CN103385903A

CN103385903A - 一种甜叶菊酚类提取物及其在制备降脂制品中的应用

Info

Publication number: CN103385903A
Application number: CN2013103330225A
Authority: CN
Inventors: 石任兵; 彭平; 姜艳艳; 朱乃亮; 郭小红
Original assignee: 石任兵
Priority date: 2013-08-02
Filing date: 2013-08-02
Publication date: 2013-11-13

Abstract

本发明公开了一种甜叶菊酚类提取物与制备工艺，及其在制备降脂制品中的应用。本发明通过乙醇提取甜叶菊原料，提取物再通过大孔吸附树脂或聚酰胺或其他色谱法分离纯化，得到甜叶菊酚类提取物。该甜叶菊酚类提取物具有显著的降低血清中甘油三酯活性，可以制备成任何常用制品。

Description

一种甜叶菊酚类提取物及其在制备降脂制品中的应用

技术领域

本发明属食品医药技术领域，具体涉及一种甜叶菊酚类提取物及其降脂活性，以及在制备降脂制品中的应用。

背景技术

甜叶菊(Stevia rebaudiana Bertoni)属菊科甜菊属多年生草本植物，早期就有其治疗糖尿病的报道。我国学者对甜叶菊治疗糖尿病作用进行试验，结果发现其具有降脂、降血糖及改善“三多”症状的作用，总有效率达86％。

文献报道甜叶菊中主要含有甜菊苷类、酚酸类等化学成分，且已被作为甜味剂进行广泛应用。申请人通过研究确定了其所含的酚类成分，如咖啡鞣质类成分，咖啡酸、阿魏酸等其他酚类成分，和/或黄酮类成分，如4，5-双咖啡酰奎宁酸、槲皮苷等。申请人通过建立简便易行经济的制备方法，分离富集了甜叶菊酚类提取物，并对其降脂活性进行了考察，发现其具有显著的降脂活性，为甜叶菊酚类提取物的制备以及其制备降脂制品中的应用提供科学依据，亦为甜叶菊综合应用开发奠定了基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种甜叶菊酚类提取物，本发明的另一个目的在于提供甜叶菊酚类提取物的制品及其在降脂药品、食品中的应用，本发明的第三个目的在于提供一种甜叶菊酚类提取物的制备方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

步骤1：取甜叶菊药材，溶剂回流提取；

步骤2：色谱法纯化；

该甜叶菊酚类提取物中总酚含量为5～100％；该甜叶菊酚类提取物中总酚含量优选为20～100％。

将以上所得提取物，加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、丸剂、口服液体制剂、注射剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂。

上述提取物，可作为辅料或添加剂，加至食品、饮料及其他制品中，制成可接受的任意常规制品。

上述步骤1中，甜叶菊药材用30～95％乙醇回流提取2～3次，每次提取1～2小时，合并提取液，减压回收溶剂至干，得甜叶菊乙醇提取物。

上述步骤2中，将步骤1所得乙醇提取物加水分散溶解，以甜叶菊药材计，上样液浓度为0.08～0.25g/ml，通过大孔吸附树脂，上样量以生药量计为与0.10～0.50g/ml，吸附流速为2～9BV/h，树脂柱径高比为1∶3～10，用0～20％乙醇洗脱1～4BV进行除杂，弃去，用20～60％乙醇洗脱3～6BV，洗脱流速为2～9BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，即得甜叶菊酚类提取物。

上述步骤2中所用大孔吸附树脂优选为AB-8、HPD-400、HPD-826型等弱极性或中等极性大孔吸附树脂。

本发明甜叶菊酚类提取物主要包括酚类物质，如异绿原酸及其衍生物等咖啡鞣质类成分、其他酚类成分、和/或黄酮类成分。甜叶菊酚类提取物中异绿原酸及其衍生物等咖啡鞣质类成分百分含量的总和为5～100％(w/w)。

本发明甜叶菊酚类提取物为甜叶菊经乙醇、或其他醇类、稀醇、或其他有机溶剂或水提取再通过大孔吸附树脂或其他色谱方法，如聚酰胺色谱法等，或溶剂法，如溶剂萃取法等纯化得到，经降脂药效实验表明，具有显著的降脂作用。

