明的固定化脂肪酶。干燥可以是自然干燥或流化床干燥。
在添加涂膜剂的情况下,将涂膜剂与固定化脂肪酶接触。
在一个具体的实施方式中,将涂膜剂(分离蛋白、乳清蛋白、胶原蛋白和酪蛋白酸盐中的一种或几种)配制成溶液(使用两种以上涂膜剂的情况下,按所需质量比例配制),将前述制备得到的颗粒加入流化床(例如Midi Glatt11505,德国格拉特公司)后,在50~70℃下对颗粒喷淋该涂膜剂溶液,从而进行涂膜。然后自然干燥或流化床干燥至样品水分含量为5%~10%,筛分出300~700μm的颗粒,即可获得本发明的固定化脂肪酶。
或者,可将前述获得的颗粒(含涂膜剂或不含涂膜剂)加入到挤压造粒机(例如,JZL-80实验室挤压造粒机,常州永昌制粒干燥设备有限公司)中进行挤压制粒,设置筛网孔径为0.5~1.0(例如0.8mm),搅拌速度为10~50rpm。
任选地,将前述所得颗粒加入抛丸机(例如,QZL-MINI,常州佳发制粒设备有限公司)中进行抛丸,圆盘转速为500~1000rpm。然后在对抛丸所得颗粒进行干燥(自然干燥或流化床干燥),干燥后样品水分含量为5~10%。
具体而言,本发明涉及前述(a)~(g)项所述的固定化脂肪酶的制备方法。例如,对于(a)~(d)项所述的固定化脂肪酶,其制备方法包括:
(i)将含脂肪酶的溶液施加到搅拌中的载体中,搅拌形成颗粒;
(ii)任选地给步骤(i)所述的颗粒施加涂膜剂;
(iii)任选地给步骤(i)或(ii)所述的颗粒进行挤压造粒;
(iv)在实施挤压造粒的情况下,对步骤(iii)挤压造粒所得颗粒实施抛丸处理;和
(v)干燥颗粒;
其中,所述载体含有多孔无机材料和酯化淀粉。
对于(e)和(f)项所述的固定化脂肪酶,其制备方法包括:
(i)将含脂肪酶的溶液施加到搅拌中的载体中,搅拌形成颗粒;
(ii)给步骤(i)所述的颗粒施加涂膜剂;
(iii)任选地给步骤(ii)所述的颗粒进行挤压造粒;
(iv)在实施挤压造粒的情况下,对步骤(iii)挤压造粒所得颗粒实施抛丸处理;和
(v)干燥颗粒;
其中,所述载体不含有酯化淀粉。
对于(g)项所述的固定化脂肪酶,其制备方法包括:
(i)将含脂肪酶的溶液施加到搅拌中的载体中,搅拌形成颗粒;
(ii)对所得颗粒进行挤压造粒;
(iii)对步骤(ii)挤压造粒所得颗粒实施抛丸处理;和
(vi)干燥颗粒;
其中,所述载体不含有酯化淀粉。
下面举出实施例具体地说明本发明,但是本发明并非仅限于这些实施例。实施例中使用到的酯交换活力测定(参照诺维信酯交换活力测定方法)如下实施:
1、底物配制
用精炼大豆油和极度氢化大豆油以73:27的质量比混匀配成酯交换反应底物备用。
2、反应
称取10g底物,加入0.5g固定化酶,放入70℃水浴锅中反应30min,反应完毕后取出部分产物放入固脂管中,取出量为固脂管高度的4-5厘米。底物取出后重新加入10g底物,进行下一批反应,共反应9批。
3、固脂含量测定
将装有产物的固脂管放入100℃烘箱内15分钟,依次放入60℃水浴锅内5min,0℃水浴锅60min,40℃水浴锅内30min,水浴完毕后立即插入预热好的核磁共振仪上测SFC含量。以未反应的底物为对照。
4、活力计算
IUN=(SFC对照-SFC样品)/30*1260
下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照国家标准测定。若没有相应的国家标准,则按照通用的国际标准、常规条件、或按照制造厂商所建议的条件进行。除非另外说明,否则所有的份数为重量份,所有的百分比为重量百分比,所述的聚合物分子量为数均分子量。
如无具体说明,本发明的各种原料均可以通过市售得到;或根据本领域的常规方法制备得到。
除非另有定义或说明,本文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术熟练人员所熟悉的意义相同。此外任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。
实验设备信息:
高速混合制粒机(型号GHL-7.5/5/2.5,厂商:常州佳发制粒设备有限公司);
挤压造粒机(型号JZL-80,厂商:常州永昌制粒干燥设备有限公司);
抛丸机(型号:QZL-MINI,厂商:常州佳发制粒设备有限公司);
滴加喷枪(型号:DP-2,厂商:常州佳发制粒干燥设备有限公司)。
试剂信息:
羟丙基甲基纤维素、酪蛋白酸钠、明胶(A型)、明胶(B型)、羧甲基纤维素、月桂酸淀粉酯、羟乙基纤维素、甲基纤维素,采购自国药集团。
硬脂酸淀粉酯、棕榈酸淀粉酯、醋酸淀粉酯、辛烯基琥珀酸淀粉酯,采购自国民淀粉化学有限公司。
实施例1
称取2g羟丙基甲基纤维素溶于80g去离子水中,18g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于100g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司,酶活力700.000LU/ml)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取100g白炭黑(JS-96,福建省沙县金沙白炭黑有限公司),加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为400rpm,剪切速度为1000rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成,室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例2
