CN106265810A - 一种甜叶菊酚类提取物及其在制备抑菌制品中的应用 - Google Patents

一种甜叶菊酚类提取物及其在制备抑菌制品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种甜叶菊酚类提取物及其在制备抑菌制品中的应用，属植物提取物技术领域。该甜叶菊酚类提取物是以黄酮和绿原酸为主要成分的多酚类化合物。该甜叶菊酚类提取物对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌3种G+菌具有抑菌作用，抑菌活性随甜叶菊酚类提取物浓度的增加而增强。甜叶菊酚类提取物经高温处理后仍具有较好的抑菌活性，增加pH值和紫外线处理使其对蜡样芽孢杆菌的抑菌活性降低，Na+、K+和Ca2+能够增强甜叶菊酚类提取物对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性。甜叶菊酚类提取物具有较好的抑菌活性和抑菌稳定性，作为抑菌制品使用具有广阔的开发和利用前景。

Description

一种甜叶菊酚类提取物及其在制备抑菌制品中的应用
技术领域
本发明属植物提取物技术领域，涉及一种甜叶菊酚类提取物及其在制备抑菌制品中的应用。
背景技术
甜叶菊(Stevia rebaudiana)属菊科多年生草本植物，原产于南美巴拉圭和巴西，主要用来作为生产甜菊糖的原料使用。甜菊糖的甜度为蔗糖的150～300倍，热量却仅为蔗糖的1/300。近年来，甜菊糖苷在食品、饮料及日化用品等行业中得到了广泛的应用，甜叶菊也已成为继甘蔗和甜菜之后的第三大糖源。甜叶菊中除甜菊糖苷为还含有黄酮、绿原酸等多种成分，且这些成分具有重要的生物活性，如抗菌、降血压、降血脂等，在其发源地作为甜茶、药茶饮用已有一百多年的历史。
甜菊糖苷以甜菊叶为原料，经热水浸提→絮凝除杂→树脂纯化→干燥制得。甜叶菊酚类物质在甜菊糖苷生产过程中作为杂质存在，在絮凝环节和甜菊糖苷分离，进入絮凝渣作为废弃物排放，不仅造成资源的浪费，还对环境造成了极大的污染。
发明内容
为提高甜叶菊综合利用价值，本发明提供了一种甜叶菊酚类提取物，本发明另一个目的在于提供甜叶菊酚类提取物在制备抑菌制品中的应用。
为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：一种甜叶菊酚类提取物，该提取物是以黄酮和绿原酸为主要成分的多酚类化合物。
本发明所述甜叶菊酚类提取物中包括黄酮含量为5.0-85.0wt％，绿原酸含量为10.0-90.0wt％。
本发明所述甜叶菊酚类提取物中黄酮成分为槲皮素、槲皮苷、槲皮素-3-O-β-D-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-[4”'-O-反式-咖啡酰基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]、芹菜素、芹菜素-4'-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷中的任意一种或几种，苷元为槲皮素、山奈酚、芹菜素和木犀草素中的任意一种或几种。
本发明该甜叶菊酚类提取物中绿原酸成分为咖啡酸、3-咖啡酰基奎尼酸、4-咖啡酰基奎尼酸、5-咖啡酰基奎尼酸、3,4-二咖啡酰基奎尼酸、3,5-二咖啡酰基奎尼酸、4,5-二咖啡酰基奎尼酸、5-阿魏酰基奎尼酸中的任意一种或几种。
本发明所述甜叶菊酚类提取物制备方法如下：
(1)取甜菊叶原料，加水提取，提取液过陶瓷膜；
提取用水量为原料的10-30倍，提取温度为15-85℃，传统间歇提取三次或采用三级连续逆流提取，陶瓷膜选用膜管为5-100nm膜管；
(2)陶瓷膜透过液上大孔吸附树脂1吸附，碱洗，一定度数乙醇解析，解析液浓缩回收乙醇后分别过脱盐、脱色、精脱树脂，干燥得甜菊糖苷产品；
选用的吸附树脂为P20、ADS-4、69M、T28、DM30、001×6、001×8、201-H、SQ338、330中的任意一种或几种；碱洗液为NaOH、KOH、氨水中的一种或任意组合，质量浓度为0.2-2％的或pH 8.5-9.5，碱洗液用量为1-3BV，速度为1-3BV/h；