实验例甜菊酚类提取物降血脂活性

通过高脂饲料造模后，模型组大鼠血脂各项指标甘油三酯、总胆固醇、LDL均显著高于空白对照组，说明高脂模型造模成功。

阳性对照药物吉非罗齐组显著降低血清中甘油三酯(P＜0.05)、显著升高HDL(P＜0.05)，本试验结果与本品的作用机制及文献报道结果基本一致。

受试药高、低剂量组显著降低血清中甘油三酯(P＜0.05)和LDL、显著升高HDL(P＜0.05)。表明受试药具有显著的降低血脂作用。

表对高脂模型大鼠血脂的影响

与空白对照组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

含有本发明提出的提取物的制剂可根据本领域公知的方法制备。可将本发明提出的提取物与一种或多种固体或液体药物或赋形剂和/或辅料结合，制成可作为人药或兽药或其他健康产品使用的适当的施用形式或剂量形式。

含有本发明提出的提取物的制剂，可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、透皮、皮下、皮内、腹膜、直肠等。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型，如液体剂型可以是真溶液剂型、胶体溶液剂型、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。液体剂型形式可以是糖浆剂、酒剂、注射溶液、非水溶液、悬浮液或乳液等；固体剂型例如片剂、锭剂、胶囊、滴丸剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、霜剂、栓剂、散剂、膏剂等。

含有本发明提出的提取物的制剂，可以是普通制剂，也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统等。

为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子包括，赋形剂如碳酸钙、乳糖、磷酸钙、磷酸钠；稀释剂与吸收剂如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝、葡聚糖、胶态二氧化硅、阿拉伯胶、明胶、三硅酸镁、角蛋白等；湿润剂与粘合剂如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂如干燥淀粉、海藻酸钠、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可酯、氢化植物油等；吸收促进剂如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂如滑石粉、三乙胺硬脂酸镁、三乙胺硬脂酸、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片等。

为了将单位给药剂型制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可酯、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄耆胶、明胶、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等；崩解剂如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸钠、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

为了将单位给药剂型制成胶囊，可将本发明提出的提取物与上述各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬明胶胶囊或软胶囊中。也可将本发明提出的提取物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

为了将单位给药剂型制成口服液体制剂，如乳液、溶液、悬浮液、糖浆等，可根据需要任选添加剂如着色剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、矫味剂(如薄荷、冬青油等)、甜味剂(如蔗糖、乳糖等)或其他材料。

为了将单位给药剂型制成注射用含水或非水制剂，如溶液剂、混悬型溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体，如稀释剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂，以及常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、植物油(如橄榄油、玉米油等)、明胶、可注射用有机酯(如油酸乙酯、脂肪酸酯等)、聚氧乙烯山梨醇等。为了制备等渗注射剂，还可以添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油。

具体实施方式

实施例1：甜叶菊酚类提取物制备工艺

取干燥甜叶菊1Kg，剪成1cm小段，加14倍量50％乙醇回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至一定体积，使溶液浓度为0.125g/mL(以生药量计)作为上样液，上样液通过7L已处理的AB-8型大孔树脂树脂柱，吸附流速3BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样量为0.14g/mL(以生药材量计)，水洗1倍树脂体积，除杂流速为2BV/h，25％乙醇洗脱8倍树脂体积，洗脱流速是2BV/h，收集25％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明甜叶菊酚类提取物。

总酚含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取异绿原酸C对照品适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取甜叶菊提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠可见分光光度法，分别精密吸取一定量的异绿原酸C对照品溶液和样品溶液，置于25ml容量瓶中，加5％NaNO₂溶液1ml，摇匀，放置6min；然后加10％Al(NO₃)₃溶液1ml，摇匀，放置6min；再加4％NaOH溶液10ml，最后用稀醇稀释定容至刻度，摇匀，放置15min，并随行做空白对照，于520nm处测定吸光度，外标两点法计算含量，经测定总酚含量为66％。

实施例2：甜叶菊酚类提取物制备工艺

取干燥甜叶菊1Kg，剪成1cm小段，加12倍量30％乙醇回流提取3次，每次提取1.5小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至一定体积，使溶液浓度为0.10g/mL(以生药量计)作为上样液，上样液通过8L已处理的HPD-400型大孔树脂树脂柱，吸附流速6BV/h，树脂柱径高比为1∶8，上样量为0.125g/mL(以生药材量计)，水洗1倍树脂体积，除杂流速为4BV/h，40％7醇洗脱8倍树脂体积，洗脱流速是5BV/h，收集40％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明甜叶菊酚类提取物。

总酚含量测定方法：

测定方法：采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠可见分光光度法，分别精密吸取一定量的异绿原酸C对照品溶液和样品溶液，置于25ml容量瓶中，加5％NaNO₂溶液1ml，摇匀，放置6min；然后加10％Al(NO₃)₃溶液1ml，摇匀，放置6min；再加4％NaOH溶液10ml，最后用稀醇稀释定容至刻度，摇匀，放置15min，并随行做空白对照，于520nm处测定吸光度，外标两点法计算含量，经测定总酚含量为45％。