称取2g羟丙基甲基纤维素溶于80g去离子水中,18g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于100g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取100g白炭黑(JS-96,福建省沙县金沙白炭黑有限公司),加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为400rpm,剪切速度为1000rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成,所得颗粒放入流化床在50℃下进行涂膜,涂膜剂组成为:0.1g酪蛋白酸钠,0.9g明胶(A型),10g纯净水。最后将样品室温自然晾干至水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例3
称取2g羟丙基甲基纤维素溶于80g去离子水中,18g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于100g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取100g白炭黑(JS-96,福建省沙县金沙白炭黑有限公司),加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为400rpm,剪切速度为1000rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成,将制粒后的样品进行挤压造粒,再抛丸,最后室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例4
称取2g羟丙基甲基纤维素溶于80g去离子水中,18g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于100g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取100g白炭黑(JS-96,福建省沙县金沙白炭黑有限公司),加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为400rpm,剪切速度为1000rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成。所得颗粒放入流化床在60℃下进行涂膜,涂膜剂组成:0.25g酪蛋白酸钠,4.75g明胶(B型),50g纯净水。将涂膜后的样品进行挤压造粒,再抛丸,最后室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例5
称取2g羟丙基甲基纤维素溶于80g去离子水中,18g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于100g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取95g白炭黑(JS-96,福建省沙县金沙白炭黑有限公司),5g酯化淀粉(HI-CAP100,国民淀粉化学有限公司),加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为400rpm,剪切速度为1000rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成。所得颗粒放入流化床在60℃下进行涂膜,涂膜剂组成为:0.25g酪蛋白酸钠,4.75g明胶(B型),50g纯净水。将涂膜后的样品进行挤压造粒,再抛丸,最后室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例6
将1g羧甲基纤维素溶于70g去离子水中,30g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于100g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取60g白炭黑(Zeofree5162Q,邱博工程材料有限公司),20g硅胶(400目,国药集团化学试剂有限公司),20g月桂酸淀粉酯,加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为300rpm,剪切速度为800rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成。所得颗粒放入流化床在70℃下进行涂膜,涂膜剂组成为:0.2g酪蛋白酸钠,0.8g明胶(B型),20g纯净水。将涂膜后的样品进行挤压造粒,再抛丸,最后将样品流化床干燥至水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例7
将4g羧甲基纤维素溶于80g去离子水中,20g麦芽糊精(DE10~15,罗盖特精细化工有限公司)溶于100g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取70g白炭黑(A200,德固赛化工股份有限公司),30g硬脂酸淀粉酯,加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为800rpm,剪切速度为2000rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成。所得颗粒放入流化床在60℃下进行涂膜,涂膜剂组成为:0.3g酪蛋白酸钠,2.7g明胶(A型),30g纯净水。将涂膜后的样品进行抛丸,最后室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例8