(3)下柱水和调酸后碱洗液混合，上吸附树脂2，水洗，乙醇水溶液解析，浓缩回收溶剂，干燥得甜叶菊酚类提取物；
所用吸附树脂2为LX-200B、LX-2007、SD-300、LSA-21、HZ841中的一种或任意组合；下柱水和调酸后碱洗液上柱流速1-3BV/h，调酸用盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、柠檬酸中的一种或几种，酸性溶液为摩尔浓度为0.1-18mol/L，调pH至0.5-6.5；水洗用量1-3BV，水洗流速1-3BV/h，解析用乙醇浓度为10-85％，用量为1-5BV，洗脱流速为1-3BV/h；浓缩采用薄膜浓缩、减压浓缩中的一种或组合；干燥采用喷雾干燥、脱味锅真空干燥、回转罐真空干燥、烘箱干燥中的一种或组合。
本发明的另一目的在于提供上述的甜叶菊酚类提取物在制备抗菌药物或食品中的应用。
本发明所述药物是以甜叶菊酚类提取物为活性成分制备而成的口服剂、注射剂或外用制剂。
本发明所述甜叶菊酚类提取物与Na+、K+、Ca2+中的任意一种或几种在抑菌效果上有正向协同作用。
本发明所述甜叶菊酚类提取物具有良好的热稳定性；所述甜叶菊酚类提取物对紫外光的稳定性良好。
本发明甜叶菊酚类提取物中黄酮和绿原酸的检测方法参考专利201510339325.7中提供的黄酮和绿原酸的检测方法。
本发明的设计思路是：本发明从甜叶菊中提取得到甜叶菊酚类提取物，该提取物具有很好的抑菌活性，可用于抑菌制品中。该甜叶菊酚类提取物包括黄酮含量为5.0-85.0wt％，绿原酸含量为10.0-90.0wt％。本发明证实，该提取物对金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌3种G+菌具有抑菌作用，抑菌活性随甜叶菊酚类提取物浓度的增加而增强。甜叶菊 酚类提取物经高温处理后仍具有较好的抑菌活性，增加pH值和紫外线处理使其对蜡样芽孢杆菌的抑菌活性降低，Na+、K+和Ca2+能够增强甜叶菊酚类提取物对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明提供的甜叶菊酚类提取物具有原料来源丰富，易于产业化等优点，此外，甜叶菊酚类提取物对考察的3种G+菌均具有较好抑菌效果，且抑菌稳定性良好，作为抑菌制品使用具有广阔的开发和利用前景。
附图说明
图1为甜叶菊酚类提取物对蜡样芽孢杆菌(A)的时间—抗菌曲线图；
图2为枯草芽孢杆菌(B)的时间—抗菌曲线图；
图3为金黄色葡萄球菌(C)的时间—抗菌曲线图。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供了甜叶菊酚类提取物具有抑菌作用的实验。
1.1材料与试剂
甜叶菊酚类提取物；MH(A)培养基、MH(B)培养基，北京奥博星生物技术有限责任公司；金黄色葡萄糖球菌(Staphylococcus aureus)AS1.89、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AS1.1849、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)AS1.1846，中科院微生物所；其他试剂均为国产分析纯。
1.2仪器与设备
ZWP-A1230恒温恒湿培养箱，上海智城分析仪器制造有限公司；SW-CJ-2FD双人单面净化工作台，苏州净化设备有限公司。
1.3.1菌种的活化及菌悬液制备
将菌种从斜面上用接种环接到新鲜培养基斜面上，各细菌于37℃培养箱培养24h。随后，分别从活化的菌种斜面上用接种环刮取少量菌体接种于已灭菌的MH(B)培养基，采用活菌计数法测定蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的原始菌液浓度，最后将制备好的菌液至于4℃保存备用。
1.3.2甜叶菊酚类提取物的制备