实施例3：甜叶菊酚类提取物制备工艺

取干燥甜叶菊1Kg，剪成1cm小段，加15倍量70％乙醇回流提取2次，每次提取2小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至一定体积，使溶液浓度为0.15g/mL(以生药量计)作为上样液，上样液通过4L已处理的AB-8型大孔树脂树脂柱，吸附流速8BV/h，树脂柱径高比为1∶7，上样量为0.25g/mL(以生药材量计)，10％乙醇洗脱2倍树脂体积，除杂流速为4BV/h，50％乙醇洗脱8倍树脂体积，洗脱流速是5BV/h，收集50％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明甜叶菊酚类提取物。

总酚含量测定方法：

测定方法：采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠可见分光光度法，分别精密吸取一定量的异绿原酸C对照品溶液和样品溶液，置于25ml容量瓶中，加5％NaNO₂溶液1ml，摇匀，放置6min；然后加10％Al(NO₃)₃溶液1ml，摇匀，放置6min；再加4％NaOH溶液10ml，最后用稀醇稀释定容至刻度，摇匀，放置15min，并随行做空白对照，于520nm处测定吸光度，外标两点法计算含量，经测定总酚含量为70％。

实施例4：甜叶菊酚类提取物制备工艺

取干燥甜叶菊1Kg，剪成1cm小段，加14倍量80％7醇回流提取3次，每次提取1小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至一定体积，使溶液浓度为0.125g/mL(以生药量计)作为上样液，上样液通过10L已处理的HPD-400型大孔树脂树脂柱，吸附流速3BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样量为0.10g/mL(以生药材量计)，水洗4倍树脂体积，除杂流速为2BV/h，45％7醇洗脱8倍树脂体积，洗脱流速是7BV/h，收集45％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明甜叶菊酚类提取物。

总酚含量测定方法：

样品溶液制备：称取甜叶菊提取物适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液：

测定方法：采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠可见分光光度法，分别精密吸取一定量的异绿原酸C对照品溶液和样品溶液，置于25ml容量瓶中，加5％NaNO₂溶液1ml，摇匀，放置6min；然后加10％Al(NO₃)₃溶液1ml，摇匀，放置6min；再加4％NaOH溶液10ml，最后用稀醇稀释定容至刻度，摇匀，放置15min，并随行做空白对照，于520nm处测定吸光度，外标两点法计算含量，经测定总酚含量为80％。

实施例5：甜叶菊酚类提取物制备工艺

取干燥甜叶菊1Kg，剪成1cm小段，加12倍量50％乙醇回流提取3次，每次提取2小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至一定体积，使溶液浓度为0.20g/mL(以生药量计)作为上样液，上样液通过5L已处理的AB-8型大孔树脂树脂柱，吸附流速3BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样量为0.20g/mL(以生药材量计)，20％洗脱1倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，30％乙醇洗脱6倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集30％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明甜叶菊酚类提取物。

总酚含量测定方法：

测定方法：采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠可见分光光度法，分别精密吸取一定量的异绿原酸C对照品溶液和样品溶液，置于25ml容量瓶中，加5％NaNO₂溶液1ml，摇匀，放置6min；然后加10％Al(NO₃)₃溶液1ml，摇匀，放置6min；再加4％NaOH溶液10ml，最后用稀醇稀释定容至刻度，摇匀，放置15min，并随行做空白对照，于520nm处测定吸光度，外标两点法计算含量，经测定总酚含量为76％。

实施例6：甜叶菊酚类提取物制备工艺

取干燥甜叶菊1Kg，剪成1cm小段，加12倍量50％甲醇回流提取3次，每次提取2小时，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至一定体积，使溶液浓度为0.20g/mL(以生药量计)作为上样液，上样液通过5L已处理的聚酰胺树脂柱，吸附流速4BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样量为0.20g/mL(以生药材量计)，20％洗脱1倍树脂体积，除杂流速为3BV/h，30％乙醇洗脱6倍树脂体积，洗脱流速是3BV/h，收集30％乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得本发明甜叶菊酚类提取物。