将2g羟乙基纤维素溶于50g去离子水中,33g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于80g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取50g白炭黑(A200,德固赛化工股份有限公司),50g棕榈酸淀粉酯,加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为100rpm,剪切速度为600rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成。所得颗粒放入流化床在60℃下进行涂膜,涂膜剂组成为:0.3g酪蛋白酸钠,2.7g明胶(A型),30g纯净水。将涂膜后的样品进行挤压造粒,再抛丸,最后室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例9
将2.5g甲基纤维素溶于60g去离子水中,2.5g麦芽糊精(DE10~15,河南豫中生物科技有限公司)溶于120g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取50g白炭黑(A200,德固赛化工股份有限公司),50g醋酸淀粉酯,加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为200rpm,剪切速度为600rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成。所得颗粒放入流化床在50℃下进行涂膜,涂膜剂组成为:0.2g酪蛋白酸钠,1.8g明胶(B型),30g纯净水。将涂膜后的样品进行挤压造粒,再抛丸,最后将样品流化床干燥至水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例10
将10g甲基纤维素溶于100g去离子水中,0.5g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于150g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取80g硅藻土(阿拉丁试剂有限公司),20g月桂酸淀粉酯,加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为500rpm,剪切速度为1500rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成。所得颗粒放入流化床在70℃下进行涂膜,涂膜剂组成为:0.8g酪蛋白酸钠,3.2g明胶(B型),40g纯净水。将涂膜后的样品进行抛丸,最后将样品室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例11
将10g甲基纤维素溶于100g去离子水中,0.5g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于70g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取99.9g硅藻土(阿拉丁试剂有限公司),0.1g辛烯基琥珀酸淀粉酯,加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为500rpm,剪切速度为1500rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成。所得颗粒放入流化床在70℃下进行涂膜,涂膜剂组成为:0.8g酪蛋白酸钠,3.2g明胶(B型),40g纯净水。将涂膜后的样品进行挤压造粒,再抛丸,最后将样品室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例12
将4g羧甲基纤维素溶于100g去离子水中,16g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于100g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取80g硅藻土(阿拉丁试剂有限公司),20g月桂酸淀粉酯,加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为500rpm,剪切速度为1200rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成。所得颗粒放入流化床在60℃下进行涂膜,涂膜剂组成为:0.2g酪蛋白酸钠,1.8g明胶(B型),40g纯净水。将涂膜后的样品进行挤压造粒,再抛丸,最后将样品室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例13
将4g羧甲基纤维素溶于100g去离子水中,加入16g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司),然后将二者混合搅拌均匀。