称取100kg甜菊叶，加1.5m3水，65℃提取，重复提取三次，合并提取液，过5nm陶瓷膜。透过液上201-H吸附树脂，1BV水洗，水洗流速1BV/h，1.5BV 0.4％NaOH水溶液洗，流速1BV/h，乙醇解析，解析液浓缩回收乙醇后分别过脱盐、脱色、精脱树脂，干燥得甜菊糖苷产品。
碱洗液用1mol/L的盐酸水溶液调pH至3.5，和下柱水混合，上吸附树脂SD-300，上柱流速1.5BV/h。2BV水洗，水洗流速1.5BV/h。2BV 50％乙醇水溶液解析，解析流速1BV/h。减压浓缩，回收乙醇溶剂，脱味锅真空干燥得甜叶菊多酚提取物2.0kg。检测甜叶菊酚类提取物总黄酮和总绿原酸含量分别为20％和75％，黄酮类成分为槲皮素、槲皮苷、槲皮素-3-O-β-D-阿拉伯糖苷、芹菜素、芹菜素-4'-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷；绿原酸成分为咖啡酸、3-咖啡酰基奎尼酸、4-咖啡酰基奎尼酸、5-咖啡酰基奎尼酸、3,4-二咖啡酰基奎尼酸、3,5-二咖啡酰基奎尼酸、4,5-二咖啡酰基奎尼酸、5-阿魏酰基奎尼酸。
1.3.3滤纸片扩散法
将原始菌液用MH(B)液体培养基稀释至浓度为0.8～1.2×106CFU/mL。吸取100μL上述菌液于无菌培养皿中，再加入MH(A)培养基后混匀。吸取10μL 100mg/mL甜叶菊酚类提取物于直径为6mm的滤纸片上，将滤纸片放置在已凝固的混有菌液的MH(A)培养基上，同时做空白对照，在37℃培养箱中培养24h后观察结果。通过测定抑菌圈的直径来评价甜叶菊酚类提取物对3种食源性细菌的抑菌作用。
1.3.4最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定
采用液体倍比稀释法，吸取1mL甜叶菊酚类提取物溶液与9mL MH(A)培养基加入到无菌培养皿中，制成50、25、12.5、6.25、3.125mg/mL的带样平板，吸取0.1mL 0.8～1.2×106CFU/mL菌悬液均匀的涂布在固体培养基上，以无菌水代替样品作为空白对照，在37℃培养箱中培养24h，以抑制菌株生长的平板所含最低样品浓度为MIC。将以上测出的MIC以上浓度的培养基表面用无菌水冲洗，将冲洗液接种到无菌MH(A)培养基上，涂布均匀，在37℃培养36h，以与正常MH(A)培养基表面无菌落生长相对应的最小样品浓度，即为该样品对供试菌的MBC。
1.4统计分析
每个实验至少重复三次，实验结果以均值±标准偏差(Mean±S.D.)表示，数据统计用SPSS18.0统计软件进行处理，采用ANOVA单因素方差分析和Duncan多重比较检验。p<0.05具有显著性差异，p<0.01具有极显著性差异。
1.5实验结果
由表1所示，甜叶菊酚类提取物(100mg/mL)对枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌作用显著，其抑菌圈直径分别为1.27，1.53和2.82cm。甜叶菊酚类提取物对枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的MIC均为12.5mg/mL，对金黄色葡萄球菌的MIC为3.13mg/mL； 甜叶菊酚类提取物对枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的MBC分别为12.5、25和6.25mg/mL。由此可知，甜叶菊酚类提取物对供试G+菌、G-菌均具有抑菌作用。对供试G+菌的抑菌作用强于供试G-菌，对G+菌的抑菌作用强弱顺序为：金黄色葡萄球菌>蜡样芽孢杆菌>枯草芽孢杆菌。
表1甜叶菊酚类提取物对不同供试菌的抑菌活性
注：§，甜叶菊酚类提取物浓度为100mg/mL；—，没有抑菌作用。
实施例2
本实施例提供了甜叶菊酚类提取物的时间—抗菌曲线的测定实验。
2.1材料与试剂
