CN106282034A - 一种羊肚菌菌种快速繁育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种羊肚菌菌种快速繁育方法,该方法通过将传统的先生产原种再生产栽培种用于播种,改进为直接生产原种播种,去掉了原种扩繁为栽培种的环节,大大缩短了菌种制种时间,同时由于减少了种子繁殖代数,保证种子活性,其适应性和抗逆性更强,该方法能够显著缩短羊肚菌菌种的繁育周期,并且能有效提高羊肚菌菌种繁育的产量。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌栽培技术领域,具体涉及到一种羊肚菌菌种快速繁育方法。
背景技术
羊肚菌(Morchella)属子囊菌门(Ascomycota)、盘菌纲(Pezizimycetes)、盘菌目(Pezizales)、羊肚菌科(Morchellaceae)。因其表面呈蜂窝状,外形常为圆顶或尖顶,与羊肚颇为相似,故名为羊肚菌。
羊肚菌肉质脆嫩,含有丰富的氨基酸、多糖、脂肪酸,其营养价值较高,是世界公认的珍贵食用真菌。在欧洲各地,羊肚菌以其鲜美的味道被认为是仅次于块菌的美味食用菌,北美人同样认为它是食用菌中的佳品。羊肚菌在我国最早被收载于《本草纲目》,中医以其子实体入药,因性平味甘,故具有健脾、化痰理气、益肠消食等功效。
近年来,由于国内、国外市场对羊肚菌的需求日益增加,加之分布区域特定、出菇期短、天然产量有限以及过度采摘,呈现产量逐年下降趋势。市场价格也因此居高不下。目前我国已实现部分羊肚菌菌株人工栽培,每亩产量一般在100~200公斤,但是由于菌种的获取方法极不规范,菌种生产周期较长,加之对羊肚菌生活史周期尚未完全明了, 导致菌种产量不稳定,甚至有绝收的现象出现。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明提供一种羊肚菌菌种快速繁育方法,该方法能够显著缩短羊肚菌菌种的繁育周期,并且能有效提高羊肚菌菌种繁育的产量。
本发明通过下述技术方案实现:
一种羊肚菌菌种快速繁育方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)种菇选择:选取菇柄长1~2厘米、菇帽长3~4厘米、纹路清晰、褶皱紧密的羊肚菌种菇连根拔除,清除杂质后摊晾至含水量为60~70%,以提高组织分离可操作性,降低细菌感染的几率;
(2)无糖培养基制备:将土豆去皮后切成0.9~1.1cm3的颗粒,称取200份,加水煮沸18~20分钟,趁热过滤后取滤液,向滤液中补充热水后加入琼脂粉,搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌,趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内,消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中,冷却备用;
(3)菌种分离:将步骤(1)中的种菇、无糖培养基和分离器具灭菌后,切开种菇菌盖,铲取小块菌肉,接入平板皿中的无糖培养基内,16~18℃培养4~6天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝,7~8天后待菌丝长到直径1.5~2cm的菌落时即可提纯;
(4)接种:从步骤(3)所得无糖培养基中挑取4~5mm见方大的培养基2块,放入试管内的提纯培养基的两个三分点上,每个三角瓶可接20~30支,16~18℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝,9~10天菌丝即可长满试管;
(5)羊肚菌原种制作:将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.9~1.1cm的片段,每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内,一支试管能够接6~8瓶原种,温度16~18℃、湿度60%条件下培养,第2天菌丝即可吃料,5~7天菌丝即可封面;
(6)摇瓶:菌丝封面后,在培养室内,紧握菌种瓶,上下摇动8~10次,使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中,继续培养3~5天,菌种瓶中可见大量黄色菌核产生,即可下地播种,每亩用种量380~410瓶。
其中,步骤(4)中所述提纯培养基的制备方法如下:
取20份黄豆打磨成豆浆后加入葡萄糖20份、琼脂粉20份、KH2P04 1.5份、MgSO41.5份、酵母膏1份充分溶解,调节PH值为7,采用20mm×200mm的玻璃试管,每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液,用试管塞封口,灭菌后摆放倾斜,冷却后即得提纯培养基。
步骤(5)中所述原种培养基的制备方法如下:
1)选用当年无虫优质麦粒60份,提前48小时加水浸泡,同时加入石灰1份,浸泡至无白心时捞出沥干水分备用;
2)取木屑30份提前备好用水淋透,自然堆放至棕黄色备用;
3)将上述步骤中制备好的麦粒、木屑以及草炭土8份、石膏1份混合均匀后装入750ml菌种瓶,装瓶时装至瓶身2/3处即可,种瓶上下松紧一致,最后用棉花或者塑料薄膜封口。
在原种培养基中,麦粒富含淀粉和灰分营养更易于菌丝吸收,木屑增加培养基透气性,易于菌丝生长,草炭土含大量腐殖酸和微量元素增加菌丝活力,能够有效促进菌核形成,利于羊肚菌菌丝的快速生长。