总酚含量测定方法：

实施例7：甜叶菊酚类提取物降脂胶囊剂的制备

取甜叶菊酚类提取物200g，粉碎，过80目筛，与微晶纤维素100g混合均匀，以95％乙醇制粒，干燥，以20目筛整粒，灌装胶囊。

实施例8：甜叶菊酚类提取物降脂片剂的制备

取甜叶菊酚类提取物50g，粉碎，过80目筛，与微晶纤维素70g、羧甲基淀粉钠5g混合均匀，以5％PVP制粒，干燥，以20目筛整粒，加入硬脂酸镁2g，压片。

实施例9：甜叶菊酚类提取物降脂滴丸剂的制备

取甜叶菊酚类提取物60g，粉碎，过80目筛，混合均匀，投入180g加热熔融的聚乙二醇6000中，搅拌至溶解，转移至贮液瓶中，密闭并保温在80～90℃，调节滴丸机液滴定量阀门，由上往下滴入10～15℃的液体石蜡中，将形成的滴丸沥干并擦除液体石蜡，干燥。

实施例10：甜叶菊酚类提取物降脂口服液的制备

取甜叶菊酚类提取物70g，粉碎，过80目筛，混合均匀，与蜂蜜1000g、蔗糖200g、苯甲酸钠10g及蒸馏水2000ml混合，加热至85～90℃，搅拌使溶解，保温30min，滤过，滤液加水稀释至4000ml，搅拌均匀，灌封，灭菌。

实施例11：甜叶菊酚类提取物降脂注射液的制备

取甜叶菊酚类提取物100g，加注射用水适量使溶解，加配置量的0.02％的活性炭搅拌5～10min，滤过，滤液稀释至10L左右，加氯化钠调节渗透压至等渗，调节pH7.5～8.0，超滤，灌封，100℃灭菌30min。

实施例12：甜叶菊酚类提取物降脂粉针剂的制备

取甜叶菊酚类提取物100g，加注射用水及稀氢氧化钠适量使溶解，加配置量的0.02％的活性炭搅拌5～10min，滤过，滤液稀释至1L，调节pH6.5～7.8，超滤，喷雾干燥，干粉无菌分装。每支100mg，临用前加注射用水适量使溶解，用氯化钠输液250～500ml稀释后缓慢静脉滴注。

实施例13：甜叶菊酚类提取物降脂饮料的制备

取甜叶菊提取物100g，加至合适的饮料中，使之全部溶解。

Claims

1.一种甜叶菊酚类提取物；其特征在于该提取物的制备方法包括如下步骤：

步骤1：取甜叶菊药材，溶剂回流提取；

步骤2：色谱法纯化；

该甜叶菊酚类提取物中总酚酸含量为5～100％。

2.如权利要求1所述的甜叶菊酚类提取物，其特征在于步骤1中，甜叶菊药材用30～95％乙醇回流提取2～3次，每次提取1～2小时，合并提取液，减压回收溶剂至干，得甜叶菊乙醇提取物。

3.如权利要求1所述的甜叶菊酚类提取物，其特征在于步骤2中，将步骤1所得乙醇提取物加水分散溶解，以甜叶菊药材计，上样液浓度为0.08～0.25g/ml，通过大孔吸附树脂或聚酰胺或其它色谱柱，上样量以生药量计为0.10～0.50g/ml，吸附流速为2～9BV/h，树脂柱径高比为1∶3～10，用0～20％乙醇洗脱1～4BV进行除杂，弃去，用20～60％乙醇洗脱3～6BV，洗脱流速为2～9BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，即得甜叶菊酚类提取物。

4.如权利要求1～3所述的甜叶菊酚类提取物，其特征在于加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、丸剂、口服液体制剂、注射剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂。

5.如权利要求1～3所述的甜叶菊酚类提取物，其特征在于可作为辅料或添加剂，加至食品、饮料及其他制品中，制成可接受的任意常规制品。

6.如权利要求1所述的甜叶菊酚类提取物制备方法，其特征在于步骤1中，甜叶菊药材用30～95％乙醇回流提取2～3次，每次提取1～2小时，合并提取液，减压回收溶剂至干，得甜叶菊乙醇提取物。

7.如权利要求1所述的甜叶菊酚类提取物制备方法，其特征在于步骤2中，将步骤1所得乙醇提取物加水分散溶解，以甜叶菊药材计，上样液浓度为0.08～0.25g/ml，通过大孔吸附树脂或聚酰胺或其它色谱柱，上样量以生药量计为0.10～0.50g/ml，吸附流速为2～9BV/h，树脂柱径高比为1∶3～10，用0～20％乙醇洗脱1～4BV进行除杂，弃去，用20～60％乙醇洗脱3～6BV，洗脱流速为2～9BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，即得甜叶菊酚类提取物。

8.如权利要求1～3所述的甜叶菊酚类提取物在制备降脂制品中的应用。