甜叶菊酚类提取物；MH(B)培养基，北京奥博星生物技术有限责任公司；金黄色葡萄糖球菌(Staphylococcus aureus)AS1.89、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AS1.1849、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)AS1.1846，中科院微生物所；其他试剂均为国产分析纯。
2.2仪器与设备
SPECTRA MAX 190连续波长酶标仪，美国MD公司；HQ45恒温摇床，中国科学院武汉科学仪器厂；ZWP-A1230恒温恒湿培养箱，上海智城分析仪器制造有限公司；SW-CJ-2FD双人单面净化工作台，苏州净化设备有限公司。
2.3实验过程
2.3.1甜叶菊酚类提取物的制备
称取100kg甜菊叶，加3.0m3水，60℃三级连续逆流提取，提取液过50nm陶瓷膜。透过液上T28吸附树脂，1.5BV水洗，水洗流速1BV/h，1.5BV pH＝9.0的氨水溶液洗，流速1BV/h，乙醇解析，解析液浓缩回收乙醇后分别过脱盐、脱色、精脱树脂，干燥得甜菊糖苷产品。
碱洗液用18mol/L的硫酸溶液调pH至5.0，和下柱水混合，上吸附树脂HZ 841，上柱流速1.0BV/h。3BV水洗，水洗流速2.0BV/h。2BV 65％乙醇水溶液解析，解析流速1.5BV/h。减压浓缩，回收乙醇溶剂，喷雾干燥得甜叶菊多酚提取物3.0kg。检测甜叶菊酚类提取物总黄酮和总绿原酸含量分别为15％和60％，黄酮类成分为槲皮素、槲皮苷、芹菜素、芹菜素-4'-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素和山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷；绿原酸成分为咖啡酸、3-咖啡酰基奎尼酸、4-咖啡酰基奎尼酸、5-咖啡酰基奎尼酸、3,4-二咖啡酰基奎尼酸、3,5-二咖啡酰基奎 尼酸、4,5-二咖啡酰基奎尼酸、5-阿魏酰基奎尼酸。
2.3.2时间—抗菌曲线的测定
将原始菌液用MH(B)液体培养基稀释至浓度为0.8～1.2×106CFU/mL。于96孔板中每孔加入5μL不同浓度的甜叶菊酚类提取物溶液，再加入150μL菌悬液，混匀，使甜叶菊酚类提取物的终浓度达到1、2、5mmol/L。以无菌水代替样品作为对照。将96孔板置于培养箱中，于37℃培养，分别于0，1，2，4，6，8，10，16，20，24h取出，使用酶标仪在600nm波长处测定菌液的浊度。以时间为横坐标，各时间点测得的菌液浊度作为纵坐标，绘制时间—抗菌曲线图。
2.4统计分析
每个实验至少重复三次，实验结果以均值±标准偏差(Mean±S.D.)表示，数据统计用SPSS 18.0统计软件进行处理，采用ANOVA单因素方差分析和Duncan多重比较检验。p<0.05具有显著性差异，p<0.01具有极显著性差异。
2.5实验结果
甜叶菊酚类提取物对蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的时间—抗菌曲线如图1-3所示。空白对照组表示未加入甜叶菊酚类提取物的体系中各菌种随时间的变化。当浓度为1、2mg/mL时，甜叶菊酚类提取物对3种供试菌均无明显的抑菌作用。当浓度为5mg/mL时，甜叶菊酚类提取物对3种供试菌均具有较强的抑菌作用，从菌体生长对数期开始可使菌悬液OD值明显下降。与空白对照组比，甜叶菊酚类提取物在24h时对蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率分别达到19.6％、15.6％和21.9％。总体而言，甜叶菊酚类提取物对于3种供试菌的抑菌效果随浓度的增加而增强。
实施例3
甜叶菊酚类提取物抑菌稳定性的研究
3.1材料与试剂
甜叶菊酚类提取物；MH(A)培养基、MH(B)培养基，北京奥博星生物技术有限责任公司；金黄色葡萄糖球菌(Staphylococcus aureus)AS1.89、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AS1.1849、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)AS1.1846，中科院微生物所；其他试剂均为国产分析纯。