羊肚菌属于子囊菌,其生长过程较为复杂,且生长过程中,子囊、菌丝体、子实体形态大小会发生较大变化,其次,不同种的羊肚菌菌种具有不同的培养条件,其生长速度、生长习性、菌核发育、菌丝和菌核的颜色等都有明显的差异。目前羊肚菌菌种的获取方法各式各样,如组织分离、孢子分离、菌土分离等导致品种退化非常严重。以上原因导致目前羊肚菌菌种生产的周期长、产量不稳定,甚至绝收,难以满足市场供应。
本发明的菌种生产由传统的先生产原种再生产栽培种用于播种,改进为直接生产原种播种,去掉了原种扩繁为栽培种的环节,菌种繁育时间缩短了24~25天,进一步地,改进接种方式,接种方式由1个点位接种改进为2个点位接种,将菌种在试管内的提纯培养基生长的时间由10天缩短到6天,再通过改变原种培养方式,将传统的静置培养改为摇瓶培养,使得原种培养时间缩短5天以上。因此,本发明的羊肚菌菌种繁育方法有效将传统的70天缩短到33~36天,大大提升了菌种制种效率,适合在羊肚菌栽培中推广。
本发明直接采用原种播种,由于减少了种子繁殖代数,避免菌种由于扩繁导致的退化和衰弱,保证了种子活性,其适应性和抗逆性更强,利于羊肚菌播种后的快速生长发育,提高产量。
与传统的分离培养基相比,本发明采用了不含葡萄糖的无糖培养基,由于羊肚菌菌丝由组织块的再生萌发长成,能够快速附着在培养基表面,而杂菌菌丝必须由芽孢萌发长成,芽孢在无糖培养基表面由于养分不够很难萌发,减少了杂菌滋生的机会,因而无糖培养基能够避免菌种被杂菌污染,使羊肚菌更易存活生长,提高菌种分离的成活率,提高羊肚菌菌种的产量,为做羊肚菌品种的分类鉴定及品种选育奠定了基础。
本发明通过将菌种分离容器由试管改进为三角瓶,将菌种繁殖数量由8~10支增加到25~30支,大大提高了原种的产量,利于大范围播种。
本发明与现有技术相比,具有如下的优点和有益效果:
(1)本发明的菌种生产由传统的先生产原种再生产栽培种用于播种,改进为直接生产原种播种,去掉了原种扩繁为栽培种的环节,大大缩短了菌种制种时间,同时由于减少了种子繁殖代数,保证种子活性,其适应性和抗逆性更强;
(2)通过改进接种方式、改变原种培养方式有效将菌种培养时间缩短9天以上,同时本发明直接采用原种播种,因而整个菌种繁育方法由传统的70天缩短到33~36天;
(3)通过将菌种分离容器由试管改进为三角瓶,提纯培养时菌种繁殖数量由8~10支增加到25~30支,大大提高了繁育出的菌种的产量。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白,下面结合实施例,对本发明作进一步的详细说明,本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明,并不作为对本发明的限定。
实施例1
一种羊肚菌菌种快速繁育方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)种菇选择:采集当地人工种植或野生的羊肚菌,选取菇柄长1~2厘米、菇帽长3~4厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌,采菇时将种菇整连根拔除,去掉多余泥土和杂质,用纸质采样袋密封,摊晾至含水量60%备用;
(2)无糖培养基制备:取淀粉含量高的土豆,去皮后切成0.9cm3的颗粒,称取200g,加水1000ml放入锅内煮沸20分钟,趁热过滤后取滤液,向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉,搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌,灭菌方法为,将三角瓶直立放在医用高压锅内密封,通电加热,打开排气阀,待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时,表示锅内冷空气已排尽,关闭排气阀待温度上升至120℃时开始计时,维持40分钟后断电,灭菌完成后,趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内,消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中,冷却备用;
(3)菌种分离:将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中,超净台工作20分钟达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开,利用接种铲取小块菌肉,接入平板皿中的无糖培养基内,16℃培养4天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝,8天后待菌丝长到直径1.5cm的菌落时即可提纯;
(4)接种:从无糖培养基中挑取4mm见方大的培养基2块,放入试管内的提纯培养基的两个三分点上,每个三角瓶可接28支,16℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝,10天菌丝即可长满试管,其中,所述提纯培养基的制备方法如下:
取20g黄豆打磨成1000ml豆浆后加入葡萄糖20g、琼脂粉20g、KH2P04 1.5g、MgSO41.5g、酵母膏1g充分溶解,调节PH值为7,采用20mm×200mm的玻璃试管,每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液,用试管塞封口,灭菌后摆放倾斜,冷却后即得提纯培养基;