称取70g硅藻土(阿拉丁试剂有限公司),30g棕榈酸淀粉酯,加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。将上述粘合剂用喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为500rpm,剪切速度为1200rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成。将所得颗粒加入到200g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中进行吸附一定时间,然后将颗粒放入流化床在60℃下进行涂膜,涂膜剂组成为:0.4g酪蛋白酸钠,1.6g明胶(B型),40g纯净水。将涂膜后的样品进行挤压造粒,再抛丸,最后将样品室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例14
将0.1g羧甲基纤维素溶于100g去离子水中,4.9g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于100g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取60g硅藻土(阿拉丁试剂有限公司),40g乙酸淀粉酯,加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为500rpm,剪切速度为1200rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成。所得颗粒放入流化床在60℃下进行涂膜,涂膜剂组成为:0.2g酪蛋白酸钠,0.8g明胶(B型),20g纯净水。将涂膜后的样品进行挤压造粒,再抛丸,最后将样品室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例15
将2g甲基纤维素溶于100g去离子水中,16g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于100g酶液中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取45g二氧化硅(国药集团有限公司),5g辛烯基琥珀酸淀粉酯,加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。将上述粘合剂用喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为500rpm,剪切速度为1200rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成,最后将样品室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
实施例16
将0.5g甲基纤维素溶于100g去离子水中,4.5g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于100g酶液中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取50g二氧化硅(国药集团有限公司),30g醋酸淀粉酯,加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为500rpm,剪切速度为1200rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成,然后将样品进行挤压造粒,再抛丸,最后将样品室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒。
酶活测定结果
将实施例1-16制备的固定化酶和商品TL IM一起测定酶活,结果见表2。
表2:酶活测定结果
从表2可以看出,实施例1混合制粒载体中未添加酯化淀粉和涂膜剂,与商品TL酶活接近,反应30批后酶活都降至200IU/g以下,半衰期较短;实施例2在实施例1基础上进行了涂膜,酶活提高,半衰期延长;实施例3在实施例1基础上进行了挤压制粒,酶活提高,半衰期延长;实施例4在实施例1基础上进行了涂膜和挤压,酶活和半衰期较实施例1-3都有所提高;实施例5、6、8-9、11-14在实施例4基础上添加了酯化淀粉作为载体,酶活比商品TL酶有较大提高。实施例7和10在实施例2的基础上添加了酯化淀粉作为载体,酶活比商品TL酶有较大提高。实施例15在实施例1基础上添加了酯化淀粉作为载体,酶活比商品TL酶有较大提高。实施例16在实施例3基础上添加了酯化淀粉作为载体,酶活比商品TL酶有较大提高。
实施例17
将0.1g羧甲基纤维素溶于100g去离子水中,4.9g麦芽糊精(DE16~20,河南豫中生物科技有限公司)溶于100g酶液(商品TL酶液,诺维信生物技术有限公司)中,然后将二者混合搅拌均匀。
称取60g氧化铝(阿拉丁试剂有限公司),40g乙酸淀粉酯,加入高速混合制粒机中,搅拌速度为200rpm,搅拌1min混匀。上述混入粘合剂的酶液滴加喷枪喷淋到载体上,速度为60mL/min,同时搅拌速度为500rpm,剪切速度为1200rpm。液体加完后,继续搅拌剪切3min制粒完成。所得颗粒放入流化床在60℃下进行涂膜,涂膜剂组成为:0.2g酪蛋白酸钠,0.8g明胶(B型),20g纯净水。将涂膜后的样品进行挤压造粒,再抛丸,最后将样品室温自然晾干至样品水分含量为5%~10%。筛分出300~700μm的颗粒并测定酶活。