3.2仪器与设备
HQ45恒温摇床，中国科学院武汉科学仪器厂；ZWP-A1230恒温恒湿培养箱，上海智城分析仪器制造有限公司；SW-CJ-2FD双人单面净化工作台，苏州净化设备有限公司；HH-4数显恒温水浴锅，江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司；pH400型pH计，安莱立思仪器科技(上海)有限公司；MLS-3750高压蒸汽灭菌器，三洋电机株式会社。
3.3实验过程
3.3.1温度对甜叶菊酚类提取物抑菌活性的影响
将100mg/mL甜叶菊酚类提取物至于40、60、80和100℃下处理20min，通过测定抑菌圈的直径，确定抑菌活性。同时以相同浓度未经处理的甜叶菊酚类提取物作为对照。
3.3.2 pH值对甜叶菊酚类提取物抑菌活性的影响
将100mg/mL甜叶菊酚类提取物用0.1mol/mL的HCl或NaOH调节为pH值为4、5、6、7、8，平衡24h后测量抑菌圈的直径，确定抑菌活性。同时以相同浓度未处理的甜叶菊酚类提取物作为对照。
3.3.3紫外光对甜叶菊酚类提取物抑菌活性的影响
将100mg/mL甜叶菊酚类提取物至于紫外光下照射5、10、15、20、25min后，测量其抑菌圈的直径，确定抑菌活性。同时以相同浓度未处理的甜叶菊酚类提取物作为对照。
3.3.4金属离子对甜叶菊酚类提取物抑菌活性的影响
将100mg/mL甜叶菊酚类提取物分别用0.01mol/L的Na+、K+、Ca2+三种金属离子溶液处理，测量各组抑菌直径，确定抑菌活性。同时以相同浓度未处理的甜叶菊酚类提取物作为对照。
3.3.5统计分析
每个实验至少重复三次，实验结果以均值±标准偏差(Mean±S.D.)表示，数据统计用SPSS18.0统计软件进行处理，采用ANOVA单因素方差分析和Duncan多重比较检验。p<0.05具有显著性差异，p<0.01具有极显著性差异。
3.4实验结果
3.4.1温度对甜叶菊酚类提取物抑菌活性的影响
由表2可知，不同温度处理后甜叶菊酚类提取物对枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的抑菌圈直径无显著性影响，抑菌活性基本保持不变，表明甜叶菊酚类提取物中的抑菌成分具有较高的热稳定性。但是对于金黄色葡萄球菌，随着对甜叶菊酚类提取物处理温度的增加，在80和100℃时抑菌效果有一定减弱。总的来说，甜叶菊酚类提取物中的抑菌成分具有良好的热稳定性。
表2温度对甜叶菊酚类提取物的抑菌圈直径的影响
注：abc同列中标有不同字母的数值存在显著性差异(p<0.05)。
3.4.2pH值对甜叶菊酚类提取物抑菌活性的影响
如表3所示，甜叶菊酚类提取物对供试菌在较宽的pH范围内都有抑菌活性，但是略有波动。不同pH值甜叶菊酚类提取物对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌作用无显著性差异。然而，酸性条件处理后甜叶菊酚类提取物对蜡样芽孢杆菌的抑菌活性比在碱性条件处理后强，未经处理的(pH2.8)甜叶菊酚类提取物的抑菌活性最高，pH值超过7.0以后，抑菌效果消失。分析原因可能因为甜叶菊酚类提取物中的酚酸类物质自然情况下呈酸性，在碱性环境中结构会发生水解生成醌类，从而引起抑菌活性的减弱，总体上看甜叶菊酚类提取物在较广的pH范围内抑菌效果较好。
表3pH对甜叶菊酚类提取物的抑菌圈直径的影响
注：abc同列中标有不同字母的数值存在显著性差异(p<0.05)；—，没有抑菌作用。
3.4.3紫外光对甜叶菊酚类提取物抑菌活性的影响
如表4所示，紫外光照射使甜叶菊酚类提取物对蜡样芽孢杆菌的抑菌作用明显减弱，而对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌作用基本不受影响。可见，紫外光对甜叶菊酚类提取物的抑菌活性的影响与菌种有关，可能因为其对不同菌种的抑菌机制存在差异。总的来说，甜叶菊酚类提取物对紫外光的稳定性较好，在自然环境中存放能够对抗紫外线，保证其较好的发挥抑菌作用。