(5)羊肚菌原种制作:将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.9cm的片段,每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内,原种培养基温度降到25℃,接种在接种箱或接种室内进行,一支试管可接8瓶原种,温度18℃、湿度60%条件下培养,第2天菌丝即可吃料,6天菌丝即可封面,其中,所述原种培养基的制备方法如下:
选用当年无虫优质麦粒60g,提前48小时加水浸泡,同时加入石灰1g,浸泡至无白心时捞出沥干水分备用,取木屑30g提前备好用水淋透,自然堆放至棕黄色备用,将制备好的麦粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均匀后装入750ml菌种瓶,装瓶时装至瓶身2/3处即可,种瓶上下松紧一致,最后用棉花或者塑料薄膜封口后,采用高压灭菌设备,压力0.14MPa下灭菌3小时;
(6)摇瓶:菌丝封面后,在培养室内,紧握菌种瓶,上下摇动8~10次,使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中,继续培养5天,菌种瓶中可见大量黄色菌核产生,即可下地播种,每亩用种量400瓶。
实施例2
一种羊肚菌菌种快速繁育方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)种菇选择:采集当地人工种植或野生的羊肚菌,选取菇柄长1~2厘米、菇帽长3~4厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌,采菇时将种菇整连根拔除,去掉多余泥土和杂质,用纸质采样袋密封,摊晾至含水量70%备用;
(2)无糖培养基制备:取淀粉含量高的土豆,去皮后切成1.1cm3的颗粒,称取200g,加水1000ml放入锅内煮沸20分钟,趁热过滤后取滤液,向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉,搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌,灭菌方法为,将三角瓶直立放在医用高压锅内密封,通电加热,打开排气阀,待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时,表示锅内冷空气已排尽,关闭排气阀待温度上升至120℃时开始计时,维持40分钟后断电,灭菌完成后,趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内,消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中,冷却备用;
(3)菌种分离:将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中,超净台工作20分钟达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开,利用接种铲取小块菌肉,接入平板皿中的无糖培养基内,18℃培养4天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝,7天后待菌丝长到直径1.5cm的菌落时即可提纯;
(4)接种:从无糖培养基中挑取5mm见方大的培养基2块,放入试管内的提纯培养基的两个三分点上,每个三角瓶可接30支,18℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝,9天菌丝即可长满试管,其中,所述提纯培养基的制备方法如下:
取20g黄豆打磨成1000ml豆浆后加入葡萄糖20g、琼脂粉20g、KH2P04 1.5g、MgSO41.5g、酵母膏1g充分溶解,调节PH值为7,采用20mm×200mm的玻璃试管,每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液,用试管塞封口,灭菌后摆放倾斜,冷却后即得提纯培养基;
(5)羊肚菌原种制作:将试管中长满菌丝的提纯培养基切成1.1cm的片段,每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内,原种培养基温度降到25℃,接种在接种箱或接种室内进行,一支试管可接8瓶原种,温度16℃、湿度60%条件下培养,第2天菌丝即可吃料,5天菌丝即可封面,其中,所述原种培养基的制备方法如下:
选用当年无虫优质麦粒60g,提前48小时加水浸泡,同时加入石灰1g,浸泡至无白心时捞出沥干水分备用,取木屑30g提前备好用水淋透,自然堆放至棕黄色备用,将制备好的麦粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均匀后装入750ml菌种瓶,装瓶时装至瓶身2/3处即可,种瓶上下松紧一致,最后用棉花或者塑料薄膜封口后,采用高压灭菌设备,压力0.14MPa下灭菌3小时;
(6)摇瓶:菌丝封面后,在培养室内,紧握菌种瓶,上下摇动8~10次,使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中,继续培养5天,菌种瓶中可见大量黄色菌核产生,即可下地播种,每亩用种量380瓶。