实施例17在实施例14的基础上将二氧化硅替代为氧化铝,酶活与实施例16相比具有相同水平,与商品TL酶相比有较大的提高。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.一种固定化脂肪酶制品,所述固定化脂肪酶含有脂肪酶和载体,其中,所述载体包含酯化淀粉和多孔无机材料,所述固定化脂肪酶制品任选地含有涂膜剂。
2.一种固定化脂肪酶制品,所述固定化脂肪酶含有脂肪酶、载体和涂膜剂;任选地,所述载体含有酯化淀粉。
3.如权利要求1或2中任一项所述的固定化脂肪酶制品,其特征在于,所述固定化脂肪酶制品具有以下一个或几个特征:
(1)所述多孔无机材料包括活性炭、高岭土、多孔玻璃、氧化铝、羟基磷灰石和/或二氧化硅中的一种或几种,进一步优选二氧化硅,所述二氧化硅选自白炭黑、硅胶、硅藻土中的一种或两种以上的混合物;
(2)所述酯化淀粉选自无机酸酯淀粉和有机酸酯淀粉,优选有机酸酯淀粉,进一步优选辛烯基琥珀酸酯淀粉、月桂酸酯淀粉、硬脂酸酯淀粉或其任意混合物;
(3)所述多孔无机材料与酯化淀粉的重量比为99.9:0.1~50:50,优选90:10~60:40,特别优选80:20~70:30;和
(4)所述载体平均粒径为10~60μm,优选20~50μm。
4.如权利要求1-3中任一项所述的固定化脂肪酶制品,其特征在于,所述固定化脂肪酶具有以下一个或多个特征:
(a)所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐、乳清蛋白、分离蛋白和胶原蛋白中的一种或多种。
(b)所述酪蛋白酸盐是酪蛋白酸钠,所述胶原蛋白是明胶,酪蛋白酸钠与明胶的质量比为1:99~99:1,优选5:95~50:50,最优选10:90~20:80;和
(c)所述涂膜剂的总用量为载体质量的1%~5%,优选2%~4%。
5.如权利要求1-4所述的固定化脂肪酶制品,其特征在于,所述固定化脂肪酶制品具有以下一个或多个特征:
(i)所述固定化脂肪酶制品含有粘合剂;
(ii)所述粘合剂包含化学改性纤维素和麦芽糊精;
(iii)所述粘合剂的总用量为载体质量的5%~35%,优选10%~30%,最优选15%~25%;
(iv)所述化学改性纤维素选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素或其任意混合物;
(v)所述麦芽糊精的DE值为10-30,优选16-20;和
(vi)化学改性纤维素与麦芽糊精的质量比为1:99~99:1,优选10:90~50:50,最优选20:80~30:70。
6.一种固定化脂肪酶的制备方法,所述方法包括将含脂肪酶的溶液与载体接触,挤压形成所述固定化脂肪酶。
7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述方法包括以下一个或多个特征:
(1)所述载体包含多孔无机材料和任选的酯化淀粉;
(2)所述多孔无机材料选自活性炭、高岭土、多孔玻璃、氧化铝、羟基磷灰石和/或二氧化硅中的一种或几种,优选二氧化硅,所述二氧化硅选自白炭黑、硅胶、硅藻土中的一种或两种以上的混合物;
(3)所述酯化淀粉选自无机酸酯淀粉和有机酸酯淀粉;
(4)所述酯化淀粉为有机酸酯淀粉,优选辛烯基琥珀酸酯淀粉、月桂酸酯淀粉、硬脂酸酯淀粉或其任意混合物;
(5)所述含脂肪酶的溶液还含有粘合剂;
(6)所述粘合剂包含化学改性纤维素和/或麦芽糊精;
(7)所述化学改性纤维素选自羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素或其任意混合物;
(8)所述麦芽糊精的DE值为10-30,优选16-20;
(9)所述方法还包括,挤压前用涂膜剂与含脂肪酶和载体的颗粒进行接触;
(10)所述涂膜剂含有酪蛋白酸盐、乳清蛋白、分离蛋白和胶原蛋白中的一种或多种;和
(11)所述方法还包括,在挤压之后将挤压造粒所得颗粒进行抛丸处理。
8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,所述方法具有以下一个或多个特征:
(a)所述多孔无机材料与酯化淀粉的重量比为99.9:0.1~50:50,优选90:10~60:40,特别优选80:20~70:30;
(b)所述载体平均粒径为10~60μm,优选20~50μm;
(c)所述固定化脂肪酶为颗粒形式,粒径为100~1000μm,优选300~700μm;
(d)所述粘合剂的总用量为载体质量的5%~35%,优选10%~30%,最优选15%~25%;
(e)所述粘合剂包含化学改性纤维素和麦芽糊精,其中,化学改性纤维素与麦芽糊精的质量比为1:99~99:1,优选10:90~50:50,最优选20:80~30:70;
(f)所述涂膜剂优选包含酪蛋白酸盐和胶原蛋白;
(g)所述酪蛋白酸盐是酪蛋白酸钠,所述胶原蛋白是明胶,酪蛋白酸钠与明胶的质量比为1:99~99:1,优选5:95~50:50,最优选10:90~20:80;
(h)所述涂膜剂的总用量为载体质量的1%~5%,优选2%~4%;和
(i)所述方法还包括,抛丸处理后干燥所述颗粒,使其含水量为5%~10%。
9.采用权利要求6-8中任一项所述的方法制备得到的固定化脂肪酶。
10.酯化淀粉和/或选自酪蛋白酸盐、乳清蛋白、分离蛋白和胶原蛋白的涂膜剂在制备固定化脂肪酶中的用途。
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