表4紫外光对甜叶菊酚类提取物的抑菌圈直径的影响
注：abc同列中标有不同字母的数值存在显著性差异(p<0.05)。
3.4.4金属离子对甜叶菊酚类提取物抑菌活性的影响
从表5可以看出，0.01mol/L的Na+、K+和Ca2+能够在一定程度上提高甜叶菊酚类提取物的抑菌活性，但对不同供试菌抑菌活性的增效作用有差异。对于枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌，3种离子对甜叶菊酚类提取物抑菌活性的增效作用强弱为K+>Na+≈Ca2 +。
表5金属离子对甜叶菊酚类提取物的抑菌圈直径的影响
注：abc同列中标有不同字母的数值存在显著性差异(p<0.05)。

Claims (9)

1.一种甜叶菊酚类提取物，其特征在于，该提取物是以黄酮和绿原酸为主要成分的多酚类化合物。
2.根据权利要求1所述的一种甜叶菊酚类提取物，其特征在于，所述甜叶菊酚类提取物中包括黄酮含量为5.0-85.0wt%，绿原酸含量为10.0-90.0wt%。
3.根据权利要求1所述的一种甜叶菊酚类提取物，其特征在于，所述甜叶菊酚类提取物中黄酮成分为槲皮素、槲皮苷、槲皮素-3-O-β-D-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-[4'''-O-反式-咖啡酰基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]、芹菜素、芹菜素-4'-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷中的任意一种或几种，苷元为槲皮素、山奈酚、芹菜素和木犀草素中的任意一种或几种。
4.根据权利要求1所述的一种甜叶菊酚类提取物，其特征在于，该甜叶菊酚类提取物中绿原酸成分为咖啡酸、3-咖啡酰基奎尼酸、4-咖啡酰基奎尼酸、5-咖啡酰基奎尼酸、3,4-二咖啡酰基奎尼酸、3,5-二咖啡酰基奎尼酸、4,5-二咖啡酰基奎尼酸、5-阿魏酰基奎尼酸中的任意一种或几种。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的甜叶菊酚类提取物，其特征在于，所述甜叶菊酚类提取物制备方法如下：
（1）取甜菊叶原料，加水提取，提取液过陶瓷膜；
提取用水量为原料的10-30倍，提取温度为15-85℃，传统间歇提取三次或采用三级连续逆流提取，陶瓷膜选用膜管为5-100nm膜管；
（2）陶瓷膜透过液上大孔吸附树脂1吸附，碱洗，一定度数乙醇解析，解析液浓缩回收乙醇后分别过脱盐、脱色、精脱树脂，干燥得甜菊糖苷产品；
选用的吸附树脂为P20、ADS-4、69M、T28、DM30、001×6、001×8、201-H、SQ338、330中的任意一种或几种；碱洗液为NaOH、KOH、氨水中的一种或任意组合，质量浓度为0.2-2%的或pH8.5-9.5，碱洗液用量为1-3BV，速度为1-3BV/h；
（3）下柱水和调酸后碱洗液混合，上吸附树脂2，水洗，乙醇水溶液解析，浓缩回收溶剂，干燥得甜叶菊酚类提取物；
所用吸附树脂2为LX-200B、LX-2007、SD-300、LSA-21、HZ841中的一种或任意组合；下柱水和调酸后碱洗液上柱流速1-3BV/h，调酸用盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、柠檬酸中的一种或几种，酸性溶液为摩尔浓度为0.1-18mol/L，调pH至0.5-6.5；水洗用量1-3BV，水洗流速1-3BV/h，解析用乙醇浓度为10-85%，用量为1-5BV，洗脱流速为1-3BV/h；浓缩采用薄膜浓缩、减压浓缩中的一种或组合；干燥采用喷雾干燥、脱味锅真空干燥、回转罐真空干燥、烘箱干燥中的一种或组合。