实施例3
一种羊肚菌菌种快速繁育方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)种菇选择:采集当地人工种植或野生的羊肚菌,选取菇柄长1~2厘米、菇帽长3~4厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌,采菇时将种菇整连根拔除,去掉多余泥土和杂质,用纸质采样袋密封,摊晾至含水量65%备用;
(2)无糖培养基制备:取淀粉含量高的土豆,去皮后切成1.0cm3的颗粒,称取200g,加水1000ml放入锅内煮沸19分钟,趁热过滤后取滤液,向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉,搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌,灭菌方法为,将三角瓶直立放在医用高压锅内密封,通电加热,打开排气阀,待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时,表示锅内冷空气已排尽,关闭排气阀待温度上升至120℃时开始计时,维持40分钟后断电,灭菌完成后,趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内,消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中,冷却备用;
(3)菌种分离:将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中,超净台工作20分钟达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开,利用接种铲取小块菌肉,接入平板皿中的无糖培养基内,17℃培养5天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝,8天后待菌丝长到直径1.8cm的菌落时即可提纯;
(4)接种:从无糖培养基中挑取5mm见方大的培养基2块,放入试管内的提纯培养基的两个三分点上,每个三角瓶可接29支,17℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝,9天菌丝即可长满试管,其中,所述提纯培养基的制备方法如下:
取20g黄豆打磨成1000ml豆浆后加入葡萄糖20g、琼脂粉20g、KH2P04 1.5g、MgSO41.5g、酵母膏1g充分溶解,调节PH值为7,采用20mm×200mm的玻璃试管,每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液,用试管塞封口,灭菌后摆放倾斜,冷却后即得提纯培养基;
(5)羊肚菌原种制作:将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.9cm的片段,每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内,原种培养基温度降到25℃,接种在接种箱或接种室内进行,一支试管可接8瓶原种,温度17℃、湿度60%条件下培养,第2天菌丝即可吃料,7天菌丝即可封面,其中,所述原种培养基的制备方法如下:
选用当年无虫优质麦粒60g,提前48小时加水浸泡,同时加入石灰1g,浸泡至无白心时捞出沥干水分备用,取木屑30g提前备好用水淋透,自然堆放至棕黄色备用,将制备好的麦粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均匀后装入750ml菌种瓶,装瓶时装至瓶身2/3处即可,种瓶上下松紧一致,最后用棉花或者塑料薄膜封口后,采用高压灭菌设备,压力0.14MPa下灭菌3小时;
(6)摇瓶:菌丝封面后,在培养室内,紧握菌种瓶,上下摇动8~10次,使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中,继续培养4天,菌种瓶中可见大量黄色菌核产生,即可下地播种,每亩用种量390瓶。
实施例4
一种羊肚菌菌种快速繁育方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)种菇选择:采集当地人工种植或野生的羊肚菌,选取菇柄长1~2厘米、菇帽长3~4厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌,采菇时将种菇整连根拔除,去掉多余泥土和杂质,用纸质采样袋密封,摊晾至含水量70%备用;
(2)无糖培养基制备:取淀粉含量高的土豆,去皮后切成1.1cm3的颗粒,称取200g,加水1000ml放入锅内煮沸20分钟,趁热过滤后取滤液,向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉,搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌,灭菌方法为,将三角瓶直立放在医用高压锅内密封,通电加热,打开排气阀,待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时,表示锅内冷空气已排尽,关闭排气阀待温度上升至120℃时开始计时,维持40分钟后断电,灭菌完成后,趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内,消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中,冷却备用;