6.基于权利要求1-5任意一项所述的甜叶菊酚类提取物在制备抗菌药物或食品中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物是以甜叶菊酚类提取物为活性成分制备而成的口服剂、注射剂或外用制剂。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述甜叶菊酚类提取物与Na+、K+、Ca2+中的任意一种或几种在抑菌效果上有正向协同作用。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述甜叶菊酚类提取物具有良好的热稳定性；所述甜叶菊酚类提取物对紫外光的稳定性良好。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106619766A (zh) * 2016-08-29 2017-05-10 晨光生物科技集团股份有限公司 一种甜叶菊酚类提取物及其在降血糖制品中的应用
CN109349333A (zh) * 2018-11-16 2019-02-19 青岛海思达生物科技有限公司 一种甜叶菊发酵产物及其极性组分和在制备香肠防腐剂中的应用
CN109498668A (zh) * 2018-11-16 2019-03-22 青岛海思达生物科技有限公司 一种甜叶菊发酵液提取物及其极性组分和在制备抑菌剂和添加剂中的应用
CN110200057A (zh) * 2019-05-10 2019-09-06 鲁东大学 一种海水鱼保鲜及品质改善的方法
WO2020039443A1 (en) * 2018-08-23 2020-02-27 Kalmarna Limited Compositions and methods for controlling mammalian pathogens
CN114521608A (zh) * 2022-01-27 2022-05-24 江苏雅博动物健康科技有限责任公司 一种乳酸菌和芽孢杆菌的发酵增效组合物

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103385903A (zh) * 2013-08-02 2013-11-13 石任兵 一种甜叶菊酚类提取物及其在制备降脂制品中的应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103385903A (zh) * 2013-08-02 2013-11-13 石任兵 一种甜叶菊酚类提取物及其在制备降脂制品中的应用

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106619766A (zh) * 2016-08-29 2017-05-10 晨光生物科技集团股份有限公司 一种甜叶菊酚类提取物及其在降血糖制品中的应用
WO2020039443A1 (en) * 2018-08-23 2020-02-27 Kalmarna Limited Compositions and methods for controlling mammalian pathogens
CN109349333A (zh) * 2018-11-16 2019-02-19 青岛海思达生物科技有限公司 一种甜叶菊发酵产物及其极性组分和在制备香肠防腐剂中的应用
CN109498668A (zh) * 2018-11-16 2019-03-22 青岛海思达生物科技有限公司 一种甜叶菊发酵液提取物及其极性组分和在制备抑菌剂和添加剂中的应用
CN110200057A (zh) * 2019-05-10 2019-09-06 鲁东大学 一种海水鱼保鲜及品质改善的方法
CN114521608A (zh) * 2022-01-27 2022-05-24 江苏雅博动物健康科技有限责任公司 一种乳酸菌和芽孢杆菌的发酵增效组合物
CN114521608B (zh) * 2022-01-27 2022-11-04 江苏雅博动物健康科技有限责任公司 一种乳酸菌和芽孢杆菌的发酵增效组合物

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