(3)菌种分离:将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中,超净台工作20分钟达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开,利用接种铲取小块菌肉,接入平板皿中的无糖培养基内,18℃培养4天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝,7天后待菌丝长到直径1.5cm的菌落时即可提纯;
(4)接种:从无糖培养基中挑取5mm见方大的培养基2块,放入试管内的提纯培养基的两个三分点上,每个三角瓶可接29支,18℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝,10天菌丝即可长满试管,其中,所述提纯培养基的制备方法如下:
取20g黄豆打磨成1000ml豆浆后加入葡萄糖20g、琼脂粉20g、KH2P04 1.5g、MgSO41.5g、酵母膏1g充分溶解,调节PH值为7,采用20mm×200mm的玻璃试管,每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液,用试管塞封口,灭菌后摆放倾斜,冷却后即得提纯培养基;
(5)羊肚菌原种制作:将试管中长满菌丝的提纯培养基切成1.1cm的片段,每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内,原种培养基温度降到25℃,接种在接种箱或接种室内进行,一支试管可接8瓶原种,温度18℃、湿度60%条件下培养,第2天菌丝即可吃料,5天菌丝即可封面,其中,所述原种培养基的制备方法如下:
选用当年无虫优质麦粒60g,提前48小时加水浸泡,同时加入石灰1g,浸泡至无白心时捞出沥干水分备用,取木屑30g提前备好用水淋透,自然堆放至棕黄色备用,将制备好的麦粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均匀后装入750ml菌种瓶,装瓶时装至瓶身2/3处即可,种瓶上下松紧一致,最后用棉花或者塑料薄膜封口后,采用高压灭菌设备,压力0.14MPa下灭菌3小时;
(6)摇瓶:菌丝封面后,在培养室内,紧握菌种瓶,上下摇动8~10次,使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中,继续培养5天,菌种瓶中可见大量黄色菌核产生,即可下地播种,每亩用种量385瓶。
实施例5
一种羊肚菌菌种快速繁育方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)种菇选择:采集当地人工种植或野生的羊肚菌,选取菇柄长1~2厘米、菇帽长3~4厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌,采菇时将种菇整连根拔除,去掉多余泥土和杂质,用纸质采样袋密封,摊晾至含水量70%备用;
(2)无糖培养基制备:取淀粉含量高的土豆,去皮后切成1.1cm3的颗粒,称取200g,加水1000ml放入锅内煮沸18分钟,趁热过滤后取滤液,向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉,搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌,灭菌方法为,将三角瓶直立放在医用高压锅内密封,通电加热,打开排气阀,待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时,表示锅内冷空气已排尽,关闭排气阀待温度上升至120℃时开始计时,维持40分钟后断电,灭菌完成后,趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内,消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中,冷却备用;
(3)菌种分离:将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中,超净台工作20分钟达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开,利用接种铲取小块菌肉,接入平板皿中的无糖培养基内,16℃培养5天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝,7天后待菌丝长到直径2cm的菌落时即可提纯;
(4)接种:从无糖培养基中挑取4mm见方大的培养基2块,放入试管内的提纯培养基的两个三分点上,每个三角瓶可接30支,18℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝,9天菌丝即可长满试管,其中,所述提纯培养基的制备方法如下:
取20g黄豆打磨成1000ml豆浆后加入葡萄糖20g、琼脂粉20g、KH2P04 1.5g、MgSO41.5g、酵母膏1g充分溶解,调节PH值为7,采用20mm×200mm的玻璃试管,每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液,用试管塞封口,灭菌后摆放倾斜,冷却后即得提纯培养基;
(5)羊肚菌原种制作:将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.9cm的片段,每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内,原种培养基温度降到25℃,接种在接种箱或接种室内进行,一支试管可接8瓶原种,温度17℃、湿度60%条件下培养,第2天菌丝即可吃料,6天菌丝即可封面,其中,所述原种培养基的制备方法如下:
选用当年无虫优质麦粒60g,提前48小时加水浸泡,同时加入石灰1g,浸泡至无白心时捞出沥干水分备用,取木屑30g提前备好用水淋透,自然堆放至棕黄色备用,将制备好的麦粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均匀后装入750ml菌种瓶,装瓶时装至瓶身2/3处即可,种瓶上下松紧一致,最后用棉花或者塑料薄膜封口后,采用高压灭菌设备,压力0.14MPa下灭菌3小时;
(6)摇瓶:菌丝封面后,在培养室内,紧握菌种瓶,上下摇动8~10次,使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中,继续培养5天,菌种瓶中可见大量黄色菌核产生,即可下地播种,每亩用种量400瓶。
经发明人大量的试验和探索,最终得出上述羊肚菌菌种快速繁育方法,该方法在保证菌种品质、存活率和产量的前提下,大大缩短了羊肚菌菌种繁育周期,满足市场需求。
以上所述的具体实施方式,对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明,所应理解的是,以上所述仅为本发明的具体实施方式而已,并不用于限定本发明的保护范围,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种羊肚菌菌种快速繁育方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)种菇选择:选取菇柄长1~2厘米、菇帽长3~4厘米、纹路清晰、褶皱紧密的羊肚菌种菇连根拔除,清除杂质后摊晾至含水量为60~70%备用;
(2)无糖培养基制备:土豆去皮后切成颗粒,称取质量份数为200份的土豆颗粒,加水煮沸18~20分钟,趁热过滤取滤液,向滤液中补充热水后加入琼脂粉,搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌,再趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内,消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中,冷却备用;
(3)菌种分离:将步骤(1)中的种菇,无糖培养基和分离器具灭菌后,切开种菇菌盖,铲取小块菌肉,接入平板皿中的无糖培养基内,16~18℃培养4~6天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝,7~8天后待菌丝长到直径1.5~2cm的菌落时即可提纯;
(4)接种:从步骤(3)所得无糖培养基中挑取2块培养基,放入试管内的提纯培养基的两个三分点上,16~18℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝,9~10天菌丝即可长满试管;
(5)羊肚菌原种制作:将试管中长满菌丝的提纯培养基切成片段,每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内,温度16~18℃、湿度60%条件下培养,第2天菌丝即吃料,5~7天菌丝即可封面;
(6)摇瓶:菌丝封面后,在培养室内,紧握菌种瓶,上下摇动8~10次,使菌丝均匀分布在菌种瓶中,继续培养3~5天,菌种瓶中有大量黄色菌核产生,即可下地播种,每亩用种量380~410瓶。
2.根据权利要求1所述的一种羊肚菌菌种快速繁育方法,其特征在于,步骤(4)中所述提纯培养基的制备方法如下:
取20份黄豆打磨成豆浆后加入葡萄糖20份、琼脂粉20份、KH2P041.5份、MgSO41.5份、酵母膏1份充分溶解,采用20mm×200mm的玻璃试管,每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液,封口灭菌后摆放倾斜,冷却后即得提纯培养基。
3.根据权利要求1或2所述的一种羊肚菌菌种快速繁育方法,其特征在于,步骤(5)中所述原种培养基的制备方法如下:
1)选用当年无虫优质麦粒60份,提前48小时加水浸泡,同时加入石灰1份,浸泡至无白心时捞出沥干水分备用;
2)取木屑30份提前备好用水淋透,自然堆放至棕黄色备用;
3)将上述步骤中制备好的麦粒、木屑以及草炭土8份、石膏1份混合均匀后装入750ml菌种瓶,装瓶时装至瓶身2/3处即可,种瓶上下松紧一致,最后用棉花或者塑料薄膜封口。
4.根据权利要求3所述的一种羊肚菌菌种快速繁育方法,其特征在于:步骤(2)中所述土豆颗粒为0.9~1.1cm3。
5.根据权利要求3所述的一种羊肚菌菌种快速繁育方法,其特征在于:步骤(4)中挑取的两块无糖培养基体积均为4~5mm3。
6.根据权利要求3所述的一种羊肚菌菌种快速繁育方法,其特征在于:步骤(5)中切成片段的提纯培养基长度为0.9~1.1cm